蒼術(shù)中蒼術(shù)素的提取及含量測(cè)定

2019屆本科畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）開(kāi)題報(bào)告畢業(yè)論文題目:蒼術(shù)中蒼術(shù)素的提取及含量測(cè)定學(xué)院：________________專業(yè)：________________班級(jí)：學(xué)號(hào)：________________姓名：________________一、論文選題的目的和意義蒼術(shù)為菊科蒼術(shù)屬植物茅蒼術(shù)Atractylodeslan-cea（Thunb.）DC.或北蒼術(shù)Atractylodeschinensis（DC.）Koidz.的干燥根莖，有燥濕健脾、祛風(fēng)散寒和明目的功效[1]，主治濕困脾胃、倦怠嗜臥、胞痞腹脹、食欲不振、哎吐泄瀉、痰飲、濕腫、表證夾濕、頭身重痛、痹證溫性、肢節(jié)酸痛重著、痿襞和夜盲等癥狀[2]。蒼術(shù)素作為蒼術(shù)的有效成分之一，具有促進(jìn)胃排空、抗炎、抗腫瘤、降血糖、利尿等藥理活性。然而，目前國(guó)內(nèi)外卻較少有文獻(xiàn)單獨(dú)研究蒼術(shù)素這一單體。目的：蒼術(shù)素具有抗炎、抗腫瘤、促進(jìn)胃排空及抗病原微生物等藥理作用。但關(guān)于蒼術(shù)素的單獨(dú)研究相對(duì)較少，本實(shí)驗(yàn)探索蒼術(shù)中蒼術(shù)素的提取方法及含量測(cè)定，為更好的發(fā)揮蒼術(shù)的藥用價(jià)值提供參考。意義：通過(guò)在知網(wǎng)等權(quán)威數(shù)據(jù)庫(kù)里能找到的關(guān)于蒼術(shù)素的提取和測(cè)定的文獻(xiàn)很少，說(shuō)明目前學(xué)界對(duì)蒼術(shù)素的提取和測(cè)定研究很少。蒼術(shù)素具有重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和產(chǎn)業(yè)化前景。當(dāng)前的研究熱點(diǎn)多集中在有效成分和藥理作用兩方面，本文重點(diǎn)在與蒼術(shù)素的提取和測(cè)定，在前人的基礎(chǔ)上探索蒼術(shù)素提取與測(cè)定過(guò)程中的優(yōu)化方法，并為蒼術(shù)素日后的開(kāi)發(fā)利用提供參考和依據(jù)。二、國(guó)內(nèi)外關(guān)于該論題的研究現(xiàn)狀和發(fā)展趨勢(shì)1.蒼術(shù)的研究現(xiàn)狀1.1蒼術(shù)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)蒼術(shù)主要分為北蒼術(shù)、關(guān)蒼術(shù)和茅蒼術(shù)，北蒼術(shù)主產(chǎn)于河北、山西等地，關(guān)蒼術(shù)主產(chǎn)于東北三省，茅蒼術(shù)主產(chǎn)于江蘇句容、鎮(zhèn)江等地。以江蘇句容的蒼術(shù)質(zhì)量尤好，所以茅蒼術(shù)又被稱為道地藥材。朱利霞[13]等比較了不同產(chǎn)地不同品種的蒼術(shù)之間的蒼術(shù)素含量，表明茅蒼術(shù)中蒼術(shù)素的含量不僅低于關(guān)蒼術(shù)，而且低于2020年《中國(guó)藥典》規(guī)定的最低值[1]。因此，在評(píng)價(jià)蒼術(shù)質(zhì)量體系中，僅參考蒼術(shù)素含量是很欠缺的，還需要采用能夠反映蒼術(shù)整體特征的指紋圖譜共同評(píng)估蒼術(shù)質(zhì)量的優(yōu)劣。學(xué)者馮金秋等[7]對(duì)不同產(chǎn)區(qū)的茅蒼術(shù)進(jìn)行質(zhì)量評(píng)估，進(jìn)一步體現(xiàn)了蒼術(shù)素含量與蒼術(shù)質(zhì)量沒(méi)有直接相關(guān)性，而茅蒼術(shù)的道地性體現(xiàn)在蒼術(shù)中蒼術(shù)酮、β-桉葉醇和蒼術(shù)素的特定比例。從微生物與生物化學(xué)角度來(lái)講，主要通過(guò)水楊酸信號(hào)途徑介導(dǎo)內(nèi)生真菌誘導(dǎo)子激活乙酰輔酶A羧化酶，從而促進(jìn)蒼術(shù)細(xì)胞中蒼術(shù)素的生物合成，對(duì)探索內(nèi)生真菌是否影響茅蒼術(shù)道地性提供新思路。1.2蒼術(shù)素的性質(zhì)與含量蒼術(shù)素為淡黃色針狀結(jié)晶，為聚乙炔類化合物，其分子式為C13H10O。由其結(jié)構(gòu)可知，蒼術(shù)素由于結(jié)構(gòu)中含有不飽和鍵而存在一定的不穩(wěn)定性，有研究表明，[2-3]高溫及強(qiáng)光照射會(huì)引起蒼術(shù)素的降解，而低溫環(huán)境則有利于蒼術(shù)素的穩(wěn)定。