課程設(shè)置與課程內(nèi)容簡(jiǎn)介

表7．基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院藥理學(xué)院（系、所）碩士研究生課程簡(jiǎn)介課程名稱：心血管藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)英文名稱：Methodologyofcardiovascularpharmacology課程類型：□講授課程■實(shí)踐（實(shí)驗(yàn)、實(shí)習(xí)）課程□研討課程□專題講座□其它考核方式：據(jù)自己的興趣或需要(如畢業(yè)論文)作實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)教學(xué)方式：實(shí)驗(yàn)操作適用專業(yè)：與心血管有關(guān)的所有專業(yè)或方向適用層次：碩士■博士□開課學(xué)期：第一學(xué)期總學(xué)時(shí)/講授學(xué)時(shí)：32/4學(xué)分：2先修課程要求：無(wú)課程組教師姓名職稱專業(yè)年齡學(xué)術(shù)專長(zhǎng)金滿文教授藥理58心血管藥理肖軍花副教授藥理37心血管藥理湯強(qiáng)副教授藥理36心血管藥理呂青講師藥理37心腦血管藥理徐旭林講師藥理34心腦血管藥理課程教學(xué)目標(biāo)：課程目的：向心血管研究領(lǐng)域的研究生傳授最實(shí)用的實(shí)驗(yàn)方法和技術(shù)，并為選課者即將開展的畢業(yè)論文設(shè)計(jì)提供方法學(xué)咨詢。建議選課學(xué)員在確定所選實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目前與各自導(dǎo)師充分討論，結(jié)合自已即將開展的畢業(yè)論文的需要，有的放矢地選擇所需實(shí)驗(yàn)方法。課程特點(diǎn)：選課學(xué)員根據(jù)自己畢業(yè)論文需要針對(duì)性地選擇適用的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目，有的放矢地進(jìn)行實(shí)戰(zhàn)培訓(xùn)，為進(jìn)入科研提前做好技術(shù)準(zhǔn)備。課程設(shè)計(jì)：注重層次分布（整體、器官、細(xì)胞水平）、與相關(guān)學(xué)科實(shí)驗(yàn)方法的銜接（生化、組化、超微病理、分子生物學(xué)等）。目錄中的內(nèi)容都是在藥理系的科研中運(yùn)行良好的成熟技術(shù)。開課方式：全部實(shí)驗(yàn)均利用藥理系的科研條件（師資、場(chǎng)地、儀器設(shè)備、藥品試劑等），完全按正式的科研要求進(jìn)行嚴(yán)格訓(xùn)練。教學(xué)大綱（章節(jié)目錄）：實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目及相關(guān)內(nèi)容簡(jiǎn)介序號(hào)項(xiàng)目及內(nèi)容簡(jiǎn)介類別1《心血管藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》概論課堂講授內(nèi)容簡(jiǎn)介：系統(tǒng)介紹《心血管藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》的發(fā)展史、內(nèi)容、與其他學(xué)科實(shí)驗(yàn)方法的內(nèi)在聯(lián)系。如何根據(jù)自己研究課題的需要，正確選擇實(shí)驗(yàn)方法，設(shè)計(jì)先進(jìn)合理的觀察指標(biāo)。2麻醉動(dòng)物(犬、大鼠)血流動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)及藥物干預(yù)操作(大鼠)，觀摩(犬)內(nèi)容簡(jiǎn)介：操作技術(shù)包括：動(dòng)物種類選擇、麻醉藥的正確選擇和使用、股動(dòng)脈插管(動(dòng)脈血壓測(cè)定)、股靜脈插管(靜脈給藥)、左心室插管(左心室功能測(cè)定)、體表心電圖。