腎衰竭機(jī)能實(shí)驗(yàn)課件

影響腎泌尿功能的因素及急性腎功能不全15預(yù)防一班朱帥偉實(shí)驗(yàn)?zāi)康耐ㄟ^神經(jīng)、體液因素來改變腎血流量、體液晶體滲透壓及腎小管對(duì)電解質(zhì)的重吸收，并觀察它們對(duì)尿生成的影響。學(xué)習(xí)氯化高汞復(fù)制急性腎功能不全的動(dòng)物模型，觀察急性腎功能不全時(shí)血、尿鈉，尿蛋白、腎酚紅排泄率的變化及腎形態(tài)學(xué)的改變，并根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析和討論急性腎功能不全的發(fā)病機(jī)制。觀察速尿?qū)毙阅I功能不全動(dòng)物模型的治療效果，分析其可能的作用機(jī)制。實(shí)驗(yàn)原理：1、腎臟的功能：〔1〕泌尿功能形成尿液，排出機(jī)體的代謝產(chǎn)物?！?〕內(nèi)分泌功能分泌腎素、PG、EPO、1,25-(OH)2〔3〕滅活某些激素如胃泌素、甲狀旁腺素等。2、影響尿生成的因素〔1〕影響腎小球?yàn)V過率的因素〔2〕腎小管和集合管重吸收及分泌功能本實(shí)驗(yàn)通過建立急性腎功能不全的動(dòng)物模型，Hg+進(jìn)入血循環(huán)并在腎小管中反響，破壞了腎小管結(jié)構(gòu)與功能，致使腎小管的阻塞和回漏，導(dǎo)致尿量明顯減少。急性腎功能不全模型的復(fù)制給動(dòng)物注射HgCl2→Hg2+進(jìn)入血液循環(huán)→經(jīng)腎小球?yàn)V出→與腎小管上皮細(xì)胞膜蛋白質(zhì)的巰基結(jié)合→Hg2+經(jīng)吞噬作用聚集在細(xì)胞內(nèi)→與細(xì)胞器質(zhì)膜結(jié)合并引起結(jié)構(gòu)和功能破壞→腎小管上皮細(xì)胞功能和結(jié)構(gòu)的顯著改變。3、影響腎小球?yàn)V過率的因素

