一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生要求

1一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生要求本文件規(guī)定了一次性使用衛(wèi)生用品的原材料衛(wèi)生要求、生產(chǎn)過程衛(wèi)生要求、產(chǎn)品衛(wèi)生要求、包裝、運輸和貯存、標識要求，描述了相應的檢測方法。本文件適用于銷售和使用的一次性使用衛(wèi)生用品。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T191包裝儲運圖示標志GB5749生活飲用水衛(wèi)生標準GB/T8939衛(wèi)生巾（護墊）GB/T15981消毒器械滅菌效果評價方法GB/T26367胍類消毒劑衛(wèi)生要求GB/T26369季銨鹽類消毒劑衛(wèi)生要求GB/T27741紙和紙板可遷移性熒光增白劑的測定GB/T27947酚類消毒劑衛(wèi)生要求GB/T28004.1紙尿褲第1部分：嬰兒紙尿褲GB/T28004.2紙尿褲第2部分：成人紙尿褲GB/T38496消毒劑安全性毒理學評價程序和方法GB38598消毒產(chǎn)品標簽說明書通用要求GB50073潔凈廠房設計規(guī)范WS/T10009消毒產(chǎn)品檢測方法中華人民共和國藥典（國家藥品監(jiān)督管理局、國家衛(wèi)生健康委員會）消毒產(chǎn)品生產(chǎn)企業(yè)衛(wèi)生規(guī)范［衛(wèi)生部（2009年版）］3術語和定義下列術語和定義適用于本文件。3.1一次性使用衛(wèi)生用品disposablesanitaryproducts與人體直接接觸的，為達到人體生理衛(wèi)生或抗菌、抑菌目的的一次性使用日常生活用品。注：主要包括婦女經(jīng)期衛(wèi)生用品、排泄物衛(wèi)生用品（不包括廁所用紙）和衛(wèi)生濕巾、抗菌劑、抑菌劑等其他衛(wèi)生用品。3.2以非織造布、織物、木漿復合布、木漿紙等為載體，適量添加生產(chǎn)用水和殺菌成分等原材料，對處理對象（如手、皮膚、黏膜及普通物體表面）具有清潔殺菌作用的濕巾。2注：僅包括與手、皮膚或（和）黏膜直接接觸的衛(wèi)生濕巾。3.3抗菌劑antibacterialagent直接接觸人體完整皮膚或黏膜，具有一定殺菌（細菌和酵母菌）作用，但不以治療疾病或者改善皮膚、黏膜的癥狀為目的的制劑。注：不包括人體足部、眼睛、指甲、腋部、頭皮、頭發(fā)、鼻黏膜、肛腸等特定部位。3.4直接接觸人體完整皮膚或黏膜，具有一定抑菌（細菌和酵母菌）作用，但不以治療疾病或者改善皮膚、黏膜的癥狀為目的的制劑。注：不包括人體足部、眼睛、指甲、腋部、頭皮、頭發(fā)、鼻黏膜、肛腸等特定部位。3.5生產(chǎn)車間productionworkshop生產(chǎn)加工一次性使用衛(wèi)生用品的場所。注：包括配料間（區(qū)）、制作加工間（區(qū)）、分（灌）裝間（區(qū)）、內(nèi)包裝間（區(qū)）等。其中，分裝企業(yè)生產(chǎn)車間包括分（灌）裝間（區(qū)）、內(nèi)包裝間（區(qū)）等。［來源：《消毒產(chǎn)品生產(chǎn)企業(yè)衛(wèi)生規(guī)范》（2009年版），第十二條，有修改］3.6高吸水材料superabsorbentmaterials能夠吸收自身質(zhì)量數(shù)倍至數(shù)百倍液態(tài)水,吸收后具有保水和貯水能力的吸收體。注：吸收體由高分子化合物、紙漿和無紡布等構成。4原材料衛(wèi)生要求4.1原材料應符合消毒產(chǎn)品相關規(guī)范和標準的要求，無毒、無害。原材料包裝應清楚標明內(nèi)含物的名稱、生產(chǎn)單位、生產(chǎn)日期或生產(chǎn)批號；有特殊要求的原材料應標明貯存條件和保質(zhì)期。4.2不應使用廢棄或使用過的一次性使用衛(wèi)生用品作為原材料或半成品。4.3原材料中不得添加下列禁用物質(zhì)。a）抗（抑）菌劑中不應添加列入《中華人民共和國藥典》的藥品及其同名原料（消毒防腐藥、中藥和抑菌劑除外，也不包括藥用輔料和純化水）；疫苗、血清或毒素及其制品等用于產(chǎn)生主動或被動免疫的制劑，用于診斷免疫狀態(tài)的制劑，蛋白、多肽制劑（溶菌酶、溶葡萄球菌酶除外）；列入《化妝品安全技術規(guī)范》的禁用化學物質(zhì)（碘除外）；國家衛(wèi)生健康行政部門規(guī)定的其他禁止使用的物質(zhì)及其他對人體健康有明確危害的物質(zhì)。b）衛(wèi)生濕巾和其他具有抗（抑）菌功能的一次性使用衛(wèi)生用品不應添加抗菌藥物、抗真菌藥物、抗病毒藥物、激素類藥物及其同名原料等和國家衛(wèi)生健康行政部門規(guī)定的其他禁止使用的物質(zhì)及其他對人體健康有明確危害的物質(zhì)。c）非織造布、織物或其他原材料不應添加可遷移性熒光增白劑等禁用成分。4.4根據(jù)產(chǎn)品工藝規(guī)程選用符合相應產(chǎn)品質(zhì)量標準的生產(chǎn)用水。濕巾、衛(wèi)生濕巾和抗（抑）菌劑的生產(chǎn)用水應符合《中華人民共和國藥典》中純化水要求，其他一次性使用衛(wèi)生用品的生產(chǎn)用水應符合GB5749和企業(yè)相關規(guī)范的要求，并保證產(chǎn)品使用安全、有效。5生產(chǎn)過程衛(wèi)生要求5.1原輔料的購入、貯存、發(fā)放、使用應滿足產(chǎn)品質(zhì)量控制要求并符合管理制度規(guī)定。35.2生產(chǎn)環(huán)境衛(wèi)生指標要求如下。a）抗（抑）菌劑生產(chǎn)車間空氣應符合《消毒產(chǎn)品生產(chǎn)企業(yè)衛(wèi)生規(guī)范》的要求，凈化車間應符合GB50073的要求；其他一次性使用衛(wèi)生用品生產(chǎn)車間空氣中菌落總數(shù)應小于或等于（空氣采樣器法）或應小于或等于16CFU/（皿·5min平皿暴露法）。b）直接接觸未包裝產(chǎn)品的工作臺表面菌落總數(shù)應小于或等于20CFU/cm2。c）直接接觸未包裝產(chǎn)品的工人手表面菌落總數(shù)應小于或等于300CFU/只手（套）。5.3消毒級一次性使用衛(wèi)生用品初始污染菌應小于或等于10000CFU/g或CFU/mL。5.4應對用于消毒級一次性使用衛(wèi)生用品的消毒方法進行消毒效果檢測，并應符合以下要求：a）環(huán)氧乙烷消毒：對枯草桿菌黑色變種（ATCC9372）芽孢的殺滅對數(shù)值大于或等于3.00；b）電離輻射消毒：對短小桿菌E601（ATCC27142）芽孢的殺滅對數(shù)值大于或等于3.00；c）壓力蒸汽消毒：對嗜熱脂肪桿菌（ATCC7953）芽孢的殺滅對數(shù)值大于或等于3.00。6產(chǎn)品衛(wèi)生要求6.1感官要求外觀應整潔，符合產(chǎn)品固有性狀，不應有掉毛、掉屑現(xiàn)象，不應有異常氣味與異物。6.2理化要求6.2.1理化指標應符合表1的規(guī)定。