《彩色馬蹄蓮組培快繁技術(shù)規(guī)程（征求意見(jiàn)稿）》

ICS65.020.20CCS6232（2024-01-25）在提交反饋意見(jiàn)時(shí)，請(qǐng)將您知道的相關(guān)專利連同支持性文件一并附上。IDB32/TXXXX—XXXX前言 2規(guī)范性引用文件 3術(shù)語(yǔ)和定義 4組培苗的生產(chǎn) 4.1外植體獲取 4.2外植體的消毒 4.3不定芽的誘導(dǎo) 4.4不定芽的增殖 4.5壯芽培養(yǎng) 24.6壯苗培養(yǎng) 24.7瓶?jī)?nèi)結(jié)球培養(yǎng) 24.8生根培養(yǎng) 25煉苗和移栽 25.1環(huán)境條件 25.2移栽基質(zhì) 25.3煉苗 25.4移栽 26移栽后管理 36.1水分 36.2光照 36.3溫度 36.4濕度 36.5施肥 36.6病害防治 37一年生仔球的生產(chǎn) 3附錄A（資料性）基質(zhì)消毒方法 4附錄B（資料性）常用細(xì)菌殺菌劑 5DB32/TXXXX—XXXX本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由江蘇省中國(guó)科學(xué)院植物研究所提出并歸口。本文件起草單位：江蘇省中國(guó)科學(xué)院植物研究所。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：鄭玉紅，傅力，付嬌嬌，韓福貴。1DB32/TXXXX—XXXX彩色馬蹄蓮組培快繁技術(shù)規(guī)程本文件規(guī)定了彩色馬蹄蓮品種組織培養(yǎng)快速繁殖、組培苗的移栽管理和病蟲(chóng)害防治的技術(shù)要求。本文件適用于江蘇省采用組織培養(yǎng)的方式進(jìn)行彩色馬蹄蓮的繁殖。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。LY/T1589花卉術(shù)語(yǔ)CJ/T135園林綠化球根花卉種球3術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。一年生仔球oneyear~oldtuber組培苗經(jīng)過(guò)一個(gè)生長(zhǎng)季的栽培發(fā)育形成的塊莖。4組培苗的生產(chǎn)4.1外植體獲取選取直徑大于4.0cm的健康的彩色馬蹄蓮塊莖，用800~1000倍廣譜性殺菌劑水溶液浸泡15min后，淺埋于經(jīng)高壓滅菌的濕潤(rùn)細(xì)沙中，在光照強(qiáng)度3000lx、光照時(shí)間12h/d、(25±1)℃的條件下預(yù)培養(yǎng)7～10d后，選取芽長(zhǎng)約1cm的塊莖，作為外植體。4.2外植體的消毒用軟毛刷將塊莖刷洗干凈，避免損傷頂芽，將其切成長(zhǎng)寬均約為1.5cm的帶芽小塊，放入含1%液體洗滌劑的溶液中振蕩洗滌20min~30min，之后流水沖洗40min~60min，轉(zhuǎn)入超凈工作臺(tái)，75％酒精消毒30s~45s后，無(wú)菌水沖洗2~3次，再用有效氯含量2%~3%的次氯酸鈉溶液消毒25min～35min，無(wú)菌水沖洗4～5次，無(wú)菌吸水紙吸干表面的水分。4.3不定芽的誘導(dǎo)將消毒好的彩色馬蹄蓮種球切成大小約lcm3的帶芽小塊，接種至下列培養(yǎng)基中：基本培養(yǎng)基MS，蔗糖30g/L，6~BA2.0~5.0mg/L，pH5.8；在溫度（25±1）℃,黑暗培養(yǎng)，直至外植體萌發(fā)出不定芽。