血液學血細胞化學染色

關(guān)于血液學血細胞化學染色

學習目標1.掌握：細胞化學染色的基本步驟；鐵染色、過氧化物酶染色、酯酶染色、過碘酸-希夫染色、堿性磷酸酶染色、酸性磷酸酶染色的正常血細胞染色反應和臨床意義。2.熟悉：細胞化學染色的概念和臨床應用。3.了解：細胞化學染色的原理和影響因素。第2頁,共156頁，2024年2月25日，星期天第一節(jié)概述

一、概念細胞化學染色是細胞學和化學相結(jié)合而形成的一門科學。它以細胞形態(tài)學為基礎，結(jié)合運用化學反應的原理對血細胞內(nèi)的各種化學成分(酶類/脂類/糖類/鐵/蛋白質(zhì)/核酸等)作定性、定位、半定量分析的方法。第3頁,共156頁，2024年2月25日，星期天要求：血細胞化學染色的基本要求是在原位顯示細胞成分和結(jié)構(gòu)，反應產(chǎn)物應是有色沉淀物，具有一定的穩(wěn)定性。血細胞化學染色可顯示糖原、脂類、酶、蛋白質(zhì)等。第4頁,共156頁，2024年2月25日，星期天二、必要性從形態(tài)學觀察，存在較多的主觀性；有些原始細胞形態(tài)較相似，難以鑒別；結(jié)合細胞化學染色，提高疾病的診斷率。第5頁,共156頁，2024年2月25日，星期天三、臨床應用1.輔助判斷急性白血病的細胞類型2.輔助血液系統(tǒng)疾病的診斷和鑒別診斷3.觀察疾病的療效和預后4.疾病發(fā)病機制的探討第6頁,共156頁，2024年2月25日，星期天白血病的診斷：MICM分型

M：morphologyI：immunology

C：cytogeniticsM：molecularbiology形態(tài)學分型：進行初步的診斷免疫學分型：明確細胞種類細胞遺傳學分型：與疾病預后有關(guān)分子生物學分型：提高到分子水平第7頁,共156頁，2024年2月25日，星期天四、基本步驟1.固定（1）物理法：干燥、火焰（2）化學法：A、蒸氣固定：甲醛B、液體固定：甲醛、乙醇、甲醇、丙酮。第8頁,共156頁，2024年2月25日，星期天2.顯示：有色沉淀反應（1）偶氮偶聯(lián)法：酯酶染色（2）聯(lián)苯胺法：POX（3）普魯士藍反應：Fe（4）希夫反應：PAS（5）金屬沉淀法：NAP（6）物理顯色法：SBB第9頁,共156頁，2024年2月25日，星期天3.復染：使各種細胞能顯示出來鐵染色----中性紅、伊紅PAS-------甲基綠核：中性紅、甲基綠、沙黃等。漿：伊紅、剛果紅、光綠等。第10頁,共156頁，2024年2月25日，星期天五、研究對象

外周血和骨髓新鮮涂片單個細胞中的化學物質(zhì)：

酶類、脂類、糖類、鐵、蛋白質(zhì)、核酸等

第11頁,共156頁，2024年2月25日，星期天

第二節(jié)常用細胞化學染色技術(shù)

鐵染色過氧化物酶染色蘇丹黑B染色酯酶染色過碘酸-希夫反應中性粒細胞堿性磷酸酶染色酸性磷酸酶染色

第12頁,共156頁，2024年2月25日，星期天一、鐵染色

（ferricstain）第13頁,共156頁，2024年2月25日，星期天亞鐵氰化鉀亞鐵氰化鐵(藍色沉淀在含F(xiàn)e部位)鐵＋酸性環(huán)境普魯士藍反應骨髓小粒中的含F(xiàn)e血黃素（細胞外鐵）骨髓中貯存鐵幼紅細胞內(nèi)的Fe（細胞內(nèi)鐵）原理第14頁,共156頁，2024年2月25日，星期天

二、結(jié)果判斷

1.細胞外鐵(骨髓小粒－含鐵血黃素)鐵顆粒、鐵小珠、鐵團塊第15頁,共156頁，2024年2月25日，星期天細胞外鐵(低倍鏡觀察)（－）：無顆粒（＋）：有少量鐵顆?；蚺家婅F小珠（＋＋）：有較多的鐵顆粒或鐵小珠（＋＋＋）：有很多的鐵顆粒、鐵小珠和少數(shù)鐵小塊（＋＋＋＋）：有極多鐵顆粒、小珠和很多鐵小塊，密集成堆。第16頁,共156頁，2024年2月25日，星期天2.細胞內(nèi)鐵(中晚幼紅細胞，油鏡觀察)（1）分級(按鐵顆粒數(shù)量的多少及大小)

