雜環(huán)類藥物分析

關(guān)于雜環(huán)類藥物分析【基本要求】

1、掌握異煙肼、硫酸奎寧、氫溴酸東莨宕堿、鹽酸環(huán)丙沙星、鹽酸氯丙嗪、異丙嗪、地西泮、氯氮卓的鑒別試驗和主要含量測定方法

2、熟悉用薄層色譜法檢查異煙肼中游離肼、氯丙嗪、地西泮中有關(guān)物質(zhì)的檢查

3、熟悉異丙嗪片劑、注射劑的紫外分光光度法

4、了解本類藥物化學結(jié)構(gòu)、化學性質(zhì)與分析方法的關(guān)系

5、了解本類藥物的比色測定法返回第2頁,共145頁，2024年2月25日，星期天第一節(jié)吡啶類藥物一、典型藥物的結(jié)構(gòu)與主要化學性質(zhì)（一）典型藥物的結(jié)構(gòu)

吡啶（pyridine）異煙肼（isoniazid）第3頁,共145頁，2024年2月25日，星期天尼可剎米（nikethamide）第4頁,共145頁，2024年2月25日，星期天硝苯地平（nifedipine)第5頁,共145頁，2024年2月25日，星期天（二）主要化學性質(zhì)

1.弱堿性

吡啶環(huán)上的氮為堿性氮原子，吡啶環(huán)的pKb

值為8.8（水中）。尼可剎米除了吡啶環(huán)上氮外，β位上被酰氨基取代。酰氨基化學性質(zhì)不甚活潑，但遇堿水解后釋放出具有堿性的二乙胺，故可以進行鑒別。

第6頁,共145頁，2024年2月25日，星期天

2．還原性

異煙肼的吡啶環(huán)γ位上被具有還原性酰肼取代，可被氧化劑氧化，可與含羰基的化合物發(fā)生縮合反應。

3．吡啶環(huán)的特性

異煙肼和尼可剎米的吡啶環(huán)α、α’位未取代，而β或γ位被羧基衍生物所取代；硝苯地平的吡啶環(huán)β、β’位被甲酸甲酯所取代，其吡啶環(huán)可發(fā)生開環(huán)反應。

第7頁,共145頁，2024年2月25日，星期天二、鑒別試驗（一）吡啶環(huán)的開環(huán)反應

本反應適用于吡啶環(huán)的α、α’位無取代基的異煙肼和尼可剎米。1.戊烯二醛反應（k?ning反應）尼可剎米+溴化氰H2O戊烯二醛衍生物苯胺黃色芳伯胺＋溴化氰→戊烯二醛→戊烯二醛衍生物芳伯胺吡啶環(huán)Ch.P只用于尼可剎米的鑒別第8頁,共145頁，2024年2月25日，星期天第9頁,共145頁，2024年2月25日，星期天（黃色~黃棕色）第10頁,共145頁，2024年2月25日，星期天2．二硝基氯苯反應（Vongerichten反應）吡啶及其衍生物+2,4-二硝基氯苯至熔融或混合

醇制KOH紫紅色無水條件第11頁,共145頁，2024年2月25日，星期天采用本法鑒別異煙肼、尼可剎米時，需適當處理，即將酰肼氧化成羧基或?qū)Ⅴ０匪鉃轸然筮M行鑒別。如異煙肼鑒別：第12頁,共145頁，2024年2月25日，星期天異煙肼可不經(jīng)處理發(fā)生如下反應：異煙肼+2，4-二硝基氯苯乙醇OH-紫紅色第13頁,共145頁，2024年2月25日，星期天（二）酰肼基團的反應

1．還原反應異煙肼+AgNO3異煙酸銨+N2+Ag銀鏡異煙肼+亞硒酸硒（紅色）第14頁,共145頁，2024年2月25日，星期天2．縮合反應

異煙肼的酰肼基與芳醛縮合形成腙，其有固定的熔點，可用以鑒別。ChP和BP均采用本法鑒別.

黃色結(jié)晶mp為228℃～231℃

第15頁,共145頁，2024年2月25日，星期天

Ar-NH2活性-CH2-+1，2-萘醌-4-磺酸OH-紅色第16頁,共145頁，2024年2月25日，星期天（三）

形成沉淀的反應

具有吡啶環(huán)的結(jié)構(gòu)，可與重金屬鹽類及苦味酸等試劑形成沉淀。

如尼可剎米+CuSO4+硫氰酸銨草綠色尼可剎米異煙肼+HgCl2白色第17頁,共145頁，2024年2月25日，星期天

（四）分解產(chǎn)物的反應使?jié)駶櫟募t色石蕊試紙變藍尼可剎米異煙肼+無水Na2CO3Ca(OH)2吡啶臭尼可剎米+NaOH

二乙胺第18頁,共145頁，2024年2月25日，星期天（五）

紫外吸收光譜特征

本類藥物的分子結(jié)構(gòu)中均含有芳雜環(huán)，在紫外光區(qū)有特征吸收，其最大、最小吸收波長及百分吸收系數(shù)可供鑒別。本類藥物的紫外特征吸收鑒別方法見下表。本類藥物的紫外特征吸收鑒別方法

藥物溶劑λmax（nm）λmin（nm）E1cm1%

異煙肼HCl（0.01mol/L）265—約420水266234378尼可剎米HCl（0.01mol/L）263—285NaOH（0.1mol/L）255—840260—860

硝苯地平無水乙醇333—140第19頁,共145頁，2024年2月25日，星期天

（一）異煙肼中游離肼的檢查

1.TLC法

Ch.P中異煙肼及其注射,采用TLC法中雜質(zhì)對照法。

對照品：硫酸肼0.20mg/ml（相當于游離肼50μg）

薄層板：硅膠（用羧甲基纖維素鈉溶液制備）

展開劑：異丙醇-丙酮（3：2）

顯色劑：乙醇制對-二甲氨基苯甲醛試液

檢測結(jié)果：供試品主斑點前方，不得顯黃色斑點

三、有關(guān)物質(zhì)檢查第20頁,共145頁，2024年2月25日，星期天

BP的檢查方法：

供試品溶液制備:

取異煙肼1.0g，加丙酮-水(1:1)制成10ml.

