農(nóng)業(yè)部2031號(hào)公告-7-2013 轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品成分檢測(cè) 抗蟲(chóng)水稻科豐2號(hào)及其衍生品種定性PCR方法

轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品成分檢測(cè)抗蟲(chóng)水稻科豐2號(hào)及其衍生品種定性PCR方法2013-12-04發(fā)布2013-12-04實(shí)施I農(nóng)業(yè)部2031號(hào)公告—7—20131農(nóng)業(yè)部2031號(hào)公告—7—2013抗蟲(chóng)水稻科豐2號(hào)及其衍生品種定性PCR方法本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)水稻科豐2號(hào)轉(zhuǎn)化體特異性的定性PCR檢測(cè)方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)水稻科豐2號(hào)及其衍生品種以及制品中科豐2號(hào)轉(zhuǎn)化體成分的定性PCRGB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水NY/T672轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品檢測(cè)通用要求農(nóng)業(yè)部2031號(hào)公告—19—2013轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品檢測(cè)抽樣農(nóng)業(yè)部1485號(hào)公告—4—2010轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品成分檢測(cè)DNA提取和純化科豐2號(hào)外源插入片段3'端與水稻基因組的連接區(qū)序列，包括整合序列3'端部分序列和水稻基因4原理根據(jù)轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)水稻科豐2號(hào)轉(zhuǎn)化體特異性序列設(shè)計(jì)特異性引物，對(duì)試樣DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增檢測(cè)。依據(jù)是否擴(kuò)增獲得預(yù)期的DNA片段，判斷樣品中是否含有科豐225.4500mmol/L乙二銨四乙酸二鈉溶液(pH8.0):稱取SPS-F:5'-ATCTGTTTACTPEPC-F:5'-TCCCTCCAGAAGGTCTTTPEPC-R:5'-GCTGGCAACTGGTTGGKF2-F:5'-TAGAGCAGCTTGAGCTTGKF2-R:5'-GCACGGACTATACAAGTTGT37.5.1試樣PCR反應(yīng)以非轉(zhuǎn)基因水稻基因組DNA作為陰性對(duì)照；以轉(zhuǎn)基因水稻科豐2號(hào)質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%～1.0%的水稻基因組DNA,或采用科豐2號(hào)轉(zhuǎn)化體特異性序列與非轉(zhuǎn)基因水稻基因組相比的拷貝數(shù)分?jǐn)?shù)為水10×PCR緩沖液XdNTPs混合溶液(各2.5mmol/L)總體積“—”表示體積不確定。如果PCR緩沖液中含有氯化鎂，則不加氯化鎂溶液，根據(jù)TaqDNA聚合酶的濃度確定其體積，注：水稻內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因PCR檢測(cè)反應(yīng)體系中，上、下游引物分別為SPS-F和SPS-R或PEPC-F和PEPC-體特異性PCR檢測(cè)反應(yīng)體系中，上、下游引物分別為KF2-F和KF2-R。451TAGAGCAGCTTGAGCTTGGATCAGATTGTTTGCTCT