實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)實(shí)驗(yàn)及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物采血方法

實(shí)驗(yàn)一常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)介紹目的了解并熟悉實(shí)驗(yàn)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)操作的基本方法和技術(shù)。內(nèi)容注射方法；麻醉方法；動(dòng)物編號(hào)的方法；采血；動(dòng)物性別鑒定；動(dòng)物的致死。學(xué)習(xí)打結(jié)、縫合、固定動(dòng)物等。播放錄像《太行山獼猴》、《動(dòng)物的捉拿和給藥途徑》。用品大白鼠、小白鼠、蟾蜍、家兔，常用手術(shù)器械、注射器、小木錘、大小鼠固定器，戊巴比妥鈉，乙醚、士的寧、乙醚、氯仿、氯化鉀、一氧化碳、二氧化碳常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物性別鑒定1、大、小鼠的性別鑒定離乳仔鼠性別鑒定主要以生殖器與肛門之間的距離長(zhǎng)短及肛門與生殖器有無(wú)被毛為標(biāo)志。識(shí)別要點(diǎn)是：①雄性的生殖器與肛門之間的距離較遠(yuǎn)，雌鼠較近；②雄性的生殖器與肛門之間有毛；③雄性的生殖器突起較雌鼠大；④雌鼠乳頭較雄鼠明顯。成熟后，雄性可見陰囊,雌性乳頭明顯而易于區(qū)分。2、豚鼠的性別鑒定豚鼠的性別鑒定主要是通過生殖器形態(tài)來(lái)判斷。雌性外生殖器陰蒂突起比較小，用拇指按住陰蒂突起，余指撥開大陰唇的皺褶，可見陰道口呈”V”形（注意發(fā)情間期的閉鎖現(xiàn)象，即一種除了發(fā)情和分娩時(shí)外，關(guān)閉陰道口的細(xì)胞結(jié)構(gòu)）；雄性外生殖器有包皮覆蓋的陰莖小隆起，用拇指按住其基部包皮，可見龜頭向外突出。3、兔子的性別鑒定幼兔的性別鑒定主要以尿道開口部與肛門之間的距離及尿道開口部的形狀來(lái)判別。哺乳期仔兔，雄性尿道開口部與肛門之間的距離較遠(yuǎn)，為雌性的1.5－2倍，雌性較近。雌性尿道開口扁形，大小與肛門同；雄性圓形，略小于肛門。1月齡仔兔，雄性生殖孔呈圓形，翻出可見呈圓柱體的突起；雌性生殖孔呈Y形，翻出僅見有裂縫，裂縫及于肛門。3月齡以上成年兔，雄性陰囊明顯而雌性無(wú)陰囊；雄性頭大短而圓而雌性頭小略呈長(zhǎng)形。4、貓的性別鑒定幼貓的性別是根據(jù)生殖器與肛門的距離來(lái)判斷。距離遠(yuǎn)者為雄性，距離近者為雌性。5、猴類的性別鑒定猴類性別的區(qū)分較為困難。首先檢查尿道開口，許多雌性動(dòng)物有較大的陰蒂，其腹側(cè)形成溝狀通向尿道口，而雄性動(dòng)物的尿道開口在陰莖頭上。觸摸陰囊內(nèi)是否有睪丸是確定其雌雄的最可靠辦法。常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物處死大鼠和小鼠的處死方法1、脊椎脫臼法右手抓住鼠尾用力向后拉，同時(shí)左手拇指與食指用力向下按住鼠頭，將脊髓與腦髓拉斷，鼠便立即死亡。2、斷頭法實(shí)驗(yàn)者戴上棉紗手套，用右手握住大鼠頭部，左手握住背部，露出頸部，助手用剪刀在鼠頸部將鼠頭剪掉。小鼠處死法相同。3、擊打法右手抓住鼠尾，提起，用力摔擊其頭部，鼠痙攣后立即死亡。用小木錘用力擊打鼠頭部也可致死。4、急性大失血法可采用鼠眼眶動(dòng)脈和靜脈急性大量失血方法使大小鼠立即死亡。5、化學(xué)致死法吸入一氧化碳，大、小鼠在一氧化碳濃度為0.2-0.5%環(huán)境中即可致死。皮下注射士的寧，吸入乙醚、氯仿，均可致死。士的寧注射量，小鼠為0.76～2.0mg/kg體重，大鼠3.0-3.5ml/kg體重。氯化鉀處死大鼠劑量：25%溶液0.6ml/只靜脈注入。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的處死方法很多，應(yīng)根據(jù)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、?shí)驗(yàn)動(dòng)物品種（品系）、以及需要采集標(biāo)本的部位等因素，選擇不同的處死方法。無(wú)論采用哪一種方法，都應(yīng)遵循安樂死的原則。安樂死是指在不影響動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果的前提下，使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物短時(shí)間無(wú)痛苦地死亡。處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物時(shí)應(yīng)注意，首先要保證實(shí)驗(yàn)人員的安全；其次要確認(rèn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物已經(jīng)死亡，通過對(duì)呼吸、心跳、瞳孔、神經(jīng)反射等指征的觀察，對(duì)死亡作出綜合判斷；再者要注意環(huán)保，避免污染環(huán)境，還要妥善處理好尸體。一、頸椎脫臼處死法此法是將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的頸椎脫臼，斷離脊髓致死，為大、小鼠最常用的處死方法。操作時(shí)實(shí)驗(yàn)人員用右手抓住鼠尾根部并將其提起，放在鼠籠蓋或其他粗糙面上，用左手拇指、食指用力向下按壓鼠頭及頸部，右手抓住鼠尾根部用力拉向后上方，造成頸椎脫臼，脊髓與腦干斷離，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物立即死亡。二、斷頭處死法此法適用于鼠類等較小的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。操作時(shí)，實(shí)驗(yàn)人員用左手按住實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的背部，拇指夾住實(shí)驗(yàn)動(dòng)物右腋窩，食指和中指夾住左前肢，右手用剪刀在鼠頸部垂直將鼠頭剪斷，使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物因腦脊髓斷離且大量出血死亡。三、擊打頭蓋骨處死法主要用于豚鼠和兔的處死。操作時(shí)抓住實(shí)驗(yàn)動(dòng)物尾部并提起，用木錘等硬物猛烈打擊實(shí)驗(yàn)動(dòng)物頭部，使大腦中樞遭到破壞，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物痙攣并死亡。四、放血處死法此法適用于各種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。具體做法是將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的股動(dòng)脈、頸動(dòng)脈、腹主動(dòng)脈剪斷或剪破、刺穿實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的心臟放血，導(dǎo)致急性大出血、休克、死亡。犬、猴等大動(dòng)物應(yīng)在輕度麻醉狀態(tài)下，在股三角做橫切口，將股動(dòng)脈、股靜脈全部暴露并切斷，讓血液流出。操作時(shí)用自來(lái)水不斷沖洗切口及血液，既可保持血液暢流無(wú)阻，又可保持操作臺(tái)清潔，使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物急性大出血死亡。五、空氣栓塞處死法處死兔、貓、犬常用此法。向?qū)嶒?yàn)動(dòng)物靜脈內(nèi)注入一定量的空氣，形成肺動(dòng)脈或冠狀動(dòng)脈空氣栓塞，或?qū)е滦那粌?nèi)充滿氣泡，心臟收縮時(shí)氣泡變小，心臟舒張時(shí)氣泡變大，從而影響回心血液量和心輸出量，引起循環(huán)障礙、休克、死亡?？諝馑ㄈ幩婪ㄗ⑷氲目諝饬浚埡屯脼?0~50ml，犬為90~160ml。六、過量麻醉處死法此法多用于處死豚鼠和家兔?？焖龠^量注射非揮發(fā)性麻醉藥（投藥量為深麻醉時(shí)的30倍），或讓動(dòng)物吸入過量的乙醚，使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中樞神經(jīng)經(jīng)過過度抑制，導(dǎo)致死亡。應(yīng)用戊巴比妥鈉注射麻醉致死。豚鼠可用其麻醉劑量3倍以上劑量腹腔注射。貓可采用本藥麻醉量的2～3倍藥量靜脈注射或腹腔內(nèi)注射。兔可用本藥80～100ml／kg的劑量急速注入耳緣靜脈內(nèi)。狗可用本藥100mg／kg靜脈注射。七、毒氣處死法讓實(shí)驗(yàn)動(dòng)物吸入大量CO2等氣體而中毒死亡。吸入二氧化碳，此法安全、人道、迅速，被認(rèn)為是處理嚙齒類的理想方法，國(guó)外現(xiàn)多采用此法。可將多只動(dòng)物同時(shí)置入一個(gè)大箱或塑料袋內(nèi)，然后充入CO2，動(dòng)物在充滿CO2的容器內(nèi)l～3min內(nèi)死去。人類為什么總拿小白鼠做實(shí)驗(yàn)？原因一：

老鼠中的小白鼠的基因序列和人類的差不多，一些醫(yī)學(xué)的科研和臨床實(shí)驗(yàn)都是有小白鼠來(lái)完成的。當(dāng)中以小白鼠做遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)很好，因?yàn)樗娜蚪M和人類的相似度極高，很多人類難以治愈的疾病可以在小白鼠身上找到相似性狀，從而加以實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)治病基因。

原因二：

實(shí)驗(yàn)專用白鼠的生物學(xué)意義較大，純系小鼠的培育方法經(jīng)過百年探索已經(jīng)形成固定流程，培育出的小鼠幾乎完全沒有個(gè)體差異(生理上)，而在一般的自然種群中,同種動(dòng)物間的個(gè)體差異是很大的(盡管外表相同)，主要表現(xiàn)在先天的身體素質(zhì)上。生理上沒有個(gè)體差異是否意味著氣質(zhì)上沒有差異尚不明了，不過選擇純系實(shí)驗(yàn)白鼠主要還是為了盡可能的減少先天的個(gè)體差異。

原因三：

數(shù)量充足，許多實(shí)驗(yàn)需要統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，這就要求一定的數(shù)量，大白鼠和小白鼠，特別是小白鼠，在人工繁殖條件下，能滿足這一要求。種系純，好的實(shí)驗(yàn)要對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的品種嚴(yán)格控制，這用小白鼠就容易解決。

還有動(dòng)物等級(jí)，小白鼠好歹也是哺乳動(dòng)物，除了體形小，與其它哺乳動(dòng)物的進(jìn)化水平相比并不差。體形小反而成為人工繁殖喂養(yǎng)的有利條件。

原因四：

其實(shí)很多實(shí)驗(yàn)用猩猩等與人更近似的動(dòng)物做最好，但使用猩猩太昂貴了。許多實(shí)驗(yàn)，比如認(rèn)知類的，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后時(shí)需要將動(dòng)物殺死，來(lái)檢查其內(nèi)部變化的。這樣，大量的實(shí)驗(yàn)肯定就不能用比較“貴重”的猩猩了。實(shí)驗(yàn)二、常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物采血、血細(xì)胞計(jì)數(shù)1、小白鼠的采血目的：了解并熟悉小白鼠的采血方法；掌握小白鼠眼眶后靜脈叢采血。用品:二甲苯棉球、1%肝素溶液、1%可卡因、乙醚、刀片、無(wú)鉤彎鑷子、彎止血鉗、微量采血針、剪刀、剪毛剪、鋒利刀片、注射器。內(nèi)容：1、剪尾采血：需血量少時(shí)可用此方法。將動(dòng)物固定，顯露尾部，將尾尖剪去約5mm，從尾根部向尾端部按摩，血即從斷端流出。若用二甲苯棉球涂擦尾部或事先將鼠尾浸在45℃水中數(shù)分鐘，使尾部血管充盈，可采到較多的血，但注意二甲苯可致溶血。也可用鋒利刀片割破尾動(dòng)脈或尾靜脈，讓血液自行流出，采血后，消毒，止血。如將動(dòng)物麻醉取血量可更多些。小鼠每次采血約0.1ml，大鼠約0.4

ml。為了多次反復(fù)取血應(yīng)盡量從鼠尾末端開始。

2、摘眼球采血：此法常用于鼠類大量采血。用左手固定動(dòng)物，壓迫眼球，盡量使眼球突出，右手用無(wú)鉤彎鑷子或彎止血鉗迅速摘除眼球，立即將鼠倒置，頭朝下，眼眶內(nèi)很快流出血液。一般只適用于一次采血。大部動(dòng)物采血后可以存活，可采另一側(cè)眼球取血。