對照溶液制備:

取硫酸肼50mg，加水50ml使溶解后，加丙酮稀釋至100ml；量取10ml，加供試品溶液0.2ml，加丙酮-水(1:1)稀釋至100ml。

薄層板：硅膠GF254薄層板

展開劑：醋酸乙酯-丙酮－甲醇－水(50:20:20:10)

顯色劑：乙醇制對-二甲氨基苯甲醛試液第21頁,共145頁，2024年2月25日，星期天

檢測結(jié)果：

于254nm紫外光下檢測，供試品中的雜質(zhì)斑點強度應小于對照溶液中異煙肼色譜斑點；再噴以對-二甲氨基苯甲醛溶液，并在日光下檢視，對照溶液中硫酸肼斑點的強度大于供試液中的雜質(zhì)斑點。第22頁,共145頁，2024年2月25日，星期天

2．比濁法

JP（14）采用樣品中加水楊醛的乙醇溶液觀察混濁的方法來控制游離肼的限量。

此法專屬性差，因異煙肼(慢)和硫酸肼均生成腙而析出沉淀。第23頁,共145頁，2024年2月25日，星期天3.差示分光光度法

肼異煙肼+對-二甲氨基苯甲醛黃色縮合物對-二甲氨基苯甲醛連氮(λmax=456nm有最大吸收)形成的縮合產(chǎn)物對-二甲氨基芐叉(于λmax=456nm波長處無吸收)

可在456nm波長處測定并計算二者的差示吸收度ΔA456，同時以對照品比較法計算游離肼含量。第24頁,共145頁，2024年2月25日，星期天

具體測定法：

對照品溶液：硫酸肼CR＝1μg/ml

5ml+丙酮λmax=456nm測A1+對-二甲氨基苯甲醛(ΔA456＝A2－A1)ΔAR5mlλmax=456nm測A2

供試品溶液：異煙肼C＝2mg/ml

游離肼CX=ΔAs/AR×CR

1份+丙酮

λmax=456nm測A1

+對-二甲氨基苯甲醛

(ΔA456＝A2－A1)ΔAs

2份

λmax=456nm測A2第25頁,共145頁，2024年2月25日，星期天(二)尼可剎米中有關(guān)雜質(zhì)檢查

因有關(guān)雜質(zhì)的化學結(jié)構(gòu)不明，故Ch.P和BP均采用TLC法中的高低濃度對比法進行檢查。方法：供試品甲醇溶解成40mg/ml的溶液，再精密吸取適量用甲醇稀釋至0.4mg/ml和0.04mg/ml的溶液作為對照液。取供試品和對照品液點樣分析，顯色后置紫外燈下觀察。供試品如果顯雜質(zhì)斑點，與對照液2比較不得更深，如有一個雜質(zhì)斑點超過2的主斑點，應不深于對照液1。

第26頁,共145頁，2024年2月25日，星期天

(三)硝苯地平中有關(guān)物質(zhì)檢查

硝苯地平遇光分子內(nèi)部發(fā)生光化學歧化作用，降解為4-（2-硝基苯基）-2,6-二甲基吡啶-3,5-二羧酸二甲酯（A）和4-（2-亞硝基苯基）-2,6-二甲基吡啶-3,5-二羧酸二甲酯（B）。其化學結(jié)構(gòu)如下:第27頁,共145頁，2024年2月25日，星期天具體方法

1、供試液Ⅰ和Ⅱ的制備2、有關(guān)雜質(zhì)對照品液Ⅰ和Ⅱ的制備(0.2mg/ml)3、色譜條件與靈敏度調(diào)節(jié)填充劑：十八烷基硅烷鍵合硅膠

流動相：甲醇-水（3：2）；檢測波長：235nm。取對照品溶液Ⅱ20μl注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測靈敏度，使雜質(zhì)A和B組分色譜峰的峰高為滿量程的20%；雜質(zhì)A和B組分之間，雜質(zhì)B與硝苯地平之間的分離度均符合規(guī)定。1mg/ml0.2mg/ml第28頁,共145頁，2024年2月25日，星期天4.有關(guān)物質(zhì)檢測

取供試液Ⅰ和對照液Ⅱ各20μl，分別進樣記錄色譜圖至主成分峰保留時間的2倍。供試液Ⅰ如出現(xiàn)與對照液Ⅱ中雜質(zhì)A和B相對應的峰，其峰面積不得大于對照液Ⅱ中雜質(zhì)A和B的峰面積；如出現(xiàn)除雜質(zhì)A和B以外的其他雜質(zhì)峰，其峰面積不得大于對照液Ⅱ中硝苯地平的峰面積；各雜質(zhì)總量不得大于0.5%。供試液Ⅰ中小于對照液Ⅱ中硝苯地平峰面積的10%以下的雜質(zhì)峰忽略不計。

返回第29頁,共145頁，2024年2月25日，星期天第30頁,共145頁，2024年2月25日，星期天

一、基本結(jié)構(gòu)與化學性質(zhì)（一）典型藥物的結(jié)構(gòu)硫酸奎寧硫酸奎尼?。╭uininesulfate）(quinidinesulfate)第二節(jié)

喹啉類藥物第31頁,共145頁，2024年2月25日，星期天

鹽酸環(huán)丙沙星(ciprofloxacinhydrochloride)第32頁,共145頁，2024年2月25日，星期天（二）主要化學性質(zhì)

1.堿性

喹啉環(huán)上的氮原子具有堿性，與強酸形成穩(wěn)定的鹽。

環(huán)丙沙星與鹽酸成鹽，奎寧和奎尼丁可與二元酸成鹽，結(jié)構(gòu)中喹核堿含脂環(huán)氮，堿性強，可與硫酸成鹽；而喹啉環(huán)系芳環(huán)氮，堿性較弱，不與硫酸成鹽?？鼘巔Kb1為5.07，pKb2為9.7，飽和溶液的pH值為8.8?？岫Kb1為5.4，pKb2為10。

第33頁,共145頁，2024年2月25日，星期天2.旋光性硫酸奎寧為左旋體，其比旋度為-237o至-244o；硫酸奎尼丁為右旋體，其比旋度為+275o至+290o；而鹽酸環(huán)丙沙星無旋光性。3.熒光特性硫酸奎寧和硫酸奎尼丁在稀硫酸溶液中均顯藍色熒光，而鹽酸環(huán)丙沙星則無熒光。第34頁,共145頁，2024年2月25日，星期天

