
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動(dòng)物細(xì)胞工程練習(xí)一、選擇題1.下圖為動(dòng)物成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)過程示意圖。下列敘述正確的是()A.步驟①的操作不需要在無菌環(huán)境中進(jìn)行B.步驟②中用鹽酸溶解細(xì)胞間物質(zhì)使細(xì)胞分離C.步驟③到④的分瓶操作前常用胰蛋白酶處理D.步驟④培養(yǎng)過程中不會(huì)發(fā)生細(xì)胞轉(zhuǎn)化2.我國(guó)科學(xué)家首次培育出靈長(zhǎng)類動(dòng)物克隆猴“中中”和“華華”,其克隆的基本過程是取甲猴的體細(xì)胞核,移入乙猴的去核卵母細(xì)胞,得到重組細(xì)胞并體外培育成早期胚胎,植入丙猴的子宮,最終分娩出小猴“中中”和“華華”。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是()A.對(duì)乙猴注射促性腺激素,對(duì)丙猴注射孕激素B.對(duì)乙猴卵母細(xì)胞去核操作通常采用顯微操作法C.“中中”和“華華”的性別及遺傳物質(zhì)只與甲猴有關(guān)D.克隆猴的成功培育對(duì)人類重大疾病的研究、干預(yù)和治療可能有積極意義3.下圖表示通過相關(guān)技術(shù)獲得某種克隆哺乳動(dòng)物(二倍體)的流程,下列敘述正確的是()A.A表示細(xì)胞核,其供體應(yīng)選用性染色體組成為XX的個(gè)體B.從牛卵巢中采集的卵母細(xì)胞可直接用于過程①C.進(jìn)行過程②前必須對(duì)受體動(dòng)物注射適量免疫抑制劑D.胚胎發(fā)育卵裂階段細(xì)胞數(shù)目增加,胚胎總體積并不增加4.Vero細(xì)胞系來源于非洲綠猴腎上皮細(xì)胞,具有無限分裂和貼壁生長(zhǎng)的特性。將新冠病毒接種到Vero細(xì)胞后,經(jīng)Vero細(xì)胞培養(yǎng)、新冠病毒滅活及提純,可制成新冠病毒滅活疫苗。下列敘述錯(cuò)誤的是()A.Vero細(xì)胞可作為新冠病毒大量繁殖的“培養(yǎng)基”B.向Vero細(xì)胞培養(yǎng)液中加入適量抗生素可防止雜菌污染C.分瓶前需要用胰蛋白酶處理貼壁生長(zhǎng)的Vero細(xì)胞D.每傳代1次,培養(yǎng)瓶中的Vero細(xì)胞分裂1次5.為解決雜交瘤細(xì)胞在傳代培養(yǎng)中出現(xiàn)來自B淋巴細(xì)胞的染色體丟失的問題,研究者將抗原刺激后的B淋巴細(xì)胞用EBV(一種病毒顆粒)感染,獲得“染色體核型穩(wěn)定”的EBV轉(zhuǎn)化細(xì)胞。EBV轉(zhuǎn)化細(xì)胞能夠在HAT培養(yǎng)基中存活,但對(duì)Oua敏感。骨髓瘤細(xì)胞在HAT培養(yǎng)基中不能存活,但對(duì)Oua不敏感。下圖表示操作過程。下列分析錯(cuò)誤的是()A.B淋巴細(xì)胞可從多次間歇注射某種抗原的動(dòng)物脾臟中獲得B.HAT培養(yǎng)基和Oua篩選去除的是未融合的EBV轉(zhuǎn)化細(xì)胞C.雜交瘤細(xì)胞染色體丟失可能會(huì)導(dǎo)致抗體的產(chǎn)生能力下降D.圖中獲得的雜交瘤細(xì)胞需經(jīng)抗體檢測(cè)篩選后才可用于生產(chǎn)6.抗原檢測(cè)的關(guān)鍵是制備適用于抗原檢測(cè)的抗體,下圖為單克隆抗體制備過程的示意圖。下列相關(guān)敘述正確的是()A.每個(gè)B淋巴細(xì)胞可產(chǎn)生多種抗體,所以需要進(jìn)行細(xì)胞篩選B.細(xì)胞融合可使用滅活病毒,滅活的病毒失去感染性和抗原性C.細(xì)胞融合和細(xì)胞篩選時(shí)所用的培養(yǎng)液在成分上相同D.經(jīng)過上圖細(xì)胞篩選過程之后的細(xì)胞還需進(jìn)行進(jìn)一步篩選7.2020年諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)授予發(fā)現(xiàn)丙肝病毒的三位科學(xué)家。丙肝病毒引起的丙型肝炎可導(dǎo)致肝臟慢性炎癥壞死和纖維化,部分患者可發(fā)展為肝硬化甚至肝癌。下圖表示以小鼠甲為實(shí)驗(yàn)材料研制丙肝病毒的單克隆抗體的實(shí)驗(yàn)流程。下列敘述錯(cuò)誤的是()A.在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí),培養(yǎng)液中除營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)外還要添加一定量的血清B.