《活性氫水抗氧化性測(cè)定ABTS法》

T/BJWA**—2023

1范圍

本文件規(guī)定了采用ABTS法測(cè)定活性氫水抗氧化性能的方法。

本文件適用于活性氫水體外抗氧化性能的測(cè)定。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

3術(shù)語(yǔ)和定義

下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。

抗氧化能力（antioxidantactivity）

清除自由基的能力，以待測(cè)樣品對(duì)ABTS自由基的清除率來(lái)表示。

4縮略語(yǔ)

下列縮略語(yǔ)適用于本文件。

ABTS：2,2-聯(lián)氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二銨鹽

2,2'-Azinobis-(3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonate)

5試劑和材料

除非另有說(shuō)明，本方法所用的試劑均為分析純，試驗(yàn)用水為GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。

5.1過(guò)硫酸鉀，分析純。

5.2ABTS，分析純。

5.1.2.1ABTS溶液：稱取ABTS2000mg，過(guò)硫酸鉀34.4mg，溶于50.0mL蒸餾水，搖勻，室溫避光放

置24h后，作為ABTS母液。取適量ABTS母液，用95%乙醇稀釋至吸光度值在0.70±0.02內(nèi)(OD734)，

作為ABTS測(cè)定溶液，該溶液應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用。

注：可以根據(jù)分光光度計(jì)的靈敏度配制合適濃度的ABTS測(cè)定溶液。

6儀器和設(shè)備

6.1分光光度計(jì)：波長(zhǎng)范圍為400nm～800nm，吸光度值精確至0.001。

6.2電子天平：感量為0.001g。

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6.3移液器。

6.4吸量管。

7原理

ABTS經(jīng)氧化后生成較穩(wěn)定的藍(lán)綠色ABTS+自由基,在可見(jiàn)光區(qū)734nm處有最大吸收峰,活性氫水與

ABTS+自由基反應(yīng)后使其褪色,在734nm處的吸光值降低。采用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)測(cè)定反應(yīng)后的吸光

度。通過(guò)與不加樣品的溶液進(jìn)行比較，采用樣品對(duì)ABTS自由基的清除率來(lái)判定的抗氧化能力。

8分析步驟

8.1測(cè)定

取兩支試管，分別按表1的組合添加試劑。

表1試劑添加量

溶液名稱空白（Ab）樣品（As）

ABTS溶液3.6ml3.6mL

一級(jí)水0.4ml―

樣品―0.4mL

在空白管和樣品管中均加入3.6mLABTS溶液后，向樣品管中加入0.4mL樣品，向空白管中加入

0.4mL一級(jí)水，分別充分混合均勻后，室溫避光反應(yīng)5min，于波長(zhǎng)734nm條件下，用紫外分光光度

計(jì)測(cè)定其吸光度值(采用一級(jí)水調(diào)零校準(zhǔn))。

8.18.2試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理

按式（1）計(jì)算：

............(1)

式中：Ab?As

P=Ab×100%

P——自由基清除率；

Ab——ABTS溶液與一級(jí)水混合液的吸光度；

As——ABTS溶液與樣品混合液的吸光度。

計(jì)算結(jié)果以平行測(cè)定值的算數(shù)平均值表示，保留三位有效數(shù)字。

9重復(fù)性

在重復(fù)性條件下獲得的不低于3次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不超過(guò)算術(shù)平均值的20%。

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1范圍

本文件規(guī)定了采用ABTS法測(cè)定活性氫水抗氧化性能的方法。

本文件適用于活性氫水體外抗氧化性能的測(cè)定。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

3術(shù)語(yǔ)和定義

下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。

抗氧化能力（antioxidantactivity）

清除自由基的能力，以待測(cè)樣品對(duì)ABTS自由基的清除率來(lái)表示。

4縮略語(yǔ)

下列縮略語(yǔ)適用于本文件。

ABTS：2,2-聯(lián)氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二銨鹽

2,2'-Azinobis-(3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonate)

5試劑和材料

除非另有說(shuō)明，本方法所用的試劑均為分析純，試驗(yàn)用水為GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。

5.1過(guò)硫酸鉀，分析純。

5.2ABTS，分析純。

5.1.2.1ABTS溶液：稱取ABTS2000mg，過(guò)硫酸鉀34.4mg，溶于50.0mL蒸餾水，搖勻，室溫避光放

置24h后，作為ABTS母液。取適量ABTS母液，用95%乙醇稀釋至吸光度值在0.70±0.02內(nèi)(OD734)，

作為ABTS測(cè)定溶液，該溶液應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用。

注：可以根據(jù)分光光度計(jì)的靈敏度配制合適濃度的ABTS測(cè)定溶液。

6儀器和設(shè)備

6.1分光光度計(jì)：波長(zhǎng)范圍為400nm～800nm，吸光度值精確至0.001。

6.2電子天平：感量為0.001g。

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6.3移液器。

6.4吸量管。

7原理

ABTS經(jīng)氧化后生成較穩(wěn)定的藍(lán)綠色ABTS+自由基,在可見(jiàn)光區(qū)734nm處有最大吸收峰,活性氫水與

ABTS+自由基反應(yīng)后使其褪色,在734nm處的吸光值降低。采用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)測(cè)定反應(yīng)后的吸光

度。通過(guò)與不加樣品的溶液進(jìn)行比較，采用樣品對(duì)ABTS自由基的清除率來(lái)判定的抗氧化能力。

8分析步驟

8.1測(cè)定

取兩支試管，分別按表1的組合添加試劑。

表1試劑添加量

溶液名稱空白（Ab）樣品（As）

ABTS溶液3.6ml3.6mL

一級(jí)水0.4ml―

樣品―0.4mL

在空白管和樣品管中均加入3.6mLABTS溶液后，向樣品管中加入0.4mL樣品，向空白管中加入

0.4mL一級(jí)水，分別充分混合均勻后，室溫避光反應(yīng)5min，于波長(zhǎng)734nm條件下，用紫外分光光度

計(jì)測(cè)定其吸光度值(采用一級(jí)水調(diào)零校準(zhǔn))。

8.18.2試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理

按式（1）計(jì)算：

............(1)

式中：Ab?As

P=Ab×100%

P——自由基清除