《微生物學(xué)檢驗(yàn)》復(fù)習(xí)思考題參考答案1

《微生物學(xué)檢驗(yàn)》復(fù)習(xí)思考題參考答案

緒論

1、微生物的概念、特點(diǎn)，微生物分哪三型八大類？

微生物：是存在于自然界的一大群體形微小、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、肉眼直接看不見，必須藉助光

學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡放大數(shù)百倍、數(shù)千倍，甚至數(shù)萬(wàn)倍才能觀察到的微小生物。包括細(xì)菌、

病毒、真菌等三類。

特點(diǎn)：

（1）個(gè)體微小，結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單

（2）比表面積大、吸收多、轉(zhuǎn)化快

⑶代謝旺盛，繁殖迅速

（4）種類繁多，分布廣泛

⑸適應(yīng)力強(qiáng)，容易變易

按結(jié)構(gòu)和組成不同，可分為三型八大類

⑴非細(xì)胞型微生物：病毒

⑵原核細(xì)胞型微生物（廣義的細(xì)菌）：包括細(xì)菌（狹義的細(xì)菌）、支原體、立克次體、衣原

體、螺旋體及放線菌。

⑶真核細(xì)胞型微牛.物：真菌

2、簡(jiǎn)述臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)的主要任務(wù)有哪些？

⑴研究感染性疾病的病原體特征

⑵提供快速、準(zhǔn)確的病原學(xué)診斷

⑶指導(dǎo)臨床合理使用抗生素

⑷監(jiān)控醫(yī)院感染

3、簡(jiǎn)述臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)的目的和核心任務(wù)是什么？

臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)的目的是為感染性疾病提供微生物學(xué)診斷，以達(dá)到治療、控制和預(yù)防感染

性疾病的擴(kuò)散。

微生物學(xué)檢驗(yàn)的核心任務(wù)是快速、準(zhǔn)確地進(jìn)行病原學(xué)診斷和藥敏檢測(cè)，為臨床感染性疾病的

診斷、治療提供依據(jù)。

4、簡(jiǎn)述臨床微生物檢驗(yàn)的原則。

⑴確保臨床標(biāo)本可靠；

⑵全面了解機(jī)體正常菌群；

⑶保證檢驗(yàn)質(zhì)量、快速準(zhǔn)確提供信息；

（4）微生物學(xué)定性、定量和定位分析，并結(jié)合病情（三定一結(jié)合）；

⑸加強(qiáng)與臨床聯(lián)系。

5、填空題

⑴根據(jù)微生物能耐受不同的溫度，人們常用、、和來

保存菌種。細(xì)菌的具有高度抗熱性，這常給消毒帶來困難。

⑵生物學(xué)性狀基本相同的細(xì)菌群體構(gòu)成一個(gè)菌種，不同來源的同一菌種的細(xì)菌稱為該菌的

不同;性狀相近關(guān)系密切的若干菌種構(gòu)成—;具有某種細(xì)菌典型特征的菌株稱該

菌的。

⑴普通冰箱（4°C）；低溫冰箱（-20。0；干冰（-70。0；液氮（-196℃）；芽胞

⑵菌株、菌屬、標(biāo)準(zhǔn)菌株（典型菌株）

細(xì)菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu)

1、名詞解釋：細(xì)菌L型；|中介體|；質(zhì)粒；gg；莢膜腫脹試驗(yàn)

⑴細(xì)菌L型：是指細(xì)胞壁缺陷型的細(xì)菌。1935年Klieneberger首先在Lister研究所發(fā)現(xiàn)而

得名。

⑵中介體：細(xì)菌細(xì)胞膜向細(xì)胞質(zhì)內(nèi)陷、折疊、卷曲形成的囊狀物，多見于G+菌。中介體參

與細(xì)菌的分裂和能量的產(chǎn)生，有類似于真核細(xì)菌紡錘絲與線粒體的作用。

⑶質(zhì)粒：存在于細(xì)胞質(zhì)中的帶有遺傳信息、控制細(xì)菌的某些特定遺傳性狀、能夠自我復(fù)制

的染色體以外的閉環(huán)雙鏈DNA?；颍杭?xì)菌的胞質(zhì)DNA。

（4）芽胞：某些細(xì)菌在一定的環(huán)境條件下，胞質(zhì)脫水濃縮，在菌體內(nèi)形成一個(gè)圓形或卵圓形

小體，是細(xì)菌的休眠形式，即為芽胞。其抵抗力強(qiáng)，衡量滅菌效果時(shí)，常以殺死芽胞作

為判斷指標(biāo)。芽胞的大小、形態(tài)、位置等隨菌種而異，有助于細(xì)菌鑒別。

⑸莢膜腫脹試驗(yàn)：某些細(xì)菌的莢膜與同型抗血清作用后增厚變寬，此試驗(yàn)為莢膜腫脹試驗(yàn)。

可作為肺炎鏈球菌等細(xì)菌的血清學(xué)診斷。

2、細(xì)菌的基本結(jié)構(gòu)與特殊結(jié)構(gòu)以及它們的主要功能。|G+菌與G-菌的細(xì)胞壁的比較。|G+菌

與G-菌細(xì)胞壁差異的臨床意義。

基本結(jié)構(gòu)：細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、核質(zhì)

細(xì)胞壁的功能：

⑴維持菌體的固有形態(tài)，保護(hù)細(xì)菌抵抗外界低滲環(huán)境（主要功能）：

⑵參與菌體內(nèi)外物質(zhì)交換；

⑶帶有多種抗原，決定細(xì)菌的免疫原性。誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答并與血清分型有關(guān)。

（4）G-菌外膜是一種屏障結(jié)構(gòu)，阻止某些抗生素的進(jìn)入，成為細(xì)菌耐藥的機(jī)制之一。

⑸某些G+有表面蛋白、G-菌內(nèi)毒素等與細(xì)菌的致病性有關(guān)。

（6）與細(xì)菌染色性密切相關(guān)。

細(xì)胞膜的功能：

⑴物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)；⑵生物合成；⑶細(xì)胞呼吸；⑷形成中介體，參與細(xì)菌分裂等。

細(xì)胞質(zhì)的功能：是細(xì)菌合成蛋白質(zhì)和核糖核酸的場(chǎng)所；是細(xì)菌進(jìn)行新陳代謝的場(chǎng)所。

核質(zhì)的功能：是細(xì)菌的遺傳物質(zhì)，控制細(xì)菌的各種遺傳性狀。

細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)：莢膜、鞭毛、菌毛、芽抱。

莢膜的功能：

⑴抗吞噬作用；⑵黏附作用；⑶抗有害物質(zhì)的損傷；⑷具有抗原性。

莢膜染色特點(diǎn)：不易著色。常用墨汁負(fù)染法染色，可見菌體周圍一圈未著色的透明圈，也

可用莢膜染色法。

鞭毛的功能：

⑴是細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)器官；⑵有些鞭毛（如霍亂弧菌、空腸彎曲菌）與細(xì)菌的致病性密切相關(guān);

⑶具有抗原性，可籍此鑒定細(xì)菌及對(duì)細(xì)菌分類

鞭毛的檢測(cè)方法：

⑴電子顯微鏡觀察；

⑵經(jīng)特殊染色（鞭毛染色）使鞭毛變粗后用光學(xué)顯微鏡觀察；

⑶半固體培養(yǎng)基穿刺接種觀察生長(zhǎng)情況間接判斷該菌有無(wú)鞭毛（這是鑒定細(xì)菌是否有動(dòng)力

最簡(jiǎn)單的常用的方法）。

（4）懸滴法或壓滴法觀察細(xì)菌的動(dòng)力間接判斷該菌有無(wú)鞭毛；

菌毛的功能：

⑴普通菌毛：細(xì)菌的黏附結(jié)構(gòu)，與細(xì)菌的致病性有關(guān)。

⑵性菌毛：介導(dǎo)接合，細(xì)菌的毒力、耐藥性等性狀可通過此方式傳遞

⑶為某些噬菌體的受體。

芽抱的功能：

⑴根據(jù)芽抱形態(tài)、大小以及在菌體中的位置，有利于細(xì)菌的鑒別；

⑵殺死芽抱為滅菌的可靠指標(biāo)（殺滅芽胞最可靠的方法是高壓蒸氣滅菌法）；

⑶可以成為某些傳染病潛在的傳染源：芽抱本身不致病，但當(dāng)它發(fā)芽轉(zhuǎn)變?yōu)榉敝丑w后，可

引起疾病。在人類，有四種常見的嚴(yán)重的傳染病是由能形成芽泡的細(xì)菌引起的——炭疽

桿菌、肉毒梭菌、破傷風(fēng)梭菌和產(chǎn)氣莢膜梭菌。

革蘭陽(yáng)性菌與革蘭陰性菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)比較如下：

細(xì)胞壁革蘭陽(yáng)性菌革蘭陰性菌

組成聚糖骨架、肽側(cè)鏈和肽交橋聚糖骨架、肽側(cè)鏈

結(jié)構(gòu)類型三維空間結(jié)構(gòu)二維平面結(jié)構(gòu)