3、眼眶后靜脈叢采血：用7—10cm長(zhǎng)的微量采血針。將取血管浸入1%肝素溶液，干燥后使用。采血時(shí)，左手拇指和食指抓住鼠兩耳之間的皮膚使鼠固定，并用中指配合，輕輕壓迫頸部?jī)蓚?cè)，阻礙靜脈回流，使眼球充分外突，提示眼眶后靜脈叢充血?？捎蒙倭?%可卡因滴入動(dòng)物眼內(nèi)，使眼部局部麻醉。右手持取血管，將其尖端插入內(nèi)眼角與眼球之間，輕輕向眼底方向刺入，小鼠刺入約2—3mm，大鼠刺入約4—5

mm，當(dāng)感到有阻力時(shí)即停止刺入，旋轉(zhuǎn)取血管以切開靜脈叢，血液即流入取血管中，采血結(jié)束后，拔出取血管，放松左手，出血即停止。用本法短期內(nèi)可重復(fù)采血。小鼠一次可采血0.2—0.3

ml，大鼠一次可采0.5—0.1ml4、頸靜脈或頸動(dòng)脈采血：將鼠麻醉，剪去一側(cè)頸部外側(cè)被毛，作頸靜脈或頸動(dòng)脈分離手術(shù)，用注射器即可抽出所需血量。也可插入導(dǎo)管，反復(fù)采血。

5、斷頭采血：操作者左手拇指和食指握住鼠頸部，頭朝下，用利剪在頭頸間1/2處迅速剪動(dòng)物頭部，提起動(dòng)物，血液即可流入準(zhǔn)備好的容器中。

6、心臟采血：將動(dòng)物麻醉，使其仰位固定，剪去胸前區(qū)毛，消毒皮膚，在左側(cè)第3—4肋間選擇心博最強(qiáng)處穿刺，血液借心臟跳動(dòng)的力量進(jìn)入注射器。亦可在動(dòng)物麻醉后，切開動(dòng)物胸腔，直視心臟內(nèi)抽血或剪破心臟，直接用注射器、吸管等吸血。2、豚鼠的采血目的了解并熟悉豚鼠的采血方法；用品刀片、注射器、消毒干棉球、75%酒精棉球、20%的檸檬酸鈉溶液、紗布、脫脂棉。方法與步驟：1、耳緣切口采血：先將豚鼠耳消毒，用刀片割破耳緣，在切口邊緣涂上20%的檸檬酸鈉溶液，防止血凝，則血可自切口處流出。此法采血每次可采0.5ml左右。

2、背中足靜脈采血：固定豚鼠，將其右或左后肢膝關(guān)節(jié)伸直，腳背消毒，找出背中足靜脈，左手拇指和食指拉住豚鼠的趾端，右手將注射針刺入靜脈，拔針后立即出血。采血后用紗布或脫脂棉壓迫止血。

3、心臟采血：選心跳最明顯的部位把注射針刺入心臟，血液即流入針管。心臟采血時(shí)所用的針頭應(yīng)細(xì)長(zhǎng)些，以免發(fā)生采血后穿刺孔出血。3、家兔的采血目的了解并熟悉家兔的采血方法；掌握家兔的耳緣靜脈采血方法。用品常用手術(shù)器械、玻璃取血管、計(jì)數(shù)板、注射器、顯微鏡。內(nèi)容1、耳緣靜脈采血：將兔固定，拔去耳緣靜脈局部的被毛，消毒，用手指輕彈兔耳，使靜脈擴(kuò)張，用針頭刺耳緣靜脈末端，血液即流出。本法為兔最常用的采血方法，可多次重復(fù)使用。

2、耳中央動(dòng)脈采血：在兔耳中央有一條較粗的、顏色較鮮紅的中央動(dòng)脈。用左手固定兔耳，右手持注射器，在中央動(dòng)脈的末端，沿著與動(dòng)脈平行的向心方向刺入動(dòng)脈，即可見血液進(jìn)入針管。由于兔耳中央動(dòng)脈容易痙攣，故抽血前必須讓兔耳充分充血，采血時(shí)動(dòng)作要迅速。采血所用針頭不要太細(xì)，一般用6號(hào)針頭，針刺部位從中央動(dòng)脈末端開始，不要在近耳根部采血。

3、頸靜脈采血：將家兔麻醉，剪去一側(cè)頸部外側(cè)被毛，作頸靜脈或頸動(dòng)脈分離手術(shù)，用注射器即可抽出所需血量。也可插入導(dǎo)管，反復(fù)采血。

4、心臟采血：穿刺部位在第三肋間胸骨左緣1mm處，選心跳最明顯的部位把注射針刺入心臟，血液即流入針管。心臟采血時(shí)所用的針頭應(yīng)細(xì)長(zhǎng)些，以免發(fā)生采血后穿刺孔出血。4、小白鼠RBC、WBC計(jì)數(shù)目的1、復(fù)習(xí)小白鼠眼眶后靜脈叢采血；2、學(xué)習(xí)微量采血法和紅、白細(xì)胞計(jì)數(shù)法。原理用加有抗凝劑的溶液將定量的血液稀釋，滴入血細(xì)胞計(jì)數(shù)室內(nèi)，于顯微鏡下計(jì)數(shù)，求出一定容積的稀釋血液中的RBC、WBC數(shù)，再將其換算成1L血液中的RBC、WBC個(gè)數(shù)。用品血細(xì)胞計(jì)數(shù)板、計(jì)數(shù)器、顯微鏡、微量吸血管、酒精棉球、消毒脫脂棉球、RBC稀釋液（0.9%NaCl溶液）或RBC稀釋液：NaCl（維持滲透壓）0.5g，Na2SO4（使溶液比重增加，紅細(xì)胞均勻分布不易下沉）2.5g，HgCl2（固定紅細(xì)胞并防腐）0.25g，蒸餾水加至100ml。WBC稀釋液，其成分為：冰醋酸1ml（破壞紅細(xì)胞），1%龍膽紫1ml（染白細(xì)胞核，便于計(jì)數(shù)），加蒸餾水至100ml。方法與步驟1、熟悉血細(xì)胞計(jì)數(shù)板和微量吸血管的構(gòu)造（1）計(jì)數(shù)板是一塊厚厚的長(zhǎng)方形玻璃板，板的中部有四條直槽，內(nèi)側(cè)兩槽中間有一條橫槽，把中部隔成兩個(gè)長(zhǎng)方型的平臺(tái)。此平臺(tái)比整個(gè)玻璃板的平臺(tái)低0.1mm，當(dāng)放上蓋玻片后，平臺(tái)與蓋玻片之間的高度為0.1mm,平臺(tái)中部有3mm×3mm精確劃分的9個(gè)大方格，稱為計(jì)數(shù)室,每個(gè)大方格的面積為1mm×1mm=1mm2,體積為0.1mm3。中央的大方格則由雙線精確劃分為25個(gè)中方格，每個(gè)中方格的面積為0.2mm×0.2mm=0.04mm2,體積為0.004mm3,每個(gè)中方格又用單線精確劃分成16個(gè)小方格。適用于RBC計(jì)數(shù)。（2）微量吸血管一次性玻璃細(xì)管，以防交叉感染。該管長(zhǎng)12cm，在4.5cm處和9cm處各有一定量標(biāo)記，分別10μl和20μl。在11cm處有一色標(biāo)，為連結(jié)橡膠吸頭的標(biāo)記。2、微量采血和稀釋（1）先準(zhǔn)確吸取3.98mlRBC稀釋液于一潔凈的試管內(nèi)。（2）手持微量吸血管，將其管口浸入血滴，緩緩吸入血液至20μl處，如吸入血液稍過量，可用手指或干棉球輕觸管口，緩緩轉(zhuǎn)動(dòng)，可使血液吸出，至恰好與刻度相符。用干棉球?qū)⒐芸谕饷娴难翰潦酶蓛簟⒀杭尤氲綔?zhǔn)備好的RBC稀釋液中。注意，應(yīng)將采血管垂直插入稀釋液底部，緩緩擠出血液使之不擴(kuò)散，輕吸上清液再擠出，使血液完全轉(zhuǎn)入到試管中。（3）將血液和稀釋液混勻。3、充液取潔凈計(jì)數(shù)板及蓋玻片，將蓋玻片平放在計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)室上。用干凈吸血管或小吸管吸少量混勻的RBC稀釋液，然后將管口斜置于蓋玻片邊緣的計(jì)數(shù)板毛玻璃斜面上，擠出少量稀釋液，此時(shí)液體即由于毛細(xì)管作用而進(jìn)入計(jì)數(shù)室內(nèi)。但須注意，如果計(jì)數(shù)室內(nèi)留有氣泡或稀釋液過多以致溢出室外的凹溝中，都應(yīng)該洗去，再重新充液。4、計(jì)數(shù)充液后應(yīng)讓計(jì)數(shù)板靜置8min，待RBC充分下沉后方可進(jìn)行計(jì)數(shù)。先在低倍顯微鏡下觀察RBC分布是否均勻，如果分布很不均勻，應(yīng)洗去重做。在低倍鏡下找到中央大方格，看清其橫、豎線后即可用高倍鏡來(lái)計(jì)數(shù)。顯微鏡的光圈應(yīng)縮小并降低聚光器使得視野較暗，這樣RBC的輪廓可更清楚些。通常選擇中央大方格四角的4個(gè)中格和中央的1個(gè)中格來(lái)計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)為了防止遺漏，應(yīng)按一定的順序：即第一行先從左向右數(shù)到最后一格，下一行則從右向左數(shù)，以此類推。對(duì)于分布在雙線上的RBC，則可計(jì)數(shù)左側(cè)和上方線上的RBC，即按照“數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右”的原則。計(jì)數(shù)時(shí)應(yīng)將每個(gè)中格的RBC數(shù)記錄下來(lái)，若發(fā)現(xiàn)各中格之間的RBC數(shù)相差超過15個(gè)時(shí)，表示其分布不均勻，應(yīng)將計(jì)數(shù)室洗凈，重新?lián)u勻吸管中的稀釋血液，再充液進(jìn)行計(jì)數(shù)。5、計(jì)算RBC的稀釋倍數(shù)為200倍：（0.02ml+3.98ml）/0.02ml=200計(jì)數(shù)室5個(gè)中格的總?cè)莘e為0.02mm3，設(shè)5個(gè)中格RBC總數(shù)為X，則1mm3稀釋液RBC總數(shù)為X×50個(gè)。由此可知，每毫升血液中實(shí)際RBC數(shù)目：X×50×200個(gè)，即10000X，再乘以106得出每升血液中的RBC數(shù)。WBC基本與RBC相同，不同之處：1、WBC稀釋液，其成分為：冰醋酸1ml（破壞紅細(xì)胞），1%龍膽紫1ml（染白細(xì)胞核，便于計(jì)數(shù)），加蒸餾水至100ml。2、計(jì)數(shù)板四角的四個(gè)大方格又各分為16個(gè)中方格，適用于WBC計(jì)數(shù)。3、吸取WBC稀釋液為0.38ml，血液稀釋了20倍。4、在計(jì)數(shù)WBC時(shí)，計(jì)數(shù)四角的4個(gè)大方格中的WBC總數(shù)。其總?cè)莘e為0.4mm3,換算成每升血液中的WBC數(shù)時(shí)，4個(gè)大方格內(nèi)WBC數(shù)×2.5×20×106=WBC數(shù)/L。5、計(jì)數(shù)時(shí)，如發(fā)現(xiàn)大方格之間的WBC數(shù)相差超過10個(gè)時(shí)，表示W(wǎng)BC分布不均勻，應(yīng)重新充液計(jì)數(shù)。思考題：1、在實(shí)際操作中，你認(rèn)為哪種采血方法效果好？為什么？2、小結(jié)在操作過程中，哪些因素可能影響計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性？實(shí)驗(yàn)三、常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的給藥、胰島素驚厥1、小白鼠的給藥目的：1、了解并熟悉小白鼠、豚鼠、家兔的給藥方法；2、掌握小白鼠的皮下注射、腹腔注射。3、了解胰島素調(diào)節(jié)血糖水平的機(jī)能。用品：小鼠專用灌胃針、注射器、75%酒精棉球。內(nèi)容：