（一）綠奎寧反應（Thalleioquin）

綠奎寧反應是奎寧和奎尼丁的特殊鑒別反應。其反應如下：Ch.P收載方法二、鑒別試驗綠/翠綠色產(chǎn)物二醌亞胺鹽第35頁,共145頁，2024年2月25日，星期天（二）光譜特征1.UVCh.P采用本法鑒別鹽酸環(huán)丙沙星，其鹽酸溶液(8μg/ml)在277和315nm處有最大吸收。2.熒光光譜特征硫酸奎寧和硫酸奎尼丁，在稀H2SO4中均顯藍色熒光，鹽酸環(huán)丙沙星則無熒光，可用于本類藥物的鑒別。3.IRCh.P中硫酸奎寧和鹽酸環(huán)丙沙星均采用紅外光譜的方法進行鑒別，而硫酸奎尼丁未采用此法。第36頁,共145頁，2024年2月25日，星期天（三）無機酸鹽

利用硫酸奎寧和硫酸奎尼丁顯硫酸鹽的反應；鹽酸環(huán)丙沙星顯氯化物的反應，可用無機鹽的鑒別方法進行鑒別。第37頁,共145頁，2024年2月25日，星期天

（一）硫酸奎寧中特殊雜質(zhì)檢查

1.酸度主要控制藥物中酸性雜質(zhì)。用pH計測定,pH為5.7～6.6。

2.氯仿-乙醇中不溶物主要控制藥物中不溶性雜質(zhì)或無機鹽類.檢查方法：取本品2.0g，加三氯甲烷-無水乙醇（2:1)混合溶液15ml，在50℃加熱10min，用稱定重量的垂熔坩堝過濾，濾渣用混合溶液洗滌5次，每次10min，在105℃干燥至恒重，要求遺留的殘渣≤2.0mg。三、特殊雜質(zhì)檢查第38頁,共145頁，2024年2月25日，星期天3.其他金雞納堿主要控制硫酸奎寧中其他生物堿TLC法：因沒有合適的對照品，因此采用薄層色譜中的主成分自身對照法進行檢查。

HPLC法（BP）：供試品溶液的制備、對照溶液a、b、c、d和內(nèi)標溶液（硫脲）的制備第39頁,共145頁，2024年2月25日，星期天色譜條件：ODS、乙腈-磷酸鹽緩沖液為流動相、流速1.5ml/min、檢測波長：250和316nm色譜系統(tǒng)適用性實驗：測定法：二氫奎尼丁≤15％、保留時間小于奎尼丁的有關(guān)物質(zhì)≤5％，其他物質(zhì)總和≤2.5％。色譜峰峰面積歸一化法第40頁,共145頁，2024年2月25日，星期天（二）氧氟沙星中特殊雜質(zhì)的檢查1、溶液的澄清度與顏色主要控制本品中不溶性物質(zhì)和有色雜質(zhì)。澄清度檢查：與2號濁度標準液比濁、黃色或黃綠色4號標準比色液比色。顏色檢查：10mg/ml的堿溶液，在450nm處的A≤0.25.3.有關(guān)物質(zhì)主要控制本品中可能引入結(jié)構(gòu)不清的有關(guān)雜質(zhì)，

Ch.P和BP均采用HPLC法中歸一化法進行檢查，其檢查方法如下：第41頁,共145頁，2024年2月25日，星期天色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充柱流動相：醋酸銨高氯酸混合溶液-乙腈(85:15)用磷酸調(diào)節(jié)pH值2.2.檢測器：UV檢測波長為294nm；按氧氟沙星峰計算n≥5000;氧氟沙星峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度R＞1.5.測定方法：取本品適量，加0.1mol/l的鹽酸制成每1ml中含2.4μg的對照溶液；配制1mg/ml的溶液，置于紫外燈下照射4h；各取溶液10μl注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測靈敏度和記錄儀衰減，使主成分的峰高為記錄儀滿量程的20％～25%，記錄時間應為主成分峰保留時間的2.5倍。按面積歸一化法計算，單個雜質(zhì)峰面積不得大于對照溶液主峰面積的0.2％，雜質(zhì)總量不得大于主峰面積的2.5倍。返回第42頁,共145頁，2024年2月25日，星期天第43頁,共145頁，2024年2月25日，星期天

一、基本結(jié)構(gòu)與化學性質(zhì)（一）典型藥物的結(jié)構(gòu)

硫酸阿托品氫溴酸東莨菪堿（atropinesulfate）(copolaminehydrobromide）第三節(jié)托烷類藥物第44頁,共145頁，2024年2月25日，星期天（二）主要化學性質(zhì)1。水解性本類藥物分子結(jié)構(gòu)中具有酯的結(jié)構(gòu)，易水解。以阿托品為例，水解生成莨菪醇(Ⅰ)和莨菪酸(Ⅱ)。2.堿性

阿托品和東莨菪堿的結(jié)構(gòu)中，五元脂環(huán)上含有叔胺氮原子,具有較強的堿性,易與酸成鹽。如阿托品的pKb1為4.35。第45頁,共145頁，2024年2月25日，星期天3.旋光性

氫溴酸東莨菪堿結(jié)構(gòu)中含有不對稱碳原子，呈左旋體，比旋度為-24ο至-27ο，而阿托品結(jié)構(gòu)中雖然也含有不對稱碳原子，但因外消旋化而為消旋體，無旋光性。利用此性質(zhì)可區(qū)別阿托品與東莨菪堿。

第46頁,共145頁，2024年2月25日，星期天（一）托烷生物堿一般鑒別試驗二、鑒別試驗生物堿水解莨菪酸發(fā)煙硝酸

三硝基衍生物KOH（C2H5OH）固體KOH有色的醌型產(chǎn)物Vitaili反應第47頁,共145頁，2024年2月25日，星期天（二）氧化反應

本類藥物水解后，生成的莨菪酸，可與硫酸和重鉻酸鉀在加熱的條件下，發(fā)生氧化反應，生成苯甲醛，而逸出類似苦杏仁的臭味。其反應式為：第48頁,共145頁，2024年2月25日，星期天(三)沉淀反應