強(qiáng)度較堅(jiān)韌較蔬松

厚度厚，20—80nm薄,10—15nm

肽聚糖層數(shù)多，可達(dá)50層少，1-2層

肽聚糖含量多，占細(xì)胞干重50—80%少，占細(xì)胞干重5—20%

磷壁酸+——

外膜—+

對(duì)溶菌酶、青霉素的敏感性敏感不敏感

革蘭染色性紫色紅色

G+菌與G-菌細(xì)胞壁差異的臨床意義：體現(xiàn)在細(xì)菌染色性、抗原性、致病性、對(duì)抗生素敏感

性的不同。

項(xiàng)目革蘭陽(yáng)性菌革蘭陰性菌與細(xì)胞壁的關(guān)系

染色性紫色紅色細(xì)胞壁對(duì)酒精的通透性

抗原性主要為磷壁酸主要為外膜細(xì)胞壁的化學(xué)組成不同

毒性無(wú)內(nèi)毒素（以外毒素為主）有內(nèi)毒素內(nèi)毒素為陰性菌細(xì)胞壁成分

對(duì)青霉素的作用有效無(wú)效作用部位為肽聚糖五肽交聯(lián)橋

對(duì)溶菌酶的作用有效無(wú)效作用部位為肽聚糖聚糖骨架

3、簡(jiǎn)述細(xì)菌L型的形成、主要生物學(xué)性狀及其臨床意義。

形成：

細(xì)菌細(xì)胞壁的肽聚糖結(jié)構(gòu)受到理化或生物因素(溶菌酶、溶葡萄球菌素、青霉素、膽汁、

抗體、補(bǔ)體等)的直接破壞或合成受到抑制后形成。G+菌原生質(zhì)外僅有細(xì)胞膜包住稱原生

質(zhì)體，G-菌尚有外膜保護(hù)稱原生質(zhì)球。

主要生物學(xué)性狀：

(1)高度多形性；

⑵著色不勻，大多染成革蘭陰性；

⑶培養(yǎng)條件要求高，必須在高滲低瓊脂含血清的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)；

(4)生長(zhǎng)緩慢(2?7天)，菌落呈荷包蛋樣；

⑸去除誘發(fā)因素后，有些L型可回復(fù)為原菌；

(6)生化反應(yīng)與原菌有明顯差異；

⑺存在于細(xì)胞壁的抗原減弱或丟失；

臨床意義：可引起慢性和反復(fù)發(fā)作的感染，如尿路感染、骨髓炎、心內(nèi)膜炎等，并常在使用

作用于細(xì)胞壁的抗菌藥物治療過程中發(fā)生。

治療：對(duì)作用于細(xì)胞壁的抗生素耐藥性，而對(duì)作用于核酸或蛋白質(zhì)合成的抗生素仍敏感。

4、填空題

(1)細(xì)菌根據(jù)外形，主要有----、一一、一一三大類。

⑵細(xì)菌的基本結(jié)構(gòu)為----、------、-----、----。

⑶細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)為----、------、-----、-------------------O

(4)G+菌細(xì)胞壁的肽聚糖由--------------------組成。G-菌細(xì)胞壁的肽聚糖由-----

——組成；G-菌的內(nèi)毒素為——o

⑸細(xì)菌細(xì)胞質(zhì)中有-------------------等重要結(jié)構(gòu)。

(6)細(xì)菌莢膜的功能是-............——,普通菌毛的功能為------，鞭毛的功能為——o

⑺細(xì)菌的測(cè)量單位為-----。

(8)革蘭染色的步驟為......................................色為革蘭染色陽(yáng)性-------

色為革蘭染色陰性。

(9)中介體的功能為..................

(10)能在光學(xué)顯微鏡下觀察到的細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)有、和。

(1D莢膜具有、作用和作用。

?莢膜一?般在或形成。

?鞭毛與細(xì)菌的有關(guān)，霍亂弧菌的鞭毛還與有關(guān)。

(14)芽胞不是細(xì)菌的，而是細(xì)菌的。1個(gè)繁殖體只形成個(gè)芽

胞，1個(gè)芽胞發(fā)芽也只生成個(gè)繁殖體。

⑴球菌桿菌螺形菌

⑵細(xì)胞壁細(xì)胞膜細(xì)胞質(zhì)核質(zhì)

⑶莢膜鞭毛菌毛芽抱

(4)聚糖骨架肽側(cè)鏈肽交橋聚糖骨架肽側(cè)鏈脂多糖

⑸⑹⑺⑻⑼

⑩莢膜鞭毛芽胞

(11)抗吞噬粘附抗有害物質(zhì)的損傷

?機(jī)體內(nèi)營(yíng)養(yǎng)豐富的環(huán)境中

?運(yùn)動(dòng)器官致病性

(14)繁殖方式休眠狀態(tài)1個(gè)1個(gè)

細(xì)菌的生理

1、名詞解釋：I熱原質(zhì)I;I細(xì)菌素耐毒素;外毒貳\

⑴熱原質(zhì)：又稱致熱原，是細(xì)菌合成的一種注入人體或動(dòng)物體內(nèi)能引起發(fā)熱反應(yīng)的物質(zhì)。

⑵細(xì)菌素：某些細(xì)菌菌株產(chǎn)生的一類僅對(duì)近緣細(xì)菌具有抗菌作用的蛋白質(zhì)稱為細(xì)菌素。

⑶內(nèi)毒素：即革蘭陰性菌細(xì)胞壁的脂多糖，其毒性成分為脂質(zhì)A,當(dāng)菌體死亡裂解后才釋

放，是革蘭陰性菌的主要致病物質(zhì)。

（4）外毒素：是多數(shù)革蘭陽(yáng)性菌和少數(shù)革蘭陰性菌在生長(zhǎng)繁殖過程中釋放到菌體外的蛋白質(zhì),

其毒性強(qiáng)，為細(xì)菌重要的致病物質(zhì)。

2、簡(jiǎn)述細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的基本條件有哪些？為什么專性厭氧菌在有氧環(huán)境中不能生長(zhǎng)繁殖？

細(xì)菌個(gè)體的生長(zhǎng)繁殖方式：二分裂繁殖；繁殖速度：細(xì)菌分裂數(shù)量倍增所需時(shí)間，即代時(shí),

多數(shù)為20-30分鐘。TB（結(jié)核桿菌）約18小時(shí)，產(chǎn)氣莢膜梭菌為8分鐘。

細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的基本條件：

⑴充足的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：包括水、碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽、生長(zhǎng)因子等；

⑵合適的pH值：大多病原菌的最適pH值為72-7.6；

⑶適宜的溫度：大多數(shù)病原菌的最適溫度為37℃;

（4）必要的氣體環(huán)境。

專性厭氧菌不能在有氧環(huán)境中生長(zhǎng)繁殖的原因：

⑴缺乏Eh高的呼吸能（細(xì)胞色素和細(xì)胞色素氧化的）；

⑵缺乏分解有毒氧基團(tuán)的酶（超氧化物歧化酶SOD、觸酶、過氧化物酶）

3、細(xì)菌的合成代謝產(chǎn)物種類及其在醫(yī)學(xué)上的意義？

⑴與致病性有關(guān)的合成代謝產(chǎn)物：熱原質(zhì)/致熱原、毒素和侵襲性酶；

⑵供治療用的合成代謝產(chǎn)物：抗生素、細(xì)菌素、維生素；

⑶與鑒別細(xì)菌有關(guān)的合成代謝產(chǎn)物：色素。

4、細(xì)菌的生長(zhǎng)曲線可分為幾期？各自的主要特點(diǎn)是什么？

細(xì)菌生長(zhǎng)曲線：是將一定量的細(xì)菌接種于適宜培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，連續(xù)檢測(cè)細(xì)菌在不同

培養(yǎng)時(shí)間的活菌數(shù)目（以菌落形成單位cfu表示），以cfu為縱坐標(biāo)，培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)，

可以作出一條反映細(xì)菌生長(zhǎng)數(shù)變化規(guī)律的曲線，即生長(zhǎng)曲線。包括遲緩期、對(duì)數(shù)期、穩(wěn)定期、

衰退期這四個(gè)時(shí)期。

（1）遲緩期：代謝活躍，菌體增大，積累酶、輔酶和中間代謝產(chǎn)物，不分裂繁殖，為細(xì)菌大

量繁殖作好物質(zhì)準(zhǔn)備。

⑵對(duì)數(shù)期：細(xì)菌繁殖迅速，菌數(shù)呈幾何級(jí)數(shù)增長(zhǎng)，細(xì)菌的生物學(xué)性狀典型，對(duì)外界環(huán)境作

用敏感，適用于研究細(xì)菌的生物學(xué)性狀和進(jìn)行藥物敏感實(shí)驗(yàn)，一般在培養(yǎng)后8-18小時(shí)。

⑶穩(wěn)定期：細(xì)菌數(shù)仍在增加，死菌數(shù)與活菌數(shù)形成一種動(dòng)態(tài)平衡。其特點(diǎn)：形態(tài)、染色性

等生物學(xué)性狀常有改變；芽抱，毒素、抗生素等產(chǎn)生；若向培養(yǎng)系統(tǒng)補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，取

走代謝產(chǎn)物，改善培養(yǎng)條件則可延長(zhǎng)穩(wěn)定期。

（4）衰亡期：死亡菌數(shù)增多，超過活菌數(shù)，細(xì)菌形態(tài)顯著改變，生理活動(dòng)趨于停止。一般不

用該期細(xì)菌作鑒定和研究工作。

5、根據(jù)細(xì)菌代謝時(shí)對(duì)分子氧的需求與否，可將細(xì)菌分為哪幾類?