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)通常采用培養(yǎng)皿或松蓋培養(yǎng)瓶,并將其置于含有95%O2和5%CO2的混合氣體的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)C.圖中篩選1的目的是獲得雜交瘤細(xì)胞D.若B淋巴細(xì)胞的基因型為HH,骨髓癌細(xì)胞的基因型為SS,則兩兩融合后基因型可能有HHSS、HHHH、SSSS8.為研究多種血糖調(diào)節(jié)因子的作用,我國(guó)科學(xué)家開發(fā)出胰島素抵抗模型鼠。為擴(kuò)增模型鼠數(shù)量,科學(xué)家通過誘導(dǎo)優(yōu)良模型鼠體細(xì)胞轉(zhuǎn)化獲得iPS細(xì)胞,繼而利用iPS細(xì)胞培育出與模型鼠遺傳特性相同的克隆鼠,具體步驟如下圖所示。下列敘述錯(cuò)誤的是()A.誘導(dǎo)優(yōu)良模型鼠體細(xì)胞轉(zhuǎn)化為iPS細(xì)胞的過程類似于植物組織培養(yǎng)的脫分化B.為獲得更多的雙細(xì)胞胚,可對(duì)白色鼠1注射性激素達(dá)到超數(shù)排卵的目的C.胚胎移植后,重構(gòu)胚進(jìn)一步擴(kuò)大導(dǎo)致囊胚腔破裂的過程稱為孵化D.為確定克隆鼠培育是否成功,須對(duì)黑色鼠3進(jìn)行胰島素抵抗的相關(guān)檢測(cè)9.克隆技術(shù)可用于生殖性克隆和治療性克隆,治療性克隆有希望最終解決供體器官短缺和器官移植出現(xiàn)的免疫排斥反應(yīng),下圖表示治療性克隆的過程。下列敘述正確的是()A.上述過程利用了核移植技術(shù)和胚胎移植技術(shù)B.①②過程不進(jìn)行DNA復(fù)制和蛋白質(zhì)的合成C.胚胎干細(xì)胞和誘導(dǎo)出的各種細(xì)胞都需在適宜條件下進(jìn)行培養(yǎng)D.治療性克隆解決了器官移植的免疫排斥反應(yīng),已成為目前器官移植的常用手段10.為研究治療性克隆技術(shù)能否用于帕金森病的治療,科研人員利用人帕金森病模型鼠進(jìn)行下圖實(shí)驗(yàn),相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是()A.過程①中選擇MⅡ期的卵母細(xì)胞有利于細(xì)胞核全能性恢復(fù)B.過程②重組細(xì)胞培養(yǎng)依次經(jīng)歷了卵裂、桑葚胚、原腸胚和囊胚等過程C.過程③的關(guān)鍵是利用特定條件誘導(dǎo)胚胎干細(xì)胞相關(guān)基因表達(dá)D.過程④對(duì)受體小鼠無需注射免疫抑制劑以抑制其細(xì)胞免疫功能11.CD47是一種在多種細(xì)胞中廣泛表達(dá)的跨膜糖蛋白,能夠與巨噬細(xì)胞細(xì)胞膜上的受體結(jié)合,并抑制其吞噬作用。結(jié)腸癌等多種腫瘤細(xì)胞表面的CD47含量比正常細(xì)胞高1.6~5倍??蒲腥藛T嘗試合成抗CD47的單克隆抗體,并進(jìn)一步探究其對(duì)巨噬細(xì)胞吞噬作用的影響。過程如下圖所示,下列分析正確的是()A.可用滅活病毒誘導(dǎo)②過程兩種細(xì)胞融合,該方法也適用于誘導(dǎo)植物體細(xì)胞的融合B.③過程可利用CD47糖蛋白篩選出目標(biāo)雜交瘤細(xì)胞C.抗CD47單克隆抗體與巨噬細(xì)胞結(jié)合,增強(qiáng)其吞噬作用D.在腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)液中加入抗CD47抗體將抑制腫瘤細(xì)胞的增殖12.科學(xué)家在研究基因定位時(shí),將人的不能利用次黃嘌呤的突變細(xì)胞株(HGPRT-)和小鼠不能利用胸腺脫氧核苷的突變細(xì)胞株(TK-)進(jìn)行融合,然后利用選擇培養(yǎng)基進(jìn)行篩選,得到3株能在選擇培養(yǎng)基上增殖的穩(wěn)定的細(xì)胞株(見下表)。據(jù)此分析下列說法錯(cuò)誤的是()細(xì)胞株編號(hào)123所含人染色體編號(hào)11,14,17,227,11,14,175,7,17,21A.可用PEG誘導(dǎo)人和小鼠細(xì)胞融合B.在選擇培養(yǎng)基上增殖的細(xì)胞株1中最多有4條人的染色體C.該選擇培養(yǎng)基中應(yīng)該添加次黃嘌呤和胸腺脫氧核苷D.由表中信息可推測(cè)人的TK基因可能位于17號(hào)染色體上13.Rag基因缺失小鼠不能產(chǎn)生成熟的淋巴細(xì)胞??