細小顆粒：細沙樣鐵小粒，不易看清。粗大顆粒：很容易看清的顆粒。（2）陽性率

觀察100個中晚幼紅細胞，計算出鐵粒幼紅細胞的百分比。第17頁,共156頁，2024年2月25日，星期天【結(jié)果判斷】

幼紅細胞核染色為鮮紅色,鐵粒呈藍綠色。

第18頁,共156頁，2024年2月25日，星期天細胞內(nèi)鐵(油鏡觀察幼紅細胞)

Ⅰ型：1～2個小鐵顆粒；

Ⅱ型：3～5個小鐵顆粒；

Ⅲ型：6～10個小鐵顆?；?～4個大顆粒；

Ⅳ型：

10個以上小鐵顆?；?個以上大顆粒。第19頁,共156頁，2024年2月25日，星期天

環(huán)形鐵粒幼紅細胞(ringedsideroblast)

幼紅細胞胞質(zhì)內(nèi)鐵顆粒>6個，圍繞核周2/3以上者。鐵粒幼紅細胞(sideroblast)：

胞質(zhì)中出現(xiàn)藍色鐵顆粒的幼紅細胞。鐵粒紅細胞(siderocyte)：

胞質(zhì)中出現(xiàn)藍色鐵顆粒的成熟紅細胞。第20頁,共156頁，2024年2月25日，星期天綠色箭頭示：環(huán)形鐵粒幼紅細胞；藍色箭頭示：鐵粒紅細胞第21頁,共156頁，2024年2月25日，星期天1.細胞外鐵：

（+）~（++）2.細胞內(nèi)鐵：鐵粒幼紅細胞陽性率大約12~44%，I~II型（I型為主），無Ⅲ型、Ⅳ型、環(huán)形鐵粒幼紅細胞及鐵粒紅細胞。三、參考范圍第22頁,共156頁，2024年2月25日，星期天四、臨床意義

鐵染色是評估鐵缺乏最實用的方法，是反映儲存鐵的金標準，是臨床應用最廣泛的細胞化學染色之一。第23頁,共156頁，2024年2月25日，星期天

1.缺鐵性貧血：外鐵（－），內(nèi)鐵<10%；治療有效后，內(nèi)外鐵

。

2.鐵粒幼細胞性貧血：外鐵

；內(nèi)鐵陽性率

，環(huán)形鐵粒幼紅細胞增多，可見粗顆粒的Ⅲ、Ⅳ型鐵粒幼紅細胞。第24頁,共156頁，2024年2月25日，星期天

3.MDS-RAS：內(nèi)外鐵增多，環(huán)形鐵粒幼紅細胞>15%。

4.非缺鐵性貧血：溶貧、巨幼貧、再障、白血病等，內(nèi)外鐵正常或增多。

5.感染、肝硬化、慢性腎炎、血色病等：外鐵增多。第25頁,共156頁，2024年2月25日，星期天五、應用評價鐵染色是臨床常用的一種細胞化學染色，雖不如血漿鐵蛋白敏感，但是反映機體儲存鐵的金標準。

外鐵：反映骨髓中鐵的儲存量；

內(nèi)鐵：反映骨髓中可利用的鐵量。

第26頁,共156頁，2024年2月25日，星期天二、過氧化物酶染色

（peroxidase,POX）

第27頁,共156頁，2024年2月25日，星期天一、原理

粒細胞和部分單核細胞的溶酶體顆粒中含有過氧化物酶(POX)，它可分解H2O2釋放出新生態(tài)的氧，后者氧化二氨基聯(lián)苯胺，形成金黃色不溶性沉淀，定位于胞質(zhì)內(nèi)酶所在的活性部位。

二甲基聯(lián)苯胺法（DAB）原理第28頁,共156頁，2024年2月25日，星期天POX

新生態(tài)氧[O]↑過氧化氫（基質(zhì)中）四甲基聯(lián)苯胺（無色）聯(lián)苯胺藍（藍色）亞硝基鐵氰化鈉藍色顆粒（漿內(nèi)酶部位）粒、單核細胞胞漿【原理】第29頁,共156頁，2024年2月25日，星期天二、ICSH推薦的三種方法

