化妝品中雙氟拉松丙酸酯的測定（BJH 202402）

—————BJH化妝品補(bǔ)充檢驗(yàn)方法BJH202402化妝品中雙氟拉松丙酸酯的測定2024-5-10發(fā)布國家藥品監(jiān)督管理局發(fā)布化妝品中雙氟拉松丙酸酯的測定（BJH202402）1范圍本方法規(guī)定了化妝品中雙氟拉松丙酸酯的測定方法。本方法適用于液體（水、油）類、膏霜乳類、凝膠類、蠟基類化妝品中雙氟拉松-17-丙酸酯和雙氟拉松-21-丙酸酯的定性和定量測定。2原理樣品以乙腈為溶劑提取，采用高效液相色譜儀分離，質(zhì)譜檢測器檢測。根據(jù)保留時(shí)間和特征離子對的相對豐度比定性，定量離子對峰面積定量，以標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算含量。雙氟拉松-17-丙酸酯和雙氟拉松-21-丙酸酯分別計(jì)算各自含量。3試劑和材料除另有規(guī)定外，本方法中所用試劑均為分析純及以上規(guī)格，水為符合GB/T6682規(guī)定的一級水。3.1乙腈，色譜純。3.2正己烷，色譜純。3.370%乙腈溶液：取乙腈（3.1）、水按體積比7:3混合，搖勻。3.4標(biāo)準(zhǔn)品：雙氟拉松-17-丙酸酯、雙氟拉松-21-丙酸酯標(biāo)準(zhǔn)品，純度均≥97%。標(biāo)準(zhǔn)品的中文名稱、英文名稱、CAS號、分子式、相對分子質(zhì)量、結(jié)構(gòu)式詳見附錄A中的表A.1。3.5標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：稱取雙氟拉松-17-丙酸酯、雙氟拉松-21-丙酸酯標(biāo)準(zhǔn)品各10mg（精確到0.00001g），分別置于10mL容量瓶中，用乙腈（3.1）溶解并定容至刻度，搖勻。制成標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液的質(zhì)量濃度為1000mg/L。置于-20℃冰箱中保存,有效期1個(gè)月。3.6混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：準(zhǔn)確移取雙氟拉松-17-丙酸酯、雙氟拉松-21-丙酸酯標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（3.5）適量，用乙腈（3.1）配制得質(zhì)量濃度為10mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。置于-20℃冰箱中保存。4儀器和設(shè)備4.1高效液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀。4.2分析天平：感量0.0001g和0.00001g。4.3超聲波清洗儀。4.4渦旋混合儀。4.5高速離心機(jī)。5試樣制備與保存樣品應(yīng)按照標(biāo)簽標(biāo)示的貯存條件進(jìn)行保存。取樣前，應(yīng)檢查封口的完整性，觀察樣品的性狀和特征，并使樣品混勻。打開包裝后，應(yīng)盡可能快地取出所要測定部分進(jìn)行分析，取樣后，應(yīng)將樣品進(jìn)行密封保存。6分析步驟6.1篩查用混合標(biāo)準(zhǔn)溶液取混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（3.6）適量，用乙腈（3.1）進(jìn)行稀釋，配制成雙氟拉松-17-丙酸酯、雙氟拉松-21-丙酸酯濃度為2μg/L的篩查用混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。6.2空白基質(zhì)提取液稱取空白試樣0.2g（精確到0.001g），置于10mL具塞比色管中，自“加入8mL乙腈（3.1）”或“加入1-2mL正己烷（3.2）”起與樣品同法處理（6.5），作為空白基質(zhì)提取液。6.3基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液精密量取混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（3.6）0.10mL，置于10mL容量瓶中，用空白基質(zhì)提取液（6.2）稀釋至刻度，搖勻，制成雙氟拉松-17-丙酸酯、雙氟拉松-21-丙酸酯質(zhì)量濃度為100μg/L的基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液。6.4基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液分別精密量取基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液(6.3)適量，用空白基質(zhì)提取液（6.2）配制得到質(zhì)量濃度為2、4、10、20、50μg/L基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液（基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液濃度范圍可根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行調(diào)整）。基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配。6.5樣品處理6.5.1液體（水、油）類、膏霜乳類、凝膠類樣品稱取樣品0.2g（精確到0.001g），置于10mL具塞比色管中，加入8mL乙腈（3.1），渦旋振蕩30s，混合均勻。超聲提取20min，靜置至室溫，用乙腈（3.1）定容至刻度，搖勻。必要時(shí)，以10000r/min轉(zhuǎn)速離心10min。取上清液經(jīng)0.22μm濾膜過濾后，濾液作為供試品溶液備用（供試品溶液可根據(jù)實(shí)際濃度進(jìn)行適當(dāng)稀釋）。6.5.2蠟基類樣品稱取樣品0.2g（精確到0.001g），置于10mL離心管中，加入1-2mL正己烷（3.2），渦旋分散均勻后，加入70%乙腈溶液（3.3）5mL，渦旋振蕩2min，10000r/min離心10min，吸取下層溶液至10mL具塞比色管中，上層正己烷層用70%乙腈溶液（3.3）5mL，自“渦旋振蕩2min，…”起，重復(fù)上述步驟一次，合并兩次溶液，加70%乙腈溶液（3.3）定容至刻度，混勻，經(jīng)0.22μm濾膜過濾后，濾液作為供試品溶液備用（供試品溶液可根據(jù)實(shí)際濃度進(jìn)行適當(dāng)稀釋）。6.6儀器參考條件6.6.1色譜條件色譜柱：C18柱（150mm×3mm，1.8μm），或等效色譜柱；流動(dòng)相：A為水，B為乙腈（3.1）。梯度洗脫程序見表1；流速：0.3mL/min；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：2μL。表1梯度洗脫程序時(shí)間（min）流動(dòng)相A（%）流動(dòng)相B（%）0.0070301.0070307.00109010.00109011.00703014.007030

