豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗(NVDC-JXA1株)工藝規(guī)程

PAGE編號:SC-TS-02-215豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗(NVDC—JXA1株)工藝規(guī)程上海海利生物藥品有限公司工藝規(guī)程生產管理上海海利生物藥品有限公司編號:SC-TS-02-215生效日:1/14頁標題:豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗(NVDC—JXA1株)工藝規(guī)程起草

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:質管部、技術研發(fā)部、生產部目錄TOC\o"1-2"\h\z1.主題內容 22.適用范圍 23.引用標準 24.規(guī)程內容 24.1. 品名 24.2. 劑型 24.3. 規(guī)格 24.4. 菌（毒）種 24.5. 批準文號 24.6. 工藝流程圖 24.7. 質量控制點 44.8. 活性物質制備工藝過程 44.9. 活性物質生產技術經濟指標和原料利用率計算 64.10. 油乳劑滅活疫苗制造工藝過程 64.11. 油乳劑劑制造技術經濟指標 84.12. 設備一覽表 84.13. 生物安全及勞動保護 94.14. 物料 94.15. 成品質量標準 114.16. 貯藏和有效期 124.17. 包裝材料要求 124.18. 標簽、說明書 13

題目

:豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗(NVDC—JXA1株)工藝規(guī)程編號:SC-TS-02-2152/14頁主題內容本標準規(guī)定豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗達到的技術要求。適用范圍本標準適用于豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗。引用標準豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗質量標準。規(guī)程內容品名通用名稱：豬繁殖與呼吸綜合征油乳劑滅活疫苗英文名：PorcineReproductiveandRespiratorySyndromeVaccine,Inactivated漢語拼音：ZhuFanzhuyuHuxizonghezhengyourujiMiehuoyimiao劑型油乳劑滅活疫苗規(guī)格20ml/瓶、50ml/瓶、100ml/瓶菌（毒）種來源：中國動物檢驗檢疫中心保存毒株：豬繁殖與呼吸綜合征NVDC-JAX1代次：5代保存溫度：-70℃批準文號農醫(yī)藥便函[2007]139號工藝流程圖

豬繁殖與呼吸綜合征豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗（NVDC—JXA1株）工藝流程圖生產用Marc-145細胞生產用Marc-145細胞棄液并加入胰蛋白酶，消化細胞棄液并加入胰蛋白酶，消化細胞加入DMEM液，分散細胞加入DMEM液，分散細胞分裝，取樣檢測分裝，取樣檢測制備轉瓶單層成纖維細胞制備轉瓶單層成纖維細胞﹡接種種毒接種種毒﹡細胞病變達70～80%細胞病變達70～80%﹡收獲收獲﹡油相制備油相制備TCID50TCID50檢測反復凍融3次滅活檢驗滅活檢驗水相制備乳化﹡滅活水相制備乳化﹡滅活﹡入庫裝箱貼簽軋蓋分裝入庫裝箱貼簽軋蓋分裝百級區(qū)百級區(qū)萬級區(qū)帶﹡項為質量控制點

題目

:豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗(NVDC—JXA1株)工藝規(guī)程編號:SC-TS-02-2154/14頁質量控制點工序名稱控制項目控制標準細胞消化消化液0.25%胰蛋白酶EDTA溶液；50-100mL/轉瓶消化溫度37消化時間轉動轉瓶，待細胞層開始出現(xiàn)裂縫時終止，一般為45秒轉瓶培養(yǎng)溫度37℃時間細胞生長成單層即可結束培養(yǎng)，一般為24小時左右轉速轉瓶機設置為9～11轉/小時接毒接種量無菌控制下接種，3%無菌檢測取樣，T.G、G.P、G.A培養(yǎng)基培養(yǎng)應無菌觀察細胞病變情況出現(xiàn)混濁，可能污染，棄去。病變≥70%時收獲收獲無菌無菌控制下操作，不污染滅活滅活劑0.2%的甲醛滅活溫度調整滅活罐的溫度為37滅活時間滅活充分，維持24小時乳化水相、油相比例保證抗原含量并不分層，水相：油相為2:3乳化時間90分鐘乳化溫度保持抗原免疫效力，30±2活性物質制備工藝過程4.8.1Marc-145傳代細胞種的要求：應無菌、無霉菌、無支原體、無外源病毒污染。制苗的細胞代次：第88—140代之間。MARC-145細胞種應生長迅速，培養(yǎng)48小時應在1/2以上的瓶面出現(xiàn)細胞島，并有部分相連、生長緩慢、形態(tài)不良的細胞培養(yǎng)物不可作種用，鏡檢時傳代細胞的正常形態(tài)是梭狀上皮細胞，明朗、輪廓清晰、胞漿內可見小顆粒，如出現(xiàn)肥大的圓細胞和空泡，是衰退的表現(xiàn)，不可留作種用。4.8.2生產用毒種要求4.8.2.1毒種應無細菌霉菌支原體其它外源病毒4.8.2.2毒種保存與毒種繼代在-15繼代應不超過5代。題目

:豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗(NVDC—JXA1株)工藝規(guī)程編號:SC-TS-02-2155/14頁4.8.3細胞的傳代工藝過程選生長3-4天已形成致密單層的細胞種按常規(guī)法進行細胞分散，35~37℃培養(yǎng)，3-4天傳代一次。傳代細胞傳代時的分種率一般1：4即1瓶分4生長不良、形態(tài)不好的細胞不能用。工作條件工作環(huán)境潔凈級別：100級溫度：18～26℃相對濕度：45～65%壓差：大于5Pa工作器械121℃高溫蒸汽滅菌工藝應進行驗證4.8.4選擇符合要求的圓瓶細胞培養(yǎng)物，棄去生長液，用Hanks液洗單層3次，然后接種5-10%PRRS毒種，置35～37℃溫室的轉瓶機上旋轉1.5小時后，加入維持液，使維持液中毒種含量為5%，維持液含犢牛血清1～2%，于35～37℃溫室旋轉培養(yǎng)。4.8.5工藝過程接種后每天逐瓶觀察細胞病變，并做好記錄，大部分圓瓶應在接種后6天內收獲，應該有50%以上的細胞出現(xiàn)明顯病變，病變細胞應為胞漿收縮，細胞萎縮變形，部分細胞脫落，收獲的細胞培養(yǎng)物置–20℃工作條件工作環(huán)境潔凈級別：100級溫度：18～26℃相對濕度：45～65%壓差：大于5Pa工作器械121℃高溫蒸汽滅菌工藝應進行驗證4.8.6.滅活工藝過程工藝過程取病毒上清液導入滅活罐中,加入0.2%的甲醛

；滅活24小時，滅活溫度37℃工作環(huán)境

題目

:豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗(NVDC—JXA1株)工藝規(guī)程編號:SC-TS-02-2156/14頁工作條件潔凈級別：1000級溫度：18～26℃相對濕度：45～65%壓差：大于5Pa工作器械121℃高溫蒸汽滅菌工藝應進行驗證4.8.7半成品檢驗應無菌生長。取適宜稀釋度，接種96孔長好單層的ST細胞微量板，每稀釋度接8孔，每孔接毒0.1ml，續(xù)加維持液，培養(yǎng)觀察細胞病變，計算TCID50。取滅活毒液，接種長成單層的ST細胞，換成維持液，逐日觀察細胞形態(tài)，連續(xù)6天，不引起細胞病變。4.8.8崗位定員和生產周期崗位人員生產周期制細胞3每批共7天配液2接種2收獲34.8.9原材料：ST細胞，其質量標準應符合《中華人民共和國獸用生物制品質量標準》2001年版的要求?；钚晕镔|生產技術經濟指標和原料利用率計算原料營養(yǎng)液收獲得益率數(shù)量Marc-145細胞10*100095%價值/元50010*1000*0.21000*10*0.95每ml活性物質（500+2000）/1000*10*0.95=0.2631元油乳劑滅活疫苗制造工藝過程4.10.1配方滅活液93.5份水相2份吐溫-856.5份白油90.6份油相3份司本-858份硬脂酸鋁1.4份題目

:豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗(NVDC—JXA1株)工藝規(guī)程編號:SC-TS-02-2157/14頁4.10.1.1取注射用白油90.6ml，加硬脂酸鋁1.4g。邊加邊攪拌，直到完全透明，再加入8ml司本-80。充分混勻，高壓滅菌備用。4.10.1.2水相制備取6.5份吐溫-80裝入的容器中，高壓滅菌冷卻后加入水相罐內與93.5份抗原充分攪拌直到吐溫-85完全溶解。4.10.1.3乳化取油相3份放于乳化罐內，開動電機慢速轉動攪拌，同時徐徐加入水相2份，加完后再以60r/min攪拌25-30分鐘。在控制面板上開乳化罐自乳化化開關；乳化至60分鐘時；加入1％硫柳汞溶液，使其最終濃度為0.01％。再乳化30分鐘后，取3～5ml以3000r/min離心15分鐘，若有分層現(xiàn)象，應重復乳化1次。4.10.3分裝4.10.3.1內包裝容器名稱：西林瓶或藥用高密度聚乙烯瓶、丁基橡膠塞藥用高密度聚乙烯瓶由符合GMP要求的廠家直接提供。丁基橡膠塞滅菌：121℃西林瓶清洗：用超聲波清洗機清洗2-3次；121℃4.10.生產好的疫苗產品，移至分裝生產線上，進行分裝，有4ml/瓶和20ml/瓶兩種規(guī)格。4.10.3.3工作環(huán)境工作條件潔凈級別：100級溫度：18～26℃相對濕度：45～65%壓差：大于5Pa工作器械121℃高溫蒸汽滅菌工藝應進行驗證4.10.4壓蓋貼簽裝箱壓蓋：分裝完畢的產品，立即進入壓蓋生產線，加上鋁蓋，進行壓蓋。貼簽：貼簽機調整設置好相應的產品批號及有效期限，進入貼簽程序。裝盒：每20瓶一盒，盒內放置說明書、合格證各一份，小盒用不干膠封口。入庫。注：批號設置、貼簽印刷應符合《獸藥瓶簽、說明書的管理規(guī)定》題目

:豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗(NVDC—JXA1株)工藝規(guī)程編號:SC-TS-02-2158/14頁4.10.5．崗位定員和生產周期崗位人員生產周期分裝41/2天壓蓋31/2天貼簽裝箱32天油乳劑劑制造技術經濟指標序號項目及計算指標1分裝率（%）=實際分裝瓶數(shù)/理論分裝瓶數(shù)*100%100%（±5%）2合格率（%）=合格瓶數(shù)/實際分裝瓶數(shù)*100%≥99%設備一覽表設備名稱規(guī)格制造單位1恒溫培養(yǎng)箱0-100上海一恒科學儀器有限公司2恒溫搖床0-65上海一恒科學儀器有限公司3轉瓶機1400*650*14000南京4-70℃450L青島海爾集團52-8℃40m上海開靈制冷有限公司6-20℃20m上海開靈制冷有限公司7脈動真空滅菌柜2200*2000*2200華菱醫(yī)療設備制造有限公司8脈動真空滅菌柜2415*1200*1800華菱醫(yī)療設備制造有限公司11干熱滅菌柜1600*1800*2550華菱醫(yī)療設備制造有限公司12滅活罐413電子天平1上海一恒科技有限公司14乳化乳化泵2000L15分裝分裝機HD-20050-20ml16分裝機HD-20050-100ml17自動膠塞清洗機2370*1320*1880上海欣麗實業(yè)有限公司18臭氧滅菌柜1600*1800*550康爾醫(yī)藥設備制造有限公司19包裝軋蓋機XF-20051375*755*160020貼簽機TLJ1650*845*120021檢驗恒溫箱HIHENG650*445*550上海一恒科技有限公司題目

:豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗(NVDC—JXA1株)工藝規(guī)程編號:SC-TS-02-2159/14頁生物安全及勞動保護4.13.1技術安全上崗工人必須經過“生物安全及自我防護”培訓。生產過程中，各崗位必須嚴格按照工藝規(guī)程、崗位標準操作程序及設備標準操作程序操作，不得違反。生產時必須在符合獸藥GMP要求環(huán)境條件下進行。每次生產更換批號（或品種和規(guī)格），各工序須清洗工具容器和場地，達到清場要求。各工序半成品容器加蓋密封存放，放至半成品貯存間規(guī)定的地方，防止異物混入，并有明顯標志（有卡片），按品名、規(guī)格、批號存放或設棚欄隔開。機器設備有專人管理、維護、保養(yǎng)。嚴格執(zhí)行安全用電規(guī)定，經常檢查電源、線路，防止漏電短路，電源要接地線，禁止?jié)袷珠_掣；機電設備嚴禁帶病運轉，機器運行時，嚴禁用手伸入轉動部位；禁止用水洗電機轉軸及皮帶輪防護安全罩，操作時不能站在與皮帶輪同一線上。隨時檢查燃氣系統(tǒng)，應保持完好無損，以免發(fā)生事故，設備、設施應定期檢查完好情況。管道標志明顯：水管涂綠色，藥液管涂黃色，蒸氣管涂紅色，嚴防漏氣漏液。高壓容器、管道系統(tǒng)等應經勞動技術安全部門檢測合格方能使用。各工序均應配備防火設施和其他意外應急設施，每個員工都要學會使用滅火器材。各崗位操作人員須經嚴格崗位培訓并經考核合格，憑崗位合格證才能上崗獨立操作。非本崗位人員不能頂替上班。當班人員不能隨意離開崗位，嚴禁竄崗，必需離開時要有本崗位人員接替方能離開。交接班應交接清楚，認真填寫交接班記錄。各崗位上崗須按規(guī)定穿戴工作服、帽、鞋、手套。特別是接觸強酸、強堿，要穿戴防護衣、膠手套、水鞋及防護鏡，避免酸、堿液濺到身上。萬一被濺上皮膚，立即用大量水沖洗。4.13.2勞動保護1．上班人員均要按規(guī)定穿戴工作服、帽、鞋、防護手套等勞保用品。2．使用顯微鏡的人員嚴格執(zhí)行中休、班休制度，每年檢查視力一次。員工每年進行健康檢查一次。建立健康檔案。物料4.14.1注射用水的質量標準及檢驗1）性狀：本品為純化水經蒸餾所得的無色的澄明液體；無臭，無味。2）檢查a

:pH值

:應為5.0～7.0（附錄ⅥH）。b

:氨取本品50ml，照純化水的方法檢查，注：對照用氯化銨溶液改為1.0ml，應符合規(guī)定（0.00002％）。c

:細菌內毒素取本品，依法檢查（附錄ⅪE），每1ml中含內毒素量應小于0.25EU。d

:氯化物、硫酸鹽與鈣鹽、硝酸鹽與亞硝酸鹽、二氧二碳、易氧化物、不揮發(fā)物與重金屬照純化水的方法檢查，應符合規(guī)定。題目

:豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗(NVDC—JXA1株)工藝規(guī)程編號:SC-TS-02-21510/14頁4.14.2牛血清名稱：牛血清質量標準：中國生物制品主要原輔料質控標準，2000年版。供應商：南京蘇邦生物技術有限公司（或經公司批準的其他符合規(guī)定的廠家）4.14.3營養(yǎng)液名稱：DMEM質量標準：中國獸藥典，2005版供應商：清大天一生物科技有限公司（或經公司批準的其他符合規(guī)定的廠家）4.14.4磷酸鈉名稱：磷酸鈉質量標準：HG31292-80供應商：上海國藥集團化學試劑有限公司（或經公司批準的其他符合規(guī)定的廠家）4.14.5磷酸氫二鉀名稱：磷酸氫二鉀質量標準：GB274-93供應商：上海國藥集團化學試劑有限公司（或經公司批準的其他符合規(guī)定的廠家）4.14.6磷酸氫二鈉名稱：磷酸氫二鈉質量標準：GB1909—1987供應商：上海國藥集團化學試劑有限公司（或經公司批準的其他符合規(guī)定的廠家）4.14.7磷酸氫二鈉名稱：重鉻酸鉀質量標準：GB/T642-1999供應商：上海國藥集團化學試劑有限公司（或經公司批準的其他符合規(guī)定的廠家）4.14.8硫酸名稱：硫酸質量標準：GB625-89供應商：上海國藥集團化學試劑有限公司（或經公司批準的其他符合規(guī)定的廠家）4.14.9無水氯化鈣名稱：無水氯化鈣質量標準：HGB3208-60供應商：上海國藥集團化學試劑有限公司（或經公司批準的其他符合規(guī)定的廠家）題目

:豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗(NVDC—JXA1株)工藝規(guī)程編號:SC-TS-02-21511/14頁4.14.10苯酚紅名稱：苯酚紅質量標準：GB/T15351-94供應商：上海國藥集團化學試劑有限公司（或經公司批準的其他符合規(guī)定的廠家）4.14.11吐溫-85名稱：吐溫80質量標準：中國藥典，2000年版。供應商：美國CRODA公司（或經公司批準的其他符合規(guī)定的廠家）4.14.12司本-85名稱：吐溫80質量標準：中國藥典，2000年版。供應商：美國CRODA公司（或經公司批準的其他符合規(guī)定的廠家）4.14.13硫柳貢名稱：硫柳汞鈉質量標準：Q/CYDZ-220-2004。供應商：上海國藥集團化學試劑有限公司（或經公司批準的其他符合規(guī)定的廠家）4.14.14名稱：注射用白油（輕質礦物油）質量標準：中華人民共和國獸醫(yī)生物制品規(guī)程，2000版。供應商：美國?？松梨谑凸荆ɑ蚪浌九鷾实钠渌弦?guī)定的廠家）4.14.15甲醛名稱：甲醛質量標準：中國藥典，2000版。供應商：上海國藥集團化學試劑有限公司（或經公司批準的其他符合規(guī)定的廠家）成品質量標準4.15.1物理性狀本品為乳白色乳狀液，為水包油包水型，靜置后，下層略帶淡紅色。用1ml吸管（出口內徑1.2mm），吸取25℃37℃4.15.2無菌檢驗應無菌生長。4.15.3安全檢驗用豬瘟中和抗體、豬細小病毒HI抗體陰性豬2頭，各深部肌肉注射疫苗10ml。觀察21日，應無不良臨床反應。用2-4日齡同窩乳鼠至少5只，各皮下注射0.1ml，觀察7日，應健活。如有死亡，可重檢一次。題目

:豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗(NVDC—JXA1株)工藝規(guī)程編號:SC-TS-02-21512/14頁4.15.4效力檢驗用體重350g以上的HI抗體陰性豚鼠4只，各肌肉注射疫苗0.5ml。28日后，連同條件相同的對照豚鼠2只，采血，測定抗體。對照抗體陰性，注射豚鼠應有3只出現(xiàn)抗體反應，其HI加應≥64。貯藏和有效期2-8℃包裝材料要求4.17名稱：豬細小病毒病滅活疫苗標簽質量標準：80克銅板紙，內容符合《獸藥瓶簽、說明書的管理規(guī)定尺寸：20mm×60mm，25mm供應商：上海鄭盛印務有限公司（或經公司批準的其他符合規(guī)定的廠家）4.17名稱：冷凍瓶質量標準：符合《中華人民共和國藥品管理法》和《藥品包裝用材料和容器管理辦法》尺寸：7ml供應商：東營力諾玻璃制品有限公司（或經公司批準的其他符合規(guī)定的廠家）4.17名稱：外用液體藥用高密度聚乙烯瓶質量標準：符合《中華人民共和國藥品管理法》和《藥品包裝用材料和容器管理辦法》尺寸：20供應商：杭州美堅華醫(yī)藥包裝材料有限公司（或經公司批準的其他符合規(guī)定的廠家）4.17名稱：鋁塑蓋質量標準：符合《中華人民共和國藥品管理法》和《藥品包裝用材料和容器管理辦法》尺寸：d:2cm,h:供應商：洛陽豫洛瓶蓋有限公司（或經公司批準的其