二氨基聯(lián)苯胺法（DBA）二鹽酸聯(lián)苯胺法過氧化物酶氨基-甲基卡巴唑染色法

第30頁,共156頁，2024年2月25日，星期天三、結(jié)果判斷

在細胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)金黃色顆粒為陽性反應。（二氨基聯(lián)苯胺法）第31頁,共156頁，2024年2月25日，星期天二氨基聯(lián)苯胺法第32頁,共156頁，2024年2月25日，星期天二鹽酸聯(lián)苯胺法第33頁,共156頁，2024年2月25日，星期天二鹽酸聯(lián)苯胺法第34頁,共156頁，2024年2月25日，星期天【結(jié)果判斷】

-、±、+、++、+++、++++弱陽性顆粒小，分布稀疏陽性顆粒稍粗，分布較密集強陽性顆粒粗大，密布于整個胞漿第35頁,共156頁，2024年2月25日，星期天POX結(jié)果判斷細胞質(zhì)內(nèi)有藍黑色顆粒者為陽性。（－）無顆粒沉著；（a）（±）顆粒細小，分布稀疏；（b）（+）顆粒較粗，局灶分布；（c）（++）顆粒粗大，分布較密，占胞質(zhì)1/2~2/3；（d）（+++）顆粒粗大，呈團塊分布；（e）（++++）全部胞質(zhì)均部滿顆粒，可覆蓋胞核（f）。第36頁,共156頁，2024年2月25日，星期天【正常血細胞染色反應】1.粒細胞系統(tǒng)

POX主要存在于粒系細胞中。

分化差的原粒細胞陰性;

分化好的原粒細胞至中性成熟粒細胞各階段均呈陽性，陽性反應程度隨細胞的成熟逐漸增強。

中性分葉核粒細胞：強陽性嗜酸粒細胞：陽性最強嗜堿粒細胞：（－）第37頁,共156頁，2024年2月25日，星期天

2.單核細胞系統(tǒng)陰性或弱陽性

3.淋巴細胞系統(tǒng)紅細胞系統(tǒng)巨核細胞系統(tǒng)陰性漿細胞組織細胞

第38頁,共156頁，2024年2月25日，星期天第39頁,共156頁，2024年2月25日，星期天第40頁,共156頁，2024年2月25日，星期天第41頁,共156頁，2024年2月25日，星期天第42頁,共156頁，2024年2月25日，星期天四、臨床意義鑒別急性白血病的類型首選（1）急淋和急性髓細胞系的鑒別：急淋：（－），陽性率<3%；急單：弱陽性；急粒：陽性（+～+

+

+）。

第43頁,共156頁，2024年2月25日，星期天

2.單核細胞系統(tǒng)：（－）或弱（+），陽性顆粒少而細小。

3.其它系統(tǒng)細胞：淋巴細胞系統(tǒng)、紅細胞系統(tǒng)、巨核細胞系統(tǒng)、漿細胞、組織細胞（－）。

第44頁,共156頁，2024年2月25日，星期天【臨床評價】

急性髓細胞白血病急性淋巴細胞白血病

鑒別第45頁,共156頁，2024年2月25日，星期天

1.急性髓細胞白血病

（1）急性粒細胞白血病

陽性反應

（2）急性單核細胞白血病

弱陽性反應第46頁,共156頁，2024年2月25日，星期天

2.急性淋巴細胞白血病

陰性反應或陽性率<3%(殘留原粒細胞)第47頁,共156頁，2024年2月25日，星期天ALL第48頁,共156頁，2024年2月25日，星期天ALL第49頁,共156頁，2024年2月25日，星期天原粒陰性第50頁,共156頁，2024年2月25日，星期天原粒弱陽性第51頁,共156頁，2024年2月25日，星期天原粒陽性第52頁,共156頁，2024年2月25日，星期天早幼粒強陽性第53頁,共156頁，2024年2月25日，星期天

一、原理

蘇丹黑B是一種脂溶性重氮染料，可溶解細胞內(nèi)含脂結(jié)構(gòu)(中性脂肪、磷脂、糖脂和類固醇)，而使脂類物質(zhì)顯示出來，呈棕黑色或深黑色(粒細胞：豐富；單核細胞：少量)。三、蘇丹黑B染色（SudanblackB，SBB）第54頁,共156頁，2024年2月25日，星期天正常血細胞的染色反應與POX染色基本一致臨床意義與POX染色相似第55頁,共156頁，2024年2月25日，星期天二、SBB與POX區(qū)別：