本類藥物具有堿性，可與生物堿沉淀劑生成沉淀。如：阿托品+氯化汞醇試液黃色沉淀東莨菪堿+氯化汞醇試液白色沉淀（四）硫酸鹽與溴化物反應第49頁,共145頁，2024年2月25日，星期天

1.酸度

東莨菪堿堿性很弱，對石蕊試紙幾乎不顯堿性反應。氫溴酸東莨菪堿為強酸弱堿形成的鹽，通過其5%水溶液的pH值為4.0～5.5，來控制本品中的酸性雜質(zhì)。

2.其他生物堿三、氫溴酸東莨菪中特殊雜質(zhì)檢查本品水溶液+氨試液不混濁合格混濁存在其他生物堿+KOH試液混濁（東莨菪堿）第50頁,共145頁，2024年2月25日，星期天Ch.P：本品兩份，一份加氨試液、一份加KOH試液，應產(chǎn)生瞬間消失的白色渾濁。BP：TLC法檢查－配制20mg/ml、0.2mg/ml、0.1mg/ml的供試品溶液和對照溶液a和b，點樣后碘化鉍鉀顯色。要求：供試品溶液中除主斑點外的雜質(zhì)斑點與對照液a的主斑點比均不得更深，比對照液b主斑點顏色更深的雜質(zhì)斑點不得多余1個。第51頁,共145頁，2024年2月25日，星期天

3.易氧化物

主要是檢查本品在生產(chǎn)中可能引入的阿撲阿托品及及其它含有雙鍵的有機物質(zhì)，可使KMnO4溶液褪色。返回Ch.P：高錳酸鉀的顏色消失BP：控制在254nm處的百分吸收系數(shù)，E≤3.6（0.5％）第52頁,共145頁，2024年2月25日，星期天第四節(jié)吩噻嗪類藥物一、基本結(jié)構(gòu)與化學性質(zhì)（一）結(jié)構(gòu)特點與典型藥物苯并噻嗪硫氮雜蒽第53頁,共145頁，2024年2月25日，星期天第54頁,共145頁，2024年2月25日，星期天第55頁,共145頁，2024年2月25日，星期天奮乃靜第56頁,共145頁，2024年2月25日，星期天癸氟奮乃靜第57頁,共145頁，2024年2月25日，星期天鹽酸氟奮乃靜第58頁,共145頁，2024年2月25日，星期天鹽酸三氟拉嗪第59頁,共145頁，2024年2月25日，星期天（二）主要化學性質(zhì)1.紫外和紅外吸收光譜特征硫氮雜蒽母核為共軛三環(huán)л系統(tǒng)

三個最大吸收峰別在：205nm、254nm、300nm由于2位、10位上的取代基不同，可引起最大吸收峰的位移。

硫氮雜蒽母核的硫為二價，易氧化為砜和亞砜，其紫外吸收光譜有明顯不同，它們具有四個峰值。另外，取代基R和R’的不同，則可產(chǎn)生不同的紅外光譜第60頁,共145頁，2024年2月25日，星期天第61頁,共145頁，2024年2月25日，星期天2.易氧化呈色二價硫易氧化，遇不同氧化劑如硫酸、硝酸、三氯化鐵試液及過氧化氫等，隨著取代基的不同，而呈不同的顏色。

3.與金屬離子絡(luò)合呈色

本類藥物中未被氧化的硫，可與鈀離子形成配位化合物，其氧化產(chǎn)物則無此反應。此性質(zhì)可用于鑒別和含量測定，并具有專屬性，可消除氧化產(chǎn)物的干擾。第62頁,共145頁，2024年2月25日，星期天（一）紫外特征吸收和紅外吸收光譜

本類藥物可用UV和IR鑒別，Ch.P中UV鑒別實例如下：

藥物名稱溶劑濃度（μg/ml）λmax（nm）AE1%1cm鹽酸氯丙嗪鹽酸（9→1000）52540.46915306——鹽酸異丙嗪鹽酸（0.01mol/L）6249—883~937奮乃靜無水乙醇72580.65—癸氟奮乃靜乙醇10260——鹽酸氟奮乃靜鹽酸（9→1000）10255—553~593鹽酸三氟拉嗪鹽酸（1→20）10256—630鹽酸硫利達嗪乙醇8264與315——二、鑒別試驗第63頁,共145頁，2024年2月25日，星期天第64頁,共145頁，2024年2月25日，星期天第65頁,共145頁，2024年2月25日，星期天

（二）顯色反應

1.與氧化劑的顯色反應

藥物名稱硫酸硝酸過氧化氫

鹽酸氯丙嗪顯紅色,漸變淡黃色—鹽酸異丙嗪顯櫻桃紅色,放置生成紅色沉淀,加熱即溶解,后顏色漸變深溶液由紅色轉(zhuǎn)變?yōu)槌赛S色奮乃靜——顯深紅色;放置后紅色漸褪去鹽酸氟奮乃靜顯淡紅色,溫熱——后變成紅褐色鹽酸三氟拉嗪—生成微帶紅色的白色沉淀;放—置后,紅色變深,加熱后變黃色

鹽酸硫利達嗪顯藍色—

—

第66頁,共145頁，2024年2月25日，星期天

2.與鈀離子絡(luò)合顯色反應

利用分子結(jié)構(gòu)中未被氧化的硫與金屬鈀離子絡(luò)合形成有色絡(luò)合物，如與癸氟奮乃靜形成紅色絡(luò)合物。第67頁,共145頁，2024年2月25日，星期天第68頁,共145頁，2024年2月25日，星期天（三）分解產(chǎn)物的反應

癸氟奮乃靜碳酸鈉及碳酸鉀F-+酸性茜素鋯試液[ZrF6]2-配位離子，茜素游離使溶液由紅色變?yōu)辄S色。600℃熾灼第69頁,共145頁，2024年2月25日，星期天