表1理化指標項目指標適用范圍標識均值±1以內(nèi)標識pH值的衛(wèi)生用品可遷移性熒光增白劑不得檢出含紙的衛(wèi)生用品鉛（以Pb計）濕巾、衛(wèi)生濕巾、抗（抑）菌劑等衛(wèi)生用品砷（以As計）濕巾、衛(wèi)生濕巾、抗（抑）菌劑等衛(wèi)生用品汞濕巾、衛(wèi)生濕巾、抗（抑）菌劑等衛(wèi)生用品環(huán)氧乙烷殘留量經(jīng)環(huán)氧乙烷消毒的衛(wèi)生用品穩(wěn)定性有效期≥1年衛(wèi)生濕巾、抗（抑）菌劑及其他含有抗（抑）菌成分的衛(wèi)生用品6.2.2衛(wèi)生濕巾、抗（抑）菌劑和其他含有抗（抑）菌成分的一次性使用衛(wèi)生用品有效成分含量應符合產(chǎn)品標簽說明書標注的含量，其中用于手、皮膚、黏膜的產(chǎn)品，限用物質(zhì)使用濃度應符合表2的規(guī)定。表2限用物質(zhì)使用濃度使用對象葡萄糖酸氯己定或醋酸氯己定g/L或g/kg2,4,4’?三氯?2’?羥基二苯醚g/L或g/kg苯扎溴銨或苯扎氯銨g/L或g/kg國家規(guī)定的其他限用物質(zhì)手、皮膚≤45.0≤20.0≤5.0符合黏膜≤5.0≤3.5≤2.0符合6.3毒理學安全性要求6.3.1產(chǎn)品首次上市時，婦女經(jīng)期衛(wèi)生用品、排泄物衛(wèi)生用品、濕巾、衛(wèi)生濕巾、抗（抑）菌劑和其他4衛(wèi)生用品中乳墊、一次性內(nèi)褲、衛(wèi)生手套或指套、化妝棉（紙、巾）及嬰兒用紙、紙巾、棉柔巾、衛(wèi)生棉（棒、簽、球等）等應進行毒理學試驗。當原材料、生產(chǎn)工藝等發(fā)生變化可能影響產(chǎn)品毒性時，應按要求重新進行產(chǎn)品毒理學試驗。6.3.2毒理學試驗應按表3進行，指標符合表4的規(guī)定。表3毒理學試驗項目產(chǎn)品種類a毒理學試驗項目皮膚刺激試驗b眼刺激試驗陰道黏膜刺激試驗c皮膚變態(tài)反應試驗婦女經(jīng)期衛(wèi)生用品 ++排泄物衛(wèi)生用品+ +濕巾、衛(wèi)生濕巾、抗（抑）菌劑僅接觸手、皮膚+ ±d僅接觸口腔黏膜 + 僅接觸陰道黏膜 +接觸皮膚和口腔黏膜 + 接觸皮膚和陰道黏膜 +接觸皮膚、口腔和陰道黏膜 ++乳墊、一次性內(nèi)褲、衛(wèi)生手套或指套、化妝棉（紙、巾）、嬰兒用紙、紙巾、棉柔巾、衛(wèi)生棉（棒、簽、球等）等僅接觸皮膚+ +僅接觸黏膜 +接觸皮膚和黏膜 +a其他一次性使用衛(wèi)生用品參照執(zhí)行。b使用過程中多次接觸皮膚的應進行多次完整皮膚刺激試驗；標注使用后及時清洗的應進行暴露時間2h的急性一次完整皮膚刺激試驗。c標注用于陰道黏膜偶爾使用或間隔數(shù)日使用的應進行一次陰道黏膜刺激試驗，連續(xù)使用的應進行多次陰道黏膜刺激試驗。d用于孕婦、嬰兒的應進行皮膚變態(tài)反應試驗。表4毒理學指標項目要求皮膚刺激試驗無刺激性或輕刺激性a眼刺激試驗無刺激性或輕刺激性b陰道黏膜刺激試驗無刺激或極輕刺激皮膚變態(tài)反應試驗未見或極輕度ca,b,c適用于嬰兒的一次性使用衛(wèi)生用品皮膚刺激試驗和眼刺激試驗應無刺激性，未見皮膚變態(tài)反應。6.4微生物學指標微生物學指標應符合表5的規(guī)定。5表5微生物學指標產(chǎn)品種類微生物學指標細菌菌落總數(shù)CFU/g或CFU/mL特定微生物a及其他致病微生物b真菌菌落總數(shù)CFU/g或CFU/mL婦女經(jīng)期衛(wèi)生用品普通級衛(wèi)生栓（內(nèi)置棉條）其他婦女經(jīng)期衛(wèi)生用品消毒級≤100≤200≤20不得檢出不得檢出不得檢出≤20≤100不得檢出排泄物衛(wèi)生用品普通級消毒級≤200≤20不得檢出不得檢出≤100不得檢出衛(wèi)生濕巾、抗（抑）菌劑≤20不得檢出不得檢出濕巾、乳墊、一次性內(nèi)褲、衛(wèi)生手套或指套、化妝棉（紙、巾）、紙、紙巾、棉柔巾、衛(wèi)生棉（棒、簽、球等）等≤200不得檢出≤100a特定微生物指大腸菌群、銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌。b懷疑發(fā)生相關感染時，進行相應目標致病微生物檢測。6.5衛(wèi)生濕巾及抗（抑）菌衛(wèi)生用品抗（抑）菌性能6.5.1衛(wèi)生濕巾除應符合表5中的微生物學指標外，對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的殺菌率應大于或等于90如標明對致病性酵母菌有殺菌作用，對白色念珠菌的殺菌率應大于或等于90如標明對其他微生物有殺滅作用，對相應微生物的殺菌率應大于或等于90％。6.5.2具有抗菌功能的一次性使用衛(wèi)生用品除應符合表5中的同類同級產(chǎn)品微生物學指標外，對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的殺菌率應大于或等于90振蕩燒瓶試驗方法殺菌率應大于26如標明對致病性酵母菌或其他微生物有殺滅作用，對白色念珠菌或相應微生物的殺菌率應達到上述要求。6.5.3具有抑菌功能的一次性使用衛(wèi)生用品除應符合表5中的同類同級產(chǎn)品微生物學指標外，對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑菌率應大于或等于50％（振蕩燒瓶試驗方法抑菌率應大于26％，高吸水材料抑菌率應大于或等于99或抑菌環(huán)直徑大于7.0mm；如標明對致病性酵母菌或其他微生物有抑菌作用，對白色念珠菌或相應微生物的抑菌率或抑菌環(huán)應達到上述要求。7檢測方法7.1生產(chǎn)過程衛(wèi)生要求檢測方法7.1.1生產(chǎn)環(huán)境衛(wèi)生要求檢測方法按照附錄A要求執(zhí)行。7.1.2初始污染菌檢測方法按照附錄B要求執(zhí)行。7.1.3消毒效果檢測評價方法按照附錄C要求執(zhí)行。7.2產(chǎn)品衛(wèi)生要求檢測方法7.2.1產(chǎn)品外觀采用目測、鼻嗅的方法進行測定。67.2.2衛(wèi)生巾、衛(wèi)生護墊等吸水產(chǎn)品pH按GB/T8939的方法進行測定，其他產(chǎn)品pH有相應測定標準的按相應標準的方法進行測定，無相應測定標準的按WS/T10009的方法進行測定。7.2.3可遷移性熒光增白劑：衛(wèi)生巾（護墊）按GB/T8939的方法進行測定；紙尿褲分別按GB/T28004.1、GB/T28004.2的方法進行測定；其他衛(wèi)生用品按GB/T27741的方法進行測定。7.2.4鉛、砷、汞的檢測按《化妝品安全技術規(guī)范》的方法進行測定。7.2.5產(chǎn)品環(huán)氧乙烷殘留量測試方法按照附錄D要求執(zhí)行。7.2.6產(chǎn)品殺菌性能、抑菌性能與穩(wěn)定性測試方法按照附錄E要求執(zhí)行。7.2.7葡萄糖酸氯己定、醋酸氯己定按照GB/T26367及國家有關標準中規(guī)定的方法進行測定；2,4,4’?三氯?2’?羥基二苯醚按照GB/T27947及國家有關標準中規(guī)定的方法進行測定；苯扎溴銨、苯扎氯銨按GB/T26369及國家有關標準中規(guī)定的方法進行測定；其他有效成分含量按照WS/T10009及國家有關標準中規(guī)定的方法進行測定；無法使用化學測定法的不測定。7.2.8產(chǎn)品毒理學試驗方法按照附錄F要求執(zhí)行。7.2.9產(chǎn)品微生物檢測方法按照附錄B要求執(zhí)行。8包裝、運輸和貯存8.1無外包裝影響衛(wèi)生質(zhì)量的原材料應有包裝；直接與產(chǎn)品接觸的包裝材料應無毒、無害、清潔；包裝材料應保證產(chǎn)品在正常運輸與貯存條件下不受污染。包裝儲運圖示標志應符合GB/Tl91要求。8.2應按照運輸與貯存要求進行運輸或貯存。9標識9.1產(chǎn)品標簽說明書應符合GB38598的有關要求。