DB32-T 4503-2023 羊人工授精技術(shù)規(guī)程

ICS..CCS

B

DB

羊人工授精技術(shù)規(guī)程

CODE

--

發(fā)

布 --

實(shí)

施DB

本文件按照

GB/T

—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第

1

部分：標(biāo)準(zhǔn)文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院提出并歸口。本文件起草單位：江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院。本文件主要起草人：錢勇、曹少先、王慧利、孟春花、李隱俠、丁強(qiáng)、張俊、鐘聲。DB

羊人工授精技術(shù)規(guī)程

范圍本文件規(guī)定了羊人工授精技術(shù)應(yīng)用的場地條件、準(zhǔn)備事項(xiàng)、采精、精液品質(zhì)檢查、精液稀釋與保存、母羊發(fā)情鑒定、輸精、配種記錄等技術(shù)要求。本文件適用于羊的人工授精。

規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版括所有的修改用于本文件。GB

20557—2006山羊冷凍精液NY/T

2169種羊場建設(shè)標(biāo)準(zhǔn)

術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。.臺(tái)羊DUMMY

采精時(shí)專供公羊爬跨的被固定的活羊或固定好的假羊。.人工授精

INSEMINATION人為借助專門器械，將采集的種公羊精液經(jīng)檢查、稀釋、保存等處理合格后，輸入到發(fā)情母羊生殖道內(nèi)，使其妊娠的一種繁殖技術(shù)。[來源：NY/T

1335—2022，

場地條件.

配種羊舍..

新建羊場在規(guī)劃設(shè)計(jì)時(shí)應(yīng)包含配種羊舍，其他羊場也可通過改建或擴(kuò)建設(shè)置配種羊舍，羊舍結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)應(yīng)符合

NY/T

2169

的規(guī)定。.. 配

種

羊

舍

面

積

應(yīng)

按

每

1

000

只

可

繁

殖

母

羊

1

200

M2進(jìn)

行

設(shè)

計(jì)

，內(nèi)

部

空

間

應(yīng)

包

括

空

懷

母

羊

圈

、待

配母羊圈、種公羊圈、試情公羊圈和人工授精實(shí)驗(yàn)室、采精地）、輸精設(shè)施。..

配種舍羊圈宜采用雙列或多列平面布局

，走道兩側(cè)羊圈應(yīng)設(shè)圈門

，走道與羊床高度應(yīng)持平或高差≤20

CM。DB

.

人工授精實(shí)驗(yàn)室..

建設(shè)面積一般為

10

M2^30

M2。..

實(shí)驗(yàn)室內(nèi)應(yīng)設(shè)置無菌間和器材洗滌消毒用的準(zhǔn)備間。..

無菌間的門窗應(yīng)可密閉，室內(nèi)應(yīng)安裝紫外線消毒燈和空調(diào)。..

準(zhǔn)備間應(yīng)配置清洗水池、消毒和干燥設(shè)備，電源功率>5

KW。.

采精間..

采精間應(yīng)緊鄰人工授精實(shí)驗(yàn)室，面積以

8

M2^10

M2為宜。..

采精間內(nèi)應(yīng)設(shè)置水池和采精架，地面應(yīng)硬化并做防滑處理。采精架設(shè)計(jì)示意圖見附錄

A。.

輸精間..

輸精間宜為獨(dú)立空間，可以是圍欄圍起來的專用場地，位置應(yīng)設(shè)在待配種母羊圈的附近。..

輸精間內(nèi)應(yīng)設(shè)置輸精操作臺(tái)或輸精保定欄桿。

準(zhǔn)備事項(xiàng).

配種公羊..

要求...

應(yīng)符合該品種的種用標(biāo)準(zhǔn)。...

年齡以

1

歲^5

歲為宜，體格健壯、睪丸發(fā)育良好、性欲旺盛。...

公羊與待配種母羊的比例可為

1∶200^1∶400。..

調(diào)教...

調(diào)教時(shí)間青年公羊采精前應(yīng)進(jìn)行調(diào)教。調(diào)教時(shí)間宜從

8

月齡開始，剛開始每周采精

1

次，周歲后可按正常頻率采精。...

調(diào)教方法....

開始調(diào)教時(shí)，可用體型較大的發(fā)情母羊作為臺(tái)羊保定在采精架上。采精成功

3

次后，發(fā)情母羊即可換為非發(fā)情母羊或假羊。....

