24-島津LC-2430高效液相色譜儀使用、維修、保養(yǎng)操作規(guī)程

云南品斛堂生物科技有限公司文件名稱島津LC-2030高效液相色譜儀使用、維修、保養(yǎng)操作規(guī)程頁碼2/9文件類別工作標準文件編號SOP-03-015-00云南品斛堂生物科技有限公司文件名稱島津LC-2030高效液相色譜儀使用、維修、保養(yǎng)操作規(guī)程頁碼1/9文件類別工作標準頒發(fā)部門質(zhì)量部文件編號SOP-03-01審核批準制定日期年月日審核日期年月日批準日期年月日分發(fā)部門質(zhì)量部、生產(chǎn)部實施日期年月日文件狀態(tài)修訂口新訂口原因：執(zhí)行2024年版藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理標準1目的：建立島津LC-2030高效液相色譜儀使用、維修、保養(yǎng)操作規(guī)程，確保儀器的正確操作。2范圍：本規(guī)程適用于島津LC-2030高效液相色譜儀使用、維修、保養(yǎng)。3責任：化驗室負責人，化驗員。4內(nèi)容：4.1概述本系統(tǒng)由四元低壓梯度系統(tǒng)輸送泵、自動進樣器、UV檢測器、柱溫箱、LabSolutions色譜數(shù)據(jù)工作站和電腦等組成。4.2原理儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng),樣品溶液經(jīng)進樣器進入流動相,被流動相載入色譜柱固定相內(nèi),由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù),在兩相中作相對運動時,經(jīng)過反復屢次的吸附-解吸的分配過程,各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差異,被別離成單個組分依次從柱內(nèi)流出,通過檢測器時,樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀,數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。4.3技術(shù)參數(shù)流量設定范圍0.0001～10mL/min流速精度±1%或±2μL/min最大操作壓力44MPa進樣數(shù)216個樣品外形尺寸mm410×500×605mm波長重現(xiàn)性±0.1nm溫控精度±0.1℃波長范圍190～700nm噪聲±2.5×10-6AU漂移100×10-6AU/h4.4設備安裝位置設備名稱放置房間LC-2030型高效液相色譜儀精密儀器室4.5操作方法4.5.1準備準備所需的流動相，用適宜的0.45μm濾膜過濾，超聲脫氣20～30min。根據(jù)待檢樣品的需要更換適宜的洗脫柱〔注意方向〕。配制樣品和標準溶液〔也可在平衡系統(tǒng)時配制〕，用適宜的0.45μm濾膜過濾。檢查儀器各部件的電源線、數(shù)據(jù)線和輸液管道是否連接正常。4.5.2開機接通電源，依次開啟高效液相色譜儀開關(guān)，電腦主機、顯示器，待高效液相色譜儀自檢結(jié)束后，翻開色譜工作站。4.5.3等度洗脫排氣翻開Purge，點擊程序中的“自動排氣〞，系統(tǒng)自動進行排氣，假設使用多通道，根據(jù)實際需要選擇通道進行排氣；如果不出液，用針頭接上“p〞的管路，進行抽氣，至到有液體從“Purge〞這個管路排出。參數(shù)設定.1波長設定：在[數(shù)據(jù)采集]窗口的[時間程序視圖]中[檢測器A]，選擇波長(1)輸入所需波長。.2流速設定：在[數(shù)據(jù)采集]窗口的[時間程序視圖]中[泵]，選擇泵總流量，輸入所需流速。.3流動相比例設定：在[數(shù)據(jù)采集]窗口的[時間程序]中[泵]，選擇所用泵，輸入泵項下所需的濃度比例。設置好后，點擊“下載〞系統(tǒng)自動按照設置好的方法，進行走基線?；€平穩(wěn)后，方可進樣。可以進行單次分析或批處理分析。.1單次分析:單擊[數(shù)據(jù)采集]窗口助手欄上的“單次開始〞圖標；點擊確定，系統(tǒng)即自動進行單次分析。.2批處理分析:單擊[數(shù)據(jù)采集]窗口助手欄上的“批處理〞圖標；從[文件]菜單中選擇[新建批處理文件]；點擊保存，保存批處理文件；點擊[批處理]助手欄中的“批處理開始〞，系統(tǒng)即執(zhí)行批處理程序。