9.2消毒級產(chǎn)品還應在銷售包裝上標注“消毒級”字樣、殺滅或抑制微生物類別、消毒方法和消毒日期；在運輸包裝上標注“消毒級”字樣、生產(chǎn)日期及有效期或生產(chǎn)批號及限用使用日期。9.3原材料中有表2規(guī)定的限用物質(zhì)時，應在包裝上標識。10標準的實施本文件實施之日前生產(chǎn)或進口的產(chǎn)品，在符合GB15979—2002《一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標準》的前提下，可以銷售至產(chǎn)品標示的有效期（保質(zhì)期）限為止。（規(guī)范性）消毒效果檢測評價方法C.1環(huán)氧乙烷消毒按GB/T15981的方法進行評價。C.2電離輻射消毒C.2.1電離輻射消毒效果評價用生物指示菌為短小桿菌E601（ATCC27142）芽孢，在菌量為5.0×5CFU/片～5.0×106CFU/片時，其殺滅90％微生物所需劑量D10值應為1.7kGy。C.2.2每次測試至少選5箱產(chǎn)品，每箱布放3片生物指示劑，置于最小劑量處。消毒完畢，取出指示菌片接種營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)液做定性檢測或接種營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基做定量檢測，將未處理陽性對照菌片做相同接種，兩者均置36℃±1℃培養(yǎng)。陽性對照應在24h內(nèi)有菌生長。定性培養(yǎng)樣品如連續(xù)觀察7d（或按使用說明書中的培養(yǎng)時間）全部無菌生長，可報告生物指示劑培養(yǎng)陰性，消毒合格。定量培養(yǎng)樣品與陽性對照相比殺滅對數(shù)值大于或等于3.00也可報告消毒合格。C.3壓力蒸汽消毒按GB/T15981的方法進行評價。（規(guī)范性）產(chǎn)品環(huán)氧乙烷殘留量檢測方法D.1樣品采集于環(huán)氧乙烷消毒后，立即從同一消毒批號的3個運輸包裝中隨機抽取一定量最小銷售包裝樣品，采樣量至少應滿足試驗所需（平行測試2次）規(guī)定的量，并留一定量樣品在需要復測時備用。分別于環(huán)氧乙烷消毒后24h及以后每隔數(shù)天進行殘留量測定，直至殘留量降至6.2.1所規(guī)定的標準值以下。D.2儀器與試劑D.2.1儀器D.2.1.1氣相色譜儀，配有火焰離子化檢測器（FID）。D.2.1.2分析天平，精確到0.1mg。D.2.1.3機械振蕩器。D.2.1.4冰箱：能使樣品保存在2℃~8℃之間。D.2.1.5氣體調(diào)節(jié)器：用于開、關環(huán)氧乙烷氣瓶。D.2.1.6氣密性注射器：容量為1.0mL、10.0mL、50mL、100mL，用于標準氣體配制及把標準氣體注入液相色譜。D.2.1.7微量注射器：容量為10μL，用于向氣相色譜儀中注入浸提溶液。D.2.1.8平底螺蓋瓶：體積能夠容納樣品及浸提溶液，具有聚四氟乙烯（PTFE）襯墊的硅橡膠塞，用于樣品浸提。D.2.2試劑D.2.2.1環(huán)氧乙烷：裝在適當?shù)臍馄恐械挠凶C標準氣體。D.2.2.2水：純度適合于氣相色譜。D.2.2.3載氣和輔助氣體。載氣：高純氮氣（99.999。輔助氣體：氫氣、空氣。D.3操作步驟D.3.1標準氣體配制用100mL氣密性注射器抽取環(huán)氧乙烷飽和氣（重復放空2次，以排除原有空氣），塞上橡皮頭，用10mL氣密性注射器抽取上述100mL氣密性注射器中純環(huán)氧乙烷標準氣10mL，用潔凈空氣稀釋到100mL（可將10mL標準氣注入到已有90mL潔凈空氣的帶橡皮塞頭的氣密性注射器中來完成）。用同樣的方法根據(jù)需要再逐級稀釋，配制4個～5個濃度的標準氣體。根據(jù)環(huán)氧乙烷的純度、稀釋倍數(shù)和室溫，計算出環(huán)氧乙烷標準氣體的配制濃度。稀釋后標準氣體濃度計算見公式（D.1c=×…………（D.1）式中：c─標準氣體濃度，單位為微克每毫升(μg/mL）；p─純度；k─稀釋倍數(shù)；t─室溫，單位為攝氏度(℃);─環(huán)氧乙烷相對分子質(zhì)量，單位為克每摩爾（g/mol）；─絕對溫度換算常數(shù)；─氣體常數(shù)，單位為升每摩爾（L/mol）。D.3.2樣品處理至少取2個最小包裝產(chǎn)品，將其剪碎，隨機精確稱取0.5g～2.0g，放入適當體積的平底螺蓋瓶中，加入2.0mL～5.0mL去離子水，確保樣品完全浸沒于浸提溶液中，加蓋密封后充分搖勻，放置4h或振蕩30min待用。如被檢樣品為吸水樹脂材料產(chǎn)品，可適當增加去離子水量，以確保至少可吸出2mL樣品浸提溶液。如果檢測不能馬上進行，則將浸提溶液從樣品中分離出來，密封于有聚四氟乙烯襯墊的瓶中蓋緊。任何盛有標準溶液或浸提液的管瓶，其頂端空間應少于總體積的10％，浸提溶液可在5℃±3℃的冰箱中暫時貯存，并于浸提當天檢測。D.3.3分析待儀器穩(wěn)定后，在同樣條件下，環(huán)氧乙烷標準氣體各進樣1.0mL，待分析樣品（樣品浸提溶液）各進樣1.0μL，每一樣液平行做2次測定。根據(jù)保留時間定性，根據(jù)峰面積（或峰高）進行定量計算，取平均值。D.3.4儀器操作參考條件D.3.4.1色譜柱：極性石英毛細管色譜柱（固定相為聚乙二醇）或其他等效色譜柱。D.3.4.2柱溫：90℃。D.3.4.3進樣口溫度：220℃。D.3.4.4載氣：高純氮氣。D.3.4.5載氣流量：5.0mL/min。D.3.4.6檢測器溫度：230℃。D.3.4.7氫氣流量：40mL/min。D.3.4.8空氣流量：400mL/min。D.3.5計算以所進環(huán)氧乙烷標準氣的微克數(shù)對所得峰面積(或峰高)作環(huán)氧乙烷工作曲線。以樣品中環(huán)氧乙烷對應的峰面積（或峰高）在工作曲線上求得環(huán)氧乙烷的量A(μg），并以公式（D.2）求得產(chǎn)品中環(huán)氧乙烷的殘留量。X=A×V進 m×V進…………（D.2）式中：X─產(chǎn)品中環(huán)氧乙烷殘留量，單位為微克每克(μg/gA─從工作曲線中所查得環(huán)氧乙烷量，單位為微克(μgm─所取樣品量，單位為克（gV萃─萃取液體積，單位為毫升（mL）；V進─進樣量，單位為毫升（mL）。（規(guī)范性）產(chǎn)品殺菌性能、抑菌性能與穩(wěn)定性檢測方法E.1樣品采集于同一批號3個運輸包裝中至少抽取6件最小銷售包裝樣品（若樣品數(shù)量不能滿足試驗所需，則應相應增加采樣數(shù)量其中1/3樣品用于抑菌、抗菌或殺菌性能測試，2/3樣品用于留樣；如需做穩(wěn)定性測試，樣品數(shù)量再作相應增加。E.2試驗方法選擇原則E.2.1衛(wèi)生濕巾選擇衛(wèi)生濕巾殺菌性能試驗。E.2.2液體抗菌劑選擇抗菌劑殺菌性能試驗；黏稠狀（半固體）抗菌產(chǎn)品選擇載體浸泡定量殺菌試驗；添加有殺菌劑的衛(wèi)生濕巾或可溶性抗菌物質(zhì)的載體類產(chǎn)品選擇載體殺菌試驗；含有可溶性抗菌成分的紡織品選擇浸漬殺菌試驗；含有非溶出性抗菌物質(zhì)的產(chǎn)品選擇振蕩燒瓶試驗。E.2.3液體抑菌劑選擇抑菌劑抑菌性能試驗；黏稠狀（半固體）抑菌產(chǎn)品選擇載體浸泡定量抑菌試驗；含溶出性抑菌成分的固體抑菌產(chǎn)品選擇載體抑菌試驗或抑菌環(huán)試驗；含有溶出性抑菌成分的紡織品選擇浸漬抑菌試驗；含有非溶出性抑菌物質(zhì)的產(chǎn)品選擇振蕩燒瓶試驗；含高吸水材料的產(chǎn)品選擇高吸水材料抑菌性能試驗。