抗菌藥物敏感試驗(yàn)下

關(guān)于抗菌藥物敏感試驗(yàn)下單藥紙片搭橋法第2頁,共51頁，2024年2月25日，星期天2.棋盤稀釋法—定量試驗(yàn)（1）原理將甲乙兩藥的各種稀釋度加以組合，組成聯(lián)合藥敏管。同時(shí)兩種藥物每一稀釋度都有一只加單一藥物的單獨(dú)藥敏管。根據(jù)單一藥物對被檢菌的MIC和聯(lián)合藥敏管中的抑菌情況，可精確測定兩藥在適當(dāng)濃度比例下所產(chǎn)生的相互作用。第3頁,共51頁，2024年2月25日，星期天（2）試驗(yàn)步驟1）確定單藥的MIC2）確定聯(lián)合藥敏的藥物稀釋度每一稀釋度濃度為聯(lián)合藥敏管內(nèi)所需單藥終濃度的2倍用MH液體培養(yǎng)基將甲乙兩藥稀釋6~8個(gè)稀釋度第4頁,共51頁，2024年2月25日，星期天3）棋盤狀排列無菌試管排列6排無菌試管，每排6支4）加甲、乙兩藥（分別從橫、豎排加入）每管各1ml，橫排和縱排的第一管為無藥對照，第一排為單藥對照管5）加待測菌液各管加入被檢菌液0.01ml菌液終濃度：105CFU/ml第5頁,共51頁，2024年2月25日，星期天32/032/0.532/132/232/432/816/016/0.516/116/216/416/88/08/0.58/18/28/48/84/04/0.54/14/24/44/82/02/0.52/12/22/42/80/00/0.50/10/20/40/8甲藥稀釋乙藥稀釋例：甲藥MIC單獨(dú)16mg/L

乙藥MIC單獨(dú)4mg/L第6頁,共51頁，2024年2月25日，星期天結(jié)果判讀FIC：部分抑菌濃度指數(shù)甲藥聯(lián)合時(shí)MIC乙藥聯(lián)合時(shí)MICFIC=+

甲藥單獨(dú)時(shí)MIC乙藥單獨(dú)時(shí)MICFIC<0.5協(xié)同作用

0.5~1.0相加作用

1~2無關(guān)作用

>2拮抗作用

第7頁,共51頁，2024年2月25日，星期天------------++++--++++--++++--++++--32168420甲藥濃度

00.5

1248乙藥FIC=8/16+4/4=1.5第8頁,共51頁，2024年2月25日，星期天------+-----++----+++---++++--+++++-FIC=4/32+2/8=0.375FIC=8/32+1/8=0.37532168420甲藥

00.5

1248乙藥第9頁,共51頁，2024年2月25日，星期天第五章細(xì)菌的分類與命名第一節(jié)概述一、基本概念1.分類（1）人為分類法：以形態(tài)、生理生化特征為依據(jù)（2）系統(tǒng)分類法：以細(xì)菌大分子物質(zhì)結(jié)構(gòu)的同源程度分類2.命名3.鑒定第10頁,共51頁，2024年2月25日，星期天二、分類等級(jí)細(xì)菌的分類層次界、門、綱、目、科、屬、種1.種(species)是細(xì)菌分類的基本單位。生物學(xué)性狀基本相同的細(xì)菌群體構(gòu)成一個(gè)菌種；2.菌屬：性狀相近關(guān)系密切的若干菌種組成一個(gè)菌屬（genus）第11頁,共51頁，2024年2月25日，星期天3.亞種和型：同一菌種的各個(gè)細(xì)菌，雖性狀基本相同，但在某些方面仍有一定差異，差異較明顯的稱亞種(subspecies,subsp.)，差異小的則為型(type)。血清型：依據(jù)抗原結(jié)構(gòu)的差異噬菌體型：噬菌體的敏感性生物型：生化反應(yīng)和生物學(xué)性狀第12頁,共51頁，2024年2月25日，星期天4.菌株：對不同來源的同一菌種的細(xì)菌稱為該菌的不同菌株(strain)。標(biāo)準(zhǔn)菌株(standardstrain)或模式菌株(typestrain）：具有某種細(xì)菌典型特征的菌株。第13頁,共51頁，2024年2月25日，星期天三、細(xì)菌的命名法拉丁雙名法

Escherichiacoli

（E.coli）屬名種名中文：大腸埃希菌種名屬名

第14頁,共51頁，2024年2月25日，星期天第二節(jié)細(xì)菌的分類方法一、生物學(xué)特性分類法傳統(tǒng)分類法、數(shù)值分類法二、遺傳學(xué)分類法-系統(tǒng)分類法DNA堿基比例的測定DNA堿基比例指DNA分子中G、C所占的摩爾百分比值，反映細(xì)菌間DNA分子同源程度核酸分子雜交法rRNA寡核苷酸分析第15頁,共51頁，2024年2月25日，星期天第三十五章