蒲腥藛T通過誘導(dǎo)Rag基因缺失小鼠的體細(xì)胞獲得誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(iPS細(xì)胞),然后將Rag基因?qū)雐PS細(xì)胞并誘導(dǎo)使其分化為造血干細(xì)胞,再移植到Rag基因缺失小鼠體內(nèi)進(jìn)行治療。下列分析錯(cuò)誤的是()A.誘導(dǎo)獲得iPS細(xì)胞時(shí)需要在體細(xì)胞中表達(dá)一些關(guān)鍵基因B.培養(yǎng)iPS細(xì)胞時(shí)不僅要保證無菌、無毒的環(huán)境,還需要適宜的溫度C.利用顯微注射技術(shù)可以將Rag基因直接注入iPS細(xì)胞D.利用iPS細(xì)胞進(jìn)行治療存在導(dǎo)致小鼠發(fā)生腫瘤的風(fēng)險(xiǎn)二、非選擇題14.以我國(guó)科學(xué)家為主的科研團(tuán)隊(duì)將OSNL(即4個(gè)基因Oct4/Sox2/Nanog/Lin28A的縮寫)導(dǎo)入黑羽雞胚成纖維細(xì)胞(CEFs),誘導(dǎo)其重編程為誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(iPS),再誘導(dǎo)iPS分化為誘導(dǎo)原始生殖細(xì)胞(iPGCs),然后將iPGCs注射到孵化2.5天的白羽雞胚血管中,最終獲得具有黑羽雞遺傳特性的后代,實(shí)驗(yàn)流程如圖?;卮鹣铝袉栴}。(1)CEFs是從孵化9天的黑羽雞胚中分離獲得的,為了獲得單細(xì)胞懸液,雞胚組織剪碎后需用________________處理。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)通常需要在合成培養(yǎng)基中添加________等天然成分,以滿足細(xì)胞對(duì)某些細(xì)胞因子的需求。(2)體外獲取OSNL的方法有____________________(答出1種即可)。若要在CEFs中表達(dá)外源基因的蛋白,需構(gòu)建基因表達(dá)載體,載體中除含有目的基因和標(biāo)記基因外,還須有啟動(dòng)子和________等。啟動(dòng)子是________識(shí)別和結(jié)合的部位,有了它才能驅(qū)動(dòng)_______________________________________________________。(3)iPS細(xì)胞和iPGCs細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能不同的根本原因是__________________________________________________________。(4)誘導(dǎo)iPS細(xì)胞的技術(shù)與體細(xì)胞核移植技術(shù)的主要區(qū)別是________________________________________________________________________。(5)該實(shí)驗(yàn)流程中用到的生物技術(shù)有________________________(答出2點(diǎn)即可)。15.腸道病毒71型(EV71)為單股正鏈RNA病毒,是引起手足口病的主要病原體之一,在EV71中,病毒結(jié)構(gòu)蛋白1(VP1)為主要的中和抗原(中和抗原與中和抗體結(jié)合后能阻止病原體入侵與增殖)。圖1為利用重組大腸桿菌表達(dá)VP1蛋白,并以VP1蛋白為抗原制備單克隆抗體的過程。回答以下問題。(1)重組大腸桿菌中,由EV71病毒的RNA構(gòu)建cDNA需經(jīng)過________過程,隨后cDNA通過PCR技術(shù)擴(kuò)增。將目的基因?qū)氪竽c桿菌需要構(gòu)建表達(dá)載體,常用的表達(dá)載體是________________________________________________________________________。(2)在小鼠腹腔內(nèi)注射VP1蛋白進(jìn)行免疫,在35天獲取B淋巴細(xì)胞懸液進(jìn)行融合。在獲取B淋巴細(xì)胞前3天需在腹腔再次注射VP1蛋白,這樣做的原因是____________________________________________________。(3)缺失HPRT基因的細(xì)胞無法在HAT培養(yǎng)基中生存,HAT培養(yǎng)基可以篩選出骨髓瘤細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞融合的雜交瘤細(xì)胞,其他細(xì)胞都會(huì)死亡。據(jù)此推測(cè),在單克隆抗體制備過程中缺失HPRT基因的細(xì)胞是______________________(填“大腸桿菌”“B淋巴細(xì)胞”或“骨髓瘤細(xì)胞”)。