對于性欲不強(qiáng)或不會(huì)爬跨的后備公羊，可采用以下方法進(jìn)行調(diào)教：——在別的公羊配種時(shí)讓其在旁邊“觀看激形成性條件反射；——將發(fā)情母羊分泌物抹在公羊鼻尖上刺激性欲；——將種公羊放入非育種群發(fā)情母羊群中，使其先自然交配幾次，再進(jìn)行采精訓(xùn)練；——增加運(yùn)動(dòng)量和運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度。..

補(bǔ)飼配種期間應(yīng)加強(qiáng)配種公羊日糧營養(yǎng)，增喂雞蛋、胡蘿卜、復(fù)合維生素等。DB

.

試情公羊..

試情公羊應(yīng)選擇不參與配種、周歲以上的青年公羊，且體格健壯、性欲旺盛和無疾病的個(gè)體。..

試情公羊的數(shù)量可按配種母羊數(shù)量

1∶100^1∶200

比例準(zhǔn)備。..

試情公羊參與試情期間應(yīng)單獨(dú)飼養(yǎng)。.

配種母羊應(yīng)在配種期到來之前，及時(shí)做好羔羊斷奶、母羊整群、預(yù)防接種、驅(qū)蟲，并進(jìn)行短期優(yōu)飼，母羊膘情以中等水平為宜。

采精.

準(zhǔn)備工作..

器材和物品人工授精所需的器材和物品應(yīng)在配種期到來之前準(zhǔn)備齊全，器材和物品名錄見附錄

B。..

器材清洗與消毒器材清洗與消毒方法見附錄

C。.

采精操作..

假陰道安裝...

將內(nèi)胎裝入外殼內(nèi)，將兩端露出的部分向外殼表面翻卷展平，內(nèi)胎應(yīng)松緊均勻、不扭曲。... 在安裝消毒好的假陰道一端安裝集精杯，從外殼中央充氣孔加入

50

℃^55

℃的熱水至充氣口處，然后在充氣孔上安裝好橡膠塞和充氣嘴），從氣嘴吹入適量空氣，使假陰道采精口的一端內(nèi)胎呈三角“Y”狀為宜。...

用消毒玻璃棒蘸取少許醫(yī)用凡士林均勻涂于假陰道采精口一端，深度約為內(nèi)胎

1/2。...

把消毒過的玻璃棒式溫度計(jì)插入假陰道內(nèi)檢測溫度，溫度以

40

℃^42

℃為宜。..

采精...

采精前先用濕毛巾把公羊陰莖周圍污物擦洗干凈。...

當(dāng)公羊爬跨臺(tái)羊時(shí)，迅速拉開公羊，反復(fù)

2

次后再進(jìn)行采精。...

采精時(shí)，操作人員用右手掌心握住假陰道和集精杯，氣嘴方向朝下，假陰道與地面呈

夾角，在公羊爬跨臺(tái)羊伸出陰莖時(shí)，左手迅速輕托包皮將陰莖導(dǎo)入假陰道內(nèi)，公羊向前聳身射精后迅速將假陰道豎起，集精杯一端向下。...

打開氣嘴放氣，取下集精杯，蓋上蓋，在采精杯外殼上注明公羊個(gè)體編號，盡快送到檢查室內(nèi)，并放到

30

℃^37

℃的恒溫環(huán)境中，集精杯應(yīng)避免陽光直射，防止污染。...

不宜將不同公羊的精液混合后使用。..

采精頻率每只公羊以每天采精

1

次為宜，特殊情況下

1

D

內(nèi)需采精

2

次的，則應(yīng)間隔

1

D

后再采精。DB

..

采精記錄應(yīng)及時(shí)做好當(dāng)天種公羊的采精記錄，種公羊采精記錄表樣式見附錄

D。

精液品質(zhì)檢查.

色澤與氣味正常精液應(yīng)為乳白色或淺乳黃色，略帶腥味，無異味。.

射精量可用有刻度的集精杯或注射器測定，一次射精量如<0.5

ML

的，應(yīng)檢查公羊健康狀況或調(diào)整采精頻率。.

精子密度用于人工授精的鮮精的精子密度應(yīng)≥6×108個(gè)/ML。可采用血球計(jì)數(shù)板法或精子密度儀進(jìn)行測定，精子密度儀應(yīng)定期用血球計(jì)數(shù)板法進(jìn)行校正。.

精子活力用于人工授精的鮮精的精子活力應(yīng)≥60%。檢測方法按

GB

20557—2006

中

A.3

的規(guī)定執(zhí)行。.

