一輪復(fù)習(xí)人教版發(fā)酵工程第2課時（78張）課件

第2課時微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用考點(diǎn)一微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)

考點(diǎn)二微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)經(jīng)典真題·明考向內(nèi)容要求1.闡明在發(fā)酵工程中滅菌是獲得純凈的微生物培養(yǎng)物的前提2.闡明無菌技術(shù)是在操作過程中,保持無菌物品與無菌區(qū)域不被微生物污染的技術(shù)3.舉例說明通過調(diào)整培養(yǎng)基的配方可有目的地培養(yǎng)某種微生物4.概述平板劃線法和稀釋涂布平板法是實驗室中進(jìn)行微生物分離和純化的常用方法5.概述稀釋涂布平板法和顯微鏡計數(shù)法是測定微生物數(shù)量的常用方法6.通過配制培養(yǎng)基、滅菌、接種和培養(yǎng)等實驗操作獲得純化的酵母菌落7.分離土壤中分解尿素的細(xì)菌,并進(jìn)行計數(shù)學(xué)業(yè)要求①結(jié)合生活或生產(chǎn)實例,舉例說出發(fā)酵工程及相關(guān)技術(shù)的基本原理(生命觀念)②針對人類生產(chǎn)或生活的某一需求,在發(fā)酵工程中選取恰當(dāng)?shù)募夹g(shù)和方法,嘗試提出初步的工程學(xué)構(gòu)想,進(jìn)行簡單的設(shè)計和制作(生命觀念、科學(xué)探究)必備知識梳理

重點(diǎn)難點(diǎn)突破

命題角度例析考點(diǎn)一微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)一、培養(yǎng)基1.概念:人們按照微生物對

的不同需求,配制出供其

的營養(yǎng)基質(zhì)。

2.用途:用以培養(yǎng)、

、鑒定、

或積累其代謝物。

必備知識梳理營養(yǎng)物質(zhì)生長繁殖分離保存微生物3.類型(1)依據(jù)物理性質(zhì):液體培養(yǎng)基:不含凝固劑,呈

狀態(tài)的培養(yǎng)基

↓加入凝固劑

如__________固體培養(yǎng)基:呈

狀態(tài)的培養(yǎng)基

(2)依據(jù)功能:

和鑒別培養(yǎng)基。

4.營養(yǎng)組成(1)一般都含有

、

、

和無機(jī)鹽。

必備知識梳理液體瓊脂固體選擇培養(yǎng)基水碳源氮源二、無菌技術(shù)1.目的:獲得

。

2.關(guān)鍵:防止雜菌污染。細(xì)菌對培養(yǎng)基的需求乳酸桿菌添加

霉菌一般將培養(yǎng)基調(diào)至

性

細(xì)菌一般將培養(yǎng)基調(diào)至

性

厭氧微生物提供

的條件

(2)需要滿足微生物生長對

、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及

的需求。

必備知識梳理pHO2維生素酸中性或弱堿無氧純凈的微生物培養(yǎng)物項目條件結(jié)果常用方法應(yīng)用舉例消毒較為

的物理、化學(xué)或生物方法

殺死物體表面或內(nèi)部一部分微生物煮沸消毒法日常用品

法

不耐高溫的液體,如牛奶

法

用酒精擦拭雙手、用氯氣消毒水源紫外線消毒法接種室、接種箱,超凈工作臺3.常用方法——消毒和滅菌的比較必備知識梳理溫和巴氏消毒化學(xué)藥物消毒項目條件結(jié)果常用方法應(yīng)用舉例滅菌

的理化方法

殺死物體內(nèi)外所有的微生物,包括

法

接種工具

法

玻璃器皿、金屬用具

法

培養(yǎng)基及容器必備知識梳理強(qiáng)烈芽孢和孢子灼燒滅菌干熱滅菌濕熱滅菌4.具體操作(1)對實驗操作的

、操作者的衣著和手進(jìn)行清潔和

。

(2)將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進(jìn)行

。

(3)實驗操作時,為避免周圍環(huán)境中微生物的污染,應(yīng)在

上并在

附近進(jìn)行。

(4)實驗操作時應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與

接觸。

必備知識梳理空間消毒滅菌超凈工作臺酒精燈火焰周圍的物品三、微生物的純培養(yǎng)1.概念:獲得純培養(yǎng)物(由

繁殖所獲得的

)的過程。2.步驟:包括配制培養(yǎng)基、

、

、分離和培養(yǎng)等步驟。

3.單菌落獲得的接種方法:

、

。

必備知識梳理單一個體微生物群體滅菌接種平板劃線法稀釋涂布平板法4.酵母菌的純培養(yǎng)(1)方法步驟必備知識梳理高壓蒸汽滅菌干熱滅菌酒精燈火焰平板劃線24~48(2)倒平板操作①拔出錐形瓶的棉塞。②將瓶口迅速通過

。

③用

將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙,將培養(yǎng)基(10~20mL)倒入

,立即蓋上皿蓋。

④等待培養(yǎng)基冷卻凝固后,將培養(yǎng)皿

放置。

必備知識梳理火焰拇指和食指培養(yǎng)皿倒過來(3)平板劃線法①概念:通過

在固體培養(yǎng)基表面

的操作,將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。

②具體操作:灼燒接種環(huán)→

→第一次平板劃線操作→

→培養(yǎng)。

必備知識梳理接種環(huán)連續(xù)劃線蘸取菌液連續(xù)劃線操作【長句表達(dá)】(1)平板冷凝后,要將平板倒置,原因是

。(2)接種操作之所以一定要在火焰附近進(jìn)行,原因是

。必備知識梳理可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基,造成污染;避免培養(yǎng)基水分過快揮發(fā)火焰附近存在著無菌區(qū)域【易錯辨析】(1)培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源和無機(jī)鹽,有時還需要加入一些特殊的物質(zhì)。(

)(2)消毒的原則是既殺死材料表面的微生物,又減少消毒劑對細(xì)胞的傷害。(

)(3)無菌操作的對象只要是沒有生物活性的材料(如培養(yǎng)基、接種環(huán)等)都可采用高壓蒸汽滅菌法進(jìn)行滅菌。(

)必備知識梳理×√√[解析]接種環(huán)常用灼燒滅菌法進(jìn)行滅菌。(4)倒平板時,應(yīng)將打開的皿蓋放到一邊,以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上。(

)(5)為了防止污染,接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)趁熱快速挑取菌落。(

)×必備知識梳理[解析]倒平板時,用拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙,不應(yīng)將皿蓋取下?！羀解析]接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)冷卻后再挑取菌落,防止殺滅菌種。【教材拾遺】(1)微生物是難以用肉眼觀察的微小生物的統(tǒng)稱,包括細(xì)菌、真菌、病毒及一些原生生物等。[教材

選擇性必修3P9](2)生物消毒法是指利用生物或其代謝物除去環(huán)境中的部分微生物的方法。例如,有的微生物能夠寄生在多種細(xì)菌體內(nèi),使細(xì)菌裂解,因此可以用它們來凈化污水、污泥。[教材

選擇性必修3P10](3)水果“酵素”制作的大致過程是:將洗凈、切成塊狀的水果放入潔凈的容器,再加入糖和水,密封,置于陰涼處發(fā)酵一至兩周。[教材

選擇性必修3P14]必備知識梳理1.微生物的營養(yǎng)物質(zhì)及其來源、功能重點(diǎn)難點(diǎn)突破營養(yǎng)物質(zhì)來源功能碳源無機(jī)碳源

CO2、NaHCO3等含碳無機(jī)物

①構(gòu)成細(xì)胞物質(zhì)和一些代謝產(chǎn)物

②有機(jī)碳既是碳源又是能源有機(jī)碳源糖類、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、有機(jī)酸、石油等氮源無機(jī)氮源

N2、NH3、銨鹽、硝酸鹽等將無機(jī)氮合成含氮的代謝產(chǎn)物有機(jī)氮源牛肉膏、蛋白胨、尿素、氨基酸等合成蛋白質(zhì)、核酸及含氮的代謝產(chǎn)物