根據(jù)細(xì)菌代謝時(shí)對(duì)氧氣要求的不同，可將細(xì)菌分為專性需氧菌；微需氧菌：兼性厭氧菌；

專性厭氧菌四大類。

專性厭氧菌不能在有氧環(huán)境中生長(zhǎng)繁殖的原因：缺乏Eh高的呼吸酶（細(xì)胞色素和細(xì)胞色素

氧化酶）；缺乏分解有毒氧基團(tuán)的酶（超氧化物歧化酶SOD、觸酶、過氧化物酶）。

細(xì)菌檢驗(yàn)技術(shù)

1、名詞解釋：培養(yǎng)基；分離培養(yǎng)；純培養(yǎng)；菌落；細(xì)菌的生化反應(yīng)；IMVtC試驗(yàn);KIA試

驗(yàn);CAMP試驗(yàn);莢膜腫脹試驗(yàn)。

（1）培養(yǎng)基：由人工方法配制而成的，專供微生物生長(zhǎng)繁殖使用的混合營(yíng)養(yǎng)物制品稱為培養(yǎng)

基。

⑵分離培養(yǎng)：臨床標(biāo)本中含有多種細(xì)菌，可經(jīng)過劃線接種到固體培養(yǎng)基表面分散開，經(jīng)過

18-24小時(shí)培養(yǎng)后可得到單個(gè)菌落。這種將混雜的細(xì)菌在固體培養(yǎng)基表面分散開的培養(yǎng)

方法稱為分離培養(yǎng)?；颍簩⒃鼍囵B(yǎng)物或含菌量多的標(biāo)本如糞便、膿汁等，直接在平板

上劃線分離，將其中的目的菌分離出來的培養(yǎng)方法。

⑶純培養(yǎng)：挑取一個(gè)菌落移種到另一培養(yǎng)基中，長(zhǎng)出的細(xì)菌為純種，該方法稱為純培養(yǎng)。

（4）菌落：?jiǎn)蝹€(gè)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)繁殖形成的單一的肉眼可見的細(xì)菌集團(tuán)，稱菌落。

許多菌落融合在一起形成菌苔。

⑸細(xì)菌的生化反應(yīng)：用生化試驗(yàn)的方法，檢測(cè)細(xì)菌對(duì)各種基質(zhì)（糖、蛋白質(zhì)等）的代謝作

用以及形成的代謝產(chǎn)物，從而對(duì)細(xì)菌鑒別的反應(yīng)。（原理：細(xì)菌內(nèi)所具有的酶不同，因而

對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的分解能力也不同，產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物也不同，據(jù)此可鑒別不同細(xì)菌。）

（6）IMViC試驗(yàn)：吧詠（I）、甲基紅（M）、VP（V）及枸椽酸鹽利用（C）四種試驗(yàn)，常用

于腸道桿菌的鑒定，合稱IMViC試驗(yàn)。如大腸埃希菌的結(jié)果是：++--；產(chǎn)氣桿菌的

結(jié)果是：----++。

⑺KIA試驗(yàn)：即雙糖鐵一半固體培養(yǎng)基，它是一種復(fù)合性的檢查生化反應(yīng)的培養(yǎng)基，可檢

查4種反應(yīng)，即葡萄糖、乳糖的發(fā)酵反應(yīng)，是否產(chǎn)生H?S,有無(wú)動(dòng)力等。目前多使用國(guó)

產(chǎn)雙糖鐵瓊脂粉（KIA）,比較方便，效果也好，但只能配制成斜面培養(yǎng)基，不能配成

半固體培養(yǎng)基，因而無(wú)法觀察細(xì)菌的動(dòng)力。KIA試驗(yàn)主要用于腸桿菌科細(xì)菌的鑒定和鑒

別。

（8）CAMP試驗(yàn)：B群鏈球菌產(chǎn)生一種細(xì)胞外CAMP因子，可增強(qiáng)金黃色葡萄球菌B-溶血

素的活性，因此，血平板上，在兩菌（B群鏈球菌與金黃色葡萄球菌）交界處出現(xiàn)箭頭

狀溶血區(qū)。該試驗(yàn)主要用于B群鏈球菌的鑒定。

⑼莢膜腫脹試驗(yàn)：某些細(xì)菌的莢膜與同型抗血清作用后增厚變寬，此試驗(yàn)為莢膜腫脹試驗(yàn)。

可作為肺炎鏈球菌等細(xì)菌的血清學(xué)診斷。

2、簡(jiǎn)述細(xì)菌染色標(biāo)本檢查的基本程序、復(fù)染色法基本程序與常用方法。

細(xì)菌染色標(biāo)本檢查的基本程序：涂片一一干燥一一固定一f染色。

復(fù)染色法基本程序：初染一媒染一脫色一復(fù)染

常用方法：革蘭染色法利抗酸染色法，尤其是革蘭染色法在細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)中有重要意義。

3、革蘭染色的原理、染液組成、染色方法、結(jié)果判斷、影響因素與臨床意義。

革蘭染色原理：

⑴通透性說：主要是由于兩類細(xì)菌的細(xì)胞壁成分和結(jié)構(gòu)的不同。革蘭陰性菌細(xì)胞壁中含有

較多類脂質(zhì)，而肽聚糖含量較少。當(dāng)用酒精脫色時(shí)，溶解了類脂質(zhì)，增加了細(xì)胞的通透

性，使結(jié)晶紫和碘的復(fù)合物易于滲出，細(xì)胞脫色，經(jīng)復(fù)染后，染上復(fù)染液（復(fù)紅）的顏色;

而革蘭陽(yáng)性菌細(xì)胞壁中肽聚糖含量多且交聯(lián)度大，類脂質(zhì)含量少，經(jīng)酒精脫色后，肽聚

糖層的孔徑變小，通透性降低，酒精不易進(jìn)入菌體脫色，故細(xì)胞仍保留初染液（結(jié)晶紫）

的顏色。

⑵化學(xué)說：G'菌菌體含有大量的核糖核酸鎂鹽，可與碘、結(jié)晶紫牢固結(jié)合，使已著色的菌

體不易脫色。

⑶等電點(diǎn)說：G,菌（PI2-3）低于G菌（PI4-5）,G'菌帶負(fù)電荷比G菌要多，G+菌易與帶正

電荷的堿性染料（結(jié)晶紫）結(jié)合牢固，因而不易脫色。

革蘭染色染液組成：結(jié)晶紫染液、盧戈碘液、95%乙醇、稀釋石炭酸復(fù)紅。

染色方法：結(jié)晶紫染液（初染）1分鐘，水洗一一盧戈碘液（媒染）1分鐘，水洗一一95%

乙醇（脫色）30秒至1分鐘，水洗一一稀釋石炭酸復(fù)紅（復(fù)染）1分鐘，水洗后，

待干后用油鏡進(jìn)行觀察。

結(jié)果判斷：革蘭陽(yáng)性菌呈紫色，革蘭陰性菌呈紅色。

影響革蘭染色的因素：

（1）操作因素：涂片的厚、?。粯?biāo)本是否固定好；染色與脫色時(shí)間的長(zhǎng)短。

⑵染液因素：盧戈碘液放置時(shí)間過長(zhǎng)；95%乙醇揮發(fā)；結(jié)晶紫與草酸鍍混合時(shí)間太長(zhǎng)等。

⑶細(xì)菌因素：細(xì)菌種類；細(xì)菌菌齡。

影響革蘭染色的關(guān)鍵步驟是脫色。

革蘭染色的臨床意義：⑴鑒別細(xì)菌；⑵選擇藥物；⑶與致病性有關(guān)。

4、請(qǐng)寫出抗酸染色的染液組成、染色方法及染色結(jié)果、原理。

染液組成與染色方法：

固定加溫3-5min脫色

標(biāo)本一-?5%石碳酸復(fù)紅一-?3%鹽酸酒精一-?美藍(lán)復(fù)染一-?鏡檢

染色結(jié)果：

紅色：抗酸性細(xì)菌如結(jié)核桿菌

蘭色：非抗酸性細(xì)菌

原理：由于結(jié)核桿菌細(xì)胞壁中含大量脂質(zhì)，一般不易著色，若經(jīng)加溫或延長(zhǎng)染色時(shí)間而著色

后又能抵抗強(qiáng)脫色劑鹽酸酒精的脫色，故又稱抗酸桿菌。

5、簡(jiǎn)述細(xì)菌細(xì)胞壁染色的方法與結(jié)果。

方法：

自然干燥固定15min3~5min

制片一f--10%鞍酸-f-f0.5%龍膽紫ffff鏡檢

水洗水洗

結(jié)果：有細(xì)胞壁的細(xì)菌僅菌體周邊染成紫色，菌體內(nèi)部無(wú)色；無(wú)細(xì)胞壁的細(xì)菌（如L型細(xì)