1．灌胃給藥

小鼠專用灌胃針由注射器和喂管組成，喂管長(zhǎng)約1nm，喂管尖端焊有一金屬小圓球，金屬球中空，用途是防止喂管插入時(shí)造成損傷。金屬球彎成20度角，以適應(yīng)口腔與食道之間彎曲。將喂管插頭緊緊連接在注射器的接口上，吸入定量的藥液；左手捉住小鼠，右手拿起準(zhǔn)備好的注射器。將喂管針頭尖端防放進(jìn)小鼠口咽部，順咽后壁輕輕往下推，喂管會(huì)順著食管滑入小鼠的胃，插入深度約3cm。用中指與拇指捏住針筒，食指按著針竿的頭慢慢往下壓，即可將注射器忠的藥液灌入小鼠的胃中。在插入過程中如遇到阻力或可看見1/3的針管，則江喂管取出重新插入，因?yàn)檫@時(shí)灌胃并沒有插入胃中。

2．注射給藥

（1）皮下注射給藥

皮下注射給藥是將藥液推入皮下結(jié)締組織，經(jīng)毛細(xì)血管、淋巴管吸收進(jìn)入血液循環(huán)的過程。作皮下注射常選項(xiàng)背或大腿內(nèi)側(cè)的皮膚。操作時(shí)，常規(guī)消毒注射部位皮膚，然后將皮膚提起，注射針頭取一鈍角角度刺入皮下，把針頭輕輕向左右擺動(dòng)，易擺動(dòng)則表示已刺入皮下，再輕輕抽吸，如無(wú)回血，可緩慢地將藥物注入皮下。拔針時(shí)左手拇、食指捏住進(jìn)針部位片刻，以防止藥物外漏。注射量約為0.1-0.3ml/10g體重。

（2）皮內(nèi)注射給藥

是將藥液注入皮膚的表皮和真皮之間，觀察皮膚血管的通透性變化或皮內(nèi)反應(yīng)，接種、過敏實(shí)驗(yàn)等一般作皮內(nèi)注射。先將注射部位的被毛剪掉，局部常規(guī)消毒，左手拇指和食指按住皮膚使之繃緊，在兩指之間，用結(jié)核菌素注射器連接4.5針頭穿刺，針頭進(jìn)入皮膚淺層，再向上挑起并梢刺入，將藥液注入皮內(nèi)。注射后皮膚出現(xiàn)一白色小皮丘，而皮膚上的毛孔極為明顯。注射量為0.1ml/次。

（3）肌肉注射給藥

小鼠體積小，肌肉少，很少采用肌肉注射。當(dāng)給小鼠注射不溶于水而混懸于油或其他溶劑中的藥物時(shí)，采用肌肉注射。操作時(shí)1人保定小鼠，另一人用左手抓住小鼠的1條后肢，右手拿注射器。將注射器與半腱肌呈60°角迅速插入1/4，注入藥液。用藥量：不超過0.1ml/10g體重。

(4)靜脈注射給藥

將小鼠放在金屬籠或鼠夾中，通過金屬籠或鼠夾的孔拉出尾巴，用左手抓住小鼠尾巴中部，小鼠的尾部有2條動(dòng)脈和3條靜脈，2條動(dòng)脈分別在尾部的背側(cè)面和腹側(cè)面，3條靜脈呈品字型分布，一般采用左右兩側(cè)的靜脈。拔去沿尾部靜脈走向的毛，置尾巴于45-50℃溫水中浸泡幾分鐘或用75%酒精棉球反復(fù)擦拭尾部，以達(dá)到消毒和使尾部血管擴(kuò)張及軟化表皮角質(zhì)的目的。當(dāng)尾部靜脈注射時(shí),以左手拇指和食指捏住鼠尾兩惻，使靜脈更為充盈，用中指從下面托起尾巴，以無(wú)名指夾住尾巴的末梢，右手持4號(hào)針頭注射器，使針頭與靜脈平行(小于30°角)，從尾巴的下1/4處進(jìn)針，開始注入藥物時(shí)應(yīng)緩慢，仔細(xì)觀察，如果無(wú)阻力，無(wú)白色皮丘出現(xiàn)，說(shuō)明已刺入血管，可正式注入藥物。有的實(shí)驗(yàn)需連日反復(fù)尾靜脈注射給藥，注射部位應(yīng)盡可能從尾端開始，按次序向尾根部移動(dòng)，更換血管位置注射給藥。注射量為0.05-0.1ml/10g體重。拔出針頭后，用拇指按住注射部位輕壓1-2min，防止出血。

（5）腹腔注射

左手提起并固定小鼠，使鼠腹部朝上，鼠頭略低于尾部，右手持注射器將針頭在下腹部近腹白線的兩側(cè)進(jìn)行穿刺，針頭刺入皮膚后進(jìn)針3nm左右，接著使注射針頭與皮膚呈45°角刺入腹肌，穿過腹肌進(jìn)入腹膜腔，當(dāng)針尖穿過腹肌進(jìn)入腹膜腔后抵抗感消失。固定針頭，保持針尖不動(dòng)，回抽針?biāo)?，如無(wú)回血、腸液和尿液后即可注射藥液。注射量為0.1-0.2ml/10g體重。2、豚鼠的給藥1）皮下注射給藥皮下注射部位取頸背、腋下、側(cè)腹或豚鼠后大腿的內(nèi)側(cè)，注射時(shí)以左手拇指和食指提起豚鼠皮膚，將連有5（1/2）號(hào)針頭的注射器刺入皮下。2）肌肉注射給藥選用大腿外側(cè)肌肉進(jìn)行注射。操作時(shí)1人保定豚鼠，另一人用左手抓住豚鼠的1條后肢，右手拿注射器。將注射器與半腱肌呈60°角迅速插入1/4，注入藥液。用藥量：不超過0.1ml/10g體重。3、家兔的給藥1）靜脈注射兔耳部血管分布清晰。兔耳中央為動(dòng)脈，耳外緣為靜脈。內(nèi)緣靜脈深不易固定，故不用。外緣靜脈表淺易固定，常用。先拔去注射部位的被毛，用手指彈動(dòng)或輕揉兔耳，使靜脈充盈，左手食指和中指夾住靜脈的近端，拇指繃緊靜脈的遠(yuǎn)端，無(wú)名指及小指墊在下面，右手持注射器連6號(hào)針頭盡量從靜脈的遠(yuǎn)端刺入，移動(dòng)拇指于針頭上以固定針頭，放開食指和中指，將藥液注入，然后拔出針頭，用手壓迫針眼片刻。2）皮下注射注射時(shí)以左手拇指和食指提起皮膚，將連有5（1/2）號(hào)針頭的注射器刺入皮下。皮下注射部位一般狗、貓多在大腿外側(cè)，豚鼠在后大腿的內(nèi)側(cè)或小腹部；大白鼠可在側(cè)下腹部。兔在背部或耳根部注射。3）肌肉注射肌肉注射應(yīng)選肌肉發(fā)達(dá)，無(wú)大血管通過的部位，一般多選臀部。注射時(shí)垂直迅速刺入肌肉，回抽針?biāo)ㄈ鐭o(wú)回血，即可進(jìn)行注射。4）腹腔注射用家兔做實(shí)驗(yàn)時(shí)，進(jìn)針部位為下腹部的腹白線離開1cm處。小白鼠胰島素驚厥基本原理胰島素是調(diào)節(jié)機(jī)體血糖的激素之一，當(dāng)體內(nèi)胰島素含量增高時(shí)，便引起血糖下降，動(dòng)物出現(xiàn)驚厥現(xiàn)象。動(dòng)物與器材小白鼠數(shù)只、1ml注射器、鼠籠、胰島素溶液（2μ/ml）、50%葡萄糖溶液、酸性生理鹽水。方法與步驟1．取4只小白鼠稱重后，分實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，每組2只。2．給實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物腹腔注射胰島素溶液（0.1ml/10g體重）。3．給對(duì)照組動(dòng)物腹腔注射等量的酸性生理鹽水。4．將兩組動(dòng)物都放在30—37℃5．當(dāng)動(dòng)物出現(xiàn)角弓反張、亂滾等驚厥反應(yīng)時(shí)，記下時(shí)間，并立即皮下注射葡萄糖溶液（0.1ml/10g體重）。6．比較對(duì)照組動(dòng)物、注射葡萄糖的動(dòng)物、以及出現(xiàn)驚厥而未經(jīng)搶救的動(dòng)物的活動(dòng)情況，并分析所得的結(jié)果。注意事項(xiàng)1．動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)前必須饑餓18—24h。2．一定要用pH2.5—3.5的酸性生理鹽水配制胰島素溶液。因?yàn)橐葝u素在酸性環(huán)境中才有效應(yīng)。3．酸性生理鹽水的配制將10ml0.1mol/LHCl加入300ml生理鹽水中，調(diào)整其pH值在2.5—3.5，如果偏堿，可加入同樣濃度的鹽酸調(diào)整。4．注射了胰島素的動(dòng)物最好放在30—37℃環(huán)境中保溫，夏天可為室溫，冬天則應(yīng)高些，可到36—37思考題試分析糖尿病產(chǎn)生的原因及治療方法。實(shí)驗(yàn)四、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的全身麻醉、損毀小白鼠小腦的效應(yīng)1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的全身麻醉目的：了解影響實(shí)驗(yàn)動(dòng)物麻醉的因素；了解并熟悉實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的麻醉方法；掌握大、小白鼠的吸入麻醉法。原理：麻醉(anesthesia)的基本任務(wù)是消除實(shí)驗(yàn)過程中所至的疼痛和不適感覺，保障實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的安全，使動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)中服從操作，確保實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行。全身麻醉方法：麻醉藥經(jīng)呼吸道吸入或靜脈、肌肉注射，產(chǎn)生中樞神經(jīng)系統(tǒng)抑制，呈現(xiàn)神志消失，全身不感疼痛，肌肉松弛和反射抑制等現(xiàn)象，這種方法稱全身麻醉。其特點(diǎn)為抑制深淺與藥物在血液內(nèi)的濃度有關(guān)，當(dāng)麻醉藥從體內(nèi)排出或在體內(nèi)代謝破壞后，動(dòng)物逐漸清醒，不留后遺癥。用品：注射器、乙醚、戊巴比妥鈉、硫噴妥鈉、氨基甲酸乙酯、內(nèi)容：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的麻醉是一項(xiàng)復(fù)雜系統(tǒng)的工作。正確的麻醉處理，是動(dòng)物實(shí)驗(yàn)成功的有力保障。而麻醉處理不當(dāng)，會(huì)給實(shí)驗(yàn)結(jié)果帶來(lái)難以分析的誤差。要想獲得良好的麻醉效果，除掌握實(shí)驗(yàn)動(dòng)物麻醉的基本知識(shí)和技術(shù)、遵循科學(xué)的麻醉程序外，還應(yīng)了解影響實(shí)驗(yàn)動(dòng)物麻醉的各種因素，如動(dòng)物因素、環(huán)境因素等。1、動(dòng)物因素1、年齡和體重動(dòng)物對(duì)藥物的反應(yīng)隨年齡的不同而有差異。有人將大鼠、小鼠按年齡分成幼年、成年和老年3組，觀察年齡對(duì)乙醇、戊烷和二氯乙烷等急性毒性的影響。按LD50及麻醉濃度觀察，敏感性顯示為幼年>成年>老年。體重小的動(dòng)物每單位體重的基礎(chǔ)代謝率較大動(dòng)物高，因此，動(dòng)物越小，每單位體重所需的麻醉藥劑量越大。一些慢性實(shí)驗(yàn)，觀察時(shí)間較長(zhǎng)，可選擇年幼、體重較小的動(dòng)物做實(shí)驗(yàn)。2、性別實(shí)驗(yàn)證明，不同性別的動(dòng)物對(duì)同一藥物的敏感性不同，對(duì)各種刺激的反應(yīng)也不盡一致，雌性動(dòng)物性周期不同階段和懷孕、授乳時(shí)的機(jī)體反應(yīng)性有較大的改變，因此，一般情況優(yōu)先選雄性動(dòng)物或雌雄各半做實(shí)驗(yàn)。3、生理和健康狀況體瘦、肌肉發(fā)達(dá)的動(dòng)物較脂肪多的動(dòng)物所需麻醉藥量大，這是因?yàn)橄鄬?duì)非代謝組織，其基礎(chǔ)代謝率較低?；顒?dòng)可增加代謝率，因此，好動(dòng)的動(dòng)物所需的麻醉量大。身體狀況差的動(dòng)物，所需麻醉藥量小耐受性降低。易發(fā)生中毒現(xiàn)象。4、動(dòng)物飼養(yǎng)保證足夠的營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)是維持動(dòng)物健康的重要因素，其中飼料對(duì)動(dòng)物的關(guān)系更為密切。動(dòng)物的生長(zhǎng)、發(fā)育、繁殖、抵御疾病的能力及一切生命活動(dòng)都依賴于營(yíng)養(yǎng)豐富的飼料。動(dòng)物在麻醉之前一周應(yīng)提前到位，給于精心的飼養(yǎng)管理，使其處于良好的健康狀態(tài)。2、環(huán)境因素1、溫度在一定范圍內(nèi)，溫度緩慢的變化，機(jī)體可以進(jìn)行自動(dòng)調(diào)節(jié)與之相適應(yīng)。但變化莫測(cè)過大或過急，對(duì)機(jī)體將產(chǎn)生行為和生理等不良影響。因此，實(shí)驗(yàn)環(huán)境溫度過高或過低都能導(dǎo)致機(jī)體抵抗力下降，對(duì)麻醉藥物的敏感性升高，易發(fā)生中毒現(xiàn)象。因此影響麻醉效果。2、濕度；3、空氣的流速和清潔度方法：1.吸入麻醉法麻醉藥以蒸氣或氣體狀態(tài)經(jīng)呼吸道吸入而產(chǎn)生麻醉者，稱吸入麻醉，常用乙醚作麻醉藥。吸入法對(duì)多數(shù)動(dòng)物有良好的麻醉效果，其優(yōu)點(diǎn)是易于調(diào)節(jié)麻醉的深度和較快的終止麻醉，缺點(diǎn)是中、小型動(dòng)物較適用，對(duì)大型動(dòng)物如狗的吸入麻醉操作復(fù)雜，通常不用。