重點(diǎn)難點(diǎn)突破營養(yǎng)物質(zhì)來源功能特殊營養(yǎng)物質(zhì)維生素、氨基酸、堿基

①酶和核酸的組成成分

②參與代謝過程中的酶促反應(yīng)水外界攝入

①良好的溶劑

②維持生物大分子結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定

2.歸納概括平板劃線操作的注意事項(1)灼燒接種環(huán),待其冷卻后才能伸入菌液,以免溫度太高殺死菌種。(2)第二次及其以后的劃線操作總是從上一次劃線末端開始,能使微生物的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐漸減少,最終得到由單個微生物繁殖形成的純培養(yǎng)物。(3)劃線時最后一區(qū)不要與第一區(qū)相連。(4)劃線用力大小要適當(dāng),防止用力過大將培養(yǎng)基劃破。(5)操作第一步即取菌種之前及每次劃線之前都需要進(jìn)行灼燒滅菌,劃線操作結(jié)束時,仍需灼燒接種環(huán),每次灼燒的目的如下表:重點(diǎn)難點(diǎn)突破重點(diǎn)難點(diǎn)突破

第一次操作每次劃線之前劃線結(jié)束目的殺死接種環(huán)上原有的微生物殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留的菌種,使下次劃線的菌種直接來源于上次劃線的末端,使每次劃線后菌種數(shù)目減少殺死接種環(huán)上殘存的菌種,避免微生物污染環(huán)境和感染操作者角度一考查培養(yǎng)基及無菌技術(shù)?

[2021·山東淄博二模]下列有關(guān)培養(yǎng)基的說法正確的是(

)A.固體培養(yǎng)基中的瓊脂除了凝固作用之外,通常還可以被微生物利用B.培養(yǎng)基中含C的有機(jī)物,既是異養(yǎng)微生物的碳源也是氮源C.培養(yǎng)基中的無機(jī)鹽能為微生物提供某些元素,還能調(diào)節(jié)滲透壓D.選擇培養(yǎng)基是根據(jù)微生物的代謝產(chǎn)物與培養(yǎng)基中特定試劑反應(yīng)而設(shè)計的C命題角度例析[解析]

固體培養(yǎng)基中的瓊脂一般只起到凝固的作用,一般不會被微生物所利用,A錯誤;培養(yǎng)基中含C的有機(jī)物,能為異養(yǎng)微生物提供碳源和能源,B錯誤;?

[2021·山東淄博二模]下列有關(guān)培養(yǎng)基的說法正確的是(

)A.固體培養(yǎng)基中的瓊脂除了凝固作用之外,通常還可以被微生物利用B.培養(yǎng)基中含C的有機(jī)物,既是異養(yǎng)微生物的碳源也是氮源C.培養(yǎng)基中的無機(jī)鹽能為微生物提供某些元素,還能調(diào)節(jié)滲透壓D.選擇培養(yǎng)基是根據(jù)微生物的代謝產(chǎn)物與培養(yǎng)基中特定試劑反應(yīng)而設(shè)計的C命題角度例析無機(jī)鹽可以調(diào)節(jié)滲透壓,為微生物提供某些元素,C正確;選擇培養(yǎng)基是根據(jù)微生物獨(dú)特的生存環(huán)境添加或不添加某些特定試劑設(shè)計的,D錯誤。?

[2022·湖北武漢模擬]下表中有關(guān)消毒與滅菌的描述錯誤的是(

)A.若要徹底除去物體內(nèi)外的芽孢和孢子,只靠方法①②③是不行的B.牛奶、啤酒等通常用方法②消毒,④可以為接種針、涂布器等滅菌C.⑤⑥滅菌時,滅菌物品均不能與箱壁或桶壁接觸,其原因不同D.培養(yǎng)皿、培養(yǎng)基滅菌均可采用⑤⑥方法D命題角度例析

常用方法應(yīng)用舉例消毒①日常用品②不耐高溫的液體③皮膚滅菌灼燒滅菌法④干熱滅菌法⑤高壓蒸汽滅菌法⑥[解析]