菌）可見整個(gè)菌體濃染呈紫色。

6、簡(jiǎn)述細(xì)菌不染色標(biāo)本鏡檢的常用方法與用途。

常用方法：壓滴法、懸滴法、（暗視野聚光法、相差顯微鏡檢查法等）。

應(yīng)用：主要用于觀察活菌的動(dòng)力和運(yùn)動(dòng)方式。

注意事項(xiàng)：檢測(cè)細(xì)菌動(dòng)力時(shí)需注意其真正運(yùn)動(dòng)還是分子運(yùn)動(dòng)，前者時(shí)由于鞭毛引起的有方向

性的位移，而后者只是在原地顫動(dòng)，是由于水分子撞擊細(xì)菌而引起的布朗運(yùn)動(dòng)，無(wú)鞭毛

的細(xì)菌也可有此種分子運(yùn)動(dòng)。

7、簡(jiǎn)述培養(yǎng)基制備的一般程序與原則。

不同的培養(yǎng)基制備程序不盡相同，但配制一般培養(yǎng)基的程序基本相似，分為以下幾個(gè)步驟:

調(diào)配一熔化一矯正pH值一過濾澄清一分裝一滅菌一檢定/質(zhì)量檢驗(yàn)-保存。

培養(yǎng)基的種類很多，但一般制備原則有三條：⑴足夠和適當(dāng)?shù)臓I(yíng)養(yǎng)成份。⑵合適的酸堿度。

⑶絕對(duì)無(wú)菌。

培養(yǎng)基滅菌要求：

（1）基礎(chǔ)培養(yǎng)基：121℃高壓蒸汽滅菌15?30min。

⑵含糖/明膠培養(yǎng)基：113℃滅菌15min。

⑶雞蛋、血清培養(yǎng)基：血清凝固器間歇滅菌3天3次（75℃30min-80℃30min-

85℃30min）o

（4）不耐高溫的液體成分如血清、尿素、細(xì)胞培養(yǎng)液等：濾過除菌。

8、簡(jiǎn)述在細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)中常用的接種方法有哪些？

細(xì)菌接種時(shí)，應(yīng)根據(jù)待檢標(biāo)本的種類、檢驗(yàn)?zāi)康募八门囵B(yǎng)基的類型選擇不同的接種方法。

⑴平板劃線接種法……分離培養(yǎng)，主要用于固體培養(yǎng)基的接種。

★目的：使混合的細(xì)菌呈單個(gè)分散生長(zhǎng)，形成單個(gè)菌落，以便獲得純菌。

★方法：

★分區(qū)劃線法：適用于含菌量較多的標(biāo)本如糞便、膿汁

★連續(xù)劃線法：適用于含菌量較少的標(biāo)本.

⑵瓊脂斜面接種法：用于純種增菌、保存菌種或生化反應(yīng)。

⑶半固體培養(yǎng)基接種法（穿刺接種法）：用于觀察細(xì)菌動(dòng)力或生化反應(yīng)。

⑷液體培養(yǎng)基接種法：用于純種增菌或生化反應(yīng)。

⑸傾注平板法：用于水、牛乳、飲料、尿液等液體標(biāo)本及藥物、化妝品等的細(xì)菌計(jì)數(shù)。

方法：是將經(jīng)滅菌生理鹽水適量稀釋（通常作10-1?10-5稀釋）的標(biāo)本1ml,置于滅菌平皿

內(nèi)。注入10?15ml已融化并冷至50C左右的適宜培養(yǎng)基，凝固后，將平板倒置于37c培養(yǎng)

18?24h,計(jì)算菌落形成單位（colonyformingunit,CFU）?求出每毫升或每克標(biāo)本中所含活

菌數(shù)。1ml標(biāo)本中活菌數(shù)=全平板CFUX稀釋倍數(shù)。

我國(guó)規(guī)定生活飲用水的標(biāo)準(zhǔn)是：1ml水中細(xì)菌總數(shù)WlOOcfU。

（6）涂布接種法：用于紙片藥敏試驗(yàn)和生物制品菌苗的生產(chǎn)。

9、簡(jiǎn)述細(xì)菌的培養(yǎng)方法有哪些？

根據(jù)不同標(biāo)本及培養(yǎng)目的的不同，可采取不同的方法進(jìn)行培養(yǎng)，常用的有普通（一般）

培養(yǎng)法（又叫需氧培養(yǎng)法）、二氧化碳培養(yǎng)法、微需氧培養(yǎng)法及厭氧培養(yǎng)法。

⑴普通培養(yǎng)（需氧培養(yǎng)）：

★培養(yǎng)溫度：35~37℃（采用恒溫培養(yǎng)箱）

★培養(yǎng)時(shí)間：18?24h（個(gè)別細(xì)菌例外）

⑵二氧化碳培養(yǎng)法：5~10%CO2o

★燭缸培養(yǎng)法：能自動(dòng)調(diào)節(jié)CO2的含量和溫度，使用較為方便。

★二氧化碳培養(yǎng)箱：取有蓋磨口標(biāo)本缸或玻璃干燥器，在蓋及磨口處涂以凡士林。

將接種細(xì)菌的培養(yǎng)基放入缸中，加蓋密封。隨燃燒產(chǎn)生的CO2增加，蠟燭自行熄

滅，此時(shí)缸內(nèi)CO2濃度約為5%?10%。置37℃孵箱孵育。

★化學(xué)法（重碳酸鈉-鹽酸法）：按每升容積重碳酸鈉0.4g與lmol/L鹽酸0.35ml比

例，分別取兩試劑置于容器內(nèi)，放置于標(biāo)本缸或干燥器內(nèi)，密封后傾斜容器，使

鹽酸與重碳酸鈉接觸產(chǎn)生C02。

⑶微需氧培養(yǎng)法：5?6%02、5~10%CO2和85%N2

有些微需氧菌，如空腸彎曲菌、幽門螺桿菌等，在低氧分壓的條件下生長(zhǎng)良好?？捎贸?/p>

氣換氣法即用真空泵先將容器內(nèi)的空氣排盡，然后注入5?6%02、5~10%CO2、85%N2

氣體，然后放入37℃孵箱孵育。

（4）厭氧培養(yǎng)法：厭氧培養(yǎng)箱、厭氧袋、厭氧罐、皰肉培養(yǎng)法、硫乙醇酸鹽法等。

10、按物理性狀不同可將培養(yǎng)基分哪幾種？各有何主要用途并簡(jiǎn)述細(xì)菌在其中的生長(zhǎng)現(xiàn)象。

培養(yǎng)基按其物理性狀可分為固體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基與液體培養(yǎng)基三種。分別觀察下