4.5.4梯度洗脫排氣:翻開Purge，點擊程序中的“自動排氣〞，系統(tǒng)自動進行排氣，假設使用多通道或梯度，根據(jù)實際需要選擇通道進行排氣；如果不出液，用針頭接上“p〞的管路，進行抽氣，至到有液體從“Purge〞這個管路排出。參數(shù)設定.1波長設定：在[數(shù)據(jù)采集]窗口的[時間程序視圖]中[檢測器A]，選擇波長(1)輸入所需波長。.2流速設定：在[數(shù)據(jù)采集]窗口的[時間程序視圖]中[泵]，選擇泵總流量，輸入所需流速。梯度洗脫設置程序:在[數(shù)據(jù)采集]窗口的[時間程序視圖]，選擇[時間程序]圖標中的[LC時間程序]；設置程序洗脫的時間及流動相比例；設置完后應以controllerstop〔控制儀器停止〕為結(jié)尾；點擊“時間程序〞查看設置時間程序是否正確；點擊“泵〞選擇泵，調(diào)節(jié)壓力限制(最大壓力設為20.0MPa)；設置好后，點擊“下載〞系統(tǒng)自動按照設置好的方法，進行走基線。基線平穩(wěn)后，方可進樣?？梢赃M行單次分析或批處理分析。.1單次分析:單擊[LC實時分析]窗口助手欄上的“單次開始〞圖標；點擊確定，系統(tǒng)即自動進行單次分析。.2批處理分析:單擊[數(shù)據(jù)采集]窗口助手欄上的“批處理〞圖標；從[文件]菜單中選擇[新建批處理文件]；點擊保存，保存批處理文件；點擊[批處理]助手欄中的“批處理開始〞，系統(tǒng)即執(zhí)行批處理程序。4.5.5泵的清洗檢測完畢后，如流動相無鹽、酸及緩沖液，可直接用甲醇或乙腈沖洗30分鐘即可，如流動相含有鹽、酸及緩沖液，先用甲醇:水=10:90沖流30分鐘，再用甲醇沖洗30分鐘即可。4.5.6樣品測試完畢后，繪制標準曲線。方法如下：點擊“LabSolutions〞中的再解析圖標，LC再解析開始；單擊[再解析]助手欄中的[LC數(shù)據(jù)分析]圖標，出現(xiàn)[LC數(shù)據(jù)分析]窗口；選單擊助手欄中的[向?qū)圖標，出現(xiàn)[化合物向?qū)；請確保設置了正確的積分參數(shù)，然后單擊[下一步]；記錄要識別的峰的保存時間，然后單擊[下一步]；指定定量計算方法和校準曲線類型，然后單擊[下一步]；設置識別的方法，然后單擊[下一步]；提供化合物表的詳細設置，然后單擊[完成]；0單擊[LC數(shù)據(jù)]助手欄中的[應用到方法]圖標；1命名方法文件并單擊[保存]；2單擊[確定]而不進行任何更改；3單擊[再解析]助手欄中的[校準]圖標；4翻開用于生成校準曲線的方法文件；5拖入需要作校準曲線的數(shù)據(jù)，即得出校準曲線。4.5.7使用校準曲線計算數(shù)據(jù)濃度選擇[文件]菜單中的[翻開數(shù)據(jù)文件]，然后指定數(shù)據(jù)文件名；選擇[文件]菜單中的[加載方法參數(shù)]，然后指定方法文件名，出現(xiàn)[方法參數(shù)]屏幕；使用方法文件中的校準曲線計算數(shù)據(jù)的濃度。4.5.8出具報告根據(jù)需要設置相應的報告格式；把測定的數(shù)據(jù)拖入設置好的報告模塊中，即得報告。4.5.9關(guān)機全局部析完畢后，先關(guān)檢測器和柱溫箱電源，再用適宜的溶劑清洗色譜系統(tǒng)。依次關(guān)閉系統(tǒng)控制器、泵和微機電源，拔下各插頭，做好使用記錄。4.6泵的使用和維護本卷須知4.6.1為了延長泵的使用壽命和維持其輸液的穩(wěn)定性，必須按照以下本卷須知進行操作：流動相不應含有任何腐性物質(zhì)，含有緩沖液的流動相不應保存在柱內(nèi)，尤其是在停泵過夜或更長時間的情況下。如果將含緩沖液的流動相留在泵內(nèi)，由于蒸發(fā)或泄漏，甚至是由于溶液的靜置，就可能析出鹽的微細晶體，這些晶體將和上述固體微粒一樣損壞密封環(huán)和柱塞等。因此，必須泵入?yún)⒓由倭考状蓟蛞译婧图兯畬⒈贸浞智逑春?，再換成適合于色譜柱保存和有利于泵維護的溶劑〔對于反相鍵合硅膠固定相，可以是甲醇或甲醇水〕。泵工作時要留心防止溶劑瓶內(nèi)的流動相被用完，否那么空泵運轉(zhuǎn)也會磨損柱塞、缸體或密封環(huán)，最終產(chǎn)生漏液。