常用的消毒方法并不能除去芽孢和孢子,若要除去芽孢和孢子,則需要滅菌,A正確;對于牛奶、啤酒等這些不耐高溫的液體,常用的方法是巴氏消毒法,對于金屬操作工具常用灼燒滅菌法,B正確;干熱滅菌時,滅菌的物品不與滅菌箱內(nèi)壁接觸,防止包裝紙烤焦起火,高壓蒸汽滅菌時,錐形瓶與試管不與桶壁接觸是為了避免冷凝水淋濕包裹瓶口的紙而透入棉塞,C正確;培養(yǎng)基不能用干熱滅菌法滅菌,只能使用高壓蒸汽滅菌法滅菌,D錯誤。命題角度例析

常用方法應(yīng)用舉例消毒①日常用品②不耐高溫的液體③皮膚滅菌灼燒滅菌法④干熱滅菌法⑤高壓蒸汽滅菌法⑥角度二考查微生物的純培養(yǎng)?

[2021·遼寧丹東模擬]圖為實驗室培養(yǎng)和純化酵母菌過程中的部分操作步驟,下列說法不正確的是(

)A.①步驟使用的培養(yǎng)基是已經(jīng)調(diào)節(jié)過pH并滅菌的培養(yǎng)基B.①②③步驟操作時需要在酒精燈火焰旁進(jìn)行C.③到④的過程中,接種環(huán)共灼燒了5次D.④步驟操作時,不能將第1區(qū)和第5區(qū)的劃線相連C命題角度例析[解析]

①步驟表示倒平板,在倒平板之前,培養(yǎng)基已經(jīng)調(diào)節(jié)過pH并滅過菌,A正確;①②③步驟操作時需要在酒精燈火焰旁進(jìn)行,防止雜菌污染,B正確;接種環(huán)在每次劃線前和接種結(jié)束后都要通過灼燒來滅菌,所以③到④的過程中5次劃線操作前都要灼燒滅菌,接種結(jié)束后還需灼燒滅菌1次,防止造成污染,由此可見,③到④的過程中共需灼燒接種環(huán)6次,C錯誤;④步驟操作時,不能將第1區(qū)和第5區(qū)的劃線相連,否則就達(dá)不到稀釋的目的,不能得到由單個細(xì)菌繁殖而來的菌落,D正確。命題角度例析?

[2021·河北五校聯(lián)考]在白酒發(fā)酵的窖池中,當(dāng)培養(yǎng)液的pH≤4.5時,酵母菌的代謝活動逐漸受到抑制,甚至停止。耐酸性酵母菌能在pH≤3.5的環(huán)境下繼續(xù)表現(xiàn)出較強(qiáng)發(fā)酵能力,適宜作白酒發(fā)酵生產(chǎn)用菌種,為選育適合白酒生產(chǎn)的耐酸能力強(qiáng)的酵母菌,研究者進(jìn)行了相關(guān)實驗,請回答下列有關(guān)問題:(1)獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是

,對培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌常用的方法是

。防止雜菌污染命題角度例析高壓蒸汽滅菌法[解析]實驗室獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止雜菌污染。滅菌方法包括灼燒滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌等,但一般對培養(yǎng)基及容器進(jìn)行滅菌的方法為高壓蒸汽滅菌法。(2)在制備用于篩選目的菌的培養(yǎng)基時,下列用具需要的是

(填序號)。

①酒精燈②接種環(huán)③高壓蒸汽滅菌鍋④培養(yǎng)皿若要確定培養(yǎng)基滅菌是否合格,對照組的設(shè)置是

。①③④命題角度例析將未接種的(或接種等量無菌水的)培養(yǎng)基在相同條件下進(jìn)行培養(yǎng)[解析]酵母菌屬于兼性厭氧菌,則純化培養(yǎng)方法應(yīng)為稀釋涂布平板法,所以在制備用于篩選目的菌的培養(yǎng)基時,需要用①酒精燈、