(一)鹽酸異丙嗪中特殊雜質(zhì)檢查

主要有：2-二甲氨基-1-丙醇；N,N,β-三甲基-10H-吩噻嗪-10-乙胺異構(gòu)體和結(jié)構(gòu)不清的分解產(chǎn)物

。因此采用TLC法中的

高低濃度對比法控制上述這些雜質(zhì)的限量。(二)鹽酸硫利達嗪中有關(guān)物質(zhì)檢查

本品遇光不穩(wěn)定，在生產(chǎn)和貯藏過程中易引入有關(guān)物質(zhì)，因其結(jié)構(gòu)不清，因此也采用TLC法中的高低濃度對比法控制雜質(zhì)的限量。三、特殊雜質(zhì)檢查返回第70頁,共145頁，2024年2月25日，星期天第五節(jié)苯并二氮雜卓類藥物一、結(jié)構(gòu)特征與典型藥物NNClH3CO地西泮苯環(huán)與含氮七元雜環(huán)第71頁,共145頁，2024年2月25日，星期天阿普唑侖第72頁,共145頁，2024年2月25日，星期天奧沙西泮第73頁,共145頁，2024年2月25日，星期天氯氮卓NNNCH3OClH第74頁,共145頁，2024年2月25日，星期天主要化學性質(zhì)1、堿性母核結(jié)構(gòu)上的氮原子，顯示弱堿性，并在不同的pH溶液中，可以形成不同的離子化狀態(tài)，包括質(zhì)子化分子、中性分子和去質(zhì)子化分子，從而影響其紫外吸收。2、水解性在強酸性溶液中可以發(fā)生水解成二苯甲酮衍生物第75頁,共145頁，2024年2月25日，星期天

(一)化學鑒別試驗

1，沉淀反應

氯氮卓

橙紅色沉淀

阿普唑侖鹽酸氟西泮

＋KBiI4

也生成橙紅色沉淀氯硝西泮放置后，沉淀顏色變深，

因此可以相互區(qū)別。二、鑒別試驗阿普唑侖+硅鎢酸白色沉淀，藥典中也用于鑒別。第76頁,共145頁，2024年2月25日，星期天2.水解后呈芳伯胺反應

氯氮卓和奧沙西泮，其反應如下：第77頁,共145頁，2024年2月25日，星期天3.硫酸-熒光反應

本類藥物溶于硫酸后，在紫外光（365nm）下，顯不同顏色的熒光。例如：

地西泮

黃綠色黃色氯氮卓黃色紫色艾司唑侖+H2SO4亮綠色+稀硫酸天藍色硝西泮淡藍色藍綠色奧沙西泮

淡黃綠色第78頁,共145頁，2024年2月25日，星期天4.分解產(chǎn)物的反應

本類藥物多為有機氯化合物，用氧瓶燃燒法破壞，顯氯化物反應。Ch.P用于地西泮和三唑侖藥物的鑒別。

5.氯化銅焰色反應

分子結(jié)構(gòu)中含有氯元素的藥物，在銅網(wǎng)上燃燒發(fā)出CuCl2綠色火焰。此反應藥典未用于本類藥物鑒別。第79頁,共145頁，2024年2月25日，星期天

（二）紫外特征吸收和紅外吸收光譜

藥物名稱溶劑濃度（μg/ml）λmax（nm）A

地西泮0.5%硫酸甲醇溶液5242約0.51282

約0.23366氯氮卓鹽酸溶液(9→1000)7245,308阿普唑侖鹽酸溶液(9→1000)12264鹽酸氟西泮硫酸甲醇(1→36)10239±2,284±2比值1.95～2.50362±2氯硝西泮0.5%硫酸甲醇溶液10239±2,307±2奧沙西泮乙醇10229,315±2(較弱)

紅外吸收光譜:已用于地西泮、阿普唑侖、艾司唑侖、鹽酸氟西泮、氯硝西泮和奧沙西泮的鑒別。

第80頁,共145頁，2024年2月25日，星期天（三）TLC法

1.常用的五種苯并二氮雜卓類藥物的TLC法

按常規(guī)法點樣10μl于硅膠G薄層板上，以苯-丙酮（3：2）為展開劑,飽和15min，用上行法展開15cm，揮發(fā)溶劑，用稀硫酸噴霧，于105℃干燥30min，置紫外燈下檢視熒光斑點。BP:氯硝西泮＋氯氮卓－TLC法USP:地西泮＋鹽酸氟西泮－TLC法；氯氮卓－HPLC法Ch.P:地西泮注射液－HPLC法第81頁,共145頁，2024年2月25日，星期天2.酸水解產(chǎn)物的TLC法

利用苯并二氮雜卓類藥物經(jīng)酸水解產(chǎn)生的二苯甲酮衍生物進行鑒別。由于不同的苯并二氮雜卓類藥物水解后可能會獲得相同的二苯甲酮衍生物，因此本法的專屬性較差。

第82頁,共145頁，2024年2月25日，星期天

（一）有關(guān)物質(zhì)檢查－中間體、副產(chǎn)物、分解產(chǎn)物

Ch.P收載的八種本類藥物，除氯氮卓外，其余均作此項檢查。其檢查方法除了三唑侖采用GC法外，其余均用TLC法進行檢查。USP(24)和BP(2000)中對氯氮卓都規(guī)定了此項檢查，而且均用TLC法進行檢查。三、特殊雜質(zhì)檢查第83頁,共145頁，2024年2月25日，星期天

1.地西泮中有關(guān)物質(zhì)的檢查

地西泮在合成過程中因其副反應，可能引入N-去甲基苯甲二氮卓及化學結(jié)構(gòu)不清的有關(guān)物質(zhì)，可采用TLC法中的高低濃度對比法進行檢查。

2.氯氮卓中有關(guān)物質(zhì)的檢查

USP(24)用TLC法檢查氯氮卓中的有關(guān)物質(zhì)，并規(guī)定其分解產(chǎn)物2-氨基-5-氯-2-苯甲酮含量不得過0.01%；中間體7-氯-1，3-二氫-5-苯基-2H-1，4-苯并二氮雜卓-2-酮-4-氧化物含量不得過0.1%。第84頁,共145頁，2024年2月25日，星期天3.氯氮卓中有關(guān)物質(zhì)的反相高效液相色譜法

色譜條件：色譜柱為150mm×4.6mm（i.d.）Nucleosil10C18柱；流動相為甲醇-水（50:50),流速1.0ml/min，檢測波長：254nm。

