植物細(xì)胞骨架的光學(xué)顯微鏡觀察專家講座

試驗六植物細(xì)胞骨架光學(xué)顯微鏡觀察一試驗?zāi)繕?biāo)1經(jīng)過對洋蔥內(nèi)皮細(xì)胞處理，掌握植物細(xì)胞骨架制備方法與顯微形態(tài)觀察。2掌握考馬斯亮藍(lán)R250對植物細(xì)胞骨架染色方法。

植物細(xì)胞骨架的光學(xué)顯微鏡觀察專家講座第1頁二試驗原理細(xì)胞骨架是由蛋白質(zhì)絲組成復(fù)雜網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，成份有微絲、微管和中間纖維。TritonX-100可溶解抽提細(xì)胞中蛋白質(zhì)和脂質(zhì)，但不破壞細(xì)胞骨架系統(tǒng)。戊二醛固定、考馬斯亮藍(lán)R250染色，光學(xué)顯微鏡觀察網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)由微絲組成細(xì)胞骨架。植物細(xì)胞骨架的光學(xué)顯微鏡觀察專家講座第2頁三試驗儀器、材料和試劑1儀器、用具：普通光學(xué)顯微鏡等2材料：洋蔥鱗莖3試劑：⑴M-緩沖液⑵6mmol/L磷酸緩沖液⑶1%TritonX-100⑷0.2%考馬斯亮藍(lán)R250植物細(xì)胞骨架的光學(xué)顯微鏡觀察專家講座第3頁三試驗儀器、材料和試劑3試劑：⑸3%戊二醛⑹50%、70%、95%乙醇

⑺叔丁醇、正丁醇、二甲苯、中性樹膠

植物細(xì)胞骨架的光學(xué)顯微鏡觀察專家講座第4頁四試驗方法(Ⅰ)1洋蔥鱗莖內(nèi)表皮（1cm大?。?0ml燒杯（磷酸緩沖液）→下沉2吸去緩沖液→加1%TritonX-10020~30分鐘3吸去TritonX-100→M-緩沖液洗3次/10分鐘43%戊二醛固定0.5-1小時植物細(xì)胞骨架的光學(xué)顯微鏡觀察專家講座第5頁四試驗方法5PH6.8磷酸緩沖液洗3次/10分鐘60.2%考馬斯亮藍(lán)R250染色20~30分鐘7蒸餾水洗1-2次→裝片→觀察8制作永久切片植物細(xì)胞骨架的光學(xué)顯微鏡觀察專家講座第6頁四試驗方法(Ⅱ)取洋蔥內(nèi)皮1cm左右

置于含PBS液載玻片上

濕潤后，吸去PBS

加2滴1%TritonX-100/M-緩沖液，5min

吸去緩沖液，加3%戊二醛-PB溶液，固定30min

加PBS洗2次，共3min

加0.2%考馬斯亮藍(lán)R250染色30min

用PBS洗2次，共2min，吸干

鏡檢并繪圖細(xì)胞骨架標(biāo)本制作過程植物細(xì)胞骨架的光學(xué)顯微鏡觀察專家講座第7頁五作業(yè)1繪出植物細(xì)胞骨架微絲結(jié)構(gòu)圖。2分析和敘述在光學(xué)顯微鏡下觀察到細(xì)胞骨架形態(tài)特征。3為何用TritonX-100緩沖液處理材料？植物細(xì)胞骨架的光學(xué)顯微鏡觀察專家講座第8頁植物細(xì)胞骨架微絲結(jié)構(gòu)圖植物細(xì)胞骨架的光學(xué)顯微鏡觀察專家講座第9頁植物細(xì)胞骨架微絲結(jié)構(gòu)圖植物細(xì)胞骨架的光學(xué)顯微鏡觀察專家講座第10頁植物細(xì)胞骨架微絲結(jié)構(gòu)圖植物細(xì)胞骨架的光學(xué)顯微鏡觀察專家講座第11頁植物細(xì)胞骨架微絲結(jié)構(gòu)圖植物細(xì)胞骨架的光學(xué)顯微鏡觀察專家講座第12頁植物細(xì)胞骨架微絲結(jié)構(gòu)圖植物細(xì)胞骨架的光學(xué)顯微鏡觀察專家講座第13頁植物細(xì)胞骨架形態(tài)特征細(xì)胞骨架觀察結(jié)果光學(xué)顯微鏡下洋蔥內(nèi)表皮細(xì)胞輪廓清楚可見（如圖），細(xì)胞壁及其分界顯著。10×10倍鏡下可粗略觀察到細(xì)胞內(nèi)粗細(xì)不等藍(lán)色纖維、團塊形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。同一細(xì)胞內(nèi)各處骨架密集度不均勻，細(xì)胞核區(qū)域纖維相對密集，藍(lán)色濃重，甚至分辨不出網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，另外可見細(xì)胞壁區(qū)域有零星藍(lán)色纖維分布；相鄰細(xì)胞密集程度基本一致，但有少數(shù)細(xì)胞有較大不一樣。植物細(xì)胞骨架的光學(xué)顯微鏡觀察專家講座第14頁植物細(xì)胞骨架形態(tài)特征細(xì)胞骨架觀察結(jié)果10×40倍鏡下可清楚觀察到藍(lán)色網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)確實由線性纖維交織成，纖維間結(jié)合點稍膨大。細(xì)胞邊緣骨架較稀疏，但可見由與胞壁相同走向纖維形成細(xì)胞質(zhì)膜輪廓，與細(xì)胞內(nèi)部纖維經(jīng)過縱向纖維相連。相鄰細(xì)胞有