E.3試驗材料E.3.1試驗菌E.3.1.1試驗菌種類細菌：大腸桿菌(8099或CICC10899）或大腸桿菌（ATCC25922金黃色葡萄球菌(ATCC6538或酵母菌：白色念珠菌(ATCC10231)。根據(jù)產(chǎn)品特定用途所需用的其他菌株。E.3.1.2試驗菌懸液制備取冷凍條件下保存的菌種（凍干管、甘油管或磁珠），在無菌操作下打開，加入適量營養(yǎng)肉湯，輕柔吹吸數(shù)次，使菌種融化分散。取含5.0mL～10.0mL營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基試管，滴入少許菌種懸液，36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h。用接種環(huán)取第1代培養(yǎng)的菌懸液，劃線接種于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平皿上，36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h。挑取上述第2代培養(yǎng)物中典型菌落，接種于營養(yǎng)瓊脂斜面，36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h即為第3代培養(yǎng)物。取菌株第3代～第6代的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（酵母菌為沙堡弱瓊脂培養(yǎng)基）新鮮斜面培養(yǎng)物（18h～24h用5.0mL0.03mol/L磷酸鹽緩沖液（簡稱PBS）洗下菌苔，使菌懸浮均勻后用PBS稀釋至所需濃度（浸漬抑菌試驗使用肉湯對培養(yǎng)液進行稀釋）。E.3.2試驗器材E.3.2.1培養(yǎng)基：細菌培養(yǎng)用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，酵母菌培養(yǎng)用沙堡弱瓊脂培養(yǎng)基；營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，沙堡弱液體培養(yǎng)基。E.3.2.2稀釋液：0.03mol/LPBS，pH7.2。E.3.2.3中和劑（PBS配制）。E.3.2.4載體：32支紗/cm×32支紗/cm脫脂白平紋布片（長×寬=10mm×10mm衛(wèi)生濕巾：長×寬=20mm×30mm），經(jīng)壓力蒸汽滅菌烤干后使用。E.3.2.5計時器。E.3.2.6電子天平。E.3.2.7振蕩搖床。E.3.2.8大于或等于2000r/min渦旋振蕩器。E.3.2.9恒溫水浴箱。E.3.2.1036℃培養(yǎng)箱。E.3.2.12Ⅱ級生物安全柜。E.4衛(wèi)生濕巾殺菌性能試驗E.4.1適用范圍適用于添加有殺菌成分的衛(wèi)生濕巾或可溶性抗菌物質(zhì)的載體類產(chǎn)品的抗菌性能效果鑒定。E.4.2中和劑鑒定試驗E.4.2.1試驗菌種：根據(jù)產(chǎn)品殺滅微生物類別，選擇對其敏感度較高的細菌，如宣稱對酵母菌有殺滅作用，需增加白色念珠菌；當用其他特定微生物進行殺菌試驗時，應以該特定微生物進行中和劑鑒定試驗。E.4.2.2中和劑試驗分組：第1組：5.0mL中和劑+染菌對照片→培養(yǎng)；第2組：（樣片+5.0mL中和劑）+染菌對照片→培養(yǎng)；第3組：5.0mLPBS+染菌對照片→培養(yǎng)；第4組：同批次PBS0.5mL＋中和劑0.5mL＋培養(yǎng)基→培養(yǎng)。E.4.2.3中和劑試驗評價規(guī)定如下：a）第1組、第2組和第3組有相似量試驗菌生長，并在1.0×104CFU/片～9.0×104CFU/片之間，其組間菌落數(shù)誤差率應不超過15%;b）第4組無菌生長；c）連續(xù)3次試驗均符合以上要求判定為合格。E.4.3試驗步驟對照樣片應與試驗樣片同等材質(zhì)、同等大小但不含殺菌成分，且經(jīng)滅菌處理；將100μL試驗菌懸液滴于對照樣片上，回收菌數(shù)應為1.0×104CFU/片～9.0×104CFU/片。取試驗樣片（大小20mm×30mm，厚度應確保菌懸液被完全吸收不滲漏，如被測試樣品厚度無法滿足要求，可增加片數(shù)）和對照樣片各1片分別置于無菌平皿內(nèi)，用新鮮制備的菌懸液分別在每個試驗樣片與對照樣片上滴加100μL，均勻涂布，開始計時，作用至說明書規(guī)定時間，用無菌鑷子分別將試驗樣片和對照樣片放入5.0mL相應中和劑的試管內(nèi)，充分混勻，中和作用10min后進行10倍系列稀釋，選擇適宜稀釋度，吸取1.0mL接種平皿，每管接種2個平皿，將冷至40℃~45℃熔化的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（細菌）或沙堡弱瓊脂培養(yǎng)基（酵母菌），傾注于已加入樣液的平皿中，每平皿15mL～20mL，轉動平皿，使其充分混勻，瓊脂凝固后翻轉平皿，36℃±1℃培養(yǎng)48h（細菌）或72h（酵母菌進行活菌菌落計數(shù)。重復試驗3次，計算殺菌率。E.4.4計算殺菌率計算見公式（E.1）：×100％…………（E.1）式中：K─殺菌率；Nc─對照樣片平均菌落數(shù)，單位為每片菌落形成單位（CFU/片Ns─被試樣片平均菌落數(shù)，單位為每片菌落形成單位（CFU/片）。誤差率計算見公式（E.2×100％…………（E.2）式中：E─組間菌落數(shù)誤差率；Xm─三組間菌落平均數(shù)，單位為每片菌落形成單位（CFU/片）；Xn─各組菌落平均數(shù)，單位為每片菌落形成單位（CFU/片）。E.4.5評價標準各次殺菌率均大于或等于90％，產(chǎn)品有殺菌作用。衛(wèi)生濕巾的最長殺菌作用時間不應超過5min。E.5產(chǎn)品抗菌性能試驗E.5.1抗菌劑殺菌性能試驗E.5.1.1適用范圍適用于液體抗菌劑或衛(wèi)生濕巾擠出液對微生物抗菌效果的測定。E.5.1.2中和劑鑒定試驗E.5.1.2.1試驗菌種：根據(jù)產(chǎn)品殺滅微生物類別，選擇對其敏感度較高的細菌，如宣稱對酵母菌有殺滅作用，需增加白色念珠菌；當用其他特定微生物進行殺菌試驗時，應以該特定微生物進行中和劑鑒定試驗。E.5.1.2.2中和劑試驗分組：第1組：4.5mL中和劑＋0.4mL硬水＋0.1mL菌懸液→培養(yǎng)；第2組：（0.4mL樣液＋4.5mL中和劑）＋0.1mL菌懸液→培養(yǎng)；第3組：4.9mLPBS＋0.1mL菌懸液→培養(yǎng)；第4組：同批次PBS0.5mL＋中和劑0.5mL＋培養(yǎng)基→培養(yǎng)。E.5.1.2.3中和劑試驗評價規(guī)定：a）第1組、第2組、第3組有相似量試驗菌生長，并在1.0×104CFU/mL～9.0×104CFU/mL之間，其組間菌落數(shù)誤差率［計算見公式（E.2應不超過15%;b）第4組無菌生長；c）連續(xù)3次試驗均符合以上要求判定為合格。E.5.1.3試驗步驟取新鮮制備的菌懸液0.5mL滴加于4.5mL樣液內(nèi)，混勻后開始計時，作用至說明書規(guī)定時間，用定量吸管吸取菌藥混懸液0.5mL放入4.5mL含有中和劑的試管內(nèi)，充分混勻，中和作用10min后進行10倍系列稀釋，選擇適宜稀釋度，分別吸取1.0mL接種平皿，每管接種2個平皿，將冷至40℃~45℃熔化的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（細菌）或沙堡弱瓊脂培養(yǎng)基（酵母菌），傾注于已加入樣液的平皿中，每平皿15mL～20mL，轉動平皿，使其充分混勻，瓊脂凝固后翻轉平皿，36℃±1℃培養(yǎng)48h（細菌）或72h（酵母菌），進行活菌菌落計數(shù)。