列生長(zhǎng)現(xiàn)象：

（1）固體培養(yǎng)基：細(xì)菌得以分離培養(yǎng)生成菌落從而獲得純種，主要用于細(xì)菌的分離純化、鑒

定以及藥敏試驗(yàn)。菌落分為三型：①光滑型菌落（S型菌落）；②粗糙型菌落（R型菌

落）；③粘液型菌落（M型菌落）。

⑵半固體培養(yǎng)基：多用來檢查細(xì)菌的動(dòng)力和短期保存細(xì)菌。有鞭毛的細(xì)菌可由穿刺線向四

周運(yùn)動(dòng)播散，培養(yǎng)后穿刺線模糊不清，呈羽毛狀或云霧狀混濁生長(zhǎng)；無(wú)鞭毛的細(xì)菌，不

能運(yùn)動(dòng)，僅沿穿刺線生長(zhǎng)，穿刺線清晰，穿刺線以外的培養(yǎng)基仍透明澄清。

⑶液體培養(yǎng)基：主要用于大量繁殖細(xì)菌（增菌培養(yǎng)）和觀察某些細(xì)菌的生化反應(yīng)。細(xì)菌在

液體培養(yǎng)基中生長(zhǎng)呈三種狀態(tài)。①混濁生長(zhǎng)，見于大多數(shù)細(xì)菌；②沉淀生長(zhǎng)；③菌膜生

長(zhǎng)，多為專性需氧菌，在培養(yǎng)液表面生長(zhǎng)，形成菌膜。

11、按用途不同可將培養(yǎng)基分為哪幾種？請(qǐng)各列出一種常用的培養(yǎng)基。

⑴基礎(chǔ)培養(yǎng)基：如營(yíng)養(yǎng)肉湯、營(yíng)養(yǎng)瓊脂、蛋白陳水等

⑵增菌培養(yǎng)基：

①通用增菌培養(yǎng)基：如血平板、血清肉湯等。

②專用增菌培養(yǎng)基：如堿性蛋白陳水用于霍亂弧菌的增菌。

⑶選擇培養(yǎng)基：如SS平板、伊紅-美蘭瓊脂平板、亞麻酸鉀血瓊脂平板、TCBS等。

⑷鑒別培養(yǎng)基：如糖發(fā)酵管、雙糖鐵培養(yǎng)基等。

⑸厭氧培養(yǎng)基：如庖肉培養(yǎng)基、硫乙醉酸鹽肉湯等。

12、簡(jiǎn)述甲基紅試驗(yàn)、V-P試驗(yàn)、七葉背水解試驗(yàn)、靛基質(zhì)（口引噪）試驗(yàn)、硫化氫試驗(yàn)、尿

素酶試驗(yàn)、枸檬酸鹽利用試驗(yàn)的醺、培養(yǎng)基、隆、結(jié)果與應(yīng)用。

甲基紅試驗(yàn)：

原理：葡萄糖一丙酮酸一大量混合酸一pH降至4.4以下一加入甲基紅試劑，培

養(yǎng)基變紅為陽(yáng)性。

培養(yǎng)基：葡萄糖蛋白陳水

試劑：甲基紅試劑

方法：將待檢菌接種于葡萄糖蛋白陳水培養(yǎng)基中，培養(yǎng)2-4d,于培養(yǎng)基內(nèi)加入甲基紅指

示劑2d,立即觀察結(jié)果。

結(jié)果：呈現(xiàn)紅色為陽(yáng)性；橘紅色為弱陽(yáng)性；黃色為陰性。

應(yīng)用：主要用于腸桿菌科細(xì)菌的鑒別。如大腸埃希菌為陽(yáng)性，產(chǎn)氣腸桿菌為陰性。

V-P試驗(yàn)：

原理：葡萄糖一丙酮酸一脫酸生成中性的乙酰甲基甲醇-在堿性環(huán)境中被空氣中

的氧氧化成二乙酰一二乙酰再與培養(yǎng)基內(nèi)蛋白豚中的精氨酸所含的股基反應(yīng)，

生成紅色化合物為陽(yáng)性。

培養(yǎng)基：葡萄糖蛋白陳水

方法：將待檢菌接種于上述培養(yǎng)基中，于350C培養(yǎng)48h后加入甲液（5%a-茶酚酒精溶

液）和乙液（40%KOH溶液+0.3%肌酊），振搖。

結(jié)果：在數(shù)分鐘內(nèi)出現(xiàn)紅色為陽(yáng)性：如無(wú)紅色出現(xiàn)且于35C4h后仍如故者即為陰性。

應(yīng)用：主要用于腸桿菌科細(xì)菌的鑒別。該試驗(yàn)常與甲基紅試驗(yàn)一起使用，因?yàn)榍罢哧?yáng)性

的細(xì)菌，后者通常為陰性。

七葉昔水解試驗(yàn)：

原理：某些細(xì)菌可將七葉甘分解成葡萄糖和七葉素，七葉素與培養(yǎng)基中枸檬酸鐵中的二

價(jià)鐵離子反應(yīng)，生成黑色的化合物，使培養(yǎng)基呈黑色。

培養(yǎng)基：七葉甘培養(yǎng)基、膽汁七葉昔培養(yǎng)基。

方法：將待檢菌接種于七葉甘培養(yǎng)基中于35℃培養(yǎng)48h后觀察結(jié)果。

結(jié)果：培養(yǎng)基變?yōu)楹谏珵殛?yáng)性，不變色者為陰性。

應(yīng)用：主要用于D群鏈球菌與其它鏈球菌的鑒別，前者陽(yáng)性，后者陰性。也可用于革蘭

陰性桿菌（克雷伯菌屬、腸桿菌屬和沙雷菌屬）、腸球菌及厭氧菌的鑒別。

靛基質(zhì)（吧噪）試驗(yàn)：

原理：細(xì)菌產(chǎn)生色氨酸酶，可分解蛋白陳中的色氨酸，生成靛基質(zhì)（吧睬），靛基質(zhì)與

試劑對(duì)二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰靛基質(zhì)。

培養(yǎng)基：蛋白陳水培養(yǎng)基

試劑：靛基質(zhì)試劑（含對(duì)二甲基氨基苯甲醛）

方法：挑取純培養(yǎng)物接種蛋白陳水培養(yǎng)基，于35c培養(yǎng)24?48h后，沿管壁徐徐加入靛

基質(zhì)試劑0.5mL使成兩層，觀察結(jié)果。

結(jié)果：加入試劑后，兩者液面接觸處出現(xiàn)紅色為陽(yáng)性；無(wú)色為陰性。

應(yīng)用：用于腸桿菌科細(xì)菌的鑒定。

硫化氫試驗(yàn)：

原理：某些細(xì)菌分解蛋白質(zhì)中的含硫氨基酸（如胱氨酸、甲硫氨酸），生成硫化氯，硫

化氫與培養(yǎng)基中的鐵鹽（硫酸亞鐵）或鉛鹽（醋酸鉛）結(jié)合生成黑色硫化物（硫

化亞鐵或硫化鉛）。

培養(yǎng)基：克氏雙糖鐵培養(yǎng)基或醋酸鉛培養(yǎng)基

結(jié)果：培養(yǎng)基變黑為陽(yáng)性，不變?yōu)殛幮浴?/p>

應(yīng)用：常用于腸道桿菌的鑒別。沙門菌屬（甲型副傷寒沙門菌為陰性）、愛德華菌屬、

亞利桑那菌屬、枸椽酸桿菌屬和變形桿菌屬等多為陽(yáng)性，其他菌書呈陰性。

尿素酶試驗(yàn)：

原理：產(chǎn)生版酶的細(xì)菌，能水解尿素生成氨和CO2,氨使培養(yǎng)基呈堿性變色。

培養(yǎng)基：尿素培養(yǎng)基（pH6.5-6.8）

試劑：酚紅指示劑

方法：將被檢菌接種于相應(yīng)的尿素培養(yǎng)基，于35℃培養(yǎng)18?24h后觀察結(jié)果。陰性時(shí)應(yīng)

繼續(xù)觀察4天。

結(jié)果：培養(yǎng)基變紅者為陽(yáng)性；培養(yǎng)基不變色者為陰性。

應(yīng)用：腸桿菌科中的變形桿菌屬、摩根菌屬和普羅威登菌屬的鑒定。奇異變形桿菌和普

通變形桿菌、雷極普羅威登菌和摩根菌為陽(yáng)性；克雷伯菌為弱陽(yáng)性；大腸埃希菌、

斯氏和產(chǎn)堿普羅威登菌為陰性。

枸椽酸鹽利用試驗(yàn)：

原理：某些細(xì)菌能利用培養(yǎng)基中的枸椽酸鹽作為唯一的碳源，也能利用其中的錢鹽作為

唯?氮源，細(xì)菌生長(zhǎng)過程中分解枸椽酸鹽產(chǎn)生碳酸鹽和分解筱鹽生成的氨，使培

養(yǎng)基變堿，使指示劑呈堿性反應(yīng)。

培養(yǎng)基：枸鹽酸鹽瓊脂斜面培養(yǎng)基

試劑：浪麝香草酚藍(lán)（pH6.0以下呈黃色，pH7.6以上呈藍(lán)色）

方法：在枸鹽酸鹽瓊脂斜面上濃密劃線，大量接種被檢菌，于35℃培養(yǎng)卜4天，逐日

觀察結(jié)果。

結(jié)果：枸鹽酸鹽瓊脂斜面上有細(xì)菌生長(zhǎng)，培養(yǎng)基變成深藍(lán)色為陽(yáng)性；無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)，培養(yǎng)

基顏色不變（淡綠色）為陰性。

應(yīng)用：有助于腸桿菌科屬間的鑒別。埃希菌屬、志賀菌屬、愛德華菌屬和耶爾森菌屬均

為陰性；產(chǎn)氣腸桿菌、沙門菌屬、克雷伯菌屬、黏質(zhì)和液化沙雷菌、某些變形桿

菌以及枸椽酸桿菌為陽(yáng)性。

13、填空題

（1）在形態(tài)和染色性上具有特征的致病菌常用方法作初步診斷。如—和_____菌。

⑵鑒定細(xì)菌常用凝集試驗(yàn)。此方法是用已知檢測(cè)未知。

（1）直接涂片鏡檢結(jié)核分枝桿菌白喉棒狀桿菌

⑵直接玻片抗體抗原

14、綜合分析題

實(shí)驗(yàn)室在對(duì)細(xì)菌培養(yǎng)時(shí)，需先制備培養(yǎng)基，根據(jù)所培養(yǎng)的細(xì)菌不同，選擇不同類型

