組織學(xué)與胚胎學(xué)緒論 培訓(xùn)教學(xué)課件

組織學(xué)與胚胎學(xué)

Histology

and

Embryology第一頁，共二十四頁。緒論

Introduction組織學(xué)

histology第二頁，共二十四頁。組織學(xué)(histology)：研究機(jī)體微細(xì)結(jié)構(gòu)及其相關(guān)功能的科學(xué)。組織上皮組織結(jié)締組織肌肉組織神經(jīng)組織細(xì)胞細(xì)胞間質(zhì)器官系統(tǒng)人體細(xì)胞cell：是機(jī)體形態(tài)結(jié)構(gòu)與功能的基本單位。細(xì)胞間質(zhì)intracellular：由細(xì)胞分泌產(chǎn)生，對(duì)細(xì)胞起支持、營(yíng)養(yǎng)、保護(hù)等作用，構(gòu)成細(xì)胞生存的微環(huán)境。組織tissue：由一些形態(tài)結(jié)構(gòu)相似、生理功能相近的細(xì)胞和細(xì)胞間質(zhì)組成的群體結(jié)構(gòu)，是構(gòu)成機(jī)體器官的基本成分。分為上皮組織、結(jié)締組織、肌組織和神經(jīng)組織等4種基本組織。器官organ：由組織有機(jī)組合而成，具有一定的形態(tài)結(jié)構(gòu)，并執(zhí)行特定的生理功能。如心、肝、脾、肺、腎。系統(tǒng)system：由一些結(jié)構(gòu)連續(xù)、功能相關(guān)的器官組合而成，完成連續(xù)的生理活動(dòng)。一、組織學(xué)的定義和研究?jī)?nèi)容第三頁，共二十四頁。組織學(xué)結(jié)構(gòu)觀察組織學(xué)結(jié)構(gòu)光鏡結(jié)構(gòu)：用光學(xué)顯微鏡觀察的結(jié)構(gòu)(lightmicroscope，LM，簡(jiǎn)稱光鏡)電鏡結(jié)構(gòu)：又稱超微結(jié)構(gòu)，電子顯微鏡下觀察的結(jié)構(gòu)(electronmicroscope,EM，簡(jiǎn)稱電鏡)第四頁，共二十四頁。二、組織學(xué)的常用研究方法問題解決方法觀察對(duì)象太小顯微鏡放大觀察對(duì)象無色，無反差染色(如HE染色)觀察對(duì)象生化成分不同組織化學(xué)、免疫組織化學(xué)觀察對(duì)象是活體培養(yǎng)組織學(xué)研究過程中存在的問題和解決方法第五頁，共二十四頁。組織學(xué)與胚胎學(xué)最常用的技術(shù)，最大放大倍數(shù)常為1000倍。1.切片術(shù)最常用組織切片標(biāo)本制備技術(shù)基本程序：①取材：0.5cm

②固定：甲醛、乙醇③脫水：如果是冰凍切片則不需要此步驟④包埋：石蠟、火棉膠、樹脂⑤切片：組織切片機(jī)、冰凍切片機(jī)⑥脫蠟：如果是石蠟包埋則需要此步驟⑦染色：最常用染色方法為HE染色⑧封片：2.非切片法：涂片法、鋪片法、磨片法等。(一)光學(xué)顯微鏡技術(shù)第六頁，共二十四頁。常用染色方法：HE染色蘇木精(Hematoxylin)堿性染料細(xì)胞核中的染色質(zhì)細(xì)胞質(zhì)中的核糖體染成藍(lán)色(嗜堿性)染成紅色

(嗜酸性)細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞間質(zhì)成份伊紅(Eosin)酸性染料第七頁，共二十四頁。嗜堿性：對(duì)堿性燃料有較強(qiáng)親和力，可使細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)及細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的核糖體等結(jié)構(gòu)染成藍(lán)紫色嗜酸性：對(duì)酸性染料有較強(qiáng)親和力，可使多數(shù)細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)染成粉紅色

中性：與兩種染液親合力都不強(qiáng)組織結(jié)構(gòu)的嗜色性嗜堿性嗜酸性第八頁，共二十四頁。

A嗜銀性B嗜鉻性C異染性其它染色方法第九頁，共二十四頁。普通光學(xué)顯微鏡

(lightmicroscope，LM)是觀察組織細(xì)胞微細(xì)結(jié)構(gòu)最常用的工具光學(xué)部分：起放大作用光鏡的分辨率約為0.2μm可放大1500倍左右機(jī)械部分：第十頁，共二十四頁。⑷倒置顯微鏡(invertedmicrscope)⑸暗視野顯微鏡(darkfieldmicroscope)⑹偏光顯微鏡(polarizationmicroscope)幾種特殊光學(xué)顯微鏡術(shù)⑴相差顯微鏡(phasecontrastmicroscope)用于觀察生活細(xì)胞和末經(jīng)染色細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)⑵熒光顯微鏡(fluorescencemicrscope)

是用以觀察細(xì)胞、組織內(nèi)熒光物質(zhì)的分布神經(jīng)球⑶激光共聚焦掃描顯微鏡(confocallaserscanningmicroscope，CLSM)

由激光光源、共焦成像掃描系統(tǒng)、電子光學(xué)系統(tǒng)和微機(jī)圖象分析系統(tǒng)四部份構(gòu)成。

可對(duì)樣品進(jìn)行斷層掃描重建三維圖像，進(jìn)行體視學(xué)分析；測(cè)定細(xì)胞內(nèi)pH、鈣濃度等；精確地檢測(cè)、識(shí)別組織細(xì)胞的微細(xì)結(jié)構(gòu)及其變化。又稱細(xì)胞CT。CLSM第十一頁，共二十四頁。透射電鏡(transmissionelectronmicroscope,TEM)