4.4不定芽的增殖2DB32/TXXXX—XXXX將生長(zhǎng)至4~6cm的不定芽連同部分塊莖一起切下，在不定芽增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)：基本培養(yǎng)基MS，瓊脂6.5g/L~7.0g/L，蔗糖30g/L，6~BA2.0mg/L~4.0mg/L，pH5.8；溫度（25±1℃),光照強(qiáng)度為1000~3000lx，光照時(shí)間12h，直至誘導(dǎo)出塊狀叢生芽。4.5壯芽培養(yǎng)將塊狀叢生芽分切成約1.0cm2小塊，接種到壯芽培養(yǎng)基上，進(jìn)行壯芽培養(yǎng)：基本培養(yǎng)基MS，瓊脂6.5g/L~7.0g/L，蔗糖30g/L，NAA0~0.5mg/L，6~BA2.0mg/L~3.0mg/L，pH5.8；溫度（25±1）℃,光照強(qiáng)度為1000~3000lx，光照時(shí)間12h，培養(yǎng)周期60d~80d，直至叢生芽長(zhǎng)成可以分切成單株的小苗。其中，在30d~40d，采用同樣的配方進(jìn)行繼代培養(yǎng)。4.6壯苗培養(yǎng)將壯芽后分切成單株的小苗接種到一下培養(yǎng)基中進(jìn)行壯苗培養(yǎng)，培養(yǎng)基組分為：基本培養(yǎng)基MS，瓊脂6.5g/L~7.0g/L，蔗糖30g/L，NAA0~1.0mg/L，6~BA2.0mg/L~3.0mg/L，pH5.8；溫度（25±1）℃,光照強(qiáng)度為1000~3000lx，光照時(shí)間12h，培養(yǎng)周期60d~80d，直至長(zhǎng)成塊莖直徑約0.5cm小苗。4.7瓶?jī)?nèi)結(jié)球培養(yǎng)將塊莖約0.5cm小苗保留1cm~2cm葉柄，進(jìn)行瓶?jī)?nèi)結(jié)球培養(yǎng)：基本培養(yǎng)基MS，瓊脂6.5g/L~7.0g/L，蔗糖40g/L~60g/L，NAA0.5mg/L~1.0mg/L，6~BA1.0mg/L~2.0mg/L，pH5.8；溫度（25±1）℃,光照強(qiáng)度為1000~3000lx，光照時(shí)間12h，進(jìn)行光照培養(yǎng)30d~40d，直至每株小苗均膨大出直徑0.5cm~0.8cm的塊莖。4.8生根培養(yǎng)IBA1.0mg/L~2.0mg/L，pH5.8；培養(yǎng)溫度（25±1）℃,光照強(qiáng)度為1000~3000lx，光照時(shí)間為12h，直至每株苗均長(zhǎng)出長(zhǎng)度2.0cm~3.0cm、數(shù)量3~5條組培苗。5煉苗和移栽5.1環(huán)境條件宜在春季或9~10月進(jìn)行。若其他季節(jié)進(jìn)行，需在溫度和濕度可調(diào)控的溫室進(jìn)行。5.2移栽基質(zhì)第一次使用的基質(zhì)無(wú)需消毒，重復(fù)使用基質(zhì)須消毒。消毒的方法分物理消毒法和化學(xué)消毒法2種，詳見(jiàn)附錄A。要求疏松、透氣并具有一定的保水性能。采用泥炭土:珍珠巖＝2:1時(shí)，可加入適量的蛭石。5.3煉苗在組織培養(yǎng)的緩沖間將組培瓶蓋擰松，放置2~3d；之后打開(kāi)瓶蓋，再放置2d～3d，煉苗即可完成。5.4移栽煉苗完成后，用鑷子將組培苗從瓶中取出，洗凈根部的培養(yǎng)基，用800倍~1000倍廣譜殺菌劑浸泡8min~10min，移栽到10×10的穴盤(pán)中。若直接移栽到苗床上，定植的密度以（600~700）株/m2為宜。