的培養(yǎng)基，如培養(yǎng)營(yíng)養(yǎng)要求高的細(xì)菌時(shí)，需制備含血清培養(yǎng)基（即在培養(yǎng)基中加入血清）。

細(xì)菌的保存常用細(xì)菌保存液，有時(shí)也用牛奶保存，如幽門螺桿菌。

思考題：

⑴制備培養(yǎng)基過程中應(yīng)注意什么？

⑵制備含血清培養(yǎng)基時(shí)，基礎(chǔ)培養(yǎng)基和血清如何進(jìn)行消毒滅菌？用于保存菌種的牛奶

又如何進(jìn)行消毒滅菌？

?提示1：培養(yǎng)基制備過程中應(yīng)注意無(wú)菌操作，以防止微生物的污染。

?提示2：基礎(chǔ)培養(yǎng)基通常使用高壓蒸汽滅菌法滅菌，以殺滅包括細(xì)菌繁殖體和芽胞

在內(nèi)的所有微生物。含血清培養(yǎng)基和用于保存細(xì)菌的牛奶，既要對(duì)其進(jìn)行滅菌處理,

又不能破壞營(yíng)養(yǎng)成分，故常用間歇蒸汽滅菌法。

提示3：在制備培養(yǎng)基過程中，應(yīng)注意無(wú)菌操作，通?？稍诮?jīng)紫外線照射后的無(wú)菌

罩或?qū)嶒?yàn)室中進(jìn)行培養(yǎng)基的分裝。

?提示4：在準(zhǔn)備含血清培養(yǎng)液時(shí)，通常使用過濾除菌法除菌，以確保血清中的營(yíng)養(yǎng)

成分不被破壞。

細(xì)菌與環(huán)境

1、名詞解釋：正常菌群；條件致病菌；|菌群失調(diào)癥；重疊手染；］消毒;滅菌；無(wú)菌；無(wú)菌

操作；噬菌體;前噬菌體;毒性噬菌體;溶原性細(xì)菌;一過除菌法

⑴正常菌群：定居于正常人體體表及其開放性腔道中的微生物群。在正常情況下對(duì)機(jī)體有

益無(wú)害。由于在正常微生物群中以細(xì)菌為主，而且對(duì)細(xì)菌研究得較多而深入，所以將正

常微生物群通稱為正常菌群。

⑵條件致病菌：正常情況下不致病，在特定條件下可致病的正常菌群，稱條件致病菌（或:

機(jī)會(huì)致病菌）。

⑶菌群失調(diào)癥：宿主某部位正常菌群中各菌種間的比例發(fā)生較大幅度改變并超出正常范圍

的狀態(tài)稱為菌群失調(diào)。山此而引起的病癥稱為菌群失調(diào)癥。

（4）重疊感染：或稱為二重感染，是一種后果較為嚴(yán)重的菌群失調(diào)癥，即在抗菌藥物治療原

感染性疾病或預(yù)防某些微生物感染的過程中，發(fā)生的一種新感染。

⑸消毒：殺死物體上或環(huán)境中的病原微生物的方法。但不一定能殺死含芽胞的細(xì)菌或非病

原微生物。

（6）滅菌：殺滅物體上所有微生物的方法。滅菌比消毒要求高，包括殺滅細(xì)菌芽胞在內(nèi)的全

部病原微生物和非病原微生物。

⑺無(wú)菌：不存在活的微生物的意思。

⑻無(wú)菌操作：防止微生物進(jìn)入人體或其他物品的操作技術(shù)。

⑼噬菌體：是感染細(xì)菌、真菌、放線菌或螺旋體等微生物的病毒。

⑩前噬菌體：整合在細(xì)菌染色體上的噬菌體基因。

（11）毒性噬菌體：能在宿主細(xì)胞內(nèi)復(fù)制增殖，產(chǎn)生許多子代噬菌體，并最終裂解細(xì)菌的噬菌

體，稱毒性噬菌體。

?溶原性細(xì)菌：染色體上帶有前噬菌體的細(xì)菌。

?濾過除菌法：用物理阻留的方法除去液體或空氣中的細(xì)菌，達(dá)到無(wú)菌的目的。適用于不

耐高溫滅菌的物品如血清、毒素、抗生素及空氣等的除菌。生物安全柜也是根據(jù)這個(gè)原

理，利用高效空氣過濾器的過濾作用，除去空氣中的微生物，以達(dá)到保護(hù)操作對(duì)象、保

護(hù)操作者、保護(hù)環(huán)境的目的。但濾過除菌法只能除去細(xì)菌，一般不能除去病毒、支原體、

衣原體和細(xì)菌的L型。

2、正常菌群的生理作用有哪些？正常菌群轉(zhuǎn)化為機(jī)會(huì)致病菌的條件有哪些？（簡(jiǎn)要說明微

生態(tài)失調(diào)的主要原因有哪些？）

正常菌群的生理作用：

（1）生物拮抗；⑵營(yíng)養(yǎng)作用；（3）免疫作用；（4）抗衰老作用；（5）抑腫瘤作用。

正常菌群轉(zhuǎn)化為機(jī)會(huì)致病菌的條件有：

（1）抗生素的使用導(dǎo)致菌群失調(diào)；⑵正常菌群寄居部位改變；⑶宿主免疫功能低下如

免疫抑制劑使用、激素、射線照射.、細(xì)胞毒物的使用導(dǎo)致宿主免疫功能低下。

3、常用濕熱滅菌方法的種類及其效果與適用范圍。

⑴巴氏消毒法：用較低溫度殺滅液體中的病原菌或特定微生物（如結(jié)核桿菌）、保持物品中

所需不耐熱成分不被破壞的消毒方法。

持續(xù)法:61.1-62.8℃30分鐘；

瞬間法：71.7℃15-30秒;

常用于消毒牛奶、酒類。

⑵煮沸法：常用于消毒食具、刀剪、注射器等

繁殖體：煮沸100℃,5min；

芽抱：煮沸100℃,1?3h。

⑶流動(dòng)蒸氣消毒法：阿諾蒸鍋或蒸籠。

繁殖體：煮沸100℃,15?30min

⑷間歇蒸氣滅菌法：如血清培養(yǎng)基的滅菌。

⑸高壓蒸氣滅菌法：一種最有效、最徹底的滅菌方法。在103.4kPa（1.05kg/cm2）蒸氣

壓下，溫度121.3C,維持15-20min,可殺滅包括芽胞在內(nèi)的所有微生物。是普通培養(yǎng)

基、生理鹽水、手術(shù)敷料等耐高溫、耐濕物品的最佳滅菌法。

4、高壓蒸汽滅菌法所要求的條件和用途各是什么？

高壓蒸氣滅菌法是?種最常用、最有效的滅菌方法，是在密閉的蒸氣容器中進(jìn)行。隨著

壓力升高，蒸氣的溫度也相應(yīng)升高，在103.4kpa蒸氣壓下，溫度達(dá)到121.3℃,維持15?

20min,可殺滅包括細(xì)菌芽胞在內(nèi)的微生物。適用于耐高溫、耐潮濕物品的滅菌，如一般培

養(yǎng)基、生理鹽水、手術(shù)用品等。但該溫度還不足以滅活骯粒和熱原質(zhì)。

5、請(qǐng)敘述紫外線的殺菌作用機(jī)制、特點(diǎn)和注意事項(xiàng)。

⑴紫外線（UV）的殺菌機(jī)制主要是損傷細(xì)菌DNA構(gòu)型，使一條DNA鏈上相鄰的兩個(gè)胸

腺嚅喔共價(jià)結(jié)合而形成二聚體，從而干擾DNA的復(fù)制與轉(zhuǎn)錄，導(dǎo)致細(xì)菌死亡。

⑵特點(diǎn)與注意事項(xiàng)：

①UV的殺菌作用與波長(zhǎng)有關(guān)：240-300nm波長(zhǎng)的紫外線有殺菌作用，其中以265-266nm

最強(qiáng)，因其正好與DNA的吸收光譜一致。

②紫外線的穿透力極弱：不能透過玻璃或紙張等，故一般只用于空氣消毒及物體表面消毒。

③殺菌波長(zhǎng)的UV對(duì)人體皮膚、眼睛有損傷作用，使用時(shí)應(yīng)注意防護(hù)。

④一般用低壓水銀蒸氣燈做紫外線殺菌處理。

6、簡(jiǎn)述乙醇、碘酊、過氧化氫、過氧乙酸、戊二醛、環(huán)氧乙烷消毒滅菌的主要特點(diǎn)。

乙醇消毒滅菌的機(jī)制、特點(diǎn)及主要用途：

⑴機(jī)制：去除菌細(xì)胞膜中的脂類，并使菌體蛋白質(zhì)變性與凝固。

⑵特點(diǎn)與主要用途：

①以濃度為70%?75%時(shí)殺菌力最強(qiáng)。

②易揮發(fā)，需加蓋保存，定期調(diào)整濃度。

③主要用于皮膚消毒和浸泡體溫計(jì)。

2.0?2.5%碘酊、0.5%碘伏：多用于皮膚黏膜、體溫計(jì)以及其他物品的表面消毒。

過氧化氫：

機(jī)理：導(dǎo)致酶蛋白-SH基轉(zhuǎn)變?yōu)?S-S-,導(dǎo)致酶活性喪失。3%?6%過氧化氫killmost

bacteria;10%過氧化氫killallmicroorganismincludingspore.