觀察細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)；分辨率為0.1-0.2nm,可放大幾萬－幾十萬倍掃描電鏡(scanningelectronmicroscope,SEM)

觀察組織或細(xì)胞表面的立體結(jié)構(gòu)冰凍蝕刻復(fù)型技術(shù)(freezeetchreplicamethod)觀察細(xì)胞斷裂表面形態(tài)結(jié)構(gòu)X-射線顯微分析術(shù)(X-raymicroanalysis)研究細(xì)胞、組織內(nèi)元素種類分布和含量冷凍割斷技術(shù)(freezecracking)掃描電鏡鑄型技術(shù)(scanningelectronmicroscopecasting)超高電壓電鏡(ultravoltageelectronmicroscope,UEM)掃描探針電鏡(scanningprobemicroscope,SPM)透射電鏡與照片TEM淋巴細(xì)胞掃描電鏡與照片1.纖毛2.微絨毛冰凍蝕刻細(xì)胞

冷凍斷裂腎小球右下線粒體冰凍蝕刻照片分析電鏡X線微區(qū)分析分析電鏡－X線微區(qū)分析圖片(二)電子顯微鏡技術(shù)(electronmicroscope,EM)第十二頁，共二十四頁。1.糖類顯示法：

過碘酸-希夫反應(yīng)(periodicacidSchiffreaction，PAS反應(yīng))：

檢測(cè)組織或細(xì)胞中有無多糖存在。

PAS反應(yīng)陽性部位即表示多糖和蛋白多糖的存在(三)組織化學(xué)和細(xì)胞化學(xué)技術(shù)PAS陽性小腸上皮基本原理：多糖過碘酸氧化醛Schiff試劑紫紅色沉淀第十三頁，共二十四頁。酶細(xì)胞化學(xué)神經(jīng)元ACP酶陽性脂類顯示法

蘇丹Ⅲ

鋨酸

髓鞘染色

核酸顯示法：甲基綠-派若寧反應(yīng)2.酶類顯示法：

酸性磷酸酶(ACP)顯示法3.脂類顯示法：4.核酸顯示法：

福爾根反應(yīng)

甲基綠-派若寧反應(yīng)第十四頁，共二十四頁。

是將免疫學(xué)原理與組織化學(xué)和細(xì)胞化學(xué)技術(shù)相結(jié)合建立的新技術(shù).利用抗原(antigen，Ag)，抗體(antibody)特異結(jié)合的原理，用已知抗體檢測(cè)未知抗原(組織細(xì)胞內(nèi)某些多肽、蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì))的存在與分布的一種方法。(四)免疫組織化學(xué)和免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)第十五頁，共二十四頁。間接法--PAP法間接法--ABC法直接法第十六頁，共二十四頁。(五)原位雜交術(shù)--核酸分子雜交組織化學(xué)技術(shù)原位雜交(insituhybridization)是一種敏感性高、特異性強(qiáng)的，能在組織細(xì)胞原位進(jìn)行的核酸分子雜交技術(shù)。常用的標(biāo)記物有兩種：①放射性同位素，如3H、14C、32P、35S、125I；②為非放射性物質(zhì)，如熒光素、生物素、地高辛等。非放射性原位雜交：海馬GAP-43mRNA第十七頁，共二十四頁。(六)組織細(xì)胞定量技術(shù)1.顯微分光光度術(shù)

應(yīng)用顯微分光光度計(jì)(microspectrophotometer)對(duì)組織和細(xì)胞內(nèi)化學(xué)成分進(jìn)行定量分析。2.形態(tài)計(jì)量術(shù)

運(yùn)用數(shù)學(xué)和統(tǒng)計(jì)學(xué)原理對(duì)組織細(xì)胞內(nèi)各種成分的數(shù)量、體積、表面積等的測(cè)量。目前多應(yīng)用圖像分析系統(tǒng)。3.流式細(xì)胞術(shù)

應(yīng)用流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞定量分析和細(xì)胞分類研究。第十八頁，共二十四頁。(七)放射自顯影術(shù)(autoradiograph)旨在追蹤某些物質(zhì)在體內(nèi)、組織或細(xì)胞中的分布與代謝徑路。同位素注入→取材→制標(biāo)本→涂感光材料(核乳膠)或貼照相底片→暗室曝光→顯影、定影→染色→LM觀察放射自顯影

甲狀腺125I第十九頁，共二十四頁。(八)細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)和組織工程技術(shù)組織工程技術(shù)基本方法示意圖A.獲取組織B.分離、培養(yǎng)種子細(xì)胞C.制備三維支架D.將種子細(xì)胞種植于支架E.將細(xì)胞-支架復(fù)合物植入組織缺損處細(xì)胞培養(yǎng)--神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)第二十頁，共二十四頁。三、組織學(xué)的學(xué)習(xí)方法1.理論聯(lián)系實(shí)際2.結(jié)構(gòu)與功能的統(tǒng)一3.斷面與立體的關(guān)系4.建立動(dòng)態(tài)變化的概念5.善于總結(jié)，掌握規(guī)律

第二十一頁，共二十四頁。本單元學(xué)習(xí)要求1.掌握組織學(xué)的定義和研究?jī)?nèi)容。2.了解組織學(xué)與胚胎學(xué)常用研究方法。第二十二頁，共二十四頁。復(fù)習(xí)思考題1.組織學(xué)、胚胎學(xué)的定義和研究?jī)?nèi)容。2.組織學(xué)與胚胎學(xué)的基本研究方法有哪些？第二十三頁，共二十四頁。內(nèi)容總結(jié)組織學(xué)與胚胎學(xué)

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