(4)在雜交瘤細(xì)胞篩選培養(yǎng)過程中需在培養(yǎng)基中添加胎牛血清,并置于37℃、50mL/LCO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)箱中CO2的作用是________________。(5)下圖是研究人員對(duì)不同單克隆抗體(A/B)的檢測(cè)結(jié)果。哪一種單克隆抗體適合進(jìn)入下一步研制?________,理由是________________________________________________________________________。(6)該單克隆抗體成功制備后,對(duì)于防治手足口病有什么作用?________________________________________________________________________。答案:1.C。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程需要無菌操作,故步驟①的操作需要在無菌環(huán)境中進(jìn)行,A錯(cuò)誤;動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程中需要用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理動(dòng)物組織,使其分散成單個(gè)細(xì)胞,制成細(xì)胞懸液,B錯(cuò)誤;傳代培養(yǎng)時(shí)需要用胰蛋白酶處理貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞,使之分散成單個(gè)細(xì)胞,再分瓶培養(yǎng),C正確;步驟④為傳代培養(yǎng),該過程中部分細(xì)胞可能發(fā)生細(xì)胞轉(zhuǎn)化,D錯(cuò)誤。2.C。對(duì)乙猴注射促性腺激素,可促使其超數(shù)排卵,對(duì)丙猴注射孕激素,可保證其同步發(fā)情,A正確;對(duì)乙猴卵母細(xì)胞去核操作通常采用顯微操作法,B正確;“中中”和“華華”的性別只與甲猴有關(guān),其核遺傳物質(zhì)只與甲猴有關(guān),細(xì)胞質(zhì)遺傳物質(zhì)主要與乙猴有關(guān),C錯(cuò)誤;猴和人類都是靈長(zhǎng)類動(dòng)物,猴的許多生理特點(diǎn)與人類相似,因此,克隆猴的成功培育對(duì)人類重大疾病的研究、干預(yù)和治療可能有積極意義,D正確。3.D。A為供體體細(xì)胞的細(xì)胞核,供體的性染色體組成可為XX或XY,A錯(cuò)誤;從牛卵巢中采集的卵母細(xì)胞需要在體外經(jīng)人工培養(yǎng)至MⅡ期,不可直接用于過程①,B錯(cuò)誤;過程②是胚胎移植,受體對(duì)植入的胚胎不會(huì)產(chǎn)生免疫排斥反應(yīng),因此胚胎移植時(shí)不需要注射免疫抑制劑,C錯(cuò)誤;胚胎發(fā)育卵裂期胚胎中細(xì)胞進(jìn)行有絲分裂,數(shù)目不斷增加,但胚胎的總體積并不增加或略有縮小,D正確。4.D。將新冠病毒接種到Vero細(xì)胞,Vero細(xì)胞可作為新冠病毒大量繁殖的“培養(yǎng)基”,A正確;向Vero細(xì)胞培養(yǎng)液中加入適量抗生素可防止雜菌污染,B正確;分瓶前進(jìn)行傳代培養(yǎng)時(shí)需要用胰蛋白酶處理貼壁生長(zhǎng)的Vero細(xì)胞,C正確;每傳代1次,培養(yǎng)瓶中的Vero細(xì)胞可能分裂多次,D錯(cuò)誤。5.B6.D。B淋巴細(xì)胞只能產(chǎn)生針對(duì)相應(yīng)抗原的抗體,即每個(gè)B淋巴細(xì)胞只能產(chǎn)生一種抗體,A錯(cuò)誤;滅活病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合的原理是病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細(xì)胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用,使細(xì)胞相互凝聚,細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布,細(xì)胞膜打開,細(xì)胞發(fā)生融合,故滅活的病毒必須保留抗原性,B錯(cuò)誤;細(xì)胞融合時(shí)所用的培養(yǎng)液一般需要加入誘導(dǎo)劑,細(xì)胞篩選時(shí)所用的是選擇培養(yǎng)基,兩者在成分上有差異,C錯(cuò)誤;題圖細(xì)胞篩選過程選出的是雜交瘤細(xì)胞,還需進(jìn)一步通過克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè)篩選出能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞,D正確。