《神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病生物樣本與數(shù)據(jù)庫建設(shè)規(guī)范第3部分：死亡供者腦組織樣本的采集與處理》

ICS07.080

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團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)

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神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病生物樣本與數(shù)據(jù)庫建設(shè)規(guī)范

第3部分：死亡供者腦組織樣本的采集與處理

Specificationforbiobankconstructionofneurodegenerativediseases

Part3:Collectionandprocessingofbraintissuebiomaterialfromdeceaseddonors

（征求意見稿）

XXXX-XX-XX發(fā)布XXXX-XX-XX實(shí)施

XXXXXXXX發(fā)布

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目次

前??言.............................................................錯(cuò)誤！未定義書簽。

引??言.............................................................錯(cuò)誤！未定義書簽。

1范圍................................................................................4

2規(guī)范性引用文件......................................................................4

3術(shù)語和定義..........................................................................4

4總則................................................................................4

5死亡供者腦組織采集操作規(guī)程..........................................................5

6死亡供者腦組織處理操作規(guī)程..........................................................5

7質(zhì)量控制............................................................................6

附錄A（資料性附錄）新鮮半腦取材內(nèi)容..................................................8

參考文獻(xiàn)...........................................................................9

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神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病生物樣本與數(shù)據(jù)庫建設(shè)規(guī)范

第3部分：死亡供者腦組織樣本的采集與處理

1范圍

本部分規(guī)定了死亡供者腦組織生物樣本和信息的采集、處理和質(zhì)量控制等要求。

本部分適用于死亡供者捐獻(xiàn)的腦組織樣本的采集、處理與質(zhì)量控制的生物樣本庫，以及開展神

經(jīng)系統(tǒng)變性等相關(guān)疾病研究的機(jī)構(gòu)。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中注日期的引用文

件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）

適用于本文件。

GB/T22576.1-2018醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力的要求第1部分通用要求；

GB/T37864-2019生物樣本庫質(zhì)量和能力通用要求；

GB/T39767-2021人類生物樣本管理規(guī)范。

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件。

3.1

腦brain

中樞神經(jīng)系統(tǒng)的主要部分，位于顱腔內(nèi)。人腦包括端腦（大腦）、間腦、小腦、腦干（腦干包

括：中腦、腦橋和延髓），其中分布著很多由神經(jīng)細(xì)胞集中而成的神經(jīng)核團(tuán)或神經(jīng)中樞，并有大量

上、下行的神經(jīng)纖維束通過，連接大腦、小腦和脊髓，在形態(tài)和機(jī)能上把中樞神經(jīng)各部分聯(lián)系為一

個(gè)整體。

4總則

4.1腦組織來源于神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病患者或正常人（對照）的遺體捐獻(xiàn)，采集與處理前應(yīng)確認(rèn)捐

獻(xiàn)知情同意書簽署情況，并評價(jià)危險(xiǎn)因素（如感染性疾病等）。

4.2死亡供者腦組織樣本的采集與處理應(yīng)遵循神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病生物樣本與數(shù)據(jù)庫建設(shè)規(guī)范第1

部分：通用要求及GB/T39767-2021、GB/T22576.1-2018、GB/T37864-2019的要求。

4.3死亡供者腦組織樣本的采集與處理宜在24小時(shí)內(nèi)完成，盡量減少死亡后延遲時(shí)間，以確保

盡可能體現(xiàn)腦組織的生前狀態(tài)。采集腦組織樣本前要對所采集的死亡供者按要求進(jìn)行篩選。

4.4腦組織采集地點(diǎn)應(yīng)選擇醫(yī)院病理解剖室或遺體志愿捐獻(xiàn)接收站的專用解剖室，若不能及時(shí)采

集，應(yīng)將遺體保存于低溫環(huán)境中。

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4.5腦組織處理常規(guī)行大腦半腦固定，優(yōu)勢半腦取新鮮組織速凍，特殊情況下左右腦輪流固定與