1.POX特異性高于SBB，而敏感性低于SBB；2.POX染色要求涂片新鮮，保持酶活性，SBB染色可用陳舊涂片。第56頁,共156頁，2024年2月25日，星期天第57頁,共156頁，2024年2月25日，星期天第58頁,共156頁，2024年2月25日，星期天

1.特異性酯酶（specificesterase）

主要存在于粒細胞，又稱“粒細胞酯酶”

－氯乙酸AS-D萘酚酯酶（NAS-DCE）。

一、分類四、酯酶染色第59頁,共156頁，2024年2月25日，星期天

2.非特異性酯酶(nonspecificesterase)單核、組織細胞中含量較多，粒細胞、淋巴細胞中含量少，且氟化鈉抑制單核細胞中的非特異性酯酶，而不抑制粒細胞、淋巴細胞及其他細胞。第60頁,共156頁，2024年2月25日，星期天

醋酸AS-D奈酚酯酶：NAS-DAE

α-醋酸奈酚酯酶：α-NAE

α-丁酸奈酚酯酶：α-NBE酸性α-醋酸奈酚酯酶：ANAE

(α-NBE敏感性不如NAS-DAE但特異性較之強)

第61頁,共156頁，2024年2月25日，星期天（

一）特異性脂酶染色1.氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色

NaphtholAS-Dchloroacetateesterase第62頁,共156頁，2024年2月25日，星期天

1.原理氯乙酸AS-D萘酚AS-D萘酚

不溶性的有色(紅)沉淀。NAS-DCE幾乎僅出現(xiàn)在粒細胞，其特異性高，因此又稱為“粒細胞酯酶”NAS-DCE

重氮鹽(堅牢藍紫醬)第63頁,共156頁，2024年2月25日，星期天氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色第64頁,共156頁，2024年2月25日，星期天

2.正常血細胞的染色反應

①粒系(酶活性不隨細胞成熟而增強)原粒（－）或（+）早幼粒~成熟中性粒細胞（+）嗜酸性粒細胞（－）或弱（+）嗜堿性粒細胞（+）第65頁,共156頁，2024年2月25日，星期天

②單核細胞系統(tǒng)：（－）③肥大細胞：（+）

④淋巴細胞、漿細胞、幼紅細胞、

巨核細胞、血小板：（－）第66頁,共156頁，2024年2月25日，星期天

3.臨床意義

主要用于輔助鑒別急性白血病細胞類型：

①急性粒細胞白血病：（+）

②急性早幼粒細胞白血?。簭姡?）

③急性單核細胞白血?。海ǎ?/p>

④急粒-單：粒細胞（+）單核細胞（－）

⑤急性巨核細胞性白血病：（－）

⑥急性淋巴細胞白血?。海ǎ┑?7頁,共156頁，2024年2月25日，星期天

原理

：

非特異性脂酶在相應的pH環(huán)境中，

將基質(zhì)液中相應底物水解，產(chǎn)生含萘酚

的物質(zhì)，后者與重氮鹽發(fā)生偶聯(lián)反應，

形成不溶性的有色沉淀，定位于細胞質(zhì)

內(nèi)酶所在的部位。（二）非特異性脂酶染色第68頁,共156頁，2024年2月25日，星期天根據(jù)pH值的不同分為：酸性：酸性α-醋酸萘酚酯酶染色(ANAE)中性：α-醋酸萘酚酯酶染色(α-NAE)

醋酸AS-D萘酚酯酶染色(NAS-DAE)堿性：α-丁酸萘酚酯酶染色(α-NBE)第69頁,共156頁，2024年2月25日，星期天

名稱pH底物生成物重氮鹽(產(chǎn)物顏色)α-醋酸萘酚酯酶(α-NAE)中α-醋酸萘酚α-萘酚堅牢藍B棕黑,灰黑醋酸AS-D萘酚酯酶(AS-DNAE)中醋酸AS-D萘酚AS-D萘酚堅牢藍BB藍α-丁酸萘酚酯酶(α-NBE)堿α-丁酸萘酚α-萘酚堅牢紫醬GBC紅酸性α-醋酸萘酚酯酶(ANAE)酸α-醋酸萘酚α-萘酚六偶氮付品紅紅第70頁,共156頁，2024年2月25日，星期天

1.α-醋酸萘酚酯酶染色

（α-naphtholacetateesterase，α-NAE）第71頁,共156頁，2024年2月25日，星期天α-醋酸萘酚酯酶（細胞內(nèi)）α-醋酸萘酚（基質(zhì)液中）α-萘酚