試驗同時用稀釋液代替試樣，進行平行試驗，作為陽性對照，回收菌數(shù)為1.0×104CFU/mL～9.0×104CFU/mL。重復試驗3次，計算殺菌率。E.5.1.4計算殺菌率計算見公式（E.3）：…………（E.3）式中：K─殺菌率；Nc─對照樣品平均菌落數(shù)，單位為每毫升菌落形成單位（CFU/mL）；Ns─被試樣品平均菌落數(shù)，單位為每毫升菌落形成單位（CFU/mL）。E.5.1.5評價標準說明書規(guī)定時間的各次殺菌率均大于或等于90％，判有抗菌作用；說明書規(guī)定時間的各次殺菌率均大于或等于99％，判有較強抗菌作用?？咕鷦┑淖铋L殺菌作用時間不應超過5min。E.5.2載體浸泡定量殺菌試驗E.5.2.1適用范圍適用于黏稠狀（半固體）抗菌產(chǎn)品如抗菌洗手液等對微生物抗菌效果的鑒定。E.5.2.2染菌載體制備取試驗菌24h新鮮斜面培養(yǎng)物用PBS洗下，用PBS稀釋至約5.0×106CFU/mL～5.0×107CFU/mL制成菌懸液備用。用微量移液器滴染10μL菌懸液于滅菌載體上，35℃±1℃烘干或室溫晾干備用。E.5.2.3中和劑鑒定試驗E.5.2.3.1試驗分組第1組：5.0mL中和劑+染菌載體→培養(yǎng)。第2組含抗菌劑的載體+5.0mL中和劑）+染菌載體→培養(yǎng)。第3組：5.0mL稀釋液+染菌載體→培養(yǎng)。第4組：稀釋液+中和劑+培養(yǎng)基→培養(yǎng)。E.5.2.3.2試驗步驟根據(jù)試驗分組，準備試管和平皿，依次進行編號。第1組：取5.0mL中和劑于無菌平皿中，置20℃±1℃水浴5min，加入1片染菌載體，作用10min，取出菌片放入5.0mL中和劑試管內(nèi)，作用10min后，置渦旋振蕩器上振蕩1min或在手掌上用力振打80次，將試驗菌洗下，用中和劑做10倍系列稀釋后，選擇適宜稀釋度，分別吸取1.0mL接種于2個平皿中，做活菌培養(yǎng)計數(shù)。第2組：取5.0mL中和劑于無菌平皿內(nèi)，加入1片沾有抗菌樣品的載體，混勻，置20℃±1℃水浴作用10min制成中和產(chǎn)物。再用無菌鑷子取1片染菌載體，浸于中和產(chǎn)物中作用10min后，用無菌鑷子取出染菌載體移入含5.0mL中和產(chǎn)物試管中，作用10min，振蕩，將試驗菌洗下，用中和產(chǎn)物做10倍系列稀釋,選適宜稀釋度分別吸取1.0mL接種于2個平皿中，做活菌培養(yǎng)計數(shù)。取出菌片放入5.0mLPBS試管內(nèi)，作用10min后，振蕩，將試驗菌洗下，用PBS做10倍系列稀釋,選適宜稀釋度分別吸取1.0mL接種于2個平皿中，做活菌培養(yǎng)計數(shù)。第4組：分別吸取稀釋液（PBS）與中和劑各1.0mL于同一無菌平皿內(nèi)，倒入同批次的培養(yǎng)基15mL～20mL，培養(yǎng)觀察。E.5.2.3.3結果判定第1組、第2組和第3組有相似量試驗菌生長，且菌量在1.0×104CFU/片～9.0×104CFU/片。計算組間菌落數(shù)誤差率［計算見公式（E.2）］，其組間菌落數(shù)誤差率應不超過15％。第4組無菌生長，否則，說明試劑有污染，應更換無污染的試劑重新進行試驗。試驗3次，每次試驗均應符合以上要求。E.5.2.4試驗步驟按5.0g/片的量稱取抗菌樣品于無菌平皿內(nèi)，置20℃±1℃水浴5min，用無菌鑷子取染菌載體，使載體完全浸沒于抗菌樣品中，立即計時。待染菌載體與抗菌劑相互作用至各預定時間（以說明書規(guī)定時間為T，時間分別為0.5T、T、1.5T），分別取染菌載體加入5.0mL中和劑試管中，混勻。經(jīng)中和劑作用10min后，振蕩，將試驗菌洗下，分別吸取1.0mL樣液，按活菌培養(yǎng)計數(shù)方法測定存活菌數(shù)，每管樣液接種2個平皿。如平板上生長的菌落數(shù)較多時，可用PBS進行系列10倍稀釋后，再進行活菌培養(yǎng)計數(shù)。取與試驗樣品同質(zhì)材料不含抗菌成分的對照樣品代替抗菌樣品浸泡2片染菌載體，進行平行試驗，作為陽性對照。陽性對照回收菌量為1.0×104CFU/片～9.0×104CFU/片。取同批次稀釋液、中和劑、培養(yǎng)基作陰性對照。所有試驗樣品和對照樣品均在36℃±1℃培養(yǎng)48h（細菌）或72h（酵母菌），進行活菌菌落計數(shù)。重復試驗3次，計算殺菌率。E.5.2.5殺菌率計算殺菌率計算見公式（E.4）：K=×100％…………（E.4）式中：K─殺菌率；Nc─對照樣品平均菌落數(shù)，單位為每片菌落形成單位（CFU/片Ns─被試樣品平均菌落數(shù)，單位為每片菌落形成單位（CFU/片）。E.5.2.6評價標準說明書規(guī)定時間的各次殺菌率均大于或等于90％，判有抗菌作用；說明書規(guī)定時間的各次殺菌率均大于或等于99％，判有較強抗菌作用。E.5.3載體殺菌試驗E.5.3.1適用范圍適用于添加有殺菌劑的衛(wèi)生濕巾或可溶性抗菌物質(zhì)的載體類產(chǎn)品抗菌性能效果的鑒定。E.5.3.2菌懸液配制及樣片制備取試驗菌24h新鮮斜面培養(yǎng)物用PBS洗下，用PBS稀釋至1.0×105CFU/mL～9.0×105CFU/mL，制成菌懸液備用。用無菌剪刀將抗菌產(chǎn)品和材質(zhì)相同但不含抗菌成分的對照樣品分別剪成20mm×30mm樣片備用。試驗時滴加100μL菌懸液。對照樣片染菌前需經(jīng)121℃15min滅菌處理。E.5.3.3中和劑鑒定試驗E.5.3.3.1試驗分組第1組：5.0mL中和劑+染菌對照樣片→培養(yǎng)。第2組：（5.0mL中和劑+抗菌樣片）+染菌對照樣片→培養(yǎng)。第3組：5.0mL稀釋液+染菌對照樣片→培養(yǎng)。第4組：稀釋液+中和劑+培養(yǎng)基→培養(yǎng)。E.5.3.3.2試驗步驟根據(jù)試驗分組，準備試管和平皿，依次進行編號。加入試管內(nèi)，作用10min，振蕩將試驗菌洗下，用中和劑做10倍系列稀釋后選擇適宜稀釋度分別吸取1.0mL接種于2個平皿中，做活菌培養(yǎng)計數(shù)。第2組：取5.0mL中和劑于無菌試管內(nèi)，用無菌鑷子取1片抗菌樣片加入試管內(nèi)，振蕩混勻置20℃±1℃水浴作用10min制成中和產(chǎn)物，再夾入1片染菌對照樣片，作用10min，振蕩將試驗菌洗下，用中和產(chǎn)物做10倍系列稀釋，選擇適宜稀釋度分別吸取1.0mL接種2個平皿，做活菌培養(yǎng)計數(shù)。第3組：取5.0mLPBS于無菌試管內(nèi)，置20℃入試管內(nèi)，作用10min，振蕩將試驗菌洗下，用PBS做10倍系列稀釋后選擇適宜稀釋度分別吸取1.0mL接種2個平皿，做活菌培養(yǎng)計數(shù)。第4組：分別吸取稀釋液與中和劑各1.0mL于同一無菌平皿內(nèi)，傾注同批次的培養(yǎng)基15mL~20mL，培養(yǎng)觀察。E.5.3.3.3結果判定第1組、第2組和第3組有相似量試驗菌生長，且菌量在1.0×104CFU/片～9.0×104CFU/片。計算組間菌落數(shù)誤差率，其組間菌落數(shù)誤差率應不超過15％。