凍存。以下情形需雙側(cè)腦全部固定：

a）供體死亡時(shí)間＞24h；

b）兩側(cè)大腦半球可能受疾病影響不同，需要雙側(cè)腦組織病理診斷者；

c）有人類免疫缺陷病毒（HIV）、克雅病、活動性耐甲氧西林金黃色葡萄球菌

（methicillin-resistantstaphylococcusaureus，MRSA）感染等患者。

4.6應(yīng)完整記錄采集與處理過程及供者相關(guān)信息，如腦組織樣本標(biāo)準(zhǔn)分析前變量（standard

PRE-analyticalcode，SPREC）、供者的死亡時(shí)間、原因和死亡前（瀕死）表現(xiàn)等。

5死亡供者腦組織采集操作規(guī)程

5.1查人腦組織樣本采集前，應(yīng)審查和確認(rèn)捐獻(xiàn)知情同意書簽署情況以及供者姓名、身份信息與

知情同意書的一致性，并確認(rèn)取腦組織的時(shí)間。

5.2應(yīng)提前準(zhǔn)備取材所需的醫(yī)療器械與輔助設(shè)備，如無菌解剖刀、穿刺針、手套、紗布、消毒物

品及攝像設(shè)備等。

5.3觀察并判斷是否有顱腦外傷，如有大范圍損傷，應(yīng)放棄進(jìn)行腦組織樣本的采集。

5.4采集時(shí)，沿兩側(cè)耳后至顱頂，冠狀切開頭皮，翻折、暴露顱骨，沿眉弓到枕外隆突水平環(huán)行

線上約1cm鋸開顱骨，避免切口過深損傷腦組織。

5.5用解剖刀小心剝離硬腦膜，離斷腦與顱骨聯(lián)系，完整取出大腦、小腦、腦干以及相連的部分

頸髓，全腦稱重，測量體積、長度并拍照，置入冷等張鹽水，碎冰中暫時(shí)保存。

5.6沿大腦、小腦、腦干中線矢狀切開，將全腦等分為左右兩部分，一部分置入6%甲醛溶液固定,

另一部分進(jìn)行速冷處理。

5.7采集完成后使用超級粘合膠重新連接骨骼，并用手術(shù)針和不可吸收的縫合線縫合頭皮，清潔

臉部，擦干頭發(fā)，由技術(shù)人員重新組合尸體。

6死亡供者腦組織處理操作規(guī)程

6.1冷凍處理

6.1.1將冷凍的新鮮半腦稱重，測量并拍照。

6.1.2沿上丘腦水平或乳頭體后方去除中腦及相連接的腦干、小腦部分，沿小腦腳分離腦干、小

腦。

6.1.3將新鮮大腦半球冠狀切開，每片厚1cm;小腦半球沿矢狀平行切面切開，腦干按水平橫斷面

切開。

6.1.4按照附錄A中取材內(nèi)容和部位分別順序取材后按次序排列攝片。

6.1.5將組織速凍后裝入標(biāo)記好的自封袋，放入凍存盒，置于液氮中保存。

6.2固定處理

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6.2.1將擬固定的半腦或全腦置入6%甲醛溶液固定3天后，固定液置換為4%甲醛溶液固定2周以