檢測結(jié)果：間硝西泮的tR為3.1min、氯氮卓的tR為3.6min，有關(guān)物質(zhì)A的保留時間約為氯氮卓0.7，有關(guān)物質(zhì)B約為2.3，有關(guān)物質(zhì)C約為3.9。溶液的配制：供試品液0.2mg/ml、對照液(a)1μg/ml、硝西泮a(b)5μg/ml,(2-氨基-5-氯苯基）苯甲酮對照液（c)0.4μg/ml第85頁,共145頁，2024年2月25日，星期天要求：1、記錄的色譜時間為主峰保留時間的6倍2、有關(guān)物質(zhì)A和B的峰面積不得大于對照液a主峰面積的0.2％3、有關(guān)物質(zhì)C的峰面積不得大于對照液c主峰面積的0.2％4、其他雜質(zhì)峰的峰面積年均不得大于對照液a主峰面積的0.5倍5、各雜質(zhì)峰的面積和不得大于對照液a峰面積的2.5倍第86頁,共145頁，2024年2月25日，星期天第87頁,共145頁，2024年2月25日，星期天(二)降解產(chǎn)物的檢查

地西泮注射液列入此項檢查，因本品在貯藏過程中有可能分解成2-甲氨基-5-氯-二苯甲酮等雜質(zhì)。采用HPLC法進行檢查。返回第88頁,共145頁，2024年2月25日，星期天第六節(jié)含量測定一、非水溶液滴定法主要用于測定有機堿及其鹽，也可以測定有機弱酸

1、酸性溶劑：有機弱堿在酸性溶劑中可顯著地增強相對堿度2、堿性溶劑：有機弱酸在堿性溶劑中可顯著地增強相對酸度

3、兩性溶劑：具有酸、堿性能，如methanol4、惰性溶劑：沒有酸、堿性的溶劑，丙酮、氯仿第89頁,共145頁，2024年2月25日，星期天一、非水溶液滴定法(一)基本原理當HA酸性較強時，反應不能定量完成，必須除去或降低HA的酸性，使反應順利地完成。BH+A-+HClO4BH+ClO4+HA游離堿類鹽被置換出的弱酸因此，要根據(jù)不同情況采用相應測定條件。第90頁,共145頁，2024年2月25日，星期天(二)一般方法供試品+冰醋酸10ml~30ml若供試品為氫鹵酸鹽再加5%醋酸汞的冰醋酸液3ml~5ml結(jié)果高氯酸滴定液滴定以空白試驗校正第91頁,共145頁，2024年2月25日，星期天

(三)問題討論1.適用范圍

主要用于pKb>8的有機堿鹽的含量測定。對堿性較弱的雜環(huán)類藥物，只要選擇合適的溶劑、滴定劑和終點指示的方法，可使pKb為8～13的弱堿性藥物采用本法滴定。

一般來說：pKb為8～10時，宜選冰醋酸作為溶劑；

pKb為10～12時，宜選冰醋酸與醋酐的混合溶液；pKb>12時，應用醋酐作為溶劑。

另外，在冰醋酸中加入不同量的甲酸，也能使滴定突躍顯著增大，使一些堿性極弱的雜環(huán)類藥物獲得滿意測定結(jié)果。

第92頁,共145頁，2024年2月25日，星期天

2.酸根的影響：無機酸類，在醋酸介質(zhì)中的酸性以下列排序遞減：

高氯酸＞氫溴酸＞硫酸＞鹽酸＞硝酸

消除HX干擾的方法：加Hg(Ac)2

量不足終點不明顯，結(jié)果偏低。

2B·HX+Hg(Ac)2→2B·HAc+HgX2

過量(1～3倍)不影響測定結(jié)果第93頁,共145頁，2024年2月25日，星期天3.滴定劑的穩(wěn)定性非水溶液滴定法所用的溶劑為醋酸，具有揮發(fā)性，膨脹系數(shù)較大，溫度和貯存條件都影響滴定劑的濃度。若滴定樣品與標定HClO4溶液時的溫度不一致，溫差未超過10℃時，應將高氯酸滴定液的濃度用下列公式加以校正：

4.終點指示方法常用電位法和指示劑法。Ch.P收載的本類藥物大多采用結(jié)晶紫指示劑指示終點，少數(shù)采用電位法指示終點。另外，橙黃Ⅳ、萘酚苯甲醇、喹哪啶紅、孔雀綠第94頁,共145頁，2024年2月25日，星期天(四)應用實例

1.游離弱堿性藥物測定

異煙肼、尼可剎米、地西泮及氯氮卓等。基于這些藥物分子結(jié)構(gòu)中氮原子的弱堿性，可用非水溶液滴定法直接測定其含量。由于這些藥物的堿性強弱不同，測定時所采用溶劑、指示劑及其指示終點的方法也不盡相同。

藥物名稱取樣量(g)溶劑指示劑終點顏色

尼可剎米0.15冰醋酸10ml結(jié)晶紫藍綠色地西泮0.2冰醋酸、酸酐10ml結(jié)晶紫綠色氯氮卓0.3冰醋酸10ml結(jié)晶紫藍色第95頁,共145頁，2024年2月25日，星期天

2.氫鹵酸鹽類藥物測定

當這些藥物溶于冰醋酸時，由于氫鹵酸在冰醋酸中酸性較強，對測定有干擾，必須先加入過量的醋酸汞冰醋酸溶液，使其形成難以電離的鹵化汞，而氫鹵酸鹽藥物，則轉(zhuǎn)變成可測定的醋酸鹽。然后再用高氯酸滴定液滴定，并可獲得滿意的結(jié)果。應用示例如下：

藥物名稱取樣量(g)溶劑加入醋酸汞試液(ml)指示劑終點顏色鹽酸氯丙嗪0.2醋酐10ml5橙黃Ⅳ玫瑰紅色鹽酸異丙嗪0.3冰醋酸10ml4結(jié)晶紫藍色鹽酸氟奮乃靜0.3冰醋酸20ml5結(jié)晶紫藍綠色鹽酸環(huán)丙沙星0.2冰醋酸25ml5橙黃Ⅳ粉紅色氫溴酸東莨菪堿0.3冰醋酸20ml5結(jié)晶紫純藍色鹽酸硫利達嗪0.3丙酮100ml5電位滴定法

第96頁,共145頁，2024年2月25日，星期天3.硫酸鹽類藥物測定

硫酸是二元酸，在水溶液中能完成二級解離，生成SO42-，但在非水介質(zhì)中，只顯示一元酸解離為HSO4-，即只供給一個H+，所以硫酸鹽類藥物在冰醋酸中，只能滴定至硫酸氫鹽，因此可以用高氯酸滴定液直接滴定。第97頁,共145頁，2024年2月25日，星期天（1）硫酸阿托品測定：阿托品為堿性較強的