④培養(yǎng)皿,另外需要用③高壓蒸汽滅菌鍋進(jìn)行滅菌。實驗過程中應(yīng)該設(shè)置未接種的空白培養(yǎng)基作對照,來確定培養(yǎng)基滅菌是否合格,即將未接種的(或接種等量無菌水的)培養(yǎng)基在相同條件下進(jìn)行培養(yǎng)。(3)發(fā)酵過程中,窖池中培養(yǎng)液的pH會逐漸

(填“升高”或“降低”),原因是

。降低命題角度例析細(xì)胞呼吸產(chǎn)生CO2,可形成碳酸,代謝過程還產(chǎn)生了其他酸性物質(zhì)[解析]酵母菌的代謝類型是兼性厭氧型。在發(fā)酵過程中,酵母菌無論是有氧呼吸還是無氧呼吸,都能產(chǎn)生二氧化碳,可形成碳酸,并且代謝過程中還產(chǎn)生了其他酸性物質(zhì),因此窖池中培養(yǎng)液的pH會逐漸下降。菌株AB特點(diǎn)

pH≤3.5時,生長代謝正常,pH為4~6時不正常

pH為2.5~6時,生長代謝正常、優(yōu)于其他常規(guī)菌種(4)實驗獲得兩個耐酸性較強(qiáng)的酵母菌菌株,特點(diǎn)如下表:命題角度例析依據(jù)菌株特點(diǎn),研究者認(rèn)為B菌株更適合作為白酒發(fā)酵菌株,作出這一判斷的理由是___________________________________________________________________________________________________。

該菌對pH的耐受范圍更大,發(fā)酵初期能適應(yīng)近中性環(huán)境,易于形成優(yōu)勢菌群,發(fā)酵后期,較低pH下該菌仍可正常生長[解析]據(jù)表分析可知,B菌株對pH的耐受范圍更大,發(fā)酵初期pH近中性,B菌株適合此環(huán)境,更易于形成優(yōu)勢菌群;發(fā)酵后期pH逐漸降低,B菌株依然能正常生長,所以B組菌株更適合作為白酒發(fā)酵菌株?？键c(diǎn)二微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)必備知識梳理

重點(diǎn)難點(diǎn)突破

命題角度例析一、微生物的選擇培養(yǎng)1.選擇培養(yǎng)基(1)概念:指在微生物學(xué)中,

特定種類的微生物生長,同時____________其他種類微生物生長的培養(yǎng)基。

(2)實例:篩選土壤中分解尿素的細(xì)菌的選擇培養(yǎng)基是以

為唯一氮源的。允許必備知識梳理抑制或阻止尿素2.稀釋涂布平板法步驟(1)系列稀釋操作:在將細(xì)胞接種到培養(yǎng)基之前,通過液體稀釋的方法分散細(xì)胞,隨著稀釋程度的增大,單位體積中的微生物細(xì)胞數(shù)量減少,細(xì)胞得以分散。必備知識梳理(2)涂布平板操作必備知識梳理0.1酒精冷卻均勻二、微生物的數(shù)量測定1.利用稀釋涂布平板法計數(shù)(1)為了保證結(jié)果準(zhǔn)確,一般選擇菌落數(shù)在

的平板計數(shù),并且在同一稀釋度下,應(yīng)至少對3個平板進(jìn)行計數(shù),并求

。

(2)統(tǒng)計結(jié)果往往比實際值

。

2.利用顯微鏡直接計數(shù)(1)需用細(xì)菌計數(shù)板或

計數(shù)板。

(2)統(tǒng)計結(jié)果一般是

的總和。

必備知識梳理30~300平均值少血細(xì)胞活菌數(shù)和死菌數(shù)三、土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計數(shù)1.分離原理:絕大多數(shù)微生物都能利用葡萄糖,但是只有能合成

的微生物才能分解尿素。利用以

作為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基,可以從土壤中分離出分解尿素的細(xì)菌。

2.計數(shù)方法:

。

3.實驗流程:土壤取樣→

→微生物的培養(yǎng)與觀察→細(xì)菌的計數(shù)。必備知識梳理脲酶尿素稀釋涂布平板法樣品的稀釋【長句表達(dá)】(1)微生物的篩選