第4組無菌生長，否則，說明試劑有污染，應更換無污染的試劑重新進行試驗。試驗重復3次，每次試驗均應符合以上要求。E.5.3.4試驗步驟取無菌平皿，用無菌鑷子取3片試驗樣片，勿重疊，置20℃±1℃水浴5min，在每一樣片上滴加0.1mL試驗用菌懸液，立即計時。待試驗菌與樣片相互作用至各預定時間（以說明書規(guī)定時間為T，時間分別為0.5T、T、1.5T分別夾取染菌樣片加于5.0mL中和劑試管中，混勻。經(jīng)中和劑作用10min后，振蕩將試驗菌洗下，分別吸取1.0mL樣液，按活菌培養(yǎng)計數(shù)方法測定存活菌數(shù)，每管樣液接種2個平皿。如平板上生長的菌落數(shù)較多時，可10倍系列稀釋后，再進行活菌培養(yǎng)計數(shù)。同時用不含殺菌成分，其他成分相同的對照樣片2片代替試驗樣片，進行平行試驗，作為陽性對照。陽性對照回收菌落數(shù)在1.0×104CFU/片～9.0×104CFU/片。取試驗同批次稀釋液、中和劑、培養(yǎng)基作陰性對照。所有試驗樣本和對照樣本均在36℃±1℃培養(yǎng)48h（細菌）或72h（酵母菌），進行活菌菌落計數(shù)。試驗重復3次，計算殺菌率。E.5.3.5殺菌率計算殺菌率計算見公式（E.5）：K=×100%…………（E.5）式中：K─殺菌率；Nc─對照樣品平均菌落數(shù)，單位為每片菌落形成單位（CFU/片Ns─被試樣品平均菌落數(shù)，單位為每片菌落形成單位（CFU/片）。E.5.3.6結果判定各次試驗說明書規(guī)定時間的殺菌率大于或等于90%，判有抗菌作用；各次試驗說明書規(guī)定時間的殺菌率大于或等于99%，判有較強抗菌作用。E.5.4浸漬殺菌試驗E.5.4.1適用范圍適用于抗菌毛巾、抗菌棉襪、抗菌棉布等含有溶出性抗菌材料的抗菌織物對微生物抗菌效果的試驗。E.5.4.2試樣和菌懸液制備E.5.4.2.1試樣在距試樣布邊10.0cm以上、離布端1.0m以上部位，剪取直徑為5.0cm的圓形試樣若干，取3份試樣分別裝于3個錐形瓶中，蓋好瓶口備用（需用試樣數(shù)量要根據(jù)纖維類別及織物織法而定，以能吸收1.0mL菌懸液且錐形瓶中不留殘液為度）。另同法剪取與試樣相同材質(zhì)但不含抗菌劑對照織物若干，取E.5.4.2.2菌懸液的制備用接種環(huán)將保存的菌種以劃線法接種到營養(yǎng)瓊脂平皿，36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h，取典型的菌落移種到含肉湯培養(yǎng)基的錐形瓶中，36℃±1℃培養(yǎng)24h，用肉湯對培養(yǎng)液進行系列稀釋，使菌懸液的含菌量為1.0×105CFU/mL～5.0×105CFU/mL。E.5.4.3試驗步驟分別取1.0mL菌懸液加入2份準備好的錐形瓶內(nèi)試樣和1份對照織物上，確保其均勻分布，且錐形瓶中不留多余液，封好瓶口，以防蒸發(fā)，造成細菌死亡。分別在一個盛有已接種菌懸液的試樣和對照織物的錐形瓶中加入100mL中和劑，置渦旋振蕩器上振蕩1min洗滌細菌，取1.0mL進行10倍系列稀釋，選適當稀釋度以傾注法接種平皿，作為“0”接觸時間樣品和對照織物上的細菌數(shù)。將另一個裝有已接種菌懸液試樣的錐形瓶于36℃±1℃培養(yǎng)20h±2h，加入100mL中和劑，置渦旋振蕩器上振蕩1min洗滌細菌，取1.0mL進行10倍系列稀釋，選適當稀釋度以傾注法接種平皿，作為試驗組。陰性對照組：試樣不接種菌懸液，在“0”接觸時間加入100mL中和劑，置渦旋振蕩器上振蕩1min取樣，接種平皿。陽性對照組：另取1個裝有對照織物的錐形燒瓶，接種1.0mL菌懸液后，在36℃±1℃培養(yǎng)20h±2h，加入100mLPBS，置渦旋振蕩器上振蕩1min洗滌細菌，取1.0mL進行10倍系列稀釋，選適當稀釋度以傾注法接種平皿。將陰性和陽性對照樣品與試驗組樣品接種的平皿一并于36℃±1℃培養(yǎng)48h，計數(shù)菌落數(shù)。試驗3次。產(chǎn)品對白色念珠菌等其他微生物抗菌效果的測試方法同上，選擇相應的菌株、培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件。E.5.4.4殺菌率的計算殺菌率計算見公式（E.6）：K=Nttc或×100％…………（E.6）式中：K─殺菌率；Ns─被試樣品平均菌落數(shù)，單位為每片菌落形成單位（CFU/片Nt─“0”接觸時間被試樣品平均菌落數(shù)，單位為每片菌落形成單位（CFU/片Nc─“0”接觸時間陽性對照樣品平均菌落數(shù)，單位為每片菌落形成單位（CFU/片）。如果Nt和Nc差別較大時，取較大值；如果Nt和Nc差別不大時，取平均值。E.5.4.5評價標準E.5.4.5.1“0”接觸時間對照織物的平均菌落數(shù)應在1.0×103CFU/片～5.0×103CFU/片。E.5.4.5.2陰性對照應無菌生長，陽性對照菌數(shù)比“0”接觸時間的菌數(shù)明顯增加。E.5.4.5.3各次試驗的殺菌率均大于或等于90％，即可認定該樣品具有抗菌作用；各次殺菌率均大于或等于99％，判有較強抗菌作用。E.5.5振蕩燒瓶試驗E.5.5.1適用范圍適用于對含非溶出性抗菌物質(zhì)抗菌產(chǎn)品的抗菌性能檢測。注1：在進行振蕩燒瓶試驗前，需要鑒定其抗菌成分是否可溶出，如果有溶出性抗菌材料，參照可溶出抗菌材料檢測，無溶出性抗菌材料，選用振蕩燒瓶法進行。注2：非溶出性抗菌材料的鑒定：將樣品置于無菌蒸餾水浸泡24h（通過預試驗，吸取的浸泡液需滿足后續(xù)檢測要求），取浸泡液參照E.5.1抗菌劑殺菌性能試驗檢驗是否有抗菌效果。如果無抗菌效果，說明樣品屬非溶出性抗菌材料，進行振蕩燒瓶試驗。E.5.5.2試驗步驟E.5.5.2.1將材料剪切成10mm×10mm樣片，稱取0.75g兩份分別置入250mL的錐形燒瓶中。E.5.5.2.2在上述錐形燒瓶中加入70mLPBS和5.0mL新鮮制備的菌懸液，使菌懸液在PBS中的濃度為1.0×104CFU/mL～5.0×104CFU/mL。E.5.5.2.3將錐形燒瓶固定于振蕩搖床上，在20℃~25℃條件下，以300r/min振搖2min，吸取1.0mL作為試驗組振蕩前樣液；繼續(xù)振搖至1h，吸取1.0mL樣液作為試驗組振蕩后樣液。E.5.5.2.4用PBS對振蕩前和振蕩后樣液進行適當稀釋后，每個平皿加樣液1.0mL，以瓊脂傾注法接種平皿，每個樣液分別接種兩個平皿，培養(yǎng)后進行活菌菌落計數(shù)。E.5.5.2.5同時設陰性對照樣片組和不加樣片組。陰性對照樣片組的對照樣片應與試驗樣片同等材質(zhì)、同等大小但不含抗菌成分，且經(jīng)滅菌處理；不加樣片組分別取5.0mL菌懸液和70mLPBS加入250mL三角燒瓶中，混勻，分別于振蕩前和振蕩后預定時間，各取1.0mL菌懸液與PBS的混合液進行適當稀釋，進行活菌菌落計數(shù)。E.5.5.2.6以試驗同批次的稀釋液、培養(yǎng)基分別設陰性對照。E.5.5.2.7重復試驗3次。E.5.5.3計算公式殺菌率計算見公式（E.7）：K=×100%…………（E.7）式中：K─殺菌率；Nc─樣品振蕩前平均菌落數(shù)，單位為每片菌落形成單位（CFU/片Ns─樣品振蕩后平均菌落數(shù)，單位為每片菌落形成單位（CFU/片）。E.5.5.4評價標準E.5.5.4.1各次試驗陰性對照均應無菌生長。E.5.5.4.2不加樣片組活菌計數(shù)在1.0×104CFU/片～5.0×104CFU/片之間，且樣品振蕩前后平均菌落數(shù)差值在10％以內(nèi)，試驗有效。