檢測(cè)參數(shù)包括：心率(HR)、動(dòng)脈收縮壓(SBP)、舒張壓(DBP)、平均動(dòng)脈壓(MBP)、左心室收縮壓(LVSP)、左室舒張末壓(LVEDP)、左室發(fā)展壓(LVDP)。如選用犬，尚可測(cè)定心排量、冠脈血流量、心肌耗氧量(用冠狀靜脈竇插管采血)。藥物干預(yù)可選擇正性肌力作用藥物、或降血壓藥等。3麻醉動(dòng)物急性心肌梗死模型制備及心肌保護(hù)藥物的研究操作(大鼠)，觀摩(犬)內(nèi)容簡(jiǎn)介：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物可選擇成年雄性犬或大鼠，以犬為例予以介紹。操作技術(shù)和觀察指標(biāo)包括：股動(dòng)脈插管(監(jiān)測(cè)動(dòng)脈血壓)、股靜脈插管(補(bǔ)液或給藥)、頸靜脈插管至右心房(監(jiān)測(cè)中心靜脈壓)、開胸手術(shù)、冠狀動(dòng)脈前降支分離(備結(jié)扎用)、心表面30電極的固定(監(jiān)測(cè)心臟表面心電圖)、左心室插管(監(jiān)測(cè)心功能)、體表心電圖。實(shí)驗(yàn)完成后染色法測(cè)定心肌梗死面積，取不同部位的心肌組織供組化、超微結(jié)構(gòu)、分子生物學(xué)指標(biāo)的檢測(cè)(根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪M(jìn)行實(shí)驗(yàn)指標(biāo)擴(kuò)展)。藥物干預(yù)可選擇鈣通道阻滯劑、或β受體阻滯劑等。4麻醉動(dòng)物心律失常模型制備及藥物干預(yù)操作(大鼠)，觀摩(犬)內(nèi)容簡(jiǎn)介：動(dòng)物可選擇犬和大鼠，心律失常模型可以采用藥物、缺血再灌、電刺激等方式誘發(fā)。以麻醉犬房顫模型為例，操作技術(shù)和觀察指標(biāo)包括：股動(dòng)脈插管(監(jiān)測(cè)動(dòng)脈血壓)、股靜脈插管(補(bǔ)液或給藥)、頸靜脈插導(dǎo)管電極至右心房(施超頻刺激和記錄右心房單向動(dòng)作電位)、行開胸手術(shù)、左心室插導(dǎo)管電極(心室起搏)、頸部正中切口、分離兩側(cè)迷走神經(jīng)并安置刺激電極(供刺激迷走用)、記錄體表心電圖。左室起搏維持心室率。串刺激法測(cè)定心房不應(yīng)期，刺激迷走的同時(shí)刺激心房、誘發(fā)房顫。觀察藥物干預(yù)對(duì)心房不應(yīng)期、房顫的誘發(fā)條件和房顫持續(xù)時(shí)間的影響。藥物可選擇Sotalol、或胺碘酮等。5大鼠心肌肥厚、心臟重構(gòu)模型制備及藥物干預(yù)操作內(nèi)容簡(jiǎn)介：選用成年大鼠。操作技術(shù)和觀察指標(biāo)包括：麻醉動(dòng)物，開腹，行腹主動(dòng)脈狹窄術(shù)，關(guān)腹，動(dòng)物清醒后常規(guī)飼養(yǎng)。設(shè)假手術(shù)組。數(shù)周后，稱體重；開胸、取心臟并稱重；橫切左心室，拍照、測(cè)量室壁厚度；分離左心室并稱重。計(jì)算心臟重量與體重比值(器官指數(shù))，計(jì)算左心室重量與心臟重量比值。取左心室肌標(biāo)本，供免疫組化、超微病理、生化和分子生物學(xué)的相關(guān)參數(shù)檢測(cè)。6大鼠Langendorff心臟制備、再灌損傷模型及藥物干預(yù)操作內(nèi)容簡(jiǎn)介：成年雄性大鼠，全身肝素化、麻醉，制備Langengdorff心臟，正常臺(tái)氏液灌流，由左心房插入自制小水囊(接壓力傳感器)記錄左室內(nèi)壓力變化，置電極于主動(dòng)脈和心尖部記錄心電圖，記錄冠脈流量并收集流出液，20min后，可分別制作以下模型：①局部缺血再灌注損傷模型：結(jié)扎冠狀動(dòng)脈前降支，15min后松解再灌。②全心缺血再灌損傷模型：全心停灌30min，再灌?？