具體方法是：使用乙醚麻醉兔及大小鼠時(shí)，可將動(dòng)物放入玻璃麻醉箱內(nèi)，把裝有浸潤(rùn)乙醚棉球的小燒杯放入麻醉箱，然后觀察動(dòng)物。開始動(dòng)物自主活動(dòng)，不久動(dòng)物出現(xiàn)異常興奮，不停地掙扎，隨后排出大小便。漸漸地動(dòng)物由興奮轉(zhuǎn)為抑制，倒下不動(dòng)，呼吸變慢。如動(dòng)物四肢緊張度明顯減低，角膜反射遲鈍，皮膚痛覺消失，則表示動(dòng)物已進(jìn)入麻醉，可行手術(shù)和操作。在實(shí)驗(yàn)過程中應(yīng)隨時(shí)觀察動(dòng)物的變化，必要時(shí)把乙醚燒杯放在動(dòng)物鼻部，以維持麻醉的時(shí)間與深度。

2.注射麻醉法常用的麻醉藥有戊巴比妥鈉、硫噴妥鈉、氨基甲酸乙酯等。

大、小鼠和豚鼠常采用腹腔注射法進(jìn)行全身麻醉。狗、兔等動(dòng)物既可腹腔注射給藥，也可靜脈注射給藥。在麻醉興奮期出現(xiàn)時(shí)，動(dòng)物掙扎不安，為防止注射針滑脫，常用吸入麻醉法進(jìn)行誘導(dǎo)，待動(dòng)物安靜后再行腹腔或靜脈穿刺給藥麻醉。

在注射麻醉藥物時(shí)，先用麻醉藥總量的三分之二，密切觀察動(dòng)物生命體征的變化，如已達(dá)到所需麻醉的程度，余下的麻醉藥則不用，避免麻醉過深抑制延腦呼吸中樞導(dǎo)致動(dòng)物死亡。注意事項(xiàng)1、麻醉劑的用量，除參照一般標(biāo)準(zhǔn)外，還應(yīng)考慮個(gè)體對(duì)藥物的耐受性不同，而且體重與所需劑量的關(guān)系也并不是絕對(duì)成正比的。一般說(shuō)，衰弱和過胖的動(dòng)物，其單位體重所需劑量較小，在使用麻醉劑過程中，隨時(shí)檢查動(dòng)物的反應(yīng)情況，尤其是采用靜脈注射，絕不可將按體重計(jì)算出的用量匆忙進(jìn)行注射。

2、動(dòng)物在麻醉期體溫容易下降，要采取保溫措施。

3、靜脈注射必須緩慢，同時(shí)觀察肌肉緊張、角膜反射和對(duì)皮膚夾捏的反應(yīng)，當(dāng)這些活動(dòng)明顯減弱或消失時(shí)，應(yīng)立即停止注射。配制的藥液濃度要適中不可過高，以免麻醉過急；但也不能過低，以減少注入溶液的體積。

4、作慢性實(shí)驗(yàn)時(shí)，在寒冷冬季，麻醉劑在注射前應(yīng)加熱至動(dòng)物體溫水平。思考題小結(jié)在操作過程中，哪些因素可能影響實(shí)驗(yàn)動(dòng)物麻醉效果？常用的麻醉劑

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中常用的麻醉劑分為三類，即揮發(fā)性麻醉劑、非揮發(fā)性麻醉劑和中藥麻醉劑。1.揮發(fā)性麻醉劑這類麻藥包括乙醚、氯仿等。乙醚是常用的吸入麻醉劑，乙醚揮發(fā)性很強(qiáng)，有特殊的氣味，為易燃品，適用于各種動(dòng)物（雞除外），乙醚的作用是抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)。其特點(diǎn)是安全范圍大，肌肉能完全松弛，對(duì)肝和腎的毒性較小，麻醉的誘導(dǎo)期和蘇醒較短，動(dòng)物麻醉深度容易掌握，而且麻醉后蘇醒較快。其副作用是對(duì)呼吸道和結(jié)膜刺激性強(qiáng)，胃腸道反應(yīng)增高，局部刺激作用大，可引起上呼吸道黏膜液體分泌增多，易發(fā)生呼吸道阻塞，使用時(shí)應(yīng)小心。2.非揮發(fā)性麻醉劑這類麻醉劑種類較多，包括苯巴比妥鈉、戊巴比妥鈉、硫噴妥鈉等巴比妥類的衍生物，氨基酸乙脂和水合氯醛。這些麻醉劑使用方便，一次給藥可維持較長(zhǎng)的麻醉時(shí)間，麻醉過程較平穩(wěn)，動(dòng)物無(wú)明顯掙扎現(xiàn)象。但缺點(diǎn)是蘇醒較慢。（1）戊巴比妥鈉：為中效巴比妥類藥物。戊巴比妥鈉，是常用的麻醉劑，有獸用、人獸共用的產(chǎn)品，使用時(shí)應(yīng)注意藥品質(zhì)量。（2）硫噴妥鈉：硫噴妥鈉為超速效巴比妥類藥物，為淡黃色粉末，有硫臭，易吸水，裝在安瓶中保存。其水溶液不穩(wěn)定，故必須臨時(shí)配制，常配濃度為1%~5%，在0～4℃冰箱中保存，置7天之內(nèi)，其分解甚微；在室溫中則只能保存24h。如見溶液色呈深黃、混濁，即表示已分解，不能使用。該藥麻醉誘導(dǎo)和蘇醒時(shí)間短，一次用藥僅可維持?jǐn)?shù)分鐘。因此，一般用作為誘導(dǎo)麻醉或基礎(chǔ)麻醉。其副作用：對(duì)呼吸系統(tǒng)有明顯的抑制作用，不宜與嗎啡合用。（3）氯胺酮：為中效巴比妥藥物，常用其鹽酸鹽。靜脈或肌肉給藥后，很快起到麻醉作用，但維持時(shí)間較短，一般僅10～20min。為了延長(zhǎng)時(shí)間，可重復(fù)給藥。其副作用是心率加快，血壓升高，有時(shí)還可引起動(dòng)物嘔吐等。（4）水合氯醛：此藥為無(wú)色透明棱狀結(jié)晶，有穿透性的臭氣及腐蝕性苦味。其溶解度較小，常配濃度為5％～10％。配制后的溶液易沉淀，用時(shí)先在水浴鍋中適量加熱，促其融解。作用特點(diǎn)與巴比妥類藥物相似，似一種安全有效的鎮(zhèn)靜催眠藥，能起到全身麻醉作用，其麻醉量與中毒量很接近，故安全范圍小，使用時(shí)應(yīng)注意。其副作用為對(duì)皮膚和粘膜有較強(qiáng)的刺激作用。（5）氨基甲酸乙酯（烏拉坦）：此藥是比較溫和的麻醉藥，安全度大。多數(shù)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物都可使用，更使用于小動(dòng)物。一般用作基礎(chǔ)麻醉，如實(shí)驗(yàn)全部過程都用此藥麻醉時(shí)，動(dòng)物保溫尤為重要。使用時(shí)常配成20%～25%水溶液，犬、貓、兔直腸灌注1.5g/kg體重；皮下、靜脈、腹腔注射0.75～1g/kg體重。當(dāng)與水合氯醛按1：1比例合并麻醉時(shí)，效果更好。但在作靜脈注射時(shí)必須溶在生理鹽水中，配成5%或10%的溶液，即每千克體重注射10～20ml。蛙類：2g/kg體重，由背部淋巴囊注射。鳥類：1.25g/kg體重，由肌肉注入。鼠：1.5～2g2、豚鼠的局部麻醉目的1、了解并熟悉豚鼠的局部麻醉方法2、掌握局部浸潤(rùn)麻醉方法。用品刀片、注射器、消毒干棉球、75%酒精棉球、普魯卡因、利多卡因。原理用局部麻醉藥阻滯周圍神經(jīng)末梢或神經(jīng)干、神經(jīng)節(jié)、神經(jīng)叢的沖動(dòng)傳導(dǎo)，產(chǎn)生局部性的麻醉區(qū)，稱為局部麻醉。其特點(diǎn)是動(dòng)物保持清醒，對(duì)重要器官功能干擾輕微，麻醉并發(fā)癥少，是一種比較安全的麻醉方法。適用于大中型動(dòng)物各種短時(shí)間內(nèi)的實(shí)驗(yàn)。豚鼠對(duì)麻醉藥物很敏感。內(nèi)容1.表面麻醉利用局部麻醉藥的組織穿透作用，透過粘膜，阻滯表面的神經(jīng)末梢，稱表面麻醉。在口腔及鼻腔粘膜、眼結(jié)膜、尿道等部位手術(shù)時(shí)，常把麻醉藥涂敷、滴入、噴于表面上，或尿道灌注給藥，使之麻醉。