重氮鹽（堅牢藍B）胞漿不溶性灰黑色或棕黑色沉淀水解【原理】第72頁,共156頁，2024年2月25日，星期天【結(jié)果判斷】

胞漿內(nèi)有灰黑色或棕黑色彌散性顆粒狀沉淀為陽性。第73頁,共156頁，2024年2月25日，星期天α-醋酸萘酚酯酶染色(灰黑色、棕黑色)第74頁,共156頁，2024年2月25日，星期天α-醋酸萘酚酯酶染色a:單核b:BPCc:巨核d:LC(+)e:幼紅(-)第75頁,共156頁，2024年2月25日，星期天

氟化鈉抑制試驗

在基質(zhì)液中加入適量NaF,其余染色方法同上。兩種方法染色后用油鏡計數(shù)100或200個被檢細胞，分別計算出抑制前和抑制后的陽性率或陽性積分。第76頁,共156頁，2024年2月25日，星期天

氟化鈉抑制率=抑制前陽性率或陽性積分-抑制后陽性率或陽性積分抑制前陽性率或陽性積分100%第77頁,共156頁，2024年2月25日，星期天第78頁,共156頁，2024年2月25日，星期天

A圖：急性單核細胞白血病α-NAE染色

原始、幼稚單核細胞多呈強陽性

B圖：急性單核細胞白血病

α-NAE氟化鈉抑制染色原始、幼稚單核細胞陽性反應被氟化鈉抑制（與A圖為同一標本）

A

B第79頁,共156頁，2024年2月25日，星期天【臨床評價】急單急粒急性早幼粒急粒單急淋α-NAE+++或-或++陽性-++++弱+NaF被抑制不被不被抑制部分被抑制抑制部分未被抑制主要用于鑒別急性白血病類型第80頁,共156頁，2024年2月25日，星期天

2.臨床意義

輔助鑒別急性白血病細胞類型

急單：單核細胞陽性，能被NaF抑制。

急粒：粒細胞弱陽性，不被NaF抑制。第81頁,共156頁，2024年2月25日，星期天

M3：強陽性，不能被NaF抑制。

M4：部分陽性細胞能被NaF抑制，

部分陽性細胞不能被NaF抑制。

ALL：原幼淋陰性或陽性，不能被NaF抑制。第82頁,共156頁，2024年2月25日，星期天【正常血細胞染色反應】1.單核細胞系統(tǒng)

原始單核細胞分化差陰性分化好陽性

幼稚及成熟單核細胞陽性被氟化鈉抑制第83頁,共156頁，2024年2月25日，星期天

2.粒細胞系統(tǒng)

原粒細胞陰性或弱陽性以下階段為弱陽性

3.淋巴細胞系統(tǒng)

多數(shù)陰性，少數(shù)弱陽性

不被氟化鈉抑制第84頁,共156頁，2024年2月25日，星期天2.α-丁酸奈酚酯酶染色α-NBE

原理：

血細胞中α-NBE在堿性條件下，基質(zhì)液中的α-丁酸奈酚水解，產(chǎn)生α-奈酚，后者與堅牢醬紫GBC偶聯(lián)，形成不溶性紅色沉淀，定位于胞質(zhì)內(nèi)。第85頁,共156頁，2024年2月25日，星期天α-NBE染色反應1.粒系：各期（-）2.單核系：分化差的原單（-）；分化好的原單（+）幼單~成熟單核（+），可被NaF抑制3.淋巴系：TC、非T非B（+）BC（+）

4.其他細胞：巨核、有核紅細胞、漿細胞（-）或弱（+）

組織細胞(+),不被NaF抑制第86頁,共156頁，2024年2月25日，星期天3.酸性α-醋酸奈酚酯酶染色ANAE

原理：

血細胞中的酸性α-醋酸奈酚酯酶（ANAE）在pH弱酸性（pH5.8）的條件下，可水解基質(zhì)液中的α-醋酸奈酚，產(chǎn)生α-奈酚，進而與重氮鹽六偶氮付品紅形成不溶性紅色沉淀，定位于細胞質(zhì)內(nèi)酶所在的部位。第87頁,共156頁，2024年2月25日，星期天酸性α-醋酸萘酚酯酶染色（彌漫性棕紅色）---M5第88頁,共156頁，2024年2月25日，星期天ANAE染色反應1.單核系：強（+）可被NaF抑制2.淋巴系：TC（+）BC（-）3.其他細胞：粒系（-）或弱（+）不被NaF抑制