一元堿藥物，因而硫酸阿托品的化學結(jié)構(gòu)式可以簡寫為(BH+)2·SO42-，用高氯酸直接滴定時的反應式為：(BH+)2·SO42-+HClO4→(BH+)·ClO4-+(BH+)·HSO4-可根據(jù)1mol的硫酸阿托品消耗1mol高氯酸的關(guān)系計算其含量。第98頁,共145頁，2024年2月25日，星期天（2）硫酸奎寧測定：奎寧為二元堿，其中喹核堿的堿性較強，可與硫酸生成鹽；而喹啉環(huán)的堿性極弱，不能與硫酸成鹽，而保持游離狀態(tài)。當用高氯酸直接滴定硫酸奎寧時，1mol的硫酸奎寧消耗3mol的高氯酸。其反應式如下：(C20H24N2·H+)2SO4+3HClO4→(C20H24N2·2H+)·2ClO4-

+(C20H24N2·2H+)·HSO4-·ClO4-

Ch.P和USP(24)都采用此法測定硫酸奎寧和硫酸奎尼丁的含量。第99頁,共145頁，2024年2月25日，星期天(3)硫酸奎寧片的測定：

硫酸奎寧片劑堿化處理，生成奎寧游離堿，然后再用高氯酸標準溶液直接滴定。此時1摩爾的硫酸奎寧可消耗4摩爾的高氯酸，因此片劑分析的滴定度與原料藥分析的滴定度不同。

第100頁,共145頁，2024年2月25日，星期天4.硝酸鹽的測定

硝酸在冰醋酸介質(zhì)中酸性不強，滴定反應可以進行完全。但是硝酸具有氧化性可以破壞指示劑使其變色，使指示劑無法指示終點。因此采用非水溶液滴定法測定硝酸鹽時，一般不用指示劑法而用電位法指示終點。第101頁,共145頁，2024年2月25日，星期天5.磷酸鹽與有機酸鹽

磷酸與有機酸在冰醋酸介質(zhì)中酸性極弱，不影響滴定反應的定量完成，可以按常規(guī)方法直接滴定。第102頁,共145頁，2024年2月25日，星期天（一）硝苯地平的測定

基本原理硝苯地平的測定原理，可用下列反應式表示：

終點時:微過量的Ce4+將指示劑中的Fe2+氧化成Fe3+，使橙紅色配合物離子呈淡藍色或無色，以指示終點的到達。二、鈰量法第103頁,共145頁，2024年2月25日，星期天（二）吩噻嗪類藥物的測定藥物Ce(SO4),-e紅色Ce(SO4),-2e紅色消退自身指示終點或電位法、永停法指示終點第104頁,共145頁，2024年2月25日，星期天溴酸鉀法－異煙肼類藥物的含測定利用在酸性溶液中，異煙肼具有較強的還原性，可以與溴酸鉀發(fā)生化學反應，用甲基橙指示劑，粉紅色消失為終點，反應的mol比為3：2第105頁,共145頁，2024年2月25日，星期天(一）酸性染料比色法

1.基本原理三、比色法

是利用堿性藥物在一定的pH條件下與某些酸性染料結(jié)合顯色，進而用分光光度法測定藥物含量的方法第106頁,共145頁，2024年2月25日，星期天

2.影響因素

(1)水相最佳pH值的選擇：本法中水相的pH應使有機堿性藥物均成陽離子(BH+)，而酸性染料應電離足夠的陰離子(In-),陰陽離子才能定量生成離子對，并完全溶于有機溶劑中，而過量的染料完全保留在水相中，才能保證定量的測定。

(2)酸性染料及其濃度：常用酸性染料有溴麝香草酚藍、甲基橙、溴甲酚綠等。酸性染料濃度，對測定影響不大，有足夠量即可。增加染料濃度可提高靈敏度，如果太高，則容易乳化

根據(jù)有機藥物和酸性染料的pK值及兩相中的分配系數(shù)來確定第107頁,共145頁，2024年2月25日，星期天(3)有機溶劑的選擇

有機堿藥物應對離子對提取率高，不與水混溶，或能與離子對形成氫鍵的有機溶劑。常用的有機溶劑有氯仿、二氯甲烷、二氯乙烯、苯、甲苯、四氯化碳等。(4)水分的影響：嚴防水分混入有機溶劑中，水相中過量有色酸性染料，而影響測定結(jié)果；水分的混入使氯仿混濁，而影響比色測定。一般加入脫水劑，或濾紙過濾的方法，除去混入的水分。第108頁,共145頁，2024年2月25日，星期天3.應用示例

Ch.P中硫酸阿托品片、氫溴酸東莨菪堿片和氫溴酸山莨菪堿片等，采用本法測定含量測定。

紫外吸收弱、標示量低第109頁,共145頁，2024年2月25日，星期天1、配制對照品溶液－氫溴酸東莨菪堿2、供試品溶液－樣品→研細→稱細粉→溶解過濾3、測定－精密取對照品和樣品加入分液漏斗，加入氯仿和溴甲酚綠，振搖后分層，分取氯仿層進行UV法，在420nm處測定第110頁,共145頁，2024年2月25日，星期天（一）直接分光光度法

供試品不需提取分離，溶于適當?shù)娜軇┲屑纯蛇M行含量測定。

1.奧沙西泮原料的測定在229nm，采用標準對照法測定。

2.鹽酸異丙嗪片的測定在249nm，采用E1cm1%＝910測定。

3.鹽酸異丙嗪注射液的測定

測定波長的選擇：注射液處方加VC作抗氧劑，可還原異丙嗪紅色氧化產(chǎn)物，從而防止異丙嗪氧化變色。VC在鹽酸異丙嗪最大吸收波長249nm處有吸收，干擾注測定。因此選用299nm波長測定鹽酸異丙嗪注射液的含量時，維生素C在此波長處則不產(chǎn)生干擾,但E1cm1%＝108。四、紫外分光光度法第111頁,共145頁，2024年2月25日，星期天(二)萃取后分光光度法鹽酸氯丙嗪注射液鹽酸氯丙嗪氨水堿化氯丙嗪乙醚提取乙醚層鹽酸提取鹽酸氯丙嗪