蒼術(shù)素常用的提取方法有水蒸氣蒸餾、超聲提取、超臨界萃取等經(jīng)典提取方法。在蒼術(shù)素的含量方面，諸多研究表明不同來(lái)源及產(chǎn)地的蒼術(shù)中蒼術(shù)素的含量不同，杜靈均[4]等結(jié)合茅蒼術(shù)主要成分蒼術(shù)素的含量測(cè)定與指紋圖譜，比較不同產(chǎn)地藥材化學(xué)成分的差異性，研究結(jié)果表明不同產(chǎn)地茅蒼術(shù)藥材指紋圖譜有較大相似性，但蒼術(shù)素的含量有較大的差異。聚類分析結(jié)果表明道地產(chǎn)區(qū)與主產(chǎn)區(qū)茅蒼術(shù)藥材[5]存在一定差異，但差別不是很大。張如春等研究了發(fā)現(xiàn)4年生人工栽培北蒼術(shù)的蒼術(shù)素比3年生和5年生的含量高，含量均在0.3232%-0.5959%，以指標(biāo)成分的含量為依據(jù)，北蒼術(shù)的最佳栽培時(shí)間為4年，另外，與市售飲片相比，內(nèi)蒙古莫旗的人工仿野生種植蒼術(shù)中蒼術(shù)素的含量符合標(biāo)準(zhǔn)，主要原因可能是當(dāng)?shù)貧夂虺尸F(xiàn)出春溫、夏升、秋降、冬寒的特點(diǎn)，劇烈的溫差有利于區(qū)域內(nèi)北蒼術(shù)體內(nèi)蒼[6]術(shù)素的積累。畢嘉謠[16]等比較了相同栽培產(chǎn)地不同品種及生長(zhǎng)時(shí)期蒼術(shù)之間蒼術(shù)素含量的差異，發(fā)現(xiàn)同一生長(zhǎng)時(shí)期3種蒼術(shù)中蒼術(shù)素含量存在很大差異，茅蒼術(shù)含量最高，北蒼術(shù)次之，關(guān)蒼術(shù)最低。2.發(fā)展趨勢(shì)當(dāng)前的研究熱點(diǎn)多集中在有效成分和藥理作用兩方面，對(duì)基因組學(xué)分析、挖掘有效成分合成相關(guān)基因的研究成為一種趨勢(shì)。蒼術(shù)素在臨床上具有較大的應(yīng)用潛力，但由于其結(jié)構(gòu)中含有不飽和鍵，故其穩(wěn)定性有待進(jìn)一步提高，在以后的研究中可以在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步研究以擴(kuò)大其應(yīng)用范圍。三、論文的主要內(nèi)容、研究方法（一）主要內(nèi)容：本文的主要內(nèi)容探討生藥蒼術(shù)中蒼術(shù)素的提取和含量測(cè)定方面的問(wèn)題，蒼術(shù)素在蒼術(shù)中含量很高，同時(shí)也是蒼術(shù)的主要藥用成份，本文中以甲醇為溶劑，采用超聲提取法提取，采用HPLC法測(cè)定蒼術(shù)素的含量，重點(diǎn)研究蒼術(shù)素的提取方法與蒼術(shù)中蒼術(shù)素的含量測(cè)定，為生藥蒼術(shù)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提升、提取加工及臨床應(yīng)用提供一定的參考。（二）研究方法1.文獻(xiàn)分析法。我充分運(yùn)用了網(wǎng)上的資源，查找了很多關(guān)于蒼術(shù)中蒼術(shù)素的提取和測(cè)定的文獻(xiàn)，經(jīng)過(guò)歸納、篩選和總結(jié)，整理出對(duì)自己有用的文獻(xiàn)資料，為自己的論文打下了堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)。為撰寫(xiě)論文提供科學(xué)權(quán)威的理論基礎(chǔ)。2.實(shí)驗(yàn)法：通過(guò)自己設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)對(duì)蒼術(shù)素進(jìn)行提取和含量測(cè)定。2.1蒼術(shù)素的提取。蒼術(shù)素供試品溶液的制備：取北蒼術(shù)的根莖粉碎后過(guò)三號(hào)篩，分別稱取0.2g，置于具塞錐形瓶中，加入甲醇50mL，用封口膜密封后，稱定重量，超聲提?。üβ?50W，頻率40KHz)1h，冷卻至室溫后，稱定重量，用甲醇補(bǔ)足缺失的重量，用0.45μm過(guò)濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液，即得。蒼術(shù)素對(duì)照品溶液的制備：稱取蒼術(shù)素標(biāo)準(zhǔn)品適量，甲醇溶解，超聲10min，制得20μg/mL的溶液，經(jīng)0.45μm的微孔濾膜濾過(guò)，備用。2.2蒼術(shù)素的含量測(cè)定。