2.局部浸潤(rùn)麻醉：沿手術(shù)切口逐層注射麻醉藥，靠藥液的張力彌散，浸入組織,麻醉感覺神經(jīng)末梢，稱局部浸潤(rùn)麻醉。常用藥為普魯卡因。在施行局部浸潤(rùn)麻醉時(shí)，先固定好動(dòng)物，用0.5～1％鹽酸普魯卡因皮內(nèi)注射，使局部皮膚表面呈現(xiàn)一桔皮樣隆起，稱皮丘，然后從皮丘進(jìn)針，向皮下分層注射，在擴(kuò)大浸潤(rùn)范圍時(shí)，針尖應(yīng)從已浸潤(rùn)過的部位刺入，直至要求麻醉區(qū)域的皮膚都浸潤(rùn)為止。每次注射時(shí)，必須先抽注射器，以免將麻醉藥注入血管內(nèi)引起中毒反應(yīng)。3.區(qū)域阻滯麻醉：在手術(shù)區(qū)四周和底部注射麻醉藥阻斷疼痛的向心傳導(dǎo),稱區(qū)域阻斷麻醉。常用藥為普魯卡因。

4.神經(jīng)干(叢)阻滯麻醉：在神經(jīng)干(叢)的周圍注射麻醉藥，阻滯其傳導(dǎo),使其所支配的區(qū)域無(wú)疼痛，稱神經(jīng)干(叢)阻滯麻醉。常用藥為利多卡因。3、損毀小白鼠小腦的效應(yīng)目的：1、掌握小白鼠的麻醉方法；2、了解小腦的機(jī)能?；驹硇∧X具有維持身體平衡，調(diào)節(jié)肌緊張和協(xié)調(diào)肌肉運(yùn)動(dòng)等機(jī)能。當(dāng)小腦損傷后，隨著破壞程度的不同，可表現(xiàn)出不同程度的肌緊張失調(diào)及平衡失調(diào)。動(dòng)物與器材小白鼠、常用手術(shù)器械、大頭針、麻醉口罩、乙醚、棉花。方法與步驟1．用乙醚麻醉小鼠（注意仔細(xì)觀察呼吸，若呼吸變慢時(shí)則表示動(dòng)物已麻醉）。2．自頭頂部至耳后沿正中線剪開皮膚，將頸肌向下剝離。透過透明的顱骨即可看清小腦的位置（圖9-6）用大頭針刺穿顱骨，直達(dá)小腦（2—3mm），攪毀該側(cè)小腦（注意不可深刺，以免損傷腦干）。3．待小鼠清醒后，可見其向一側(cè)旋轉(zhuǎn)或翻滾。如損傷較輕，小鼠向健側(cè)旋轉(zhuǎn)；當(dāng)損傷重時(shí)，則向損傷側(cè)翻滾。4．將實(shí)驗(yàn)用完的小鼠拉斷頸椎處死后棄之。思考題根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明小腦的生理機(jī)能。實(shí)驗(yàn)五、家兔的熱原實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、練習(xí)家兔的各種注射方法；2、了解家兔熱源反應(yīng)的基本原理。原理家兔體溫變化十分靈敏，最易產(chǎn)生發(fā)熱反應(yīng)，發(fā)熱反應(yīng)典型、恒定，因此常選用家兔進(jìn)行這方面的研究。方法與步驟1、用體溫計(jì)測(cè)量實(shí)驗(yàn)前家兔的正常體溫。2、采用以下方法進(jìn)行熱源實(shí)驗(yàn)：給家兔靜脈注射傷寒一副傷寒四聯(lián)菌苗0.5～2.0ml/kg，菌苗含量應(yīng)不低于100億/ml；皮下注射2%二硝基酚溶液（30毫克）15～20分鐘后開始發(fā)熱；肌注10%蛋白胨1.0g/Kg；皮下注射消毒脫脂牛奶3～5ml。3、一至兩小時(shí)后，用體溫計(jì)再次測(cè)量家兔的體溫，看其有何變化。思考題在熱源實(shí)驗(yàn)操作過程中，你認(rèn)為應(yīng)注意哪些方面？