用途：可用于物品表面和皮膚黏膜消毒（如口腔、創(chuàng)口的消毒、厭氧菌感染的消毒）。

但對(duì)金屬制品有腐蝕作用。

0.2%~0.3%過氧乙酸：類似于過氧化氫。

2%戊二醛：

機(jī)理：細(xì)菌蛋白和核酸的烷化作用。

特點(diǎn)：廣譜，高效，快速。

用途：戊二醛以0.3%NaHCO3調(diào)整pH至7.5?8.5,配成2%水溶液，浸泡5min,適用于

精密儀器、內(nèi)窺鏡（不能用熱力滅菌法進(jìn)行滅菌）等的滅菌。

環(huán)氧乙烷：

種類：雜環(huán)類化合物，沸點(diǎn)10.8C,氣體消毒劑。

機(jī)理：細(xì)菌蛋白和核酸的烷化作用。

特點(diǎn)：能穿透包裹物，廣譜高效，殺滅芽胞，易燃，對(duì)人有毒性。

用途：已廣泛用于醫(yī)療器械、一次性用具的滅菌。

常用的滅菌要求是濃度800?1200mg/L；相對(duì)濕度55%~60%；50℃；6h。

7、影響消毒滅菌效果的因素有哪些？

（1）消毒劑的性質(zhì)、濃度和作用時(shí)間

消毒劑種類不同，其殺菌效果亦有很大差別，大多數(shù)濃度越高，殺菌效果越好，但醇類

例外，作用時(shí)間越長(zhǎng)，殺菌效果越好。

⑵微生物的種類與數(shù)量：菌齡、有無(wú)特殊構(gòu)造等。

同種消毒劑對(duì)不同的微生物殺菌效果也不一致，且微生物數(shù)量越多，所需消毒的時(shí)間

就越長(zhǎng)。

⑶溫度、濕度：溫度升高可提高消毒效果。

⑷酸堿度：酸堿度可影響消毒劑的殺菌效果。

⑸有機(jī)物：環(huán)境中有機(jī)物的存在，可影響消毒劑的效果。生理鹽水清洗污染創(chuàng)口表面。

8、化學(xué)消毒劑的殺菌機(jī)制有哪些？各自種類的代表是什么？

⑴使菌體蛋白變性或凝固，導(dǎo)致細(xì)菌死亡：酚類（高濃度）、醇類、重金屬鹽類、酸堿類、

醛類

⑵干擾細(xì)菌的酶系統(tǒng)和代謝：某些氧化劑、重金屬鹽類（低濃度）與細(xì)菌酶蛋白的-SH基結(jié)

合而使有關(guān)酶失去活性，導(dǎo)致細(xì)菌代謝發(fā)生障礙而死亡；

⑶損傷細(xì)胞膜，能降低菌細(xì)胞的表面張力并增加其通透性，胞外液體內(nèi)滲，導(dǎo)致細(xì)菌破裂:

酚類（低濃度）、表面活性劑、脂溶劑

9、毒性噬菌體增殖以何種方式增殖？它的增殖過程包括哪幾個(gè)階段？

毒性噬菌體以復(fù)制方式增殖。它的增殖過程包括吸附，穿入，生物合成和裝配、成熟與

釋放等步驟。

10、填空題

⑴正常菌群的組成和數(shù)量發(fā)生明顯改變時(shí)，可出現(xiàn),由此產(chǎn)生的一系列臨床癥狀

稱為。

⑵當(dāng)正常菌群發(fā)生_________或時(shí)，可成為_________菌。

⑶正常菌群對(duì)機(jī)體的有益作用是、、、

和O

⑷引起微生態(tài)失調(diào)動(dòng)主要原因是、和..

（5）毒性噬菌體以—方式進(jìn)行增殖，增殖過程包括—、—、—、一幾個(gè)階段。

（6）噬菌體參與的基因轉(zhuǎn)移與重組的方式有和o

⑺噬菌體的化學(xué)組成主要為、.

（8）溫和噬菌體有三種存在形式、、o

⑴菌群失調(diào)菌群失調(diào)癥

⑵寄居部位改變菌群失調(diào)條件致病菌

⑶生物屏障作用營(yíng)養(yǎng)作用免疫作用抗衰老作用抗腫瘤作用

（4）正常菌群寄居部位改變?yōu)E用抗生素導(dǎo)致菌群失調(diào)機(jī)體免疫功能降低

⑸復(fù)制吸附穿入生物合成成熟與釋放

（6）轉(zhuǎn)導(dǎo)溶原性轉(zhuǎn)換

⑺核酸蛋白質(zhì)

⑻游離的具有感染性的噬菌體顆粒宿主胞質(zhì)內(nèi)類似質(zhì)粒形式的噬菌體核酸前噬菌體

細(xì)菌的遺傳與變異

1、名詞解釋：陡化；接合：轉(zhuǎn)導(dǎo)；溶原性轉(zhuǎn)換；|耐藥性變異;卡介苗（BCG）

⑴轉(zhuǎn)化：是供體菌裂解游離的DNA片段被受體菌直接攝取，使受體菌獲得供體菌的遺傳性

狀。（轉(zhuǎn)化是指受體菌直接攝取供體菌游離的DNA片段，從而使受體菌獲得供體菌的遺傳

性狀的過程。）

⑵接合：是細(xì)菌通過性菌毛相互溝通，將遺傳物質(zhì)（主要是質(zhì)粒DNA）從供體菌轉(zhuǎn)移給受

體菌，使受體菌獲得新的性狀。

⑶轉(zhuǎn)導(dǎo)：是以溫和噬菌體為載體，將供體菌的一段DNA轉(zhuǎn)移到受體菌內(nèi)，使受體菌獲得新

的性狀。

（4）溶原性轉(zhuǎn)換：噬菌體感染細(xì)菌時(shí)，噬菌體作為供體，宿主菌染色體中整合了噬菌體的DNA

片段，而獲得新的遺傳性狀。

⑸耐藥性變異：細(xì)菌對(duì)某種抗菌藥物由敏感變成耐藥的變異稱耐藥性變異

（6）卡介苗：卡-介二氏將有毒力的牛型結(jié)核分枝桿菌接種在含有膽汁、甘油、馬鈴薯培養(yǎng)基

上，經(jīng)過13年傳230代，終于獲得一株毒力減弱但仍保持免疫原性的變異株，即卡介苗。

2、常見的細(xì)菌變異現(xiàn)象有哪些？

⑴形態(tài)、結(jié)構(gòu)變異：如L型細(xì)菌的產(chǎn)生；莢膜、芽抱、鞭毛的形成與缺失。

⑵菌落變異：細(xì)菌S-R變異

⑶毒力變異：毒力增強(qiáng)的變異與毒力減弱的變異

（4）抗原性變異：O抗原與H抗原變異；H抗原的I相與n相的互變。

⑸耐藥性變異：細(xì)菌對(duì)某種抗菌藥物由敏感變成耐藥的變異稱耐藥性變異。

（6）酶活性變異

3、簡(jiǎn)述細(xì)菌耐藥性獲得的主要機(jī)制有哪些？

⑴鈍化酶的產(chǎn)生

⑵藥物作用靶位發(fā)生改變

⑶細(xì)胞壁的通透性的改變，抗菌藥物的滲透障礙

（4）主動(dòng)外排機(jī)制：細(xì)菌主動(dòng)外排系統(tǒng)的過度表達(dá)

k、醫(yī)學(xué)上重要的質(zhì)粒的種類有哪些？簡(jiǎn)述質(zhì)粒的主要特征。

醫(yī)學(xué)上重要質(zhì)粒的種類：①致育質(zhì)粒（F質(zhì)粒），②耐藥質(zhì)粒（R質(zhì)粒），③毒力質(zhì)粒（Vi

質(zhì)粒），④細(xì)菌素質(zhì)粒：如Col質(zhì)粒，⑤代謝質(zhì)粒。

質(zhì)粒的主要特點(diǎn)：

（1）具有自我復(fù)制的能力；

⑵編碼產(chǎn)物賦予細(xì)菌某些性狀特征：如sexpilus、細(xì)菌素、毒素和耐藥性等；

⑶可自行丟失與消除，非生命活動(dòng)所必需；

（4）質(zhì)粒的轉(zhuǎn)移性：可通過接合、轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)導(dǎo)等方式在細(xì)菌間轉(zhuǎn)移；