紅系、巨核系（-）

第89頁,共156頁，2024年2月25日，星期天

4.酯酶雙染色

在同一張涂片上進行兩種酯酶染色特異性酯酶+非特異性酯酶對診斷急性粒-單細胞白血病有獨特價值

α-NAE與NAS-DCE紅色(單)

α-NBE與NAS-DCE蘭色(粒)

第90頁,共156頁，2024年2月25日，星期天骨髓涂片特異性酯酶（CE）和非特異性酯酶（NAE）的雙酯酶染色顯示，原始粒細胞胞漿呈藍色CE陽性反應；而原始單核細胞胞漿呈棕色的NAE陽性反應。第91頁,共156頁，2024年2月25日，星期天

NAS-DCE：

M1弱(+)/M2(+)/M3強(+)，M5/ALL(－)；

α-NBE：

M5(+)NaF抑制，M1/M2/M3/ALL(－)；

α-NAE/NAS-DAE：

M5強(+)NaF抑制

M3強(+)/M1M2a/ALL(+)NaF不抑制。

第92頁,共156頁，2024年2月25日，星期天五、過碘酸-希夫反應

(糖原染色)

（periodicacid-Schiffreaction，PAS）第93頁,共156頁，2024年2月25日，星期天雙醛基過碘酸希夫試劑中的無色品紅

紫紅色化合物(附于含多糖類的胞漿內(nèi))乙二醇基(多糖類物質(zhì)含有)氧化【原理】第94頁,共156頁，2024年2月25日，星期天

過碘酸是氧化劑，使含有乙二醇基的多糖類物質(zhì)(糖原、糖蛋白、糖脂、粘多糖等)氧化，形成雙醛基。醛基與Schiff’s液中的無色品紅結(jié)合，使無色品紅變成紫紅色化合物，定位于含多糖類的細胞內(nèi)。

一、原理第95頁,共156頁，2024年2月25日，星期天【結(jié)果判斷】陽性胞漿內(nèi)紅色陽性物呈彌散狀、顆粒狀或塊狀。陰性胞漿內(nèi)無色或無顆粒,核淡綠。

第96頁,共156頁，2024年2月25日，星期天第97頁,共156頁，2024年2月25日，星期天第98頁,共156頁，2024年2月25日，星期天

1.粒細胞系統(tǒng)：（陽性逐漸增強）

原始粒C（－）或（+）早幼粒C~成熟中性粒C（+）：

細顆粒均勻紅色嗜酸粒C：顆粒不著色，胞質(zhì)呈紅色。嗜堿粒C：顆粒陽性，胞質(zhì)不著色。

二、正常血細胞的染色反應第99頁,共156頁，2024年2月25日，星期天

2.單核細胞系統(tǒng)：分化差（－）其他（+），

粗顆粒狀。3.淋巴細胞系統(tǒng)：多數(shù)（－）少數(shù)（+），粗顆?；驂K狀。

4.紅細胞系統(tǒng)：（－），病理情況可（+）。

5.巨核細胞系統(tǒng)：（+），顆粒狀或塊狀。

6.其它細胞：漿細胞（－），巨噬細胞（+）第100頁,共156頁，2024年2月25日，星期天a粒細胞、b巨核細胞、c單核細胞、d幼紅細胞第101頁,共156頁，2024年2月25日，星期天三、結(jié)果判斷

1.粒細胞系統(tǒng)：

紅色、彌散狀。各種細胞陽性反應強弱不同

2.淋巴細胞系統(tǒng)：

粗顆粒狀、小塊狀、大塊狀紅色。第102頁,共156頁，2024年2月25日，星期天1、+2、++3、+++4、++++5、－第103頁,共156頁，2024年2月25日，星期天

3.紅細胞系統(tǒng)：

均勻紅色或塊狀

4.單核細胞系統(tǒng)：

粗顆粒狀

5.巨核細胞和血小板：

顆粒狀、塊狀。第104頁,共156頁，2024年2月25日，星期天1.巨核細胞和血小板陽性第105頁,共156頁，2024年2月25日，星期天

1.幫助鑒別巨幼細胞性貧血和骨

髓增生異常綜合征、紅白血病:

前者（－），后兩者（+）。四、臨床意義第106頁,共156頁，2024年2月25日，星期天第107頁,共156頁，2024年2月25日，星期天急性淋巴細胞白血病PAS染色原始、幼稚淋巴細胞均陽性，呈粗顆粒狀陽性第108頁,共156頁，2024年2月25日，星期天109急淋PAS陽性細胞第109頁,共156頁，2024年2月25日，星期天110PAS陽性的幼紅細胞第110頁,共156頁，2024年2月25日，星期天