精子畸形率用于人工授精的鮮精的精子畸形率應(yīng)≤15%。檢測方法按

GB

20557—2006

中

A.5

的規(guī)定執(zhí)行。

精液稀釋與保存.

精液稀釋液配制）常用精液稀釋下簡稱“稀釋液”配制方法見附錄

E。）.

稀釋方法..

精液和稀釋液的溫度應(yīng)保持相同或接近，稀釋過程中應(yīng)避免溫度大幅度反復(fù)波動(dòng)。具體操作步驟如下：——將配制好的稀釋連瓶置于

30

℃^37

℃的恒溫環(huán)境中；——將檢查合格的精液連同玻璃容精杯或試樣置于相同的恒溫環(huán)境中；——根據(jù)精子密度、活力和當(dāng)天需要配種的母羊數(shù)確定稀釋倍數(shù)，應(yīng)保證每只羊每次輸精劑量（

ML^0.2

ML）的有效精子數(shù)不少于

3

000

萬個(gè)；——稀釋前用注射器先吸入少量稀釋液清洗內(nèi)壁，棄去后再按需要量正式吸入稀釋液，稀釋時(shí)應(yīng)沿精液容器壁緩緩注入精液內(nèi)并輕輕搖動(dòng)混勻；——用移液槍吸取一滴稀釋后的精液，檢查精子活力；——將稀釋后的精液放回

30

℃^37

℃的恒溫環(huán)境中，蓋上蓋子；..

精液稀釋后，應(yīng)盡快使用。如有分裝和保存需要，應(yīng)在分裝瓶上注明公羊個(gè)體編號、采精時(shí)間、精子密度、活力和稀釋倍數(shù)。DB

.

精液常溫保存..

將稀釋分裝好的精液置于

20

℃^25

℃下

1

H^2

H

后，放入

16

℃^18

℃恒溫箱內(nèi)避光保存；也可用8

層^10

層紗布包裹嚴(yán)實(shí)直接放入

16

℃^18

℃恒溫箱內(nèi)。..

保存的精液每隔

8

H^12

H

搖動(dòng)一次，搖動(dòng)時(shí)應(yīng)輕緩均勻。..

精液常溫保存時(shí)間不宜超過

48H，使用前應(yīng)檢查精子活力，精子活力<30%

的不宜使用。.

精液低溫保存..

將稀釋分裝好的精液用

8

層^10

層紗布包裹嚴(yán)實(shí)，放于冰箱

4

℃^6

℃保鮮層固定位置。..

保存期間應(yīng)避免頻繁開啟冰箱門。..

精液低溫保存時(shí)間不宜超過

72

H，使用前應(yīng)檢查精子活力，精子活力<30%

的不宜使用。

母羊發(fā)情鑒定.

宜采用“試情公羊”法進(jìn)行發(fā)情鑒定，試情時(shí)間以每天早、晚飼喂前為宜。.

試情時(shí)，可用試情布兜住試情公羊腹部并確保覆蓋住陰莖。綿羊用試情布規(guī)格為

50

CM×40

CM，山羊用試情布規(guī)格為

40

CM×30

CM。. 試情公羊應(yīng)放入母羊圈內(nèi)進(jìn)行試情

，配有運(yùn)動(dòng)場設(shè)施的也可在運(yùn)動(dòng)場內(nèi)進(jìn)行試情

。試情人員應(yīng)認(rèn)真觀察，遇到母羊擠在一起時(shí)，還應(yīng)進(jìn)行人為驅(qū)散，以保證每只母羊均有接觸試情公羊的機(jī)會(huì)。.

以母羊站立不動(dòng)、接受爬跨為發(fā)情配種的最佳時(shí)機(jī)。.

被試情公羊找出的所有發(fā)情母羊可集中到配種圈進(jìn)行配種。.

每次試情完畢，應(yīng)將試情布解下，洗凈晾干備用。

輸精.

母羊準(zhǔn)備..

母羊保定可采用站立方式或倒立方式。每日配種母羊較多的羊場或體型較大的母羊適用站立方式保定。.. 站立方式保定可在距離輸精員站立地面

1M

左右的輸精臺(tái)上用保定架保定母羊，以使站在臺(tái)下的輸精員視線比母羊的輸精部位高

10

CM^15

CM

為宜。..

倒立方式保定可在發(fā)情母羊圈旁設(shè)置一根高度在

60

CM^80

CM

可調(diào)的橫桿，將母羊后肢搭在橫1桿上，前肢著地進(jìn)行保定，

次可保定多只母羊。1..