E.5.5.4.3各次試驗中，試驗樣片殺菌率與對照樣片殺菌率的差值大于26％，產(chǎn)品具有抗菌作用。E.5.5.4.4抗菌纖維類產(chǎn)品的最長抗菌作用時間不應超過1h。E.5.5.5注意事項E.5.5.5.1振蕩前應將振蕩搖床上的錐形瓶固定牢，以免碰破。E.5.5.5.2試驗中，在試驗誤差允許的范圍內(nèi)，如果試驗樣片和對照樣片出現(xiàn)振蕩后菌落數(shù)高于振蕩前菌落數(shù)的情況，其殺菌率可按“0”計算。E.6產(chǎn)品抑菌性能試驗E.6.1抑菌劑抑菌性能試驗E.6.1.1適用范圍適用于液體抑菌劑對微生物抑菌效果的測定。E.6.1.2試驗步驟取新鮮制備的菌懸液0.5mL滴加于4.5mL樣液內(nèi)，混勻后開始計時，作用至預定時間，用定量吸管吸取菌藥混懸液0.5mL放入4.5mL稀釋液的試管內(nèi)，充分混勻，分別吸取1.0mL接種平皿，每管接種2個平皿，將冷至40℃~45℃熔化的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（細菌）或沙堡弱瓊脂培養(yǎng)基（酵母菌傾注于已加入樣液的平皿中，每平皿15mL～20mL，轉動平皿，使其充分混勻，瓊脂凝固后翻轉平皿，36℃±1℃培養(yǎng)48h（細菌）或72h（酵母菌），進行活菌菌落計數(shù)。試驗同時用稀釋液代替試樣，進行平行試驗，作為陽性對照，回收菌數(shù)為1.0×104CFU/mL～9.0×104CFU/mL。試驗3次，計算抑菌率。E.6.1.3計算抑菌率計算見公式（E.8Y=×100%…………（E.8）式中：Y─抑菌率；Nc─對照樣品平均菌落數(shù)，單位為每毫升菌落形成單位（CFU/mL）；Ns─被試樣品平均菌落數(shù)，單位為每毫升菌落形成單位（CFU/mL）。E.6.1.4評價標準各次試驗抑菌率Y均大于或等于50％到小于90％之間，產(chǎn)品有抑菌作用；各次試驗抑菌率均大于或等于90％，產(chǎn)品有較強抑菌作用。抑菌劑的最長抑菌作用時間不應超過5min。E.6.1.5注意事項若由原液接種的平皿上菌落數(shù)大于300CFU或難以計數(shù)時，才需進行10倍系列稀釋，選擇適宜稀釋度平皿作活菌菌落計數(shù)。E.6.2載體浸泡定量抑菌試驗E.6.2.1適用范圍適用于黏稠狀（半固體）抑菌產(chǎn)品（如抑菌洗手液等）對微生物抑菌效果的測定。E.6.2.2試驗步驟取試驗菌24h新鮮斜面培養(yǎng)物用PBS洗下，用PBS稀釋至約5.0×106CFU/mL～5.0×107CFU/mL制成菌懸液備用。用微量移液器滴染10μL菌懸液于滅菌載體上，35℃±1℃烘干或室溫晾干備用。按5.0g/片的量稱取樣品于無菌平皿內(nèi)，置20℃±1℃水浴5min，用無菌鑷子取染菌載體，使載體完全浸沒于樣品中，立即計時。待染菌載體與樣品相互作用至說明書的規(guī)定時間，分別取染菌載體加入5.0mLPBS試管中，混勻，振蕩，將試驗菌洗下，分別吸取1.0mL樣液，按活菌培養(yǎng)計數(shù)方法測定存活菌數(shù)，每管樣液接種2個平皿。如平板上生長的菌落數(shù)較多時，可用PBS進行10倍系列稀釋后，再進行活菌培養(yǎng)計數(shù)。取10.0g與試驗樣品同質(zhì)材料不含抑菌成分的對照樣品浸泡2片染菌載體進行平行試驗，作為陽性對照。陽性對照回收菌量為1.0×104CFU/片～9.0×104CFU/片。取同批次PBS、培養(yǎng)基作陰性對照。所有試驗樣品和對照樣品接種平皿均在36℃±1℃培養(yǎng)48h（細菌）或72h（酵母菌），進行活菌菌落計數(shù)。重復試驗3次，計算抑菌率。E.6.2.3計算抑菌率計算見公式（E.9×100％…………（E.9）式中：Y─抑菌率；Nc─對照樣品平均菌落數(shù)，單位為每片菌落形成單位（CFU/片Ns─試驗樣品平均菌落數(shù)，單位為每片菌落形成單位（CFU/片）。E.6.2.4評價標準各次試驗抑菌率Y均大于或等于50％到小于90％之間，判有抑菌作用；各次試驗抑菌率均大于或等于90％，判有較強抑菌作用。E.6.3載體抑菌試驗E.6.3.1適用范圍適用于含溶出性抑菌成分的濕巾、無紡布口罩、衛(wèi)生巾、護墊、尿布等固體類抑菌產(chǎn)品對微生物抑菌效果的測定。E.6.3.2試驗步驟取試驗菌24h新鮮斜面培養(yǎng)物用PBS洗下，用PBS稀釋至5.0×105CFU/mL～5.0×106CFU/mL，制成菌懸液備用。用滅菌剪刀在無菌條件下將試驗樣品和對照樣品分別剪成20mm×30mm樣片備用。試驗時滴加100μL菌懸液。對照樣片染菌前需經(jīng)壓力蒸汽滅菌。取無菌平皿，用無菌鑷子取2片試驗樣片，勿重疊，置20℃±1℃水浴5min，在每一樣片上滴加100μL試驗用菌懸液，立即計時。待試驗菌與樣片接觸作用至說明書的規(guī)定時間，分別夾取染菌樣片加于5.0mLPBS試管中，混勻。振蕩洗脫，分別吸取1.0mL樣液，按活菌培養(yǎng)計數(shù)方法測定存活菌數(shù)，每管樣液接種2個平皿。如平板上生長的菌落數(shù)較多時，可10倍系列稀釋后，再進行活菌培養(yǎng)計數(shù)。同時用與試驗樣品同質(zhì)材料不含抑菌成分的對照樣片2片代替試驗樣片進行試驗，作為陽性對照，陽性對照回收菌量為1.0×104CFU/片～9.0×104CFU/片；取同批次PBS、培養(yǎng)基作陰性對照。所有試驗樣本和對照樣本均在36℃±1℃培養(yǎng)48h（細菌）或72h（酵母菌），進行活菌菌落計數(shù)。試驗重復3次，計算抑菌率。E.6.3.3抑菌率計算抑菌率計算見公式（E.10）：×100％…………（E.10）式中：Y─抑菌率；Nc─對照樣品平均菌落數(shù)，單位為每片菌落形成單位（CFU/片Ns─試驗樣品平均菌落數(shù)，單位為每片菌落形成單位（CFU/片）。E.6.3.4結果判定各次試驗抑菌率Y大于或等于50％到小于90％之間，判有抑菌作用；各次試驗抑菌率大于或等于90%，判有較強抑菌作用。E.6.4抑菌環(huán)試驗E.6.4.1適用范圍適用于含溶出性抑菌物質(zhì)，或可制成直徑為5.0mm片狀物的固體抑菌產(chǎn)品的抑菌效果鑒定；也可用于鑒別抑菌產(chǎn)品中是否含有可溶性抑菌物質(zhì)。E.6.4.2載體和器材E.6.4.2.1液體材料試驗載體：5.0mm直徑圓形濾紙片，經(jīng)壓力蒸汽滅菌處理后，置120℃烤干2h，保存?zhèn)溆?。E.6.4.2.2微量移液器：5.0μL～50μL，可調(diào)式。E.6.4.2.3游標卡尺。E.6.4.3操作步驟E.6.4.3.1試驗樣片的制備：對液體材料，取無菌并干燥的濾紙片。每片滴加產(chǎn)品實際使用濃度的溶液5.0μL，然后將濾紙片平放于清潔的無菌平皿內(nèi)，開蓋置37℃恒溫箱中烤干，或置室溫下自然干燥后備用。對固體材料，可直接制成直徑為5.0mm、厚度不超過4.0mm的圓片（塊每4片（塊）一組。E.6.4.3.2陰性對照樣片的制備：對液體材料，取無菌干燥濾紙片,每片滴加無菌蒸餾水5.0μL，干燥后備用。對固體材料，對照樣片應與試驗樣片同等材質(zhì)、同等大小但不含抑菌成分。E.6.4.3.3試驗菌的接種：用無菌棉拭子蘸取濃度為5.0×105CFU/mL～5.0×106CFU/mL新鮮制備的試驗菌懸液，在適宜的培養(yǎng)基平板表面均勻涂抹3次。每涂抹1次，平板應轉動60°,最后將棉拭子繞平板邊緣涂抹一周。蓋好平皿，置室溫干燥5min。