流動相應該先脫氣，以免在泵內(nèi)產(chǎn)生氣泡，影響流量的穩(wěn)定性如果有大量氣泡，泵就無法正常工作。4.6.2如果輸液泵產(chǎn)生故障，須查明原因，采取相應措施排除故障。沒有流動相流出，又無壓力指示。原因可能是泵內(nèi)有大量氣體，這時可翻開泄壓閥，使泵在較大流量下運轉(zhuǎn)，將氣泡排盡，也可用一個50ml針筒在泵出口處幫助抽出氣體。另一個可能原因是密封環(huán)磨損，需更換。壓力和流量不穩(wěn)。原因可能是氣泡，須要排除；或者是單向閥內(nèi)有異物，可卸下單向閥，進入丙酮內(nèi)超聲清洗。有時可能是砂濾棒內(nèi)有氣泡，或被鹽的微細晶?；蜃躺奈⑸锞植慷氯?，這時，可卸下砂濾棒浸入流動相內(nèi)超聲除氣泡，或?qū)⒓啚V棒浸入稀酸內(nèi)迅速除去微生物，或?qū)Ⅺ}溶解，再立即清洗。壓力過高的原因是管路被堵塞，需要去除和清洗。壓力降低的原因那么可能是管路有泄漏。檢查堵塞或泄漏時應逐段進行。4.6.3關(guān)于試劑試劑類別：有機溶劑、無機化合物、水試劑的要求：.1有機溶劑的級別優(yōu)級純以上專用試劑。.2無機化合物要求分析純以上。.3水要求是去離子純潔水。4.6.4流動相無氣泡，通過超聲脫氣，通氦氣等方法進行脫氣。純潔無雜質(zhì)，常用方法為用0.45μm微孔過濾膜進行過濾。4.6.5色譜柱的本卷須知壓力：注意每根柱的耐壓〔最大使用壓力〕。pH的范圍：不同柱子的pH值范圍有所不同。清洗：柱子需要必要的清洗，請用戶參考柱子的說明書。保存：長時間不使用柱子時需要用適宜的試劑進行保存，請參考柱子的說明書。4.6.6關(guān)于吸濾過濾器堵塞現(xiàn)象：塞吸現(xiàn)象、管路中不斷產(chǎn)生氣泡處理方式：將吸濾頭1從溶劑管中拔出，放在正己烷或稀硝酸〔一般〈10%〉中超聲清洗。4.6.7在線過濾器堵塞現(xiàn)象：不連接柱子及管路、混合器〔松開泵進混合器或柱子的管路接頭〕，設定泵流速為1ml/min，泵壓力大于0.3MPa，說明在線過濾器堵塞。處理方式：一般建議用戶更換新的過濾器，也可以將在線過濾器拆下，用稀硝酸〔濃度小于10%〕，進行超聲清洗。4.6.8壓力波動的原因及處理方法產(chǎn)生波動的原因：有氣泡；密封圈有磨損，產(chǎn)生微量的泄液；進口單向閥中有異物〔較常見〕；在線過濾器，管路，柱子進口處有鹽析出或雜物；處理方法：流動相進行脫氣，排除流路中的氣泡；更換密封圈；清洗進出口單向閥，將單向閥置于燒杯中，用異丙醇進行超聲清洗；檢查并清洗過濾器及流路。4.6.9引起柱壓升高的原因在線過濾器堵；高壓混合器堵；進樣器堵；流路中局部細管堵；流通池堵；柱子內(nèi)部吸附樣品產(chǎn)生堵。4.6.10進樣峰分叉的原因流路及柱子等沒有做任何改變的情況下，分析樣品時，被檢測峰產(chǎn)生分叉，那么說明保護柱或分析柱柱效下降，需再生保護柱或分析柱。柱的出口到檢測池的管路偏長或管路內(nèi)徑寬所致〔常用內(nèi)徑0.3mm以下〕,導致樣品擴散,造成峰分叉。4.6.11什么情況下需更換D2Lamp〔氘燈〕顯示D2LampERROR時，一般情況下認為氘燈不良需更換。氘燈超過使用時間〔理論為2000小時〕，需要更換氘燈。4.6.12造成檢測池能量低的原因氘燈使用時間過長〔大于2000小時〕，燈老化所致。光路系統(tǒng)受到污染或老化。說明：檢測池能量上下以參比池為準。4.6.13檢測池中有氣泡如何排除一般情況下，很小的氣泡會停留在檢測池中，所以需要在池管路出口1處加一個背壓管，池中氣泡不易在池中產(chǎn)生?！布颖硥海撼隹谔幖由弦欢巫枘峁茉黾訅毫Α?.6.14如何清洗流通池一般情況下，請用戶不要將池拆散，而是用儀器附帶的工具進行清洗。常用流程：水-甲醇-異丙醇-甲醇，或再用稀硝酸沖洗池流路。4.6.15基線漂移，噪音增大的原因。所用試劑不純整個流路系統(tǒng)不干凈流動池污染氘燈使用時間過長電壓不穩(wěn)，或者有環(huán)境干擾柱子污染等因素4.6.16梯度洗脫時可能產(chǎn)生的干擾峰在進行梯度洗脫時，由于溶劑的變化，導致吸光度背景值的該改變。所以會產(chǎn)生基線上下波動，這是正常現(xiàn)象。由于不斷的洗脫，特別是水及無機鹽混合的流路，流過柱子后局部雜質(zhì)被柱子吸附，隨著體系洗脫液極性的變