干姜化學(xué)成分的研究

干姜化學(xué)成分的研究干姜(ZingiberisRhizoma)為姜科姜屬草本常年生單子葉植物姜(ZingerofficinaleRosc.)的干燥根莖。干姜作為一種用途廣泛的中藥材，已經(jīng)被多版《中華人民共和國(guó)藥典》收錄，主治脾胃虛冷、肢冷脈微、頭暈吐逆、水瀉、血痢、脾寒瘧疾、咳嗽上氣、吐血不止、赤眼澀痛、牙痛等，是藥食兼用的常用中藥。本實(shí)驗(yàn)從干姜中分得5個(gè)化合物，根據(jù)化合物的理化性質(zhì)與波譜數(shù)據(jù)分析，鑒定它們的化學(xué)結(jié)構(gòu)分別為甲基-6-姜酚(methyl-6-gingerol)、6-姜腦(6-shogaol)、β-桉醇(β-eudesmol)、2，5-二羥基沒(méi)藥烷-3，10-二烯(2，5–dihydroxybisabola-3，10-diene）和4-姜酚(4-gingerol)。其中甲基-6-姜酚、β-桉醇和2，5-二羥基沒(méi)藥烷-3，10-二烯是首次從干姜中分離得到的單體化合物。本實(shí)驗(yàn)還建立了干姜中的甲基-6-姜酚的HPLC含量測(cè)定方法，該方法具有精密度高、靈敏度好、選擇性高等特點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)為干姜質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的完善以及干姜的開(kāi)發(fā)利用提供了新的科學(xué)依據(jù)。一、干姜中單體化合物的提取、分離和鑒定1.提取將30kg干燥干姜粉末，用95%乙醇溶液回流提取3次，乙醇量分別為150L、100L和100L，提取時(shí)間分別為2h、1.5h和1h，將三次提取液合并，減壓回收乙醇，濃縮得到乙醇提取物約3.2kg。2.分離與純化將提取物進(jìn)行硅膠柱層析，薄層檢測(cè)，合并相同組分并濃縮，得到A、B、C、D和E五部分。將C部分進(jìn)行硅膠柱層析，得到C-1、C-2和C-3三部分，這三部分再反復(fù)經(jīng)ODS柱層析純化，得到單體化合物Ⅰ(1.2g)、化合物Ⅱ(500mg)和化合物Ⅲ(460mg)。將D部分進(jìn)行硅膠柱層析，得到D-1和D-2兩部分，再分別反復(fù)進(jìn)行ODS柱層析分離純化，得到化合物Ⅳ(90mg)和化合物Ⅴ(1.5g)。3.結(jié)構(gòu)鑒定通過(guò)理化性質(zhì)和UV、IR、MS、NMR等波譜學(xué)數(shù)據(jù)分析，并與文獻(xiàn)對(duì)照，確定化合物Ⅰ是甲基-6-姜酚，化合物Ⅱ是6-姜腦，化合物Ⅲ是β-桉醇，化合物Ⅳ是2，5–二羥基沒(méi)藥烷–3，10-二烯，化合物Ⅴ為4-姜酚。二、HPLC法測(cè)定干姜中甲基-6-姜酚的含量1.儀器、色譜條件和對(duì)照品色譜儀：Agilent1200Series高效液相色譜儀（UV檢測(cè)器）色譜柱：AgilentZorbaxSB-C-18(4.6mm×250mm,5μm)流動(dòng)相：甲醇-水=56:44流速：1.0mL/min柱溫：30℃檢測(cè)波長(zhǎng)：208nm對(duì)照品：甲基-6-姜酚（純度：99.5%）2.方法學(xué)考察Ⅰ.日內(nèi)精密度實(shí)驗(yàn)取甲基-6-姜酚對(duì)照品溶液10μL注入高效液相色譜儀，一天內(nèi)連續(xù)進(jìn)樣6次，結(jié)果顯示，甲基-6-姜酚的峰面積的RSD（n=6）值為0.41%，保留時(shí)間的RSD(n=6)值為1.25%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明日內(nèi)精密度良好。Ⅱ.日間精密度實(shí)驗(yàn)取甲基-6-姜酚對(duì)照品溶液10μL注入高效液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6天，每天進(jìn)樣一針，結(jié)果顯示，甲基-6-姜酚的峰面積的RSD(n=6)值為0.21%，保留時(shí)間的RSD（n=6)值為0.33%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明日間精密度良好。Ⅲ.線性關(guān)系在0.01-5.0μg范圍內(nèi)甲基-6-姜酚的進(jìn)樣量（x，μg）與峰面積（y)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。線性回歸方程為：y=3721.1x-49.487，r=0.9999Ⅳ.重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取同一樣品按供試品溶液制備方法平行制備6份供試品溶液，分別測(cè)定其中甲基-6-姜酚的含量。結(jié)果其平均含量是64.32μg/g，6次測(cè)定結(jié)果的RSD(n=6)值為0.59%，表明重復(fù)性良好。Ⅴ.穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)供試品溶液配制完成后，在12小時(shí)內(nèi)每隔兩小時(shí)進(jìn)樣一次，每次進(jìn)樣10μL，甲基-6-姜酚的峰面積RSD(n=6)和保留時(shí)間的RSD(n=6)分別為0.30%和0.50%。結(jié)果顯示，供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。Ⅵ.檢測(cè)限和定量限采用本實(shí)驗(yàn)的測(cè)定條件，甲基-6-姜酚的定量限為10ng，檢測(cè)限為5ng。Ⅶ.加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)甲基-6-姜酚的平均加樣回收率為99.4%，RSD(n=6)為2.02%。結(jié)果表明，