E.6.4.3.4樣片貼放：每次試驗貼放1個染菌平板,每個平板貼放4片試驗樣片，1片陰性對照樣片，共5片。用無菌鑷子取樣片貼放于平板表面，陰性對照樣片貼于平板中心位置，試驗樣片貼于四周。各樣片中心之間相距25mm以上，與平板的周緣相距15mm以上。貼放好后，用無菌鑷子輕壓樣片,使其緊貼于平板表面。蓋好平皿，置36℃±1℃培養(yǎng)箱，培養(yǎng)16h～18h測量結果。用游標卡尺測量抑菌環(huán)的直徑（包括貼片）并記錄。試驗3次（共12個樣片）。測量抑菌環(huán)時，應選均勻而完全無菌生長的抑菌環(huán)進行。測量其直徑應以抑菌環(huán)外沿為界。E.6.4.4評價標準E.6.4.4.1抑菌作用的判斷：抑菌環(huán)直徑大于7.0mm者，判為有抑菌作用；抑菌環(huán)直徑小于或等于7.0mm者，判為無抑菌作用。E.6.4.4.2重復試驗3次（共12個樣片）均有抑菌作用結果者，判為有抑菌作用。E.6.4.4.3陰性對照組應無抑菌環(huán)產(chǎn)生，否則試驗無效。E.6.4.5注意事項E.6.4.5.1每次試驗均應設置陰性對照，不可省略，在報告中亦應將對照組的結果列出。E.6.4.5.2接種用細菌懸液的濃度應符合要求。E.6.4.5.3應保持瓊脂濃度的準確性，否則可影響抑菌環(huán)的大小。E.6.4.5.4培養(yǎng)時間不得超過18h。培養(yǎng)過久，部分細菌可恢復生長，抑菌環(huán)變小。E.6.4.5.5抑菌環(huán)直徑可受抑菌劑的量、抑菌性能和干濕度影響。故抑菌劑濾紙片應在試驗當天制備。E.6.5浸漬抑菌試驗E.6.5.1適用范圍適用于溶出性抑菌織物（如抑菌毛巾、內(nèi)衣等）抑菌效果的測定。E.6.5.2試樣和菌懸液制備E.6.5.2.1試樣在距試樣布邊10.0cm以上、離布端1.0m以上部位，剪取直徑為5.0cm的圓形試樣若干，取3份試樣分別裝于3個錐形瓶中，蓋好瓶口備用（需用試樣數(shù)量要根據(jù)纖維類別及織物織法而定，以能吸收1.0mL菌懸液且錐形瓶中不留殘液為度）。另同法剪取與試樣相同材質(zhì)但不含抑菌劑對照織物若干，取E.6.5.2.2菌懸液的制備用接種環(huán)將保存的菌種以劃線法接種到營養(yǎng)瓊脂平皿，36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h，取典型的菌落移種到含肉湯培養(yǎng)基的錐形瓶中，36℃±1℃培養(yǎng)24h，用肉湯對培養(yǎng)液進行系列稀釋，使菌懸液的含菌量為1.0×105CFU/mL～5.0×105CFU/mL。E.6.5.3試驗步驟分別取1.0mL菌懸液加入2份準備好的錐形瓶內(nèi)試樣和1份對照織物上，確保其均勻分布，且錐形瓶中不留多余液，封好瓶口，以防蒸發(fā)造成細菌死亡。分別在一個盛有已接種菌懸液的試樣和對照織物的錐形瓶中加入100mLPBS，置渦旋振蕩器上振蕩1min洗滌細菌，分別吸取1.0mL樣液或10倍系列稀釋液接種2個平皿，作為“0”接觸時間樣本和對照織物上的細菌數(shù)。將另一個裝有已接種菌懸液試樣的錐形瓶于36℃±1℃培養(yǎng)20h±2h，加入100mLPBS，置渦旋振蕩器上振蕩1min洗滌細菌，分別吸取1.0mL樣液或10倍系列稀釋液接種2個平皿，作為試驗組。陰性對照組，試樣不接種菌懸液，在“0”接觸時間加入100mLPBS，置渦旋振蕩器上振蕩1min取樣，接種平皿。陽性對照組，另取1個裝有對照織物的錐形燒瓶，接種1.0mL菌懸液后，在36℃±1℃培養(yǎng)20h±2h，加入100mLPBS，置渦旋振蕩器上振蕩1min洗滌細菌，分別吸取1.0mL樣液或10倍系列稀釋液接種2個平皿。將陰性和陽性對照樣品與試驗組樣品接種的平皿一并于36℃±1℃培養(yǎng)48h，計數(shù)菌落數(shù)。重復試驗3次，計算抑菌率。E.6.5.4計算抑菌率抑菌率計算見公式（E.11）：×100％…………（E.11）式中：Y─抑菌率；Ns─被試樣品平均菌落數(shù)，單位為每片菌落形成單位（CFU/片Nt─“0”接觸時間被試樣品平均菌落數(shù)，單位為每片菌落形成單位（CFU/片Nc─“0”接觸時間對照樣品平均菌落數(shù)，單位為每片菌落形成單位（CFU/片）。如果Nt和Nc差別較大時，取較大值；如果Nt和Nc差別不大時，取平均值。E.6.5.5評價標準E.6.5.5.1“0”接觸時間對照織物的平均回收菌量應為1.0×103CFU/片～5.0×103CFU/片。E.6.5.5.2陰性對照應無菌生長，陽性對照菌數(shù)比“0”接觸時間的菌數(shù)明顯增加。E.6.5.5.3各次試驗的抑菌率均大于或等于50％，即可判定該樣品具有抑菌作用。E.6.6振蕩燒瓶試驗E.6.6.1適用范圍適用于對含非溶出性抑菌物質(zhì)的材料的抑菌性能檢測。注1：在進行振蕩燒瓶試驗前，需要鑒定其抑菌成分是否可溶出，如果有溶出性抑菌材料，參照可溶出抑菌材料檢測；無溶出性抑菌材料，選用振蕩燒瓶法進行。注2：非溶出性抑菌材料的鑒定：將樣品置于無菌蒸餾水浸泡24h（通過預試驗，吸取的浸泡液需滿足后續(xù)檢測要求），取浸泡液參照E.6.1抑菌劑抑菌性能試驗或參照E.6.4抑菌環(huán)試驗檢驗是否有抑菌效果。如果無抑菌效果，說明樣品屬非溶出性抑菌材料，進行振蕩燒瓶試驗。E.6.6.2試驗步驟同E.5.5.2。E.6.6.3計算抑菌率計算見公式（E.12）：Y=×100％…………（E.12）式中：Y─抑菌率；Nc─對照樣品平均菌落數(shù)，單位為每片菌落形成單位（CFU/片Ns─被試樣品平均菌落數(shù)，單位為每片菌落形成單位（CFU/片）。E.6.6.4評價標準E.6.6.4.1各次試驗陰性對照均應無菌生長。E.6.6.4.2不加樣片組活菌計數(shù)在1.0×104CFU/片～9.0×104CFU/片之間，且樣品振蕩前后平均菌落數(shù)差值在10％以內(nèi)，試驗有效。E.6.6.4.3各次試驗中，試驗樣片抑菌率與對照樣片抑菌率的差值大于26％，產(chǎn)品具有抑菌作用。E.6.7高吸水材料抑菌性能試驗E.6.7.1適用范圍本試驗方法適用于含有非溶出性高吸水材料抑菌產(chǎn)品抑菌效果的測定。注1：在進行本試驗前，需要鑒定其抑菌成分是否可溶出。注2：非溶出性抑菌材料的鑒定：將樣品置于無菌蒸餾水浸泡24h（通過預試驗，吸取的浸泡液需滿足后續(xù)檢測要求），取浸泡液參照E.6.1抑菌劑抑菌性能試驗或參照E.6.4抑菌環(huán)試驗檢驗是否有抑菌效果。如果無抑菌效果，說明樣品屬非溶出性抑菌材料，進行高吸水材料抑菌性能試驗。E.6.7.2試樣制備將10cm×30cm大小的食品級尼龍布（250目）用封口機做成10cm×15cm的尼龍布袋，作為測定吸液量備用。測試樣品選取產(chǎn)品的抑菌層。對照樣品應與測試樣品選自相同部位，同等材質(zhì)、同等大小但不含抑菌成分。E.6.7.3吸液量的測定取測試樣品和對照樣品分別剪成5.0mm×5.0mm的大小，各稱重1.0g±0.01g（注意：邊剪邊稱，稱量時使用稱量紙，避免高吸水材料灑出），分別放入預制的尼龍布袋中。分別將含有測試樣品、對照樣品的尼龍布袋以及不含樣品的空尼龍布袋稱重后放入肉湯培養(yǎng)液（NB培養(yǎng)基）中，浸泡30min（注意去除氣泡）后，吊起尼龍布袋20min后分別稱重。測試樣品、對照樣品以及空的尼龍布袋分別測定三次吸液量取平均值。吸液量測定步驟見圖E.1。圖E.1吸液量測定步驟吸液量計算見公式（E.13）和公式（E.14）：Sj=(Mj-B)-mj…………（E.13）…………