細(xì)菌耐藥性檢測第16頁,共51頁，2024年2月25日，星期天第一節(jié)抗菌藥物種類及作用機(jī)制1.抗菌藥物（antibacterialagents）指對病原菌具有抑制或殺滅作用、用于預(yù)防和治療細(xì)菌性感染的藥物，包括抗生素（antibiotics）和化學(xué)合成的藥物。2.抗生素（antibioticagents）：微生物在其代謝過程中產(chǎn)生的能殺滅或抑制其它特異病原微生物的產(chǎn)物。抗生素分子量小，低濃度就能發(fā)揮其生物活性，有天然和人工半合成兩類。第17頁,共51頁，2024年2月25日，星期天

抗菌藥物的種類分類代表藥物 β-內(nèi)酰胺類大環(huán)內(nèi)酯類氨基糖苷類四環(huán)素類氯霉素類化學(xué)合成藥物抗結(jié)核藥物多肽類抗生素青霉素類、頭孢霉素類等紅霉素、螺旋霉素等鏈霉素、慶大霉素等四環(huán)素、多西環(huán)素等氯霉素、甲砜霉素等喹諾酮類（氟哌酸、環(huán)丙沙星）利福平、異煙肼多粘菌素類、萬古霉素按化學(xué)結(jié)構(gòu)和性質(zhì)第18頁,共51頁，2024年2月25日，星期天一、β-內(nèi)酰胺類（β-lactam）

化學(xué)結(jié)構(gòu)中含有β-內(nèi)酰胺環(huán)的抗生素。β-內(nèi)酰胺抗生素分子側(cè)鏈的組成形式多樣，形成了抗菌譜不同、臨床藥理學(xué)特性各異的多種不同β-內(nèi)酰胺抗生素。第19頁,共51頁，2024年2月25日，星期天青霉素的母核第20頁,共51頁，2024年2月25日，星期天?青霉素（penicillin）類：青霉素G、甲氧西林、阿莫西林、替卡西林、派拉西林等?頭孢菌素（cephalosporin）類：一、二、三、四代

?頭霉西類：如頭孢西丁。?單環(huán)類：如氨曲南。?碳青霉素烯類：亞胺培南、美羅培南

?β-內(nèi)酰胺酶抑制劑：如舒巴坦、克拉維酸β-內(nèi)酰胺類藥物種類

第21頁,共51頁，2024年2月25日，星期天

作用機(jī)制與青霉素結(jié)合蛋白（PBP）結(jié)合，抑制肽聚糖合成中所需的轉(zhuǎn)肽酶，阻止肽聚糖鏈的交叉連接，干擾細(xì)胞壁合成。繁殖期殺菌藥第22頁,共51頁，2024年2月25日，星期天肽聚糖合成過程中的關(guān)鍵步驟細(xì)胞漿內(nèi)：合成N-乙酰胞壁酸-五肽細(xì)胞膜上：合成N-乙酰葡萄糖胺-N-乙酰胞壁酸-五肽-磷脂細(xì)胞膜外：完成肽聚糖的交叉連接第23頁,共51頁，2024年2月25日，星期天肽聚糖合成過程中需要的酶（PBP）轉(zhuǎn)糖基酶：催化β-1，4糖苷鍵形成轉(zhuǎn)肽酶：使N-乙酰胞壁酸-五肽脫去末端的D-丙氨酸，與另一條肽鏈的肽橋（五肽交聯(lián)橋）交聯(lián)，形成三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)羧肽酶：催化五肽末端D-丙氨酸水解內(nèi)肽酶：催化水解已合成肽聚糖上的肽鍵細(xì)菌生存必需的是轉(zhuǎn)肽酶和轉(zhuǎn)糖基酶第24頁,共51頁，2024年2月25日，星期天第25頁,共51頁，2024年2月25日，星期天二、氨基糖苷類1.種類鏈霉素、慶大霉素、卡那霉素、妥布霉素、阿米卡星、丁胺卡那霉素等2.作用機(jī)制選擇性地與核糖體30S小亞基結(jié)合，影響蛋白質(zhì)合成的全過程。靜止期殺菌藥第26頁,共51頁，2024年2月25日，星期天三、喹諾酮類1.種類吡哌酸、氟哌酸、環(huán)丙沙星、氧氟沙星、左氧氟沙星、羅美沙星、諾氟沙星等2.作用機(jī)制作用于細(xì)菌的DNA旋轉(zhuǎn)酶，干擾DNA合成第27頁,共51頁，2024年2月25日，星期天四、大環(huán)內(nèi)酯類1.種類紅霉素、羅紅霉素、螺旋霉素、吉他霉素、麥迪霉素、阿齊霉素等2.作用機(jī)制與細(xì)菌核糖體50S亞基結(jié)合，抑制轉(zhuǎn)肽作用，影響核蛋白位移，從而抑制蛋白質(zhì)合成。第28頁,共51頁，2024年2月25日，星期天五、磺胺類1.種類磺胺嘧啶、甲氧芐胺嘧啶、復(fù)方新諾明等2.作用機(jī)制影響核酸合成，抑制細(xì)菌生長繁殖第29頁,共51頁，2024年2月25日，星期天六、其他抗生素1.四環(huán)素類種類：四環(huán)素、土霉素、多西環(huán)素（強(qiáng)力）作用機(jī)制：與細(xì)菌30S亞基結(jié)合，抑制蛋白質(zhì)合成2.氯霉素類種類：氯霉素、甲砜霉素作用機(jī)制：與細(xì)菌50S亞基結(jié)合，抑制蛋白質(zhì)合成第30頁,共51頁，2024年2月25日，星期天3.硝基呋喃類種類：呋喃妥因、呋喃唑酮（痢特靈）作用機(jī)制：干擾細(xì)菌體內(nèi)氧化還原酶系統(tǒng)4.硝基咪唑類種類：甲硝唑、替硝唑作用機(jī)制：阻斷細(xì)菌DNA合成第31頁,共51頁，2024年2月25日，星期天抗菌藥物的作用機(jī)制第32頁,共51頁，2024年2月25日，星期天抗菌藥物的主要作用部位喹諾酮類林可霉素類氨基糖苷類酮康唑環(huán)絲氨酸利福平紅霉素制霉菌素桿菌肽甲氧芐胺嘧啶四環(huán)素類兩性霉素B萬古霉素磺胺藥氯霉素多粘菌素類β-內(nèi)酰胺類抑制核酸合成核糖體細(xì)胞膜細(xì)胞壁第33頁,共51頁，2024年2月25日，星期天第二節(jié)細(xì)菌的耐藥性和產(chǎn)生機(jī)制細(xì)菌的耐藥性：對某種藥物敏感細(xì)菌變成對該藥物耐受機(jī)制產(chǎn)生耐藥酶：水解酶、鈍化酶等藥物作用的靶位點(diǎn)改變細(xì)胞膜的通透性改變細(xì)菌主動(dòng)外排

