(高清版)GBT 40173-2021 水溶性殼聚糖中還原性端基糖的測(cè)定 分光光度法VIP

GB/T40173—2021水溶性殼聚糖中還原性端基糖的測(cè)定分光光度法國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)IGB/T40173—2021本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專(zhuān)利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專(zhuān)利的責(zé)任。本文件由全國(guó)生化檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)(SAC/TC387)提出并歸口。華揚(yáng)生物股份有限公司、正大投資股份有限公司青島分公司、青島蔚藍(lán)生物集團(tuán)有限公司、深圳市市場(chǎng)監(jiān)督管理局許可審查中心。1GB/T40173—2021水溶性殼聚糖中還原性端基糖的測(cè)定分光光度法1范圍本文件規(guī)定了水溶性殼聚糖中還原性端基糖的分光光度測(cè)定方法。本文件適用于水溶性殼聚糖(含量≥90%,脫乙酰度≥90%)中還原性端基糖的檢測(cè)。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法3.1殼聚糖chitosan3.2殼聚糖分子中脫除乙?；奶菤埢鶖?shù)占?xì)ぞ厶欠肿又锌偟奶菤埢鶖?shù)的百分?jǐn)?shù)。3.34原理殼聚糖分子末端的還原性端基糖在堿性條件下與3-甲基-2-苯并噻唑酮腙(MBTH)反應(yīng)生成吖嗪，在一定范圍內(nèi)與其在590nm處的吸光度呈正比例線(xiàn)性關(guān)系。通過(guò)測(cè)定在590nm處的吸光度值，外標(biāo)5試劑與材料除非另有說(shuō)明，本方法所用試劑均為分析純。水為符合GB/T6682規(guī)定的三級(jí)水。GB/T40173—2021純度≥98%。5.2DL-二硫蘇糖醇[DTT,HSCH?CH(OH)CH(OH)CH?SH]:CAS號(hào)：3483-12-3,純度≥98%。5.3鹽酸氨基葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品(C?H??NO?·HCl):CAS號(hào)：66-84-2,純度≥99%,或經(jīng)國(guó)家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書(shū)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。效期10天。期10天。5.8MBTH試劑：將MBTH溶液(5.6)和DTT溶液(5.7)等體積混合，即得MBTH試劑。臨用新配。5.9硫酸鐵銨試劑：稱(chēng)取5g硫酸鐵銨[NH?Fe(SO?)?·12H?O]和5g氨基磺酸，加入41.8mL濃鹽5.10鹽酸氨基葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.1mg/mL):稱(chēng)取0.1g鹽酸氨基葡萄糖(精確至0.0001g),加水溶解，用水稀釋并定容至100mL,混勻，(濃度為1mg/mL);準(zhǔn)確吸取上述溶液10mL,用水稀釋定容至6.3渦旋振蕩器。取0.1mg/mL鹽酸氨基葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液0mL、1mL、3mL、5mL、7mL、9mL,分別用水定容至10mL,配成濃度為0mg/mL、0.0標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。8測(cè)定步驟顯色1h。以水調(diào)節(jié)零點(diǎn)，于波長(zhǎng)590nm處測(cè)定吸光度值。以鹽酸氨基葡萄糖的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)工作溶液吸光度值與質(zhì)量濃度為零的空白管的吸光度的差值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。28.2試樣溶液的測(cè)定移取試樣溶液500μL,加入500μL0.5mol/L氫氧化鈉溶液和500μLMBTH試劑于試管中，混勻，于80℃水浴13min,趁熱迅速加入1000μL硫酸鐵銨試劑，混勻，放置顯色1h。以水調(diào)節(jié)零點(diǎn)，于波長(zhǎng)590nm處測(cè)定吸光度值。將待測(cè)樣吸光度值與質(zhì)量濃度為零的空白管的吸光度值差值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，計(jì)算試樣中還原端基糖的含量。9結(jié)果計(jì)算與表示9.1結(jié)果計(jì)算試樣中還原端基糖含量按式(1)計(jì)算。式中：…………X——試樣中還原端基糖的含量，單位為毫摩爾每克(mmol/g);Ae——待測(cè)樣的吸光度值；Ap——空白管的吸光度值；C。-——標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的截距；k———標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的斜率，單位為毫升每毫克(mL/mg);m--—水溶性殼聚糖的質(zhì)量濃度，單位為毫克每毫升(mg/mL);M——鹽酸氨基葡萄糖的分子質(zhì)量，215.63g/mol