煞謩e在缺血前或再灌開始時(shí)進(jìn)行藥物干預(yù)。觀察指標(biāo)：電生理：心率、心律、Q-T間期，心律失常的種類和嚴(yán)重程度。心功能：左室壓力(LVP)、左室發(fā)展壓(LVSP)、左室藥理上升和下降最大速率(±dp/dtmax)、冠脈流量(CF)。生化指標(biāo)：MDA、NO、SOD、LDH、CK等。形態(tài)學(xué)：梗死面積、超微結(jié)構(gòu)改變。分子生物學(xué)：相關(guān)物質(zhì)在mRNA和蛋白水平的表達(dá)。7豚鼠心乳頭肌動(dòng)作電位和收縮力同步記錄及藥物干預(yù)操作內(nèi)容簡(jiǎn)介：成年豚鼠，擊昏后開胸，取心臟，在氧飽和的臺(tái)氏液中制備右心室乳頭肌標(biāo)本，固定于1ml容積的器官浴槽中，循環(huán)灌流。以適當(dāng)?shù)碾姶碳ふT發(fā)收縮，同步記錄收縮力和細(xì)胞內(nèi)動(dòng)作電位，觀察藥物對(duì)收縮力(CF)、靜息電位(RP)、動(dòng)作電位0相幅度(APA)和上升速率(dV/dTmax)、動(dòng)作電位時(shí)程(APD20,APD50,APD90)的影響。8成年豚鼠心肌細(xì)胞分離及電流測(cè)定(膜片鉗方法)觀摩內(nèi)容簡(jiǎn)介：取成年豚鼠，全身肝素化、麻醉，制備Langengdorff心臟，正常臺(tái)氏灌流5min，無(wú)鈣臺(tái)氏液灌流5～10min，混合酶液灌流30～70min，將心房和心室分別在KB液中分散，得細(xì)胞懸液。此心肌細(xì)胞可用于各種試驗(yàn)，如選取胞膜完整、橫紋清楚的心肌細(xì)胞進(jìn)行膜片鉗實(shí)驗(yàn)。9乳鼠心肌細(xì)胞分離培養(yǎng)及藥物作用研究操作內(nèi)容簡(jiǎn)介：取2～3天齡大鼠，消毒，取出心臟、剪成小塊，胰蛋白酶消化，差速貼壁去成纖維細(xì)胞，對(duì)純化的心肌細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。此心肌細(xì)胞用于各種實(shí)驗(yàn)。10成年小鼠(或大鼠)心臟干細(xì)胞分離培養(yǎng)及電流測(cè)定觀摩內(nèi)容簡(jiǎn)介：成年大鼠，麻醉、全身肝素化，制備Langengdorff心臟，正常臺(tái)氏灌流10min，無(wú)鈣臺(tái)氏液灌流15～20min，混合酶液灌流30～40min，在改良臺(tái)氏液中分散心臟組織，得細(xì)胞懸液。離心，去心肌細(xì)胞，上清液與抗c-kit抗體孵育（按試劑盒說(shuō)明書操作），用免疫磁珠將c-kit陽(yáng)性細(xì)胞選出，裝瓶培養(yǎng)。數(shù)天后，干細(xì)胞形成克隆。此心臟干細(xì)胞可用來(lái)開展眾多實(shí)驗(yàn)，如用于膜片鉗實(shí)驗(yàn)，測(cè)定各種電流和藥物的作用，用于心肌損傷后的修復(fù)研究等。11離體血管環(huán)制備、張力測(cè)定、內(nèi)皮細(xì)胞功能測(cè)定及藥物作用研究操作內(nèi)容簡(jiǎn)介：常選用成年大鼠，家兔等，取其胸（或腹）主動(dòng)脈，制備離體血管環(huán)標(biāo)本，連接張力傳感器,經(jīng)放大系統(tǒng)記錄于計(jì)算機(jī)中，定血管環(huán)基礎(chǔ)張力，各組給予不同干預(yù)，測(cè)定血管環(huán)張力變化。內(nèi)皮細(xì)胞功能測(cè)定：可將血管環(huán)分為去內(nèi)皮和內(nèi)皮完整型進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，測(cè)定NO，ET含量，或定量測(cè)定血管內(nèi)皮損傷標(biāo)志物:可溶性血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體(sEPCR)、可溶性血栓調(diào)節(jié)蛋白(sTM)、血管性血友病因子(vWF)和一氧化氮(NO)的浴槽濃度。血管組織內(nèi)NO濃度及內(nèi)皮型NO合酶(eNOS)的表達(dá)。注：上表中各