定植深度以不倒伏為準(zhǔn)，然后用噴霧法澆透水，3DB32/TXXXX—XXXX6移栽后管理6.1水分掌握“少量多次”的原則，澆水的頻率也應(yīng)因季節(jié)而異。水質(zhì)應(yīng)符合GB5084的要求，無(wú)病菌，EC值在1.5以下，pH值為6.5～7.2。定植約4周后，進(jìn)行正常的水分管理。6.2光照夏季進(jìn)行組培苗的露地移栽時(shí)，須加蓋一層遮光度30%～50%遮陽(yáng)網(wǎng)進(jìn)行遮蔭。6.3溫度應(yīng)將環(huán)境溫度控制18℃~28℃,最高不超過(guò)30℃。夏季移栽，當(dāng)溫度超過(guò)28℃時(shí)，即應(yīng)用微噴霧設(shè)備降溫，同時(shí)加大遮陽(yáng)度，保持良好的通風(fēng)。6.4濕度保持相對(duì)濕度60%~80%。移栽一周內(nèi)宜保持70%~80%，一周后可逐步降低。6.5施肥定植約4周后，需進(jìn)行根外施肥?？墒褂肗:P:K=2:1:1，濃度0.3%~0.5%的液態(tài)肥，并按先低后高的原則，每7d~10d施肥一次。6.6病害防治以預(yù)防細(xì)菌性病害為主。可每2~3周進(jìn)行一次灌根。常用光譜性殺菌劑均可使用。7一年生仔球的生產(chǎn)彩色馬蹄蓮組培苗在穴盤(pán)或苗床上栽培一個(gè)生長(zhǎng)季節(jié)，并發(fā)育出直徑約2cm的塊莖后，即可通過(guò)斷水等方法強(qiáng)制其休眠。待葉片變黃后采收，置于陰涼、通風(fēng)處干燥。采收過(guò)程中盡量避免損傷塊莖表皮。此即為一年生仔球，可進(jìn)行大田種植，開(kāi)展商業(yè)化生產(chǎn)。4DB32/TXXXX—XXXX（資料性）基質(zhì)消毒方法A.1物理方法一般采用蒸汽消毒，即將基質(zhì)堆成圓錐狀，高度不超過(guò)1.5m，將多孔的管子平放并埋入基質(zhì)約40cm、80cm、120cm高處，表面嚴(yán)實(shí)地覆蓋塑料薄膜，然后從蒸汽鍋爐中放出200℃左右蒸汽，使基質(zhì)溫度上升70℃~90℃保持0.5h~lh即可。A.2化學(xué)方法A.2.1威百畝消毒將基質(zhì)平鋪，厚度30cm-40cm，按6g/m2用藥量，加水稀釋，用噴霧器均勻噴灑在基質(zhì)表面，然后再噴一次灌溉水，讓基質(zhì)充分濕潤(rùn)，最后用完好的塑料薄膜覆蓋，四周壓實(shí)，15d后掀膜即可。操作應(yīng)選在早晚涼爽環(huán)境中進(jìn)行。A.2.2五氯硝基苯消毒40%可濕性粉劑，按照1:(20~40)拌細(xì)土，然后將待消毒的基質(zhì)平鋪，厚度30cm-40cm，按10g/m2用量均勻撒在基質(zhì)上，然后再噴一次灌溉水，讓基質(zhì)濕潤(rùn)，最后用完好的塑料薄膜覆蓋，四周壓實(shí)15d后掀膜即可。5DB32/TXXXX—XXXX常用細(xì)菌殺菌劑B1常用細(xì)菌殺菌劑常用細(xì)菌殺菌劑見(jiàn)表B.1。表B.1常用細(xì)菌殺菌劑名稱規(guī)格用法用量備注五氯硝基苯70%粉劑土壤消毒按每平方米8g~9g，拌入細(xì)土，施入播種溝或播種穴內(nèi)。藥劑不得與幼苗直接接觸多菌靈50%可濕性粉劑稀釋600倍~1000倍液噴霧或浸種;土壤消毒按按每平方米6g~8g。長(zhǎng)期連續(xù)使用易引起病菌產(chǎn)生抗藥性，應(yīng)與其他殺菌劑輪換使用。甲基托布津50%可濕性粉劑稀釋700倍~1000倍噴霧。長(zhǎng)期連續(xù)使用易引起病菌產(chǎn)