實(shí)驗(yàn)六、動(dòng)物體內(nèi)常見寄生蟲卵檢查目的1、學(xué)習(xí)常見實(shí)驗(yàn)動(dòng)物蟲卵標(biāo)本的采集和檢查方法。2、學(xué)會(huì)對(duì)不同蟲卵進(jìn)行鑒定。用品大鼠、小鼠、獼猴的糞便、示范片、蓋玻片、載玻片、目鏡測(cè)微尺、物鏡測(cè)微尺方法1、直接涂片法包括糞便、血液、腸內(nèi)容物等直接涂片檢查。取一載玻片,在其上加一滴生理鹽水,取少許糞便或腸內(nèi)容物與生理鹽水混勻后于顯微鏡下觀察。血液可直接滴于載玻片上，制成涂片，加蓋玻片觀察。2、蟲卵收集法a.沉淀集卵法:取糞便加適量清水,混勻后過濾,重復(fù)數(shù)次至液體清亮為止,靜止沉淀十分鐘后,取底部沉淀物作鏡檢。此法適于檢查血吸蟲卵。b.飽和鹽水漂浮法:利用蟲卵的比重小于飽和鹽水的原理,使線蟲卵和幾種絳蟲卵或包囊漂浮于液面上,提高檢查效果。實(shí)驗(yàn)步驟和內(nèi)容：1、自然感染蠕蟲的調(diào)查取獼猴糞便在盛有生理鹽水的培養(yǎng)皿中漂洗,直接查找寄生蟲蟲體和蟲卵,根據(jù)蟲體和蟲卵的形態(tài),簽別蟲種。2、直接涂片法或沉淀集卵法檢查寄生蟲卵。3、觀察蛔蟲、蟯蟲、絳蟲和血吸蟲卵標(biāo)本裝片。注意:觀察各種蟲卵的大小、形狀、顏色、卵膜結(jié)構(gòu)等以及各種蟲卵的特征A、蛔蟲卵(線蟲綱一蟲體線形或長(zhǎng)圓柱形,雌雄異體)受精卵為橢圓形,大小約40-60微米(35-50×45-76),卵殼的表面有一層凸凹不平的蛋白質(zhì)膜,被膽汁染成棕黃色,整個(gè)蟲卵呈棕黃色。卵殼厚而透明。卵內(nèi)有一近圓形的卵細(xì)胞。未受精卵多為長(zhǎng)橢圓形,大小約40一60微米(39-40×88-94),卵殼與蛋白質(zhì)膜較薄,卵內(nèi)充滿大小不等的屈光顆粒。無(wú)論受精卵和未受精卵其蛋白質(zhì)膜有時(shí)缺失,無(wú)蛋白質(zhì)膜的受精卵是無(wú)色透明,請(qǐng)注意與其它蟲卵的區(qū)別。B、蟯蟲(線蟲綱：蟲體細(xì)小,乳白色,似一白色線頭。)蟲卵為橢圓形,兩側(cè)不對(duì)稱,一側(cè)扁平,一側(cè)稍凸。大小約25-55微米(20-30×50-60),卵殼較厚,無(wú)色透明,內(nèi)含幼蟲。C、絳蟲(絳蟲綱：腹背扁平、帶狀、分節(jié),雌雄同體,常見的有鏈狀帶絳蟲。)蟲卵近球形,較小,大小約45-70微米,蟲卵自孕節(jié)排出時(shí)卵殼己脫落,鏡下所見是具胚膜的六鉤蚴,胚膜較厚,棕黃色有放射狀的條紋。D、血吸蟲(吸蟲綱一多有腹背扁平,舌狀或葉狀,有吸盤,雌雄異體,常見的有日本血吸蟲等。)蟲卵為橢圓形,淡黃色。大小約74-106×55-80微米,卵殼較薄無(wú)蓋,殼的一側(cè)有小棘,一般在鏡下不易見到。成熟的卵內(nèi)含有一個(gè)毛蚴。注意事項(xiàng)1.高倍鏡下觀察必須加蓋玻片；2.采用直接涂片法時(shí)，不要涂得太多，必須分散開，均勻；3.觀察寄生蟲卵前，需在高倍鏡下校對(duì)目鏡每格的長(zhǎng)度，才能算出蟲卵大小；4.先在低倍鏡下觀察，發(fā)現(xiàn)后換為高倍鏡。實(shí)驗(yàn)報(bào)告內(nèi)容1、繪出鏡下觀察到的蛔蟲、蟯蟲、絳蟲和血吸蟲卵。2、概括總結(jié)蛔蟲、蟯蟲、絳蟲和血吸蟲卵的形態(tài)區(qū)別要點(diǎn)。3、在整過操作過程中的注意事項(xiàng)。實(shí)驗(yàn)七、雌性小鼠動(dòng)情周期的檢查目的1、學(xué)習(xí)小鼠陰道內(nèi)液體的采集方法；2、了解在動(dòng)情周期的不同階段，小鼠陰道涂片的組織學(xué)變化。原理哺乳類的雌性動(dòng)物在性成熟后，出現(xiàn)動(dòng)情周期變化，其中嚙齒類動(dòng)物在動(dòng)情周期不同階段，陰道粘膜發(fā)生比較典型的變化。因此，根椐陰道涂片的細(xì)胞學(xué)改變，可以推斷卵巢功能的周期性變化。未成熟的大、小白鼠尚無(wú)自然的動(dòng)情周期，但當(dāng)注射絨毛膜促性腺激素后，則可使其提前出現(xiàn)。用品顯微鏡、棉簽、載玻片、生理鹽水、堿性美藍(lán)溶液（配制：美藍(lán)0.3g，溶于95%的乙醇30ml中，再加蒸餾水至100ml及10%NaOH溶液0.1ml）等。動(dòng)物性成熟的雌性小白鼠。方法與步驟1、小鼠陰道內(nèi)液體取法取陰道內(nèi)液體有下列三種方法：（1）沖洗法將裝有消毒生理鹽水的滴管輕輕插入動(dòng)物陰道內(nèi)，按壓滴管橡皮頭，將生理鹽水打入陰道，然后吸出，如此2-3次。最后將滴管中的陰道沖洗液滴在載玻片上。（2）沾取法將消毒的細(xì)棉簽用生理鹽水潤(rùn)濕，輕輕插入動(dòng)物陰道內(nèi)0.5cm，慢慢轉(zhuǎn)動(dòng)一下取出。（3）刮取法用光滑的玻璃小勺或牛角制小刮片慢慢插入陰道內(nèi)，在陰道壁輕輕刮取一點(diǎn)陰道內(nèi)含物。2、涂片將帶有陰道內(nèi)含物的細(xì)棉簽等在載玻片上均勻的轉(zhuǎn)動(dòng)做成涂片，然后將涂片在空氣中自然干燥。3、染色用堿性美藍(lán)溶液染色5min左右，用蒸餾水沖洗剩余的美藍(lán)溶液（注意：應(yīng)從涂片邊緣慢慢沖洗，切不要把細(xì)胞沖洗掉），并使之干燥。4、觀察結(jié)果在顯微鏡下觀察陰道分泌物涂片的組織學(xué)變化，確定動(dòng)情周期變化的不同階段。表小白鼠性周期陰道分泌物涂片變化階段持續(xù)時(shí)間/h卵巢變化涂片可見動(dòng)情前期卵泡加速生長(zhǎng)大量有核上皮細(xì)胞，少量角化細(xì)胞動(dòng)情期卵泡成熟、排卵滿視野角化上皮細(xì)胞，少量有核上皮細(xì)胞動(dòng)情后期黃體生成角化上皮細(xì)胞及白細(xì)胞動(dòng)情間期黃體退化大量白細(xì)胞及少量黏液注意事項(xiàng)：1.采取陰道（下口）內(nèi)分泌物，不是腸道內(nèi)容物（上口）；2.制作涂片要均勻；3.自然干燥后，再染色8-10min；4.用蒸餾水沖洗剩余的美藍(lán)溶液時(shí)，應(yīng)從涂片邊緣慢慢沖洗；5.在鏡下鏡檢（如用高倍鏡，必須加蓋玻片）。實(shí)驗(yàn)八、小鼠下頜骨形態(tài)分析目的與原理小鼠的下頜骨形態(tài)有高度的遺傳穩(wěn)定性，不同品種或品系小鼠下頜骨的形態(tài)、大小不同，因此該項(xiàng)技術(shù)可以作為純系小鼠、純系大鼠遺傳質(zhì)量的檢測(cè)方法之一。下頜骨形態(tài)分析是一種定量技術(shù)?？申U明許多遺傳學(xué)差異。主要是對(duì)小鼠或大鼠右側(cè)下頜骨形態(tài)做對(duì)比分析，通過多變量分析，建立判別函數(shù)進(jìn)行性別判別。常規(guī)標(biāo)本制備方法1.隨機(jī)抽取小鼠數(shù)只（60日齡，體重相當(dāng)）處死，取下頭顱。2.投入沸水中煮約10分鐘，冷卻后把頭顱上的組織仔細(xì)剔除，放在含有木瓜蛋白酶的自來(lái)水中（下頜骨帶的殘肉與酶的比例為1:25)，水的PH為4.5，消化溫度為40—60℃，最適溫度為523.自然干燥，存放于塑料袋中。4.制作坐標(biāo)底片，用于測(cè)量下頜骨有關(guān)變量。5.在坐標(biāo)底片上用兩個(gè)平直的玻璃細(xì)條粘成直角，成L型，與坐標(biāo)的縱軸和橫軸相吻合，壓平待用。動(dòng)物小白鼠方法與步驟1.下頜骨的11個(gè)測(cè)量點(diǎn)參見下圖。2.將待測(cè)標(biāo)本平放在解剖鏡載物臺(tái)的標(biāo)尺上，下頜骨前端和下部邊緣與標(biāo)尺上的L型玻璃條的X及Y軸分別貼緊放平，將每個(gè)標(biāo)本11個(gè)變量的結(jié)果記錄下來(lái)，交給老師，統(tǒng)一處理。3、打開SPSS，輸入數(shù)據(jù)；定義變量；4、操作步驟：Analyze→Classify→Discriminant→opendiscriminantanalyze;Gender→groupingvariables(definerange);allvariables→independent;Method→enterindependenttogether;openstatistics→functioncoefficients→Fisher’s,unstandardized→continue;openclassify→display→summarytable,casewiseresults;priorprobabilities→Allgroupsequal→continue→OK。結(jié)果分析：求出判別系數(shù)和判別函數(shù)；2、得到判別代結(jié)果和判別率；3、驗(yàn)證回代和新標(biāo)本判別。注意事項(xiàng)1、標(biāo)本要保證完整性；2、小白鼠雌雄的體重要分別相近；3、突變性的標(biāo)本要舍去；4、測(cè)量要注意準(zhǔn)確；5、每組標(biāo)本的性別，不要混淆。實(shí)驗(yàn)九、家兔的神經(jīng)分離、氣管插管目的學(xué)習(xí)氣管插管術(shù)；學(xué)習(xí)分離及識(shí)別有關(guān)的血管和神經(jīng)；學(xué)習(xí)測(cè)定家兔呼吸運(yùn)動(dòng)的方法。用品常用手術(shù)器械、氣體插管、玻璃分針、刺激器、張力換能器、鐵夾臺(tái)、25%氨基甲酸乙酯、3%乳酸。動(dòng)物家兔方法與步驟1、麻醉并固定動(dòng)物每組取家兔一只,稱重,按40mg/kg體重的劑量由耳緣靜脈緩慢注射戊巴比妥鈉溶液，將動(dòng)物麻醉。當(dāng)動(dòng)物四肢松軟,呼吸變深變慢,角膜反射遲鈍時(shí),表明動(dòng)物己被麻醉，即可停止注射。將麻醉動(dòng)物仰臥于兔體手術(shù)臺(tái)上,固定好頭部和四肢，將兔舌拉出以免阻塞呼吸道。注意：緩慢注射；兔舌拉出；頸部必須放正拉直。2、頸部手術(shù)用剪毛剪剪去頸部被毛,用手術(shù)刀切開頸部皮膚(5-7cm)長(zhǎng),分離皮下結(jié)締組織和肌肉,暴露氣管,分離氣管和食管,在氣管下穿一棉線備用。3、頸部神經(jīng)及血管分離術(shù)3.1頸總動(dòng)脈的分離在頸部,神經(jīng)與頸總動(dòng)脈被結(jié)締組織膜束在一起,形成血管神經(jīng)束,位于氣管的外側(cè),其腹面被胸骨舌骨肌和胸骨甲狀肌所覆蓋。用玻璃分針將氣管兩側(cè)上述肌肉分離后,用左手拇指和食指輕輕捏住分離的左側(cè)肌肉和皮膚,稍向外翻,即可將血管神經(jīng)束翻于食指之上。然后用玻璃分針分離頸總動(dòng)脈外的結(jié)締組織膜,將動(dòng)脈分離約4cm長(zhǎng),并向頭端追索到甲狀軟骨上緣,暴露頸動(dòng)脈竇,在頸動(dòng)脈下穿一棉線。用同樣的方法可分離右側(cè)頸總動(dòng)脈。3.2頸部神經(jīng)的分離輕輕提起左側(cè)頸總動(dòng)脈下的線,即可清楚看到三條粗細(xì)不同的神經(jīng)。其中迷走神經(jīng)最粗,呈白色，一般位于外側(cè),易于識(shí)別；交感神經(jīng)較細(xì),略呈灰色，一般位于內(nèi)側(cè)；減壓神經(jīng)最細(xì)，呈白色,一般位于迷走神經(jīng)和交感神經(jīng)之間。