有效濾過壓=腎小球毛細(xì)血管血壓-〔血漿膠體滲透壓+腎小囊內(nèi)壓〕(1)腎小球毛細(xì)血管血壓(2)囊內(nèi)壓(3)血漿膠體滲透壓(4)腎血漿流量(5)濾過系數(shù)急性腎功能不全急性腎功能不全(ARI)是指短期內(nèi)出現(xiàn)泌尿功能障礙導(dǎo)致排泄和調(diào)節(jié)功能不能維持，出現(xiàn)代謝廢物、毒物蓄積，水、電解質(zhì)代謝紊亂，酸堿平衡紊亂等機(jī)體內(nèi)環(huán)境嚴(yán)重紊亂的病理過程。大局部急性腎功能衰竭患者尿量低于400mL／24h．稱為少尿型急性腎功能衰竭。少局部患者尿量固定400～1000m1．／24h．沒有到達(dá)少尿的衡量指標(biāo)．稱為非少尿型急性腎功能衰竭。背景知識(shí)腎前性急性腎功能衰竭腎性急性腎功能衰竭腎后性急性腎功能衰竭分類：發(fā)病機(jī)制(一)腎血流量減少。腎小球?yàn)V過減少(1)腎前性因素可使循環(huán)血量下降從而使腎血液灌注壓下降。腎血流量減少。(2)腎前性因素可致交感一腎上腺髓質(zhì)系統(tǒng)興奮．腎血管收縮。腎血液灌流量減少。(3)腎前性因素可使細(xì)胞缺血缺氧，血管內(nèi)皮細(xì)胞由于供能缺乏，鈉泵失靈，水、鈉內(nèi)流，發(fā)生腫脹．。腎血管內(nèi)血流減少。(4)可通過損傷組織、m管內(nèi)皮細(xì)胞等致使腎血液流變學(xué)發(fā)生改變．如血液黏滯度上升等．甚至啟動(dòng)凝血致腎內(nèi)微循環(huán)血栓形成．微循環(huán)血流減少。(二)腎小球病變急性腎小球腎炎、狼瘡性腎炎等病因可使腎小球?yàn)V過膜損傷，濾過面積減少，腎小球?yàn)V過率下降．尿量減少。(三)腎小管阻塞某些病因如擠壓綜合征、溶血所致血紅蛋白、肌紅蛋白釋放人血．可經(jīng)腎小球?yàn)V過阻塞腎小管；還有些病因如腎毒物可致。腎小管上皮細(xì)胞壞死脫落．阻塞腎小管．使腎小囊內(nèi)壓明顯上升．腎小球內(nèi)液體不易濾過。腎小球?yàn)V過率明顯下降．出現(xiàn)少尿。(四)腎小管缺損，原尿回漏該病因可致腎小管上皮細(xì)胞變性、壞死、脫落．基底膜斷裂．管內(nèi)尿液漏入腎間質(zhì)．稱原尿回漏。一方面直接使尿量減少．另一方面可致間質(zhì)水腫．壓迫?？逍」?、腎血管．造成腎小管阻塞及腎血流減少．進(jìn)一步使腎小球?yàn)V過率下降．導(dǎo)致明顯少尿。病理外觀：呈“大白腎〞狀，腎臟體積增大，外表蒼白，質(zhì)軟?？v切面：腎皮質(zhì)蒼白、缺血，髓質(zhì)呈暗紅色。功能代謝變化尿少，蛋白尿，尿鈉增高水中毒高鉀血癥代謝性酸中毒氮質(zhì)血癥速尿的作用及機(jī)制速尿通用名為呋塞米1.藥理作用：利尿作用:強(qiáng)效快速短暫擴(kuò)張血管:促進(jìn)前列腺素的合成有關(guān)腎血流增加2.機(jī)制：呋塞米等袢利尿藥屬于高效利尿藥，主要通過抑制腎小管髓袢厚壁段對(duì)NaCl的主動(dòng)重吸收，使管腔液與髓質(zhì)間液滲透壓梯度差降低，腎小管濃縮功能下降，從而導(dǎo)致水、Na+、cl-排泄增多。由于遠(yuǎn)端小管Na+濃度升高，促進(jìn)Na+-K+和Na+-H+交換增加，K+和H+排出增多1、動(dòng)物家兔，2.5～3.0kg，雌雄均可2、藥品氯化鈉、20％烏拉坦、酚紅、速尿、去甲腎上腺素、葡萄糖、氫氧化鈉、焦銻酸鉀、無水乙醇、肝素。實(shí)驗(yàn)材料方法與步驟心臟采血方法確定心臟的生理部位。家兔的心臟部位約在胸前由下向上數(shù)第三與第四肋骨間。選擇用手觸摸心臟搏動(dòng)最強(qiáng)的部位(劍狀軟骨左側(cè)),去毛消毒。將稍微后拉栓塞的注射器針頭由劍狀軟骨左側(cè)呈30度-45度刺入心臟,當(dāng)家兔略有顫抖時(shí),說明針頭已穿入心臟,然后輕輕地抽取,如有回血,說明已插入心腔內(nèi),即可抽血;如無回血,可將針頭退回一些,重新插入心腔內(nèi),假設(shè)有回血,那么順心臟壓力緩慢抽取所需血量。家兔麻醉判斷標(biāo)準(zhǔn):1.看角膜反射,用紗布等刺角膜幾乎無反響就可以了.2.夾鼻子無反響.3.肌肉松弛.4.呼吸深慢.將家兔頸部正中剪毛，切開皮膚，別離一側(cè)頸外靜脈，在靜脈下穿兩根絲線，近心端用動(dòng)脈夾夾閉，結(jié)扎靜脈的遠(yuǎn)心端絲線，在遠(yuǎn)心端用眼科鑷提起結(jié)扎線下方的靜脈壁，用眼科剪45。在靜脈壁上剪一小斜口，然后向心臟方向插入已充滿肝素的靜脈套管，用近心端的絲線結(jié)扎固定，松開動(dòng)脈夾，用于輸液。本卷須知為了便于插管,頸外靜脈應(yīng)盡量別離得長(zhǎng)一些。一般家兔4cm~5cm,豚鼠和大鼠2cm-3cm;結(jié)締組織盡量別離干凈,否那么插管時(shí)容易插到膜內(nèi);兩根結(jié)扎線可通過一根線對(duì)折穿過血管下后剪斷獲得。遠(yuǎn)心端結(jié)扎線和備用結(jié)扎線一定要結(jié)扎緊,防止出血;動(dòng)脈夾操作時(shí)一定要小心防止磨破血管,夾閉血以防夾閉不完全5.插入血管內(nèi)插管盡量長(zhǎng),此時(shí)易于固定。但是一定不要插到動(dòng)脈夾夾閉處,因?yàn)椴骞芎蛣?dòng)脈夾都是硬性材料,兩廂觸碰易使動(dòng)脈管破裂6.噴血時(shí),應(yīng)迅速找到出血口,并及時(shí)夾閉近心端血管,并用棉球清理創(chuàng)面;假設(shè)還是出血不止,那么考慮是否是遠(yuǎn)心端結(jié)扎線未扎緊,這時(shí)夾閉遠(yuǎn)心端;假設(shè)是少量出血,那么可能只是毛細(xì)血管受到損傷,這是可用棉球輕輕壓迫創(chuàng)面即可止血。下腹部正中剪毛，在恥骨聯(lián)合1．5cm作切口，長(zhǎng)約4cm，暴露膀胱，用注射器收集2ml尿液于試管中，備測(cè)尿蛋白、尿鈉用。在膀胱底部，找出兩側(cè)輸尿管，在其下方穿線，然后將膀胱上翻，用絲線結(jié)扎尿道內(nèi)口，在膀胱中上1／3作荷包縫合，然后提起膀胱，用眼科剪剪一小口，將充滿蒸餾水的膀胱套管向著膀胱三角的方向插入膀胱中，結(jié)扎套管并固定，用于收集尿液。本卷須知a、影響尿生成因素的觀察(對(duì)照組家兔〕

