藥物的體外抗菌試驗

關(guān)于藥物的體外抗菌試驗藥物的體外抗菌試驗用途：抗菌藥物的篩選、藥物的抗菌譜測定及臨床藥物敏感性試驗等方面。

第2頁,共23頁，2024年2月25日，星期天抑菌：即抑制微生物的生長繁殖，但不能殺死微生物，在藥物除去后微生物又能生長；殺菌：即能殺死微生物，當藥物除去后，微生物也不能再生長繁殖。兩者并非絕對，只是在一定條件下相對而言。第3頁,共23頁，2024年2月25日，星期天常用的體外抑菌試驗

瓊脂擴散法濾紙片法挖溝法連續(xù)稀釋法第4頁,共23頁，2024年2月25日，星期天瓊脂擴散法原理：藥物可以在瓊脂培養(yǎng)基中自由擴散，形成一定濃度的含藥區(qū)域。由于各種微生物對不同藥物或同一藥物不同濃度的敏感性不同，因而形成一定大小的抑菌圈或抑菌距離，根據(jù)其大小，可以了解藥物的抗菌作用大小或是微生物對試驗藥物的敏感性。第5頁,共23頁，2024年2月25日，星期天濾紙片法：制成含菌平板后，將濾紙片蘸取藥液置于平板上，培養(yǎng)后觀察結(jié)果，量取抑菌圈直徑以此判斷試驗藥物抑菌作用的強弱。用于新藥的初篩及臨床的藥敏試驗。

第6頁,共23頁，2024年2月25日，星期天第7頁,共23頁，2024年2月25日，星期天挖溝法：1、在瓊脂平板上挖溝，溝兩邊垂直劃線接種各種試驗菌，溝內(nèi)加入藥液。2、培養(yǎng)后，根據(jù)溝兩邊所生長的試驗菌離溝的距離來判斷藥物對試驗菌的抗菌作用強弱。適用于在一個平板上試驗一種藥物對幾種不同試驗菌的抗菌作用。第8頁,共23頁，2024年2月25日，星期天第9頁,共23頁，2024年2月25日，星期天

瓊脂擴散法具有方法簡便，技術(shù)要求不高，易掌握操作的特點。但精確度不高，一般能用于定性或初步判斷其作用的強弱。液體稀釋法是一種測定藥物的抗菌作用定量方法，較瓊脂擴散法精確，因而運用較普遍。

第10頁,共23頁，2024年2月25日，星期天連續(xù)稀釋法可用于測定藥物的最低抑菌濃度（MIC）和最低殺菌濃度（MBC）。可以用液體培養(yǎng)基，也可用固體培養(yǎng)基。凡能抑制試驗菌生長的最高藥物稀釋度為該藥的最低抑菌濃度（Minimalinhibitoryconcentration，MIC）。以培養(yǎng)后無細菌生長的最高藥物稀釋度為最小殺菌濃度（Minimalbactericidalconcentration，MBC）。第11頁,共23頁，2024年2月25日，星期天液體連續(xù)稀釋法

1、在一系列的試管中用液體培養(yǎng)基將試驗藥物作連續(xù)對倍稀釋，使藥物的濃度沿試管順序成倍遞減。2、再于各管中加入等量的實驗菌，經(jīng)16～24h培養(yǎng)后，與陰性及陽性對照管進行對照觀察。3、將未長細菌的培養(yǎng)液取出，分別轉(zhuǎn)種瓊脂平皿。如培養(yǎng)后重新長出試驗菌，說明該藥僅有抑菌作用。如無菌生長則可以認為該藥物有殺菌作用。第12頁,共23頁，2024年2月25日，星期天第13頁,共23頁，2024年2月25日，星期天聯(lián)合抗菌試驗

在藥學中，常需要檢查兩種抗菌藥物在聯(lián)合應用時的相互作用以及抗菌藥物與不同PH值或不同離子溶液的相互影響。

加強藥物抗菌作用的為協(xié)同（synergism）；減弱藥物作用的為拮抗（antagonism）；互相無影響的為無關(guān)（indifference）；作用二者之和為累加（addition）。

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聯(lián)合抗菌試驗的常用方法

一、紙條試驗（paperstriptest）

即在已接種實驗菌的平板表面垂直放置兩條浸有一種藥液的濾紙條，培養(yǎng)后根據(jù)抑菌區(qū)的加強、減弱或無影響來判斷它們在聯(lián)合應用時的效應。圖20-2是紙條實驗的示意圖。

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圖20-2是紙條實驗的示意圖。圖中A列的兩紙條中只有一條含有抗菌藥物，另一條不含抗菌藥物；B列的兩紙條均含有抗菌藥物。

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二、棋盤格法（checkboardtest）

是由于在試驗時,含兩種不同濃度藥物的試管排列呈棋盤狀而得名,用以評價兩種藥物同時用不同濃度進行聯(lián)合試驗時的抗菌活性。實驗時排列6排試管，每排6管，共36管使成方塊，A及B藥各以液體培養(yǎng)基進行稀釋，A藥各稀釋度縱行定量加入各管，B藥各稀釋定量按橫排加入，兩藥同時作單獨抗菌實驗對照。然后加入定量菌液，經(jīng)培養(yǎng)后觀察結(jié)果。第17頁,共23頁，2024年2月25日，星期天抗菌試驗的影響因素1、試驗菌：用專門的供應機構(gòu)提供的標準菌株。北京衛(wèi)生部藥品生物制品檢定所菌種保藏中心。試驗菌應合理保藏，用前加以純化及生物學特征鑒定。第18頁,共23頁，2024年2月25日，星期天所用的試驗菌株應處于對數(shù)生長期，因此期的微生物對外界因素變化最敏感。試驗結(jié)果的靈敏度在一定程度上與試驗菌的接種量成反比關(guān)系，故應選用適宜的接種量。第19頁,共23頁，2024年2月25日，星期天抗菌試驗的影響因素2、培養(yǎng)基抗菌試驗的培養(yǎng)基應按試驗菌的需求配制，如鏈球菌常用含血清的肉湯培養(yǎng)基，抗真菌藥物試驗需用沙氏培養(yǎng)基。培養(yǎng)基的酸堿度、電解質(zhì)、還原性物質(zhì)等均可影響試驗結(jié)果，實驗時應盡可能排除各種影響實驗結(jié)果因素的摻入。經(jīng)無菌檢查合格。第20頁,共23頁，2024年2月25日，星期天抗菌試驗的影響因素3、抗菌藥物藥物的濃度、pH及含有的其他成分均可影響試驗結(jié)果，特別是中草藥制劑往往含有色素、雜質(zhì)和鞣質(zhì)等，這些均可造成錯誤結(jié)果，應加注意。

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