第34頁,共51頁，2024年2月25日，星期天一、產(chǎn)生藥物滅活酶（一）水解酶-β-內(nèi)酰胺酶是以β-內(nèi)酰胺類抗菌藥物為水解底物的多種同類型的降解酶。包括廣譜內(nèi)酰胺酶、超廣譜酶β-內(nèi)酰胺（ESBLs）、金屬酶、AmpC酶等細(xì)菌產(chǎn)生的β-內(nèi)酰胺酶可特異性打開β-內(nèi)酰胺環(huán)，使其完全失去抗菌活性。ESBLs陽性菌：對所有β-內(nèi)酰胺類藥物耐藥第35頁,共51頁，2024年2月25日，星期天（二）鈍化酶產(chǎn)生1.氨基糖苷類鈍化酶2.氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶3.紅霉素和其他滅活酶（三）修飾酶1.乙酰轉(zhuǎn)移酶AAC2.核苷轉(zhuǎn)移酶ANT3.磷酸轉(zhuǎn)移酶APH第36頁,共51頁，2024年2月25日，星期天第37頁,共51頁，2024年2月25日，星期天第38頁,共51頁，2024年2月25日，星期天1.青霉素結(jié)合蛋白改變2.DNA解旋酶改變?nèi)?、抗菌藥物滲透障礙外膜蛋白減少四、藥物的主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)外排作用二、藥物作用靶位的改變第39頁,共51頁，2024年2月25日，星期天第三節(jié)細(xì)菌耐藥性檢查方法常用方法耐甲氧西林葡萄球菌檢測克林霉素誘導(dǎo)耐藥試驗(yàn)?zāi)c球菌高水平氨基糖苷類耐藥β內(nèi)酰胺酶檢測超廣譜β內(nèi)酰胺酶紙片法檢測

第40頁,共51頁，2024年2月25日，星期天一、β-內(nèi)酰胺酶檢測原理：β-內(nèi)酰胺酶是一類水解青霉素、頭孢菌素類抗生素的滅活酶；該酶位于G+球菌菌體外，G-桿菌周漿間隙。檢測方法：常用頭孢硝噻吩紙片法第41頁,共51頁，2024年2月25日，星期天頭孢硝塞吩紙片法（nitrocefintest）頭孢硝塞吩的內(nèi)酰胺環(huán)被β-內(nèi)酰胺酶打開，基質(zhì)由黃色變?yōu)榧t色。G+菌直接取培養(yǎng)物G-菌取細(xì)菌裂解液第42頁,共51頁，2024年2月25日，星期天二、ESBLs檢測ESBLs：擴(kuò)大了原來的底物譜，可以水解青霉素和一、二、三代頭孢菌素以及單環(huán)類抗生素。1.紙片法檢測雙相紙片試驗(yàn)2.液體稀釋法檢測第43頁,共51頁，2024年2月25日，星期天篩選試驗(yàn)：頭孢泊肟、頭孢他啶、氨曲南、頭孢噻肟確證試驗(yàn)：頭孢他啶、頭孢他啶/克拉維酸頭孢噻肟頭孢噻肟/克拉維酸第44頁,共51頁，2