在各項(xiàng)觀察之前先記錄5min的尿量作為對(duì)照，然后開始觀察1)生理鹽水20ml2)20%葡萄糖5ml3)0.01%去甲腎上腺素0.3ml4)1％速尿1ml/kg取0.1ml尿樣備測(cè)尿鈉頸外靜脈注射b、**治療〔實(shí)驗(yàn)組家兔〕頸外靜脈注射1%速尿溶液1ml/kg，觀察給藥后5分鐘的尿量和30分鐘的總尿量，從中取出0.1ml尿樣置于枯燥試管中備測(cè)尿鈉用，測(cè)定給藥后尿鈉的含量，與給藥前的尿鈉〔對(duì)照組家兔〕進(jìn)行比較

c.酚紅排泄率測(cè)定1)耳緣靜脈0.6％酚紅溶液1ml頸外靜脈20％葡萄糖30ml觀察：從注射酚紅起收集尿液，記錄30min2)尿液→500ml量杯+10%NaOH10ml+蒸餾水補(bǔ)充至500ml→混勻→試管→與標(biāo)準(zhǔn)比色系列比較→30min內(nèi)酚紅排泄率d.形態(tài)學(xué)觀察〔1〕處死家兔，取出腎臟并稱重，計(jì)算腎體比(2〕比較兩家兔腎臟外形，縱向剖開腎臟，觀察皮質(zhì)及髓質(zhì)條紋、色澤等。血鈉和尿鈉的測(cè)定方法：尿液0.1ml+無水乙醇1.9ml→用力振蕩放置10min→3000rpm，5min→取上清液。

比濁法測(cè)血鈉和尿鈉520nm血鈉、尿鈉的測(cè)定方法與步驟，數(shù)據(jù)整理及本卷須知、分光光度計(jì)的使用本卷須知1．心臟取血時(shí)注射器不用抗凝。2．頸外靜脈插管時(shí)套管內(nèi)應(yīng)充滿肝素。3．膀胱插管時(shí)套管內(nèi)應(yīng)充滿蒸餾水。4．每次給藥后觀察尿量計(jì)時(shí)應(yīng)從尿液改變后開始。5．給速尿及酚紅后，必須倒掉之前收集的尿液后才能重新收集尿液，然后從中取尿樣。6．測(cè)尿鈉時(shí)加無水乙醇后用力振蕩，并且操作后立即比色。7．血清、標(biāo)準(zhǔn)液等試劑用量要準(zhǔn)確。分光光度計(jì)正確操作使用方法：

接通電源,翻開儀器開關(guān),掀開樣品室暗箱蓋,預(yù)熱10分鐘.將靈敏度開關(guān)調(diào)至“1〞檔(假設(shè)零點(diǎn)調(diào)節(jié)器調(diào)不到“0〞時(shí)