農(nóng)業(yè)部2122號公告-4-2014 轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品成分檢測 耐除草劑和品質(zhì)改良大豆MON87705及其衍生品種定性PCR方法

農(nóng)業(yè)部2122號公告一4—2014轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品成分檢測耐除草劑和品質(zhì)改良大豆MON87705及其衍生品種定性PCR方法2014-07-07發(fā)布2014-08-01實(shí)施I農(nóng)業(yè)部2122號公告—4—2014本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1—2009給出的規(guī)則起草。1農(nóng)業(yè)部2122號公告—4—2014及其衍生品種定性PCR方法本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了轉(zhuǎn)基因耐除草劑和品質(zhì)改良大豆M農(nóng)業(yè)部1485號公告—4—2010轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品成分檢測DNA提取和純化農(nóng)業(yè)部2031號公告—8—2013轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品成分檢測大豆內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因定性PCR方法農(nóng)業(yè)部2031號公告—19-2013轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品成分檢測抽樣NY/T672轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品檢測通用要求外源插入片段3'端與大豆基因組的連接區(qū)序列，包括外源插入片段3'端部分序列和大豆基因組2lec-1672F:5'-GGGTGAGGATAGGlec-1881R:5'-GCGATCGAGTAGTMON87705-F:5'-CGCCAAATCGTGAAGTTTCMON87705-R:5'-CAGTGATAACAACACCCT37.5PCR反應(yīng)7.5.1試樣PCR反應(yīng)7.5.1.2.1每個試樣PCR反應(yīng)設(shè)置3次平行。終濃度水10×PCR緩沖液dNTPs混合溶液(各2.5mmol/L)25mg/LDNA模板總體積“—”表示體積不確定。如果PCR緩沖液中含有氯化鎂，則不加氯化鎂溶液。根據(jù)TaqDNA聚合酶的積，并相應(yīng)調(diào)整水的體積，使反應(yīng)體系總體積達(dá)到25.0μL。7.5.1.2.4進(jìn)行PCR反應(yīng)。農(nóng)業(yè)部2122號公告—4—2014增片段是否為目的DNA片段，按照7.8和7.9的規(guī)定執(zhí)行。將回收的PCR產(chǎn)物克隆測序，與轉(zhuǎn)基因耐除草劑和品質(zhì)改良大豆MON87705轉(zhuǎn)化體特異性序列(參見附錄A)進(jìn)行比對，確定PCR擴(kuò)增的DNA片段是否為目的DNA片段。8.2.1Lectin內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因和MON87705轉(zhuǎn)化體特異性序列均得到擴(kuò)增，且擴(kuò)增片段大小與預(yù)期片段特異性序列未得到擴(kuò)增，或擴(kuò)增片段大小與預(yù)期片段大小不一致，表明樣品中未檢測出轉(zhuǎn)基因大豆5農(nóng)業(yè)部2122號公告—4—20141CGCCAAATCGTGAAGTTTCTCATCTAAGCCCCCATTTGGACGTGA61AATAAAGATTTCCGAATTAGAAT121CGTAATTTGTCGTTTTATCAAAATGTACTTTCATTTTATAATA181A