本實(shí)驗(yàn)使用Waters2695型液相色譜儀（沃特世科技有限公司），色譜條件為DiamonsilC18色譜柱（4.6mm×250mm，5μL），流動(dòng)相甲醇-水（79∶21）等度洗脫，流速1.0mL/min，柱溫25℃，檢測(cè)波長(zhǎng)340nm，進(jìn)樣量20μL。在此條件下對(duì)蒼術(shù)素進(jìn)行含量測(cè)定。3.方法學(xué)考察。通過(guò)線性關(guān)系、精密度試驗(yàn)、重復(fù)性試驗(yàn)、穩(wěn)定性試驗(yàn)來(lái)校驗(yàn)實(shí)驗(yàn)法中蒼術(shù)素的測(cè)定是否有效。四、論文工作進(jìn)度安排2022年10月10日-2022年10月15日搜集材料，閱讀相關(guān)文獻(xiàn)，選題2022年10月16日-2022年10月25日課題申報(bào)與選題階段2022年10月26日-2022年11月15日下達(dá)課題任務(wù)書(shū)2022年11月16日-2022年12月10日開(kāi)題報(bào)告撰寫(xiě)階段2022年12月11日-2023年03月30日擬定大綱，進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)2023年03月31日-2023年04月20日提交初稿，教師審核后修改，完成后進(jìn)行定稿階段2023年04月21日-2023年04月30日評(píng)閱及答辯五、論文主要文獻(xiàn)[1]張曉萍,白莉,李彩霞,等.2020年版《中華人民共和國(guó)藥典》外用成方制劑作用特點(diǎn)分析[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2022(028-007).[2]楊帆,王科,趙娟.光照條件對(duì)蒼術(shù)中蒼術(shù)素含量的影響考察[J].中國(guó)藥師,2020,23(4):3.[3]李振興,丁曉紅,劉福勝,等.HPLC法測(cè)定焦蒼術(shù)中蒼術(shù)素含量[J].人參研究,2021,33(4):3.[4]杜靈均,杜婧艷,王建舫,等.16個(gè)產(chǎn)地北蒼術(shù)蒼術(shù)素含量測(cè)定及HPLC指紋圖譜的建立[J].農(nóng)業(yè)科學(xué),2021,11(7):14.[5]張如春.HPLC測(cè)定蒼術(shù)中的3種成分研究[J].北方藥學(xué),2020,17(9):2.[6]戈振凱,趙永恒,楊彩霞,等.超聲-微波協(xié)同提取蒼術(shù)中蒼術(shù)素的工藝[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2018,37(4):3.[7]馮金秋,陳惠琴,張宏蓮,等.不同來(lái)源的北蒼術(shù)中蒼術(shù)素含量測(cè)定[J].2019.3(7):4.[8]高麗,張文慧,黃惠麗,等.蒼術(shù)素現(xiàn)代研究概況[J].醫(yī)學(xué)信息,2018,31(17):5.[9]趙娟,王科,楊帆.不同炮制方法對(duì)蒼術(shù)中蒼術(shù)素含量及蒼術(shù)特征圖譜的影響[J].中南藥學(xué),2021,19(4):5.[10]李振興,丁曉紅,劉福勝,焦小怡,趙學(xué)敏.HPLC法測(cè)定焦蒼術(shù)中蒼術(shù)素含量[J].人參研究,2021,33(04):22-24.DOI:10.19403/ki.1671-1521.2021.04.005.[11]歐陽(yáng)麗敏.蒼術(shù)藥材等級(jí)標(biāo)準(zhǔn)研究[D].上海中醫(yī)藥大學(xué),2020.DOI:10.27320/ki.gszyu.2020.000736.[12]高麗,張文慧,黃惠麗,謝銘,陳可塑,劉福明,王榮榮,陳龍.蒼術(shù)素現(xiàn)代研究概況[J].醫(yī)學(xué)信息,2018,31(17):37-40+44.[13]朱利霞,黃青,王茹靜,李鴻翔,譚玉柱,董小萍.蒼術(shù)藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊,2017,35(12):3046-3051.DOI:10.13193/j.issn.1673-7717.2017.12.016.[14]彭迪,徐海星,許沛虎,黃志軍,關(guān)小羽,石召華.基于指紋圖譜及網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的蒼術(shù)質(zhì)量標(biāo)志物預(yù)測(cè)[J/OL].中藥材,2022(06):1427-1433[2023-01-01].DOI:10.13863/j.issn1001-4454.2022.06.024.[15]蘇星,