N-Ras在血管發(fā)育中的功能研究及斑馬魚白血病轉(zhuǎn)基因系的建立的開題報告

N-Ras在血管發(fā)育中的功能研究及斑馬魚白血病轉(zhuǎn)基因系的建立的開題報告題目：N-Ras在血管發(fā)育中的功能研究及斑馬魚白血病轉(zhuǎn)基因系的建立一、研究背景血管系統(tǒng)是維持生命的重要組成部分，不僅與新陳代謝有關(guān)，還與身體內(nèi)各種細(xì)胞和器官之間的相互作用有密切關(guān)系。血管形成和發(fā)展過程中包括血管內(nèi)皮細(xì)胞的生長、分化、遷移、管腔形成等一系列生物學(xué)過程，這些過程中涉及到許多信號通路的調(diào)控，其中Ras信號通路在其中發(fā)揮了重要的作用。白血病是一種造血系統(tǒng)的腫瘤性疾病，其特征為造血干細(xì)胞或幼稚的白細(xì)胞克隆增生、分化阻滯或失控。白血病患者往往因血液中白細(xì)胞增多，造成骨髓中正常血細(xì)胞的生成障礙，從而導(dǎo)致貧血、感染等嚴(yán)重問題。在目前的白血病治療中，轉(zhuǎn)基因動物模型已成為一項不可或缺的工具，目前許多研究采用斑馬魚作為白血病轉(zhuǎn)基因模型進(jìn)行研究。二、研究目的本研究主要目的是通過建立斑馬魚N-Ras缺陷模型并結(jié)合胚胎發(fā)育模型及分子生物學(xué)、生化學(xué)和組織學(xué)等技術(shù)研究N-Ras在血管發(fā)育過程中的功能，探究N-Ras在血管系統(tǒng)發(fā)育中的作用，為深入研究血管系統(tǒng)發(fā)育和心血管疾病提供理論依據(jù)。同時，本研究還旨在建立斑馬魚白血病轉(zhuǎn)基因系，為研究白血病的發(fā)生機制及新型治療方法等方面提供新的實驗?zāi)Ｐ汀Ｈ?、研究?nèi)容與方案1.構(gòu)建N-Ras基因缺陷模型采用CRISPR/Cas9技術(shù)篩選合適的靶基因，通過改變編碼序列，構(gòu)建N-Ras基因缺陷模型。利用PCR、Westernblot等方法檢驗?zāi)Ｐ秃细裥?，并分別觀察N-Ras基因缺陷斑馬魚在發(fā)育過程中的生理和形態(tài)學(xué)變化。2.研究N-Ras在血管系統(tǒng)發(fā)育過程中的作用利用N-Ras基因缺陷斑馬魚模型和胚胎發(fā)育模型，觀察N-Ras在血管系統(tǒng)發(fā)育過程中的作用。通過FISH（原位雜交）和免疫組化等技術(shù)，研究N-Ras與一些血管系統(tǒng)關(guān)鍵因子（如VEGF、Notch等）的相互作用關(guān)系，以及其在血管系統(tǒng)發(fā)育中的作用。3.建立斑馬魚白血病轉(zhuǎn)基因系通過顯微注射、CRISPR/Cas9技術(shù)和逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)染等方法，將人類白血病相關(guān)基因?qū)氚唏R魚中，構(gòu)建斑馬魚白血病轉(zhuǎn)基因系。對轉(zhuǎn)基因斑馬魚進(jìn)行表型分析、基因表達(dá)和調(diào)控分析，探究白血病在斑馬魚模型中的發(fā)生機制和新型治療方法。四、預(yù)期成果通過本研究，預(yù)期得到以下成果：（1）構(gòu)建斑馬魚N-Ras基因缺陷模型，探究N-Ras在血管系統(tǒng)發(fā)育中的作用。（2）深入研究N-Ras與血管系統(tǒng)關(guān)鍵因子的相互作用關(guān)系，為血管系統(tǒng)發(fā)育機制進(jìn)一步探究提供理論依據(jù)。（3）建立斑馬魚白血病轉(zhuǎn)基因系，為白血病發(fā)生機制研究和新型治療方法的開發(fā)提供新思路。（4）提高學(xué)術(shù)水平，為心血管疾病和白血病的臨床治療提供理論支持。五、研究意義本研究對于血管系統(tǒng)發(fā)育機制的深入研究以及白血病的發(fā)生機制和治療方法的研究具有一定的理論