由于家兔品種不同及個(gè)體間的差異,三條神經(jīng)的位置有較大的變異,應(yīng)注意識(shí)別。識(shí)別準(zhǔn)確后,用玻璃分針順著神經(jīng)的方向,小心分離其外的結(jié)締組織膜,-般先分離減壓神經(jīng),然后再分離交感神經(jīng)和迷走神經(jīng),并分別在各神經(jīng)下穿不同顏色的線（雙線）備用。4、氣管切開術(shù)在喉頭下2-3cm處的氣管上作一“T”型切口,將與氣管口徑相近的氣管插管向心方向插入氣管中，用線結(jié)扎,并將余線固定于氣管插管的分叉處,以防氣管插管脫落。5、腹部手術(shù)剪去劍突部位腹部被毛,切開胸骨下端劍突部位的皮膚,并沿腹白線再切開長(zhǎng)約2cm的切口。細(xì)心分離劍突軟骨并結(jié)扎,線的另一端連于張力換能器上,張力換能器連接于計(jì)算機(jī)BL-410的1通道上。6、開機(jī)→BL-410生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)→實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目→呼吸實(shí)驗(yàn)→呼吸運(yùn)動(dòng)調(diào)節(jié)這時(shí)可看到在屏幕上顯示4個(gè)波形窗口,鼠標(biāo)左雙擊1通道窗口,即只顯示出1通道波形窗口,在屏幕右下角選實(shí)驗(yàn)標(biāo)記。鼠標(biāo)點(diǎn)開始即可描記呼吸運(yùn)動(dòng)曲線。7、觀察項(xiàng)目7.1慢速記錄正常的呼吸運(yùn)動(dòng)曲線,注意分清吸氣與呼氣時(shí)的曲線方向；7.2增加無(wú)效腔對(duì)呼吸運(yùn)動(dòng)的影響將橡皮管(長(zhǎng)約lm,內(nèi)徑0.7cm)連于氣管插管的一個(gè)側(cè)管上,用止血鉗夾閉另一側(cè)管,使無(wú)效腔增加,觀察并記錄呼吸運(yùn)動(dòng)的變化。當(dāng)呼吸運(yùn)動(dòng)出現(xiàn)明顯改變后立即去掉橡皮管使呼吸運(yùn)動(dòng)恢復(fù)正常；7.3窒息對(duì)呼吸運(yùn)動(dòng)的影響將氣管插管的兩個(gè)側(cè)管同時(shí)夾閉,觀察并記錄呼吸運(yùn)動(dòng)的變化；7.4血中酸性物質(zhì)增多的效應(yīng)取5ml注射器,由耳緣靜脈較快地注入3%乳酸溶液2m1,觀察呼吸運(yùn)動(dòng)的變化；7.5分別刺激迷走神經(jīng)中樞端和外周端,觀察并記錄呼吸運(yùn)動(dòng)。注意事項(xiàng)1、實(shí)驗(yàn)過程中，要防止動(dòng)脈套管刺破頸總動(dòng)脈和發(fā)生凝血現(xiàn)象；2、剪去一段劍突軟骨時(shí)，不能剪得過深，以免傷及其下附著的膈肌，并要保證劍突軟骨與胸骨完全分離；3、在分離神經(jīng)及穿線時(shí),切勿損傷與其伴行的神經(jīng)；4、在頸總動(dòng)脈近甲狀腺處有甲狀腺前動(dòng)脈,分離時(shí)應(yīng)稍靠下方,以免損傷；5、注射要緩慢，兔舌要拉出，頸部必須放正拉直。實(shí)驗(yàn)十、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物環(huán)境因子檢測(cè)目的1、正確使用環(huán)境因子檢測(cè)儀器；2、了解噪音計(jì)、光度計(jì)、溫度計(jì)、濕度計(jì)的測(cè)定原理；3、學(xué)習(xí)測(cè)定方法。內(nèi)容測(cè)定各種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物環(huán)境的照度、噪音、溫度和濕度。實(shí)驗(yàn)十一、小白鼠走迷宮目的1.通過觀察、分析小白鼠學(xué)習(xí)和記憶過程，理解大腦在動(dòng)物行為機(jī)制建立中的作用。2.通過實(shí)驗(yàn)，了解影響動(dòng)物學(xué)習(xí)和記憶能力的因素。3.通過實(shí)驗(yàn)，了解數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析在科學(xué)研究中的重要作用。實(shí)驗(yàn)原理老鼠接近人類，通過老鼠的實(shí)驗(yàn)可以間接地了解人腦的功能。學(xué)習(xí)和記憶是神經(jīng)系統(tǒng)高級(jí)中樞的重要機(jī)能之一。學(xué)習(xí)是神經(jīng)系統(tǒng)不斷接受環(huán)境刺激而獲得的行為習(xí)慣或經(jīng)驗(yàn)；獲得的行為習(xí)慣或經(jīng)驗(yàn)維持一定時(shí)間的能力就是記憶。動(dòng)物的學(xué)習(xí)和記憶能力對(duì)其生存具有重要意義。在人為設(shè)置的迷宮里，動(dòng)物通過不斷感受復(fù)雜通道的結(jié)構(gòu)，調(diào)整和改進(jìn)自己的行為。隨著訓(xùn)練次數(shù)的增加，條件反射逐漸建立，以至在大腦皮層形成記憶。通過記錄動(dòng)物搜尋食物的時(shí)間長(zhǎng)短可以對(duì)此加以評(píng)價(jià)。同時(shí)也可以考察一些刺激（如饑餓和化學(xué)藥劑）對(duì)記憶力的影響。實(shí)驗(yàn)材料小白鼠。用品由學(xué)生根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要自行準(zhǔn)備。實(shí)驗(yàn)步驟（一）實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備1.用硬紙板或木板構(gòu)建迷宮。高度以小白鼠不能爬上為宜，上面也可以蓋上一玻璃板。選擇健康活潑的小白鼠5只，要求年齡和體重一致，實(shí)驗(yàn)前饑餓一天，但提供水。另選擇一只未經(jīng)饑餓處理的小白鼠備用。在迷宮內(nèi)特定位置放置一塊面包。（二）實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目1.饑餓處理的小白鼠1只，放置在迷宮入口，記錄其找到食物所需時(shí)間。5分鐘后，重復(fù)上述步驟，同樣的間隔時(shí)間對(duì)其進(jìn)行四次實(shí)驗(yàn)，每只小白鼠共計(jì)進(jìn)行5次實(shí)驗(yàn)。2.對(duì)其余四只饑餓處理的小白鼠進(jìn)行5次實(shí)驗(yàn)，記錄每只小白鼠找到食物所需時(shí)間。3.數(shù)據(jù)處理根據(jù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，求出5只小白鼠每次實(shí)驗(yàn)找到食物所需時(shí)間的平均值。以實(shí)驗(yàn)次數(shù)為橫坐標(biāo)，找到食物的時(shí)間為縱坐標(biāo)，建立直角坐標(biāo)系，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。把上述平均值標(biāo)在坐標(biāo)紙上并連接各點(diǎn)，從而得到實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)與尋找時(shí)間的關(guān)系曲線。觀察圖形的變化趨勢(shì)。4.取未經(jīng)饑餓處理的小白鼠進(jìn)行步驟1，把記錄的時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行對(duì)比，分析小白鼠記憶力的變化。5.取1只饑餓處理的小白鼠稱重，皮下注射120mg/kgNaNO2，然后讓其走迷宮，重復(fù)步驟1，將所記錄的時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)比，分析小白鼠記憶力的變化。6.另取1只饑餓處理的小白鼠稱重，測(cè)試前半小時(shí)將小白鼠灌服20%-40%酒精100ml/kg。將所記錄的時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行對(duì)比，分析小白鼠記憶力的變化。7.再取1只饑餓處理的小白鼠靜脈注射乙酰膽堿，重復(fù)步驟1，將所記錄的時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)比，分析小白鼠記憶力的變化實(shí)驗(yàn)改進(jìn)點(diǎn)實(shí)驗(yàn)用年老的小鼠與小白鼠進(jìn)行對(duì)比考察年齡對(duì)學(xué)習(xí)和記憶力的影響。實(shí)驗(yàn)考察乙酰膽堿和NaNO2對(duì)小白鼠學(xué)習(xí)和記憶力的影響。實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)1、選材為活潑健康的小白鼠，不能選運(yùn)動(dòng)機(jī)能和記憶力差的小白鼠。2、為了避免嗅覺對(duì)測(cè)試的影響，做每一個(gè)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目前都應(yīng)對(duì)迷宮進(jìn)行清潔。實(shí)驗(yàn)分工和負(fù)責(zé)找資料，負(fù)責(zé)整理和制作，實(shí)驗(yàn)改進(jìn)點(diǎn)由這幾人討論。實(shí)驗(yàn)預(yù)期結(jié)果隨著小白鼠學(xué)習(xí)和記憶過程的進(jìn)行，小白鼠找到食物的時(shí)間會(huì)越來(lái)越短。未經(jīng)饑餓處理的小白鼠由于沒有饑餓的刺激，找到食物的時(shí)間會(huì)更長(zhǎng)。由于NaNO2是缺氧劑，會(huì)造成腦部缺氧，從而破壞記憶的保持，因此小白鼠找到食物的時(shí)間會(huì)變長(zhǎng)。測(cè)試前半小時(shí)將小白鼠灌服20%-40%酒精可以明顯干擾記憶的再現(xiàn)，因此小白鼠找到食物的時(shí)間會(huì)變長(zhǎng)。小白鼠腦部乙酰膽堿的增加會(huì)增強(qiáng)記憶力，因此小白鼠找到食物的時(shí)間會(huì)變短。思考1.小白鼠的年齡對(duì)學(xué)習(xí)和記憶有沒有影響？2.人的大腦也和小白鼠有類似的結(jié)果嗎？3.乙酰膽堿在該實(shí)驗(yàn)中的作用機(jī)理是什么？實(shí)驗(yàn)參考資料《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)技術(shù)》苗明三主編中國(guó)醫(yī)藥出版社.北京.1997.6《動(dòng)物生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)》黃詩(shī)箋主編高等教育出版社施普林出版社2001.8：109，131，132《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)》羅滿林、顧為望主編中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社2002.8P127-143.實(shí)驗(yàn)十二消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型建立及驗(yàn)證（設(shè)計(jì)）（一）病毒性肝炎模型常用方法是注射乙型肝炎病人血清復(fù)制乙型肝炎模型。但大部分實(shí)驗(yàn)動(dòng)物對(duì)甲型肝炎病毒不易感。我國(guó)已有報(bào)導(dǎo)紅面獼猴、恒河猴、人及野生樹鼩種毒后出現(xiàn)人甲型肝炎現(xiàn)象。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)某些鴨肝炎病毒的特征與人肝炎病毒十分相似，故用鴨作為人肝炎模型也開始增多。（二）免疫性肝炎模型慢性或遷延性肝炎患者體內(nèi)存在著抗肝細(xì)胞成分抗體。1959年國(guó)外有人用肝組織懸液加弗氏佐劑免疫豚鼠，成功地誘發(fā)了肝細(xì)胞變性及壞死病變。也有人報(bào)導(dǎo)肝膜蛋白（LSP）加佐劑分次注射產(chǎn)生動(dòng)物免疫性肝炎模型。（三）胃、腸道潰瘍模型在動(dòng)物身上復(fù)制胃、腸道潰瘍的方法較多，但所用的方法不同，引起的潰瘍病變也各有特點(diǎn)。常用的方法有：1．應(yīng)激法以各種強(qiáng)烈的傷害性刺激（如強(qiáng)迫制動(dòng)、饑餓、寒冷等），引起動(dòng)物發(fā)生應(yīng)激性潰瘍。如把動(dòng)物浸入冷水中或放在應(yīng)激箱中不斷地遭受電刺激，使之劇烈不安，一晝夜即能引起胃粘膜出血及潰瘍。這種方法簡(jiǎn)單，成功率達(dá)99%以上。2．藥物法給動(dòng)物投服或注射一定量的組織胺、胃泌素、腎上腺類固醇、水楊酸鹽、血清素、利血平、保泰松等可造成動(dòng)物胃腸潰瘍。如給豚鼠小劑量的組織胺，連續(xù)數(shù)天，可引起胃、十二指腸、食道等發(fā)生潰瘍。又如可用利血平、血清緊張素、阿斯匹林等誘發(fā)大白鼠或小白鼠的胃潰瘍。3．