6.6.2質(zhì)譜條件離子源：電噴霧離子源（ESI源）；監(jiān)測模式：正離子多反應(yīng)監(jiān)測模式（MRM），監(jiān)測離子對及相關(guān)參數(shù)設(shè)定見表2。電噴霧電壓（IS）：5500V氣簾氣（CUR）：30L/min霧化器（GS1）：50L/min輔助氣壓力（GS2）：55L/min離子源溫度（TEM）：550℃表2雙氟拉松-17-丙酸酯、雙氟拉松-21-丙酸酯監(jiān)測離子對及相關(guān)參數(shù)設(shè)定組分名稱母離子（m/z）子離子（m/z）DP（V）CE（eV）雙氟拉松-17-丙酸酯467.2353.2*15018373.216雙氟拉松-21-丙酸酯467.2317.1*15020335.220*為推薦的定量離子。注：當(dāng)采用不同質(zhì)譜儀器時(shí)，儀器參數(shù)可能存在差異，測定前應(yīng)將質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化到最佳。6.7定性判定取供試品溶液（6.5）與篩查用混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（6.1）在相同分析條件下測定，樣品中如呈現(xiàn)定量離子對和定性離子對的色譜峰，被測成分的特征離子峰保留時(shí)間與篩查用混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（6.1）對應(yīng)的保留時(shí)間一致，保留時(shí)間的相對偏差在±3%內(nèi)，且選擇的監(jiān)測離子對的相對豐度比與相當(dāng)濃度的篩查用混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（6.1）的監(jiān)測離子對的相對豐度比的最大允許偏差不超過表3的規(guī)定，則可以判定樣品中存在對應(yīng)的組分。表3定性確證時(shí)相對離子豐度比的最大允許偏差相對離子豐度（k）k＞50%50%≥k＞20%20%≥k＞10%k≤10%允許最大偏差±20%±25%±30%±50%6.8定量測定取基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液（6.4）依次測定，以待測組分的系列濃度為橫坐標(biāo)，待測組分的峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，繪制基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線，其線性相關(guān)系數(shù)應(yīng)大于0.99。取供試品溶液（6.5）測定，將對應(yīng)的定量離子對色譜峰面積代入基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線。按“7”項(xiàng)下公式，計(jì)算樣品中待測組分的含量。6.9平行試驗(yàn)按上述步驟，對同一樣品進(jìn)行平行實(shí)驗(yàn)測定。6.10空白試驗(yàn)除不加試樣外，均按上述測定條件和步驟進(jìn)行。7結(jié)果計(jì)算結(jié)果按式(SEQ標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)公式\*ARABIC1)計(jì)算：QUOTE…………(1)式中：ω—樣品中雙氟拉松-17-丙酸酯、雙氟拉松-21-丙酸酯的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，μg/g；ρ—供試品溶液中雙氟拉松-17-丙酸酯、雙氟拉松-21-丙酸酯質(zhì)量濃度，μg/L；V—樣品定容體積，mL；m—樣品取樣量，g；D—稀釋倍數(shù)（如未稀釋則為1）。計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10%。8精密度和準(zhǔn)確度多家實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證定量下限濃度回收率為70%～115%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于9.1%（n=6），中、高濃度回收率為80%～110%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于7.5%（n=6）。9檢出限和定量限本方法中雙氟拉松丙酸酯的檢出限、定量下限及取樣量為0.2g時(shí)檢出濃度和最低定量濃度見表4。表4雙氟拉松丙酸酯的檢出限、定量下限、檢出濃度和最低定量濃度組分名稱檢出限（ng）定量下限（ng）檢出濃度（μg/g）最低定量濃度（μg/g）雙氟拉松-17-丙酸酯0.00120.0040.030.1雙氟拉松-21-丙酸酯0.00120.0040.030.1

10圖譜圖1雙氟拉松-17-丙酸酯標(biāo)準(zhǔn)溶液的多反應(yīng)監(jiān)測色譜圖圖2雙氟拉松-21-丙酸酯標(biāo)準(zhǔn)溶液的多反應(yīng)監(jiān)測色譜圖

附錄A雙氟拉松丙酸酯的相關(guān)信息表A.1雙氟拉松-17-丙酸酯、雙氟拉松-21-丙酸酯的中文名稱、英文名稱、CAS號、分子式、相對分子質(zhì)量及結(jié)構(gòu)式中文名稱英文名稱CAS號分子式相對分子質(zhì)量結(jié)構(gòu)式雙氟拉松-17-丙酸酯Diflorasone17-propionate924726-89-6C25H32F2O6466.22雙氟拉松-21-丙酸酯Diflorasone21-propionate541502-98-1C25H32F2O6466.22

附錄B帶有推進(jìn)劑的化妝品的取樣操作規(guī)程1.取完整包裝樣品，除去易脫落部件，清潔外包裝，搖勻，連接取樣導(dǎo)管，稱量樣品總質(zhì)量為M1。2.將全部樣品噴出至已稱定質(zhì)量（M3）的潔凈燒杯或具塞試管底部，注意防止損失，稱量外包裝和取樣導(dǎo)管的質(zhì)量為M2。3.將上述裝有樣品的燒杯或具塞試管放置通風(fēng)櫥中，超聲10分鐘，排除剩余推進(jìn)劑，稱量總質(zhì)量為（M4），按檢驗(yàn)方法要求，準(zhǔn)確稱取