母羊被保定在保定架上后，先用抹布蘸清水清除糞便等臟物，接著用紙巾擦干余液，再用無液滴滲出的酒精紗布塊消毒，自然干燥即可。清洗時(shí)不應(yīng)使用消毒劑。.

輸精方法..

輸精時(shí)由助手掀起羊尾，輸精員配戴

LED

頭燈，左手將用生理鹽水溫潤過的閉合狀態(tài)的開膣器沿

母

羊

陰

門

的

形

狀

緩

慢

插

入

陰

道

后，再

輕

輕

轉(zhuǎn)

動(dòng)

90°張

開

開

膣

器，調(diào)

整

頭

燈

照

射

角

度

觀

察

陰

道

內(nèi)

有

無

出血、炎癥等疾病癥狀，確認(rèn)正常后，通過調(diào)節(jié)深度和角度找到子宮頸口，并穩(wěn)定住開膣器，右手將吸入精液的輸精槍插入子宮頸口內(nèi)約

1

CM，同時(shí)注入精液，輸精完成后，右手先抽出輸精槍，然后左手一邊慢慢松開開膣器，一邊從陰道中抽出。對于初產(chǎn)母羊，可采用羊用陰道內(nèi)窺鏡進(jìn)行輔助輸精。.. 輸精

應(yīng)采

用一次

試情

兩次輸

精的方

式

，兩次

輸精

應(yīng)間隔

12H，即早

晨試

情發(fā)情

的母羊

當(dāng)日

早

、晚DB

各輸精一次。完成兩次輸精的母羊即可放回圈內(nèi)，如果

24

H

后母羊通過試情仍表現(xiàn)為發(fā)情，應(yīng)進(jìn)行第三次輸精，但在一個(gè)發(fā)情期內(nèi)，輸精不超過

3

次。

配種記錄. 所有完成輸精的母羊應(yīng)及時(shí)作好配種記錄

，并通過分析配種記錄評價(jià)配種成績

，定期檢查受胎情況。配種記錄表樣式見附錄

F。.

超過三個(gè)情期仍未懷孕的母羊應(yīng)作為難孕羊處理。DB

附 錄 A料羊用采精架設(shè)計(jì)示意圖圖A.1給出了羊用采精架設(shè)計(jì)示意圖，可根據(jù)羊品種大小酌情調(diào)整。單位為毫米圖A.羊用采精架設(shè)計(jì)示意圖分類器材名稱規(guī)格單位數(shù)量備注儀器設(shè)備生物顯微鏡，帶

024×768顯微鏡載物臺(tái)恒溫板-50

℃數(shù)顯控溫消毒柜、下家用型電子天平500

恒溫水浴箱，數(shù)精液及稀釋液保溫超聲波清洗機(jī)13

CM×28

CM×15

CM器材清洗電冰箱24

L精液低溫保存電熱高壓消毒鍋18

L高壓蒸汽消毒超純水機(jī)或蒸餾水機(jī)稀釋液配制玻璃器材蓋玻片20

MM×20

MM100載玻片76

MM×26

MM50燒杯50

ML^500

ML三角燒瓶50

ML^500

ML容量瓶100

ML^500

ML廣口瓶500

ML、無無色為酒精棉球用玻璃磨砂下口瓶

000

ML蒸餾水存用量筒100

ML^500

ML玻璃漏斗90

MM玻璃攪拌棒250

CM溫度計(jì)

℃^100

℃常用器械移液槍

UL^200

UL移液器吸頭200

UL

000移液器支架不銹鋼鑷子20

CM不銹鋼消毒桶63

CM×350

CM金屬輸精器消毒用不銹鋼藥勺手術(shù)剪18

CM試管架DB

附錄B料羊人工授精器材與物品表B.1給出了羊人工授精所需器材與物品的名錄。表

表

羊人工授精器材與物品分類器材名稱規(guī)格單位數(shù)量備注專用器械假陰道外殼10假陰道內(nèi)胎20氣嘴20開膣器塑料量杯

000

ML盛裝開膣器集精瓶20頭燈LED、可、充帶感應(yīng)控制開關(guān)輸精器金屬10試劑耗材75%適量檸檬酸鈉500

G/葡萄糖500

G/、鏈8020生理鹽水適量丁腈手套中號10DB

表

表

羊人工授精器材與物品

（續(xù)）DB

附錄 C料器材清洗與消毒方法C.

器材清洗C.. 器材清洗按照“浸泡→初步清洗→精細(xì)清洗→自來水沖洗→蒸餾水過洗

”流程操作

，洗滌劑宜選用泡沫少、中性、易清除的產(chǎn)品，如家用洗潔精類。C..