上；2周后取出固定好的半腦或全腦，去除所有腦膜及血管，注意基底動脈及頸動脈的動脈硬化或

其他疾病及其病變程度。

6.2.2沿上丘水平或乳頭體后方去除中腦及相連接的腦干、小腦；沿小腦腳分離腦干、小腦。

6.2.3小腦半球按矢狀平行切面切片，由額葉至枕葉順序編號，并攝片；腦干和脊髓按橫斷面切

片，按順序編號并攝片。

6.2.4取材切片前應(yīng)對大體標(biāo)本進(jìn)行病理檢驗(yàn)，觀察是否有損傷、出血、梗塞、軟化灶或腫瘤等

異常情況，若在附錄A中要求的常規(guī)神經(jīng)病理組織取材部位的基礎(chǔ)外，發(fā)現(xiàn)明顯病灶則取病灶處用

于神經(jīng)病理檢查。

6.2.5按附錄A中取材內(nèi)容分別取大腦及腦干各部位組織，脫水包埋用于病理診斷與科研；其余

組織繼續(xù)保存于4%中性福爾馬林固定液（NBF）中，并且固定液每2年更換一次。

6.3衍生物的提取與保存

6.3.1DNA

6.3.1.1腦組織進(jìn)行DNA提取時(shí)應(yīng)控制組織的體積約0.5×0.5×0.5cm3。

6.3.1.2新鮮腦組織應(yīng)用流水及預(yù)冷生理鹽水快速將手術(shù)樣本表面/腔面的血液、粘液以及污物沖

洗干凈。

6.3.1.3提取的DNA應(yīng)置于聚丙烯材質(zhì)（polypropylene，PP）凍存管中并完整標(biāo)識，長期保存于

氣相液氮罐中。

6.3.2RNA

6.3.2.1腦組織進(jìn)行RNA提取，厚度應(yīng)小于0.5cm。

6.3.2.2手術(shù)切除后盡快將樣本組織浸入裝有RNAlater溶液的凍存管中，RNAlater體積至少

是組織塊體積的5-10倍，容器大小應(yīng)滿足組織完全浸沒于RNAlater溶液中。

6.3.2.3浸泡在RNAlater中的組織應(yīng)放置于2-8℃環(huán)境中過夜。不同的RNAlater試劑操作應(yīng)根

據(jù)廠商給出的建議使用方法進(jìn)行。

6.3.2.4提取的RNA應(yīng)置PP凍存管中并完整標(biāo)識，于氣相液氮中長期保存。

7質(zhì)量控制

7.1應(yīng)建立和實(shí)施腦組織樣本質(zhì)量控制程序，并保留質(zhì)控過程和結(jié)果的記錄，確保樣本及相關(guān)數(shù)

據(jù)滿足預(yù)期的要求。

7.2腦組織經(jīng)過多步處理可獲得復(fù)雜衍生物，如DNA、RNA等，應(yīng)針對影響這些衍生物質(zhì)量的關(guān)鍵

因素制定控制措施，用于評估衍生物的重要質(zhì)量特性，如穩(wěn)定性、完整性、濃度與純度等。

7.3死亡供者腦組織采集完成后，用pH計(jì)測量新鮮腦脊液pH和每個(gè)腦葉和小腦切片上組織的pH，

pH值達(dá)到6以上即為質(zhì)量較好，可用于后續(xù)研究。

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7.4凍存后的腦組織RNA完整值(RNAintegritynumber，RIN)達(dá)到6以上即為質(zhì)量較好，可用于

后續(xù)研究。

7.5應(yīng)分析質(zhì)量控制數(shù)據(jù),若不能滿足既定要求，應(yīng)對不合格生物樣本及相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行有效標(biāo)識，

并采取相應(yīng)措施控制其報(bào)告和分發(fā)范圍。

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附錄A

（資料性附錄）

新鮮半腦取材內(nèi)容

（注：共45個(gè)腦區(qū)、125個(gè)新鮮組織塊，*為基本神經(jīng)病理檢測必須用到的部位，括號內(nèi)的數(shù)字代表各腦區(qū)所取組

織塊的序號，通常按照從額葉到枕葉，從上到下的順序排列）

序號腦區(qū)序號腦區(qū)

1三叉神經(jīng)節(jié)(1,2)24角回

2垂體25頂上小葉*(lps1,2,3)

3視神經(jīng)26島葉(1,2,3)

4嗅球27枕上回(gos1,2,3)

5松果體28脈洛叢(1,2,3)

6額極(1,2)29海馬*(頭1,2,3,4,5,6,7,8,9,10)

7枕極(1,2)30杏仁體*（1,2）

8小腦*(前葉1,2,3，后葉1,2,3，蚓部1,2,3)31室旁區(qū)(1,2,3)

9顳極(1,2)32上丘

10延髓*(1,2)33下丘

11脊髓(1,2)34下丘腦

12黑質(zhì)*(1,2)35底丘腦

13藍(lán)斑*36丘腦

14腦膜*(1,2,3)37尾狀核*(1,2)

15中央前回(gpc1,2,3,4,5)38殼核(1,2)

16中央后回(1,2,3,4,5)39蒼白球*(1,2)

17額上回(gfs1,2,3,4,5)40內(nèi)囊(1,2)

18額中回*(gfn1,2,3,4,5)41伏隔核

19額下回(gfi1,2,3)。42韁核

20顳上回*(gts1,2,3,4,5)43灰質(zhì)(1,2,3)

21顳中回(gtn1,2,3,4,5)44白質(zhì)(1,2,3)

22顳下回(gti1,2,3,4,5)45扣帶回(前1,2,3，后1,2,3)

23緣上回46

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