⑸質(zhì)粒的不相容性與相容性。

5、細(xì)菌基因的轉(zhuǎn)移與重組方式有幾種？

細(xì)菌基因轉(zhuǎn)移與重組的方式有：轉(zhuǎn)化、接合、轉(zhuǎn)導(dǎo)、溶原性轉(zhuǎn)換和原生質(zhì)體融合等。

6、簡(jiǎn)述F+菌、F.菌、Hfr的區(qū)別以及F+菌和Hfr的共同特點(diǎn)。

F+菌：帶有F質(zhì)粒具有性菌毛的細(xì)菌，這種細(xì)菌可通過性菌毛將遺傳物質(zhì)傳遞給F菌。

F.菌：不帶有F質(zhì)粒無(wú)性菌毛的細(xì)菌。

Hfr：當(dāng)F質(zhì)粒進(jìn)入受體細(xì)菌并將質(zhì)粒DNA整合到染色體上，這種細(xì)菌稱為Hfr（染色體

上整合有F質(zhì)粒的細(xì)菌）。

F+菌和Hfr菌的共同特點(diǎn)是：兩者都有性菌毛，均可通過接合方式進(jìn)行基因轉(zhuǎn)移。

7^填空題

⑴F-菌亦稱,可經(jīng)方式變?yōu)镕+菌。

⑵R質(zhì)粒可通過、和等基因轉(zhuǎn)移和重組的方式在細(xì)菌間傳遞耐

藥性，其中最主要的方式為。

⑶通常把細(xì)菌的鞭毛從有到無(wú)的變異，稱為變異，把細(xì)菌因受青霉素、免疫血清

等作用而致細(xì)胞壁缺陷稱為變異。

⑴雌菌，接合

⑵轉(zhuǎn)化，接合，轉(zhuǎn)導(dǎo)，接合

⑶H-0,細(xì)菌L型

細(xì)菌的感染與免疫

1、名詞解釋：展襲力；|毒血癥;膿毒血癥:敗血癥;菌血癥;收卜源性感染；內(nèi)源性感染

（1）侵襲力：致病菌能突破宿主皮膚、粘膜生理屏障等免疫防御機(jī)制，進(jìn)入機(jī)體定居、繁殖

和擴(kuò)散的能力。

⑵毒血癥是指致病菌侵入宿主機(jī)體后，只在機(jī)體局部生長(zhǎng)繁殖，病菌不進(jìn)入血循環(huán)，但其

產(chǎn)生的外毒素入血。外毒素經(jīng)血到達(dá)特定的靶器官和組織，引起特征性的毒性癥狀。例

如白喉、破傷風(fēng)等。

⑶膿毒血癥是指化膿性細(xì)菌侵入血流后，在其中大量繁殖，并通過血流擴(kuò)散到機(jī)體其他組

織器官，產(chǎn)生新的化膿性病灶。例如金黃色葡萄球菌（S.aureus）引起肝膿腫、腎膿腫、

肺膿腫。

⑷敗血癥是指病原菌侵入血流并在其中大量繁殖，產(chǎn)生毒性代謝產(chǎn)物（包括內(nèi)毒素和外毒

素等）所引起嚴(yán)重的全身性中毒癥狀。例如高熱、皮膚和粘膜瘀斑、肝脾腫大等。

⑸菌血癥是指病原菌由局部入血，一過性從血流到達(dá)易感部位后再行繁殖而致病，例如傷

寒早期有菌血癥。

（6）外源性感染：病原菌來源于宿主體外的感染。

（7）內(nèi)源性感染：病原菌來自病人自身的體內(nèi)或體表。多數(shù)由正常菌群引起；少數(shù)是以潛伏

狀態(tài)存在于體內(nèi)的致病菌引起，如結(jié)核分枝桿菌、HSV、CMVo

2、細(xì)菌性感染的發(fā)生與哪些因素有關(guān)？（細(xì)菌的致病機(jī)制如何？）

①侵入體內(nèi)的微生物（細(xì)菌）的數(shù)量

「侵襲力：菌體表面結(jié)構(gòu)與侵襲性醐等

②侵入體內(nèi)的微生物（細(xì)菌）的毒力-

'毒素：內(nèi)、外毒素

③侵入途徑：呼吸道、消化道、皮膚（創(chuàng)傷）、血液、人畜共患病的傳播（節(jié)支動(dòng)物媒介傳

播）、性接觸等

④機(jī)體免疫力

3、內(nèi)毒素與外毒素的比較。______________________________________________

區(qū)別點(diǎn)外毒素內(nèi)毒素

⑴來源G*菌和部分G菌G菌

⑵存在從活菌分泌出，少數(shù)菌崩解后釋出Cellwall成分，菌裂解后釋出

部位

⑶化學(xué)蛋白質(zhì)，分子結(jié)構(gòu)為A-B模式脂多糖

成分

⑷穩(wěn)定60-80℃,30min被破壞160℃,2-4h才被破壞

性

⑸毒性強(qiáng)，對(duì)組織器官有選擇性毒害效應(yīng),較弱，各菌的毒性效應(yīng)大致相同，引起發(fā)

作用可分為神經(jīng)毒素、細(xì)胞毒素和腸毒熱、白細(xì)胞增多、微循環(huán)障礙、休克、DIC

素三大類，引起特殊臨床表現(xiàn)等。

（6）抗原強(qiáng)，刺激機(jī)體產(chǎn)生抗毒素；甲醛液弱，刺激機(jī)體產(chǎn)生的中和抗體作用弱；甲

性處理脫毒形成類毒素醛液處理不形成類毒素

4、簡(jiǎn)述細(xì)菌性感染的類型有哪些？全身細(xì)菌性感染類型有哪些？

細(xì)菌性感染的類型有：

⑴根據(jù)臨床癥狀可分為：隱性感染、顯性感染、。其中顯性感染又可根據(jù)病情緩急分急性感

染、慢性感染；

⑵根據(jù)感染部位分：局部感染和全身感染，其中全身感染又可分為毒血癥、內(nèi)毒素血癥、

菌血癥、敗血癥和膿毒血癥。

5、病原菌標(biāo)本的采集與送檢要注意什么？

采集細(xì)菌標(biāo)本的一般原則是：

⑴無(wú)菌操作。避免雜菌污染標(biāo)本；

⑵因時(shí)取材。根據(jù)疾病特點(diǎn)采集不同標(biāo)本（不同病期取不同標(biāo)本）；在采取局部病變標(biāo)本

處，不可用消毒劑；

⑶盡早取材。在使用抗生素之前采集，對(duì)已用抗菌藥患者的標(biāo)本，應(yīng)注明藥物名稱；

（4）因地取材。盡可能采集病變明顯部位的材料；

⑸標(biāo)本必須新鮮。采集后盡快送檢（多數(shù)細(xì)菌標(biāo)本可冷藏保存或運(yùn)送）。

【附】病毒性疾病標(biāo)本的采集與送檢方法原則基本，

病毒感染性疾病實(shí)驗(yàn)室診斷標(biāo)本采取基本原則與細(xì)菌相似，即：早期采樣，冷藏速送。

但還要特別注意下列原則：

⑴被雜菌或易受污染的標(biāo)本，在進(jìn)行分離培養(yǎng)時(shí)應(yīng)該使用抗生素（加入高濃度青霉素、鏈

霉素或慶大霉素處理）；

⑵標(biāo)本的運(yùn)輸和保存：若標(biāo)本采集地點(diǎn)離病毒實(shí)驗(yàn)室較遠(yuǎn)，可將標(biāo)本置甘油緩沖鹽水中低

溫保存送檢；

⑶進(jìn)行病毒血清學(xué)診斷時(shí)，應(yīng)采取雙份血清即在發(fā)病初期和病后2-3w內(nèi)各取份血清，

以對(duì)比抗體效價(jià)變化。

6、填空題

⑴感染的后果與病原菌本身的、侵入的和密切相關(guān)。

⑵細(xì)菌的毒力由和構(gòu)成。

⑶內(nèi)毒素主要是菌細(xì)胞壁中的成分。其他微生物如、

和中亦存在類似物質(zhì)。

（4）內(nèi)毒素引起發(fā)熱的機(jī)制是作用于機(jī)體的細(xì)胞，使之產(chǎn)生具有的細(xì)胞因子。

⑸因?yàn)橥舛舅氐幕瘜W(xué)成分是，所以可用處理制備成用于預(yù)防疾病。

（6）根據(jù)外毒素的作用機(jī)制不同，可將其分為、和三類。

⑺多數(shù)外毒素的分子結(jié)構(gòu)由和亞單位組成，其功能前者是,后者

是