max254±1nm處測定A，E1cm1%＝915第112頁,共145頁，2024年2月25日，星期天（三）萃取-雙波長分光光度法

本法是USP（24）收載的方法，用于鹽酸氯丙嗪注射液的含量測定，主要用來校正樣品中氧化物對測定的干擾。測定原理利用氯丙嗪的最λmax為254nm，其氧化物在此波長也有吸收，同時在277nm氧化物也有吸收，且其A254=A277.而氯丙嗪在此波長無吸收。因此，可由兩波長處測得△A計算氯丙嗪含量。第113頁,共145頁，2024年2月25日，星期天第114頁,共145頁，2024年2月25日，星期天（四）二階導數(shù)分光光度法鹽酸氯丙嗪注射液抗氧劑維生素C的二階導數(shù)光譜近似為接近基線的一條直線，不干擾鹽酸氯丙嗪的測定。因此鹽酸氯丙嗪可從其二階導數(shù)光譜量取峰266nm～谷254nm距離，標準曲線法定量

其測定方法如下：

第115頁,共145頁，2024年2月25日，星期天1.光譜繪制

測繪條件：波長范圍為200nm～320nm；狹縫為12nm；紙速為120mm/min。2.線性關(guān)系精取鹽酸氯丙嗪對照液(50μg/ml)制得標準系列，以HCI(0.1mol/L)為空白，按光譜繪制項下分別測定。用尺量取不同濃度系列溶液光譜266nm-谷254nm距離（DL），并以峰谷距離為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。3.供試品測定精密量取鹽酸氯丙嗪注射液2.0ml，按光譜繪制項下的方法，測得二階導數(shù)光譜，量取光譜峰-谷(266nm～254nm)距離，從標準曲線上求出濃度，計算百分含量。第116頁,共145頁，2024年2月25日，星期天第117頁,共145頁，2024年2月25日，星期天五、氣相色譜法*

對熱穩(wěn)定可氣化的有機堿，先堿化得游離堿后測定（一）硫酸阿托品片的含量測定

USP(24)采用的方法。以后馬托品作為內(nèi)標,采用標準對照法。

測定方法

(1)內(nèi)標溶液的制備：(2)供試品溶液與對照品溶液的制備：(3)色譜系統(tǒng)：色譜柱為1.8m×2mm的玻璃柱；擔體為與碳酸鈉混合于900℃熔融后，經(jīng)酸和堿處理的硅烷化藻土；固定相為3%的OV-17（即50%甲基，50%苯基的聚硅氧烷）；載氣為氮氣，流速為25ml/min；檢測器為氫火焰離子化檢測器。第118頁,共145頁，2024年2月25日，星期天

(4)系統(tǒng)適用性試驗：取對照品溶液1μl，進樣6次，所得的對照品和內(nèi)標峰面積之比的RSD不大于2.0%；對照品峰和內(nèi)標峰的分辨率Rs≥4.0；拖尾因子T≤2.0。[T(拖尾因子)=W0.05h/2d1，d1為峰頂點至峰前沿之間的距離]

(5)測定方法：取供試液和對照液各進樣1μl，記錄各峰面積，用下式計算所取片粉中硫酸阿托品[(C17H23NO3)2·H2SO4·H2O]的重(mg)第119頁,共145頁，2024年2月25日，星期天（二）人血漿中硝苯地平的氣相色譜法測定及藥代動力學研究血漿樣品處理：血漿→加入內(nèi)標→加入乙醚：環(huán)已烷（1：2）＋NaOH→窩旋提取→離心→分取有機相→吹干→丙酮溶解→GC分析GC-ECD測定：DB-1（25×0.32×0.5），氮氣為載氣，分流比50：1，氣化室溫度：250℃，檢測器溫度：300℃，程序升溫：第120頁,共145頁，2024年2月25日，星期天色譜系統(tǒng)適用性：硝苯地平tR=9.4min，n≥39000,內(nèi)標tR=12min，n≥30000，內(nèi)源性物質(zhì)不干擾測定（專屬性），LOD=0.5ng/ml，線性范圍：1.0～100ng/ml，高、中、低的絕對回收率≥75％第121頁,共145頁，2024年2月25日，星期天第122頁,共145頁，2024年2月25日，星期天

(一)反相高效液相色譜法

1.地西泮注射液的反相HPLC法

地西泮注射液曾用萃取后分光光度法測定含量，因萃取不完全，及有關(guān)物質(zhì)和分解產(chǎn)物等對測定有干擾，故中國藥典自1995版改用HPLC法。此法操作簡便，可消除干擾。注射液中地西泮的平均回收率為99.4%，相對標準偏差為0.8%。

(1)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：ODSC18；流動相為甲醇-水(70:30)；檢測波長為254nm。n＞1500，R＞1.5。

(2)內(nèi)標溶液的制備：取萘50mg，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。六、高效液相色譜法第123頁,共145頁，2024年2月25日，星期天

(3)測定方法：取地西泮對照品約25mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取該溶液與內(nèi)標溶液各5ml，置25ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。吸取5μl～10μl進樣，記錄色譜圖；另取本品適量(約相當于地西泮5mg），同法測定，按內(nèi)標法以峰面積計算，即得。第124頁,共145頁，2024年2月25日，星期天2.高效液相色譜法測定硫酸阿托品片的含量

色譜條件:色譜柱為SpherisorbC185μm流動相為0.025mol/L磷酸(三乙胺調(diào)pH為3.0)-乙腈(80:20)；柱溫為30℃；檢測波長為215nm；n=5880。

線性關(guān)系：精取硫酸阿托品適量，用流動相制備成22.4、44.8、67.2、89.6、112μg/ml溶液，進樣3次，每次20μl，所得峰面積與濃度繪制標準曲線，呈良好的線性關(guān)系，其相關(guān)系數(shù)r=0.9995，其線性范圍為22.4μg/ml～112μg/ml。

回收率試驗：

樣品測定：

第125頁,共145頁，2024年2月25日，星期天4.硝苯地平血藥濃度的HPLC法測定樣品前處理：BondElut腈丙基硅烷鍵合硅膠－SPE內(nèi)標：尼群地平HPLC條件：PartisilODS(250×4.6mm,i.d.,5μm）乙腈－水（60：40）流動相，