2.幫助鑒別急性白血病的細胞類型：

急淋：（+）呈粗顆粒狀或塊狀。

急粒：（+）細顆粒狀或均勻紅色。

急單：（+）細顆粒狀，均勻分布，有時胞質(zhì)邊緣顆粒較粗大。

第111頁,共156頁，2024年2月25日，星期天

3.其他細胞：

骨髓轉(zhuǎn)移性腺癌細胞細胞呈強陽性

霍奇金淋巴瘤RS細胞多呈陰性或弱陽性

戈謝細胞呈強陽性尼曼-皮克細胞多呈陰性或弱陽性第112頁,共156頁，2024年2月25日，星期天CLLALL第113頁,共156頁，2024年2月25日，星期天

六、中性粒細胞堿性磷酸酶染色

（neutrophilicalkaline

phosphatase，NAP）第114頁,共156頁，2024年2月25日，星期天磷酸萘酚鈉（基質(zhì)中）中性粒細胞胞漿中NAP磷酸鈉α-萘酚

重氮鹽（堅牢藍鹽RR）＋紫黑色偶氮染料

（胞漿中）水解【原理】Kaplow偶氮偶聯(lián)法第115頁,共156頁，2024年2月25日，星期天【結(jié)果判斷】

胞漿中有紫黑色顆粒為陽性(+~++++）第116頁,共156頁，2024年2月25日，星期天【正常血細胞染色反應】中性成熟粒細胞陽性反應NAP主要存在于成熟的中性粒細胞胞質(zhì)中。嚴重的化膿性感染時，晚幼階段粒細胞也可見有陽性反應。2.其他細胞基本呈陰性反應

第117頁,共156頁，2024年2月25日，星期天第118頁,共156頁，2024年2月25日，星期天

NAP染色反應強度標準：

（－）：胞質(zhì)中無顆粒；（＋）：胞質(zhì)含少量顆粒，約占1/4；（＋＋）：胞質(zhì)含中等量顆粒，約占1/2；（＋＋＋）

：胞質(zhì)含較多顆粒，約占3/4；

（＋＋＋＋）：胞質(zhì)充滿顆粒，無空隙。第119頁,共156頁，2024年2月25日，星期天

2.NAP積分值計數(shù)100個成熟中性粒細胞（桿狀和分葉）,分別記錄其分級情況：

第120頁,共156頁，2024年2月25日，星期天(-)0分(+)1分(++)2分(+++)3分(++++)4分

陽性率全部陽性反應細胞之和

積分值各種陽性程度細胞的分值之和第121頁,共156頁，2024年2月25日，星期天

NAP染色結(jié)果報告包括陽性率和積分值。陽性率：指計數(shù)100個中性成熟粒細胞，其陽性細胞的數(shù)量即為陽性率；積分值：指計數(shù)100個中性成熟粒細胞，不同陽性程度細胞數(shù)量乘以其陽性程度之和即為積分值，其計算公式為：積分值=(＋)數(shù)量×1+(＋＋)數(shù)量×2+(＋＋＋)數(shù)量×3+(＋＋＋＋)數(shù)量×4。

2.NAP染色結(jié)果報告：第122頁,共156頁，2024年2月25日，星期天例：4分占20%

4×20=80分3分占40%

3×40=120分2分占18%

2×18=36分1分占10%

1×10=10分0分占12%

0×12=0分陽性率88%積分=246分第123頁,共156頁，2024年2月25日，星期天第124頁,共156頁，2024年2月25日，星期天0級0胞漿呈原色，無顆粒。

Ⅰ級+胞漿呈淺灰色，細小藍黑色顆粒占胞漿面積的25%～50%。

Ⅱ級++胞漿呈棕色片狀沉淀，小到中等顆粒約占胞漿面積的50%～75%。第125頁,共156頁，2024年2月25日，星期天Ⅲ級+++胞漿充滿棕黑色沉淀，分布均勻，中到大顆粒占胞漿面積的75%－100%。