精細(xì)清洗過程宜用超聲波清洗機(jī)來完成。C.. 精細(xì)清洗后器材可置于自來水龍頭下反復(fù)沖洗

，對于容器類器材可采用“灌入?倒出

”方式反復(fù)操作5次以上，此步驟不宜采用盆洗方式。C..

自來水沖洗后器材可置于兩盆蒸餾水中分別過洗一次，對于直接與精液或稀釋液接觸的器輸精器、集精瓶、稀釋液儲(chǔ)存容器和載玻片增加過洗次數(shù)。C.

器材消毒C..

金屬、玻璃器材宜采用電熱干燥箱120

℃消毒30

MIN。C..

橡膠、尼龍、塑料等不耐高溫的器材宜采用紫外線或臭氧消毒。C..

紗布、毛巾等器材宜采用蒸汽消毒，消毒時(shí)間達(dá)到30

MIN。C..

開膣器在每次清洗擦干后，可用酒精燈火焰消毒，然后插入生理鹽水杯中備用。C..

輸精槍在每一只母羊輸精完成后，可用75%酒精棉球從后向前擦拭消毒，后用生理鹽水棉球反復(fù)擦拭，然后再給另外一只母羊輸精。C..

玻璃棒式溫度計(jì)可用75%酒精棉球擦拭消毒，后用生理鹽水棉球反復(fù)擦拭。C..

采精、輸精器材不可放入水中煮沸消毒。10附（資料性）種公羊采精記錄表錄D表D.1給出了種公羊采精記錄表的樣式。表D.1種公羊采精記錄表公羊個(gè)體編號：品種：年齡：來源：第頁稀釋后精液品質(zhì)輸精活力%ML劑量只稀釋液（代碼）比例億/ML方式%H稀釋密度活力保存保存時(shí)間保存精液授精母羊數(shù)量輸精員備注采精日期原精液品質(zhì)（月、日、時(shí)）射精量密度活力ML億/ML%記錄人（簽字）：DB

附（資料性）種公羊采精記錄表錄D表D.1給出了種公羊采精記錄表的樣式。表D.1種公羊采精記錄表公羊個(gè)體編號：品種：年齡：來源：第頁稀釋后精液品質(zhì)輸精活力%ML劑量只稀釋液（代碼）比例億/ML方式%H稀釋密度活力保存保存時(shí)間保存精液授精母羊數(shù)量輸精員備注采精日期原精液品質(zhì)（月、日、時(shí)）射精量密度活力ML億/ML%記錄人（簽字）：11DB

附 錄 E料精液稀釋液配制E.

基礎(chǔ)稀釋液配制E..

基礎(chǔ)稀釋液配方配方一：0.9%注射用生理鹽水。配方二：葡萄糖

G，檸檬酸三鈉

G，溶于100

ML的蒸餾水中。配方三：乳糖

G，葡萄糖

G、檸檬酸三鈉

G、檸檬酸

G，溶于100

ML的蒸餾水中。基礎(chǔ)稀釋液僅用于輸精時(shí)的精液稀釋，不宜直接用于精液的保存。E..

配制方法E...

按配方稱取試劑放入燒杯中，再用量筒量取雙蒸餾水

100

ML加入其中，用磁力攪拌器或玻璃棒攪拌使其溶解。E...

將燒杯中的溶液，用一層定性濾紙過濾溶液至三角瓶中，三角瓶口用加硫酸紙或牛皮紙蓋住并用橡皮筋固定，放在蓋有石棉網(wǎng)的電爐上加熱至沸騰，迅速將其取下，冷卻至常溫。也可裝入耐高溫樣品瓶用高壓蒸汽滅菌。E... 密

封

的

基

礎(chǔ)

稀

釋

液

可

在

低

溫

環(huán)

境

下

長

期

保

存，已

啟

用

的

基

礎(chǔ)

稀

釋

液

可

放

入

在

2

℃^5

℃冰

箱

中備用，保存時(shí)間不超過12

H。E.

常溫保存稀釋液配制E.. 取

中

配

方

三

配

制

的

基

礎(chǔ)

稀

釋

液

100

ML放

入

消

毒

過

的

三

角

燒

瓶

或

樣

品

瓶

內(nèi)，加

入

青

霉

素

和鏈霉素各10萬單位，充分混合均勻后備用。E..

常溫保存稀釋液不可用于精液低溫保存。E..

常溫保存稀釋液現(xiàn)用現(xiàn)