燒灼法用電極燒灼胃底部的胃壁，可造成象人的胃潰瘍病變；用濃醋酸給大鼠胃壁內(nèi)注射或涂抹于胃壁漿膜面上可造成慢性潰瘍。燒灼法復(fù)制胃、腸道潰瘍模型的優(yōu)點(diǎn)是方法簡(jiǎn)便，潰瘍部位可由作者自己選擇。4．結(jié)扎幽門法選用大鼠、小鼠或豚鼠，麻醉后，無(wú)菌技術(shù)下在劍突下由腹正中切開腹壁皮膚及肌層，切口長(zhǎng)約3cm，暴露胃，沿胃向右，辯清幽門和十二指腸的聯(lián)結(jié)處，避開血管，于其下穿線，將幽門完全結(jié)扎。術(shù)后絕對(duì)禁食禁水。幽門結(jié)扎后，可刺激胃液分泌并使高酸度胃液在胃中潴留，造成胃潰瘍。這類潰瘍復(fù)制方法簡(jiǎn)單，發(fā)生快，成功率高，但病變較表淺，嚴(yán)格地說(shuō)仍然屬于胃粘膜急性出血性糜爛，與人類胃潰瘍的典型病變差距較大，適于作探索抗?jié)儾∷幬镅芯亢臀笣儼l(fā)病學(xué)方面的研究。其他還可用外科手術(shù)方法從腸道上部排除可中和胃酸的堿性膽汁、胰液或十二指腸液造成潰瘍。還可用刺激、損傷或毀損腦組織等方法造成潰瘍。（四）胰腺炎模型復(fù)制胰腺炎模型可采用使胰液外分泌發(fā)生潴留；使各種胰酶在胰管系統(tǒng)內(nèi)活化；感染或某些微生物毒素的作用，影響胰腺的營(yíng)養(yǎng)、代謝等。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選用狗、兔和大鼠。將狗自身膽注按0.5ml/kg體重緩慢注入狗胰腺體尾交界處的胰腺實(shí)質(zhì)內(nèi)，則可引起胰腺局部組織壞死及炎性浸潤(rùn)，與人類急性胰腺炎和病變相似。用大腸桿菌懸液9億/ml，按1ml/kg體重，向兔胰管內(nèi)逆進(jìn)注射可誘發(fā)急性胰腺炎。另外也可采用大鼠腹腔內(nèi)連續(xù)注射乙硫胺酸誘發(fā)成功胰腺炎模型。隨著乙硫胺酸注射時(shí)間的延長(zhǎng)，胰腺組織可以出現(xiàn)廣泛進(jìn)行性破壞和退化及胰酶水平的持續(xù)下降。（五）糖尿病模型糖尿病模型的復(fù)制方法采用注射致高血糖因子；手術(shù)切除胰腺的全部或大部；用四氧嘧啶（Alloxan）破壞胰島β細(xì)胞，造成胰性糖尿病；注射根皮苷使腎小管對(duì)糖的再吸收發(fā)生障礙并破壞酯酶致使葡萄糖磷酸化過程和脫磷酸過程障礙，引起根皮苷糖皮。四氧嘧啶復(fù)制的糖尿病動(dòng)物模型是目前研究人類糖尿病較好的方法，其實(shí)驗(yàn)性糖尿病近似人類糖尿病，體內(nèi)代謝障礙時(shí)有可能產(chǎn)生此種衍生物，胰島外分泌部不受損傷，幾乎所有常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物都可用來(lái)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。模型胰島的β細(xì)胞不是功能消失，而是功能不同程度的降低，有利于研究胰島組織再生和功能恢復(fù)，動(dòng)物不必注射胰島素即可存活很久。大鼠造型劑量為12mg/100g體重，家兔為150～200mg/kg體重，狗約為50～60mg/kg體重。家兔根皮苷皮糖尿病造型劑量為0.5%根皮苷按15m/kg體重，皮下注射。注意所用四氧嘧啶和根皮苷溶液必須現(xiàn)配現(xiàn)用。實(shí)驗(yàn)十三、骨質(zhì)疏松動(dòng)物模型建立和驗(yàn)證（設(shè)計(jì)）九、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物采血方法實(shí)驗(yàn)研究中，經(jīng)常要采集實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的血液進(jìn)行常規(guī)檢查或某些生物化學(xué)分析，故必須掌握血液的正確采集、分離和保存的操作技術(shù)。采血方法的選擇，主要決定于實(shí)驗(yàn)的目的所需血量以及動(dòng)物種類。凡用血量較少的檢驗(yàn)如紅、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白的測(cè)定，血液涂片以及酶活性微量分析法等，可刺破組織取毛細(xì)血管的血。當(dāng)需血量較多時(shí)可作靜脈采血。靜脈采血時(shí)，若需反復(fù)多次，應(yīng)自遠(yuǎn)離心臟端開始，以免發(fā)生栓塞而影響整條靜脈。例如，研究毒物對(duì)肺功能的影響、血液酸堿平衡、水鹽代謝紊亂，需要比較動(dòng)、動(dòng)脈血氧分壓、二氧化碳分壓和血液pH值以及K+、Na+、CI-離子濃度，必須采取動(dòng)脈血液。采血時(shí)要注意：⑴采血場(chǎng)所有充足的光線；室溫夏季最好保持在25-28℃，冬季，15-20℃為宜；⑵采血用具有采用部位一般需要進(jìn)行消毒；⑶采血用的注射器和試管必須保持清潔干燥；⑷若需抗凝全血，在注射器或試管內(nèi)需預(yù)先加入抗凝劑?，F(xiàn)將采用血方法按動(dòng)物和部位分別加以介紹。不同動(dòng)物采血部位與采血量的關(guān)系可參考表11-7。表11-7不同動(dòng)物采血部位與采血量的關(guān)系全屏顯示該表格采血量采血部位動(dòng)物品種取少量血尾靜脈耳靜脈眼底靜脈叢舌下靜脈腹壁靜脈冠、腳蹼皮下靜脈大鼠、小鼠兔、狗、貓、豬、山羊、綿羊兔、大鼠、小鼠兔青蛙、蟾蜍雞、鴨、鵝取中量血后肢外側(cè)皮下小隱靜脈前肢內(nèi)側(cè)皮下頭靜脈耳中央動(dòng)脈頸靜脈心臟斷頭翼下靜脈頸動(dòng)脈狗、猴、貓狗、猴、貓兔狗、貓、兔豚鼠、大鼠、小鼠大鼠、小鼠雞、鴨、鴿、鵝雞、鴨、鴿、鵝取大量血股動(dòng)脈、頸動(dòng)脈心臟頸靜脈摘眼球狗、猴、貓、兔狗、猴、貓、兔馬、牛、山羊、綿羊大鼠、小鼠常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的最大安全采血量與最小的致死采用血量，見表11-8。表11-8常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的最大安全采血量與最小致死采血量全屏顯示該表格動(dòng)物品種最大安全采血量（ml）最小致死采血量（ml）小鼠0.20.3大鼠12豚鼠510兔1040狼狗100500獵狗50200猴1560(一)小鼠、大鼠采血法1.割(剪）尾采血當(dāng)所需血量很少時(shí)采用本法。固定動(dòng)物并露出鼠尾。將尾部毛剪去后消毒，然后浸在45℃左右的溫水中數(shù)分鐘，使尾部血管充盈。再將尾擦干，用銳器（刀或剪刀）割去尾尖0.3-0.5cm，讓血液自由滴入盛器或用血紅蛋白吸管吸取，采血結(jié)束，傷口消毒并壓迫止血。也可在尾部作一橫切口，割破尾動(dòng)脈或靜脈，收集血液的方法同上。每鼠一般可采血10余次以上。小鼠每次可取血0.1ml，大鼠0.3～0.5ml。2.鼠尾刺血法大鼠用血量不多時(shí)（僅做白細(xì)胞計(jì)數(shù)或血紅蛋白檢查），可采用本法。先將鼠尾用溫水擦拭，再用酒精消毒和擦拭，使鼠尾充血。用7號(hào)或8號(hào)注射針頭，刺入鼠尾靜脈，拔出針頭時(shí)即有血滴出，一次可采集10～50mm3。如果長(zhǎng)期反復(fù)取血，應(yīng)先靠近鼠尾末端穿刺，以后再逐漸向近心端穿刺。3.眼眶靜脈叢采血采血者的左手拇食兩指從背部較緊地握住小鼠或大鼠的頸部（大鼠采血需帶上紗手套），應(yīng)防止動(dòng)物窒息。當(dāng)取血時(shí)左手拇指及食指輕輕壓迫動(dòng)物的頸部?jī)蓚?cè)，使眶后靜脈叢充血。右手持續(xù)接7號(hào)針頭的1ml注射器或長(zhǎng)頸（3～4cm）硬質(zhì)玻璃滴管（毛細(xì)管內(nèi)徑0.5-1.0mm），使采血器與鼠面成45℃的夾角，由眼內(nèi)角刺入，針頭斜面先向眼球，刺入后再轉(zhuǎn)180度使斜面對(duì)著眼眶后界。刺入濃度，小鼠約2～3mm，大鼠約4～5mm。當(dāng)感到有阻力時(shí)即停止推進(jìn)，同時(shí)，將針退出約0.1-0.5mm，邊退邊抽。若穿刺適當(dāng)血液能自然流入毛細(xì)管中，當(dāng)?shù)玫剿璧难亢?，即除去加于頸部的壓力，同時(shí)，將采血器拔出，以防止術(shù)后穿刺孔出血。若技術(shù)熟練，用本法短期內(nèi)可重復(fù)采血均無(wú)多大困難。左右兩眼輪換好。體重20-25g的小鼠每次可采血0.2-0.3ml；體重200-300g大鼠每次可采血0.5-1.0ml，可適用于某些生物化學(xué)項(xiàng)目的檢驗(yàn)。4.斷頭取血采血者的左手拇指和食指以背部較緊地握住大（小）鼠的頸部皮膚，并作動(dòng)物頭朝下傾的姿勢(shì)。右手用剪刀猛剪鼠頸，約1/2-4/5的頸部前剪斷，讓血自由滴入盛器。小鼠可采用約0.8～1.2ml;大鼠約5-10ml。5.心臟采血鼠類的心臟較小，且心率較快，心臟采血比較困難，故少用?；铙w采血方法與豚鼠相同。若做開胸一次死亡采血，先將動(dòng)物作深麻醉，打開胸腔，暴露心臟，用針頭刺入右心室，吸取血液。小鼠約0.5-0.6ml；大鼠約0.8-1.2ml。6.頸動(dòng)靜脈采血先將動(dòng)物仰位固定，切開頸部皮膚，分離皮下結(jié)締組織，使頸靜脈充分暴露，可用注射器吸出血液。在氣管兩側(cè)分離出頸動(dòng)脈，離心端結(jié)扎，向心端剪口將血滴入試管內(nèi)。7.腹主動(dòng)脈采血最好先將動(dòng)物麻醉，仰臥固定在手術(shù)架上，從腹正中線皮膚切開腹腔，使腹主動(dòng)脈清楚暴露。用注射器吸出血液，防止溶血?；蛴脽o(wú)齒鑷子剝離結(jié)締組織，夾住動(dòng)脈近心端，用尖頭手術(shù)剪刀，剪斷動(dòng)脈，使血液噴入盛器。8.股動(dòng)（靜）脈采血先由助手握住動(dòng)物，采血者左手拉直動(dòng)物下肢，使靜脈充盈。或者以搏動(dòng)為指標(biāo)，右手用注射器刺入血管。體重15-20g小鼠采血約0.2-0.8ml，大鼠約0.4-0.6ml。（二）豚鼠采血法1.耳緣剪口采血將耳消毒后，用銳器（刀或刀片）割破耳緣，在切口邊緣涂抹20%檸檬酸鈉溶液，阻止血凝，則血可自切口自動(dòng)流出，進(jìn)入盛器。操作時(shí)，使耳充血效果較好。此法能采血0.5ml左右。2.心臟采血取血前應(yīng)探明心臟搏動(dòng)最強(qiáng)部位，通常在胸骨左緣的正中，選心跳最顯的部位作穿刺。針頭宜稍細(xì)長(zhǎng)些，以免發(fā)生手術(shù)后穿刺孔出血，其操作手法詳見兔心臟采血。因豚鼠身體較小，一般可不必將動(dòng)物固定在解剖臺(tái)上，而可由助手握住前后肢進(jìn)行采血即可。成年豚鼠每周采血應(yīng)不超過10ml為宜。3.肌動(dòng)脈采血將動(dòng)脈仰位固定在手術(shù)臺(tái)上，剪去腹股溝區(qū)的毛，麻醉后，局部用碘酒消毒。切開長(zhǎng)約2-3cm的皮膚，使股動(dòng)脈暴露及分離。然后，用鑷子提起股動(dòng)脈，遠(yuǎn)端結(jié)扎，近端用止血鉗夾住，在動(dòng)脈中央剪一小孔，用無(wú)菌玻璃小導(dǎo)管或聚乙烯、聚四氟乙烯管插入，放開止血鉗，血液即導(dǎo)管口流出。一次可采血10-20ml。4.背中足靜脈取血助手固定動(dòng)物，將其右或左右膝關(guān)節(jié)伸直提到術(shù)者面前。術(shù)者將動(dòng)物腳背面用酒精消毒，找出背中足靜脈后，以左手的拇指和食指拉住豚鼠的趾端，右手拿的注射針刺入靜脈。拔針后立即出血，呈半球狀隆起。采血后，用紗布或脫脂棉壓迫止血。反復(fù)采血時(shí)，兩后肢交替使用。（三）兔采血法1.耳靜脈采血本法為最常用的取血法之一，常作多次反復(fù)取血用，因此，保護(hù)耳緣靜脈，防止發(fā)生栓塞特別重要。將兔放入僅露出頭部及兩耳的固定盒中，或由助手以手扶住。選耳靜脈清晰的耳朵，將耳靜脈部位的毛拔去，用75%酒精局部消毒，待干。用手指輕輕摩擦兔耳，使靜脈擴(kuò)張，用連有5（1/2）號(hào)針頭的注射器在耳緣靜脈末端刺破血管待血液漏出取血或?qū)⑨橆^逆血流方向刺入耳緣靜脈取血，取血完畢用棉球壓迫止血，此種采血法一次最多可采血5-10ml。2.耳中央動(dòng)脈采血將兔置于兔固定筒內(nèi)，在兔耳的中央有一條較粗、顏色較鮮紅的中央動(dòng)脈，用左手固定兔耳，右手取注射器，在中央動(dòng)脈的末端，沿著動(dòng)脈平行地向心方向刺入動(dòng)脈，即可見動(dòng)脈血進(jìn)入針筒，取血完畢后注意止血。此法一次抽血可達(dá)15ml。但抽血時(shí)應(yīng)注意，由于兔耳中央動(dòng)脈容易發(fā)生痙攣性收縮，因此抽血前，必須先讓兔耳充分充血，當(dāng)動(dòng)脈擴(kuò)張，未發(fā)生痙攣性收縮之前立即進(jìn)行抽血，如果等待時(shí)間過長(zhǎng)，動(dòng)脈經(jīng)常會(huì)發(fā)生較長(zhǎng)時(shí)間的痙攣性收縮。取血用的針頭一般用6號(hào)針頭，不要太細(xì)。針刺部位從中央動(dòng)脈末端開始。不要在近耳根部取血，因耳根部軟組織厚，血管位置略深，易刺透血管造