7.B。為了更好地促進(jìn)動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng),盡可能模擬細(xì)胞在體內(nèi)的生活環(huán)境,培養(yǎng)液中除營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)外還要添加一定量的血清,A正確;動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)通常采用培養(yǎng)皿或松蓋培養(yǎng)瓶,并將其置于含有95%空氣和5%CO2的混合氣體的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng),B錯(cuò)誤;融合后的體系中含有多種細(xì)胞:未融合的親本細(xì)胞、融合的具有同種核的細(xì)胞和雜交瘤細(xì)胞,篩選1的目的是獲得雜交瘤細(xì)胞,C正確;融合細(xì)胞的種類可能有B淋巴細(xì)胞+B淋巴細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞+骨髓瘤細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞+B淋巴細(xì)胞,基因型可能是HHHH、SSSS、HHSS,D正確。8.B。優(yōu)良模型鼠體細(xì)胞在誘導(dǎo)因子的作用下轉(zhuǎn)化為iPS細(xì)胞的過程與植物組織培養(yǎng)中的脫分化過程類似,是組織細(xì)胞恢復(fù)分裂、分化能力的過程,A正確;用促性腺激素處理,可使白色鼠1排出更多的卵子,而非注射性激素,B錯(cuò)誤;囊胚進(jìn)一步擴(kuò)大,會(huì)導(dǎo)致透明帶破裂,胚胎從其中伸展出來,這一過程叫作孵化,C正確;據(jù)題圖可知,最終得到了黑色鼠3,實(shí)驗(yàn)最終目的為“開發(fā)出胰島素抵抗模型鼠”,故為確定克隆鼠培育是否成功,須對(duì)黑色鼠3進(jìn)行胰島素抵抗的相關(guān)檢測(cè),D正確。9.C。結(jié)合題圖可知,該過程沒有用到胚胎移植技術(shù),A錯(cuò)誤;①②過程發(fā)生了有絲分裂和細(xì)胞分化,需要進(jìn)行DNA復(fù)制和蛋白質(zhì)的合成,B錯(cuò)誤;治療性克隆理論上可以避免免疫排斥反應(yīng),但目前沒有成為器官移植的常用手段,D錯(cuò)誤。10.B。過程②重組細(xì)胞培養(yǎng)依次經(jīng)歷了卵裂、桑葚胚、囊胚和原腸胚等過程,B錯(cuò)誤。11.B。誘導(dǎo)植物體細(xì)胞融合可用物理或化學(xué)法,但不能用滅活的病毒,滅活病毒可誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞的融合,A錯(cuò)誤;③過程可利用CD47糖蛋白特異性結(jié)合的功能篩選目標(biāo)雜交瘤細(xì)胞,B正確;加入抗CD47單克隆抗體后,抗CD47單克隆抗體與腫瘤細(xì)胞表面的CD47發(fā)生特異性結(jié)合,從而解除CD47對(duì)巨噬細(xì)胞的抑制作用,巨噬細(xì)胞的吞噬作用增強(qiáng),C錯(cuò)誤;利用抗CD47抗體與腫瘤細(xì)胞表面的CD47蛋白結(jié)合,可促進(jìn)巨噬細(xì)胞吞噬腫瘤細(xì)胞,但不能抑制腫瘤細(xì)胞的增殖,D錯(cuò)誤。12.B13.C。誘導(dǎo)獲得iPS細(xì)胞的實(shí)質(zhì)是基因的選擇性表達(dá),需要在體細(xì)胞中表達(dá)一些關(guān)鍵基因,A正確;培養(yǎng)iPS細(xì)胞時(shí)必須保證環(huán)境是無菌、無毒的,且需要保證溫度適宜,B正確;直接注射基因容易導(dǎo)致基因丟失,一般需要將Rag基因和載體連接形成重組DNA分子再顯微注射到iPS細(xì)胞,C錯(cuò)誤;iPS細(xì)胞為誘導(dǎo)多能干細(xì)胞,可以誘導(dǎo)其進(jìn)行不同方向的分化,利用iPS細(xì)胞進(jìn)行治療存在導(dǎo)致小鼠發(fā)生腫瘤的風(fēng)險(xiǎn),D正確。14.(1)胰蛋白酶、膠原蛋白酶等血清(2)基因文庫(kù)法、PCR、人工合成法(答出
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