Ⅳ級++++胞漿充滿深黑色致密的團塊狀沉淀，甚至遮蓋胞核，中到大顆粒占胞漿面積的l00%。

第126頁,共156頁，2024年2月25日，星期天第127頁,共156頁，2024年2月25日，星期天

3.參考范圍：

中性粒細胞NAP陽性率：＜40%

NAP積分為：30~130分第128頁,共156頁，2024年2月25日，星期天【臨床評價】（1）細菌性感染與病毒性感染

（尤其是化膿性感染）

明顯增加無明顯變化第129頁,共156頁，2024年2月25日，星期天

四、臨床意義

1.生理性變化：應激狀態(tài)、妊娠、新生兒等。

2.病理性變化：

(1)NAP

：細菌性感染、慢粒(加、急)、急

淋、慢淋、惡性淋巴瘤、轉(zhuǎn)移癌、

骨纖、真紅、再障、原發(fā)性血小

板增多癥、使用糖皮質(zhì)激素等。第130頁,共156頁，2024年2月25日，星期天

3.疾病的鑒別：

(1)類白與慢粒:前者

后者

(2)慢粒慢性期與慢性中性粒細胞白血?。?/p>

前者

后者

(3)細菌性感染與病毒性感染/寄生蟲感染：前者

后兩者正?；?/p>

(2)NAP：慢粒(慢)、PNH、MDS、惡組等。第131頁,共156頁，2024年2月25日，星期天

(6)惡組與反應性組織細胞增多癥：前者

后者常

(7)急性白血病類型：

急性髓細胞

急淋

(4)慢粒病情觀察：

(5)再障與陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿：

前者

后者

第132頁,共156頁，2024年2月25日，星期天CML類白第133頁,共156頁，2024年2月25日，星期天(2）類白血病反應與慢性粒細胞白血病明顯增加明顯下降且常為零分，緩解時又上升到正常第134頁,共156頁，2024年2月25日，星期天五、應用評價NAP染色有多種檢測方法，國際標準化委員會推薦Kaplow萘酚AS-BI磷酸鈉法和Tomonaga萘酚AS-MX磷酸鈉法。鈣-鈷法試劑成本低廉，操作繁瑣，反應時間長，臨床上逐步被偶氮偶聯(lián)法取代，陽性產(chǎn)物色澤鮮明、定位精確，尤其以萘酚AS-BI磷酸鈉法最為廣泛使用，利于評定NAP活性強度的分級。常用重氮鹽有堅牢藍RR、堅牢藍BB、堅牢紫醬等，不同偶聯(lián)有不同的靈敏度。

第135頁,共156頁，2024年2月25日，星期天七、酸性磷酸酶染色(acidphosphatase，ACP)一、原理1.Gomori硫化鉛法第136頁,共156頁，2024年2月25日，星期天棕黑色pH5.0第137頁,共156頁，2024年2月25日，星期天

2.偶氮偶聯(lián)法(常用)六偶氮付品紅——棕紅色沉淀磷酸萘酚AS-BI

萘酚AS-BI棕紅色沉淀

ACPPh5.0重氮鹽第138頁,共156頁，2024年2月25日，星期天第139頁,共156頁，2024年2月25日，星期天

3.抗酒石酸酸性磷酸酶染色（一組同工酶）兩張相同標本涂片+兩份基質(zhì)液(加L-酒石酸，不加L-酒石酸)ACP染色耐L-酒石酸兩份（+）不耐L-酒石酸不加L-酒石酸（+）加L-酒石酸（－）第140頁,共156頁，2024年2月25日，星期天

二、正常血細胞染色反應粒細胞、單核細胞、淋巴細胞、巨核細胞、血小板、漿細胞、巨噬細胞均呈陽性反應。第141頁,共156頁，2024年2月25日，星期天

三、臨床評價

1.診斷多毛細胞白血病多毛細胞白血?。海?），不被L-酒石酸抑制。慢淋和惡性淋巴瘤細胞:

（+），被L-酒石酸抑制。第142頁,共156頁，2024年2月25日，星期天多毛細胞白血病慢性淋巴細胞白血病第143頁,共156頁，2024年2月25日，星期天抗酒石酸酸性磷酸酶染色酸性磷酸酶染色多毛細胞白血病第144頁,共156頁，2024年2月25日，星期天多毛細胞白血病抗L-酒石酸ACP陽性第145頁,共156頁，2024年2月25日，星期天

2.鑒別戈謝(Gaucher)細胞和尼曼-匹

克(Niemann-Picks)細胞：

前者（+）后者（－）

3.鑒別T淋巴細胞和B淋巴細胞：

前者（+）后者（－）

第146頁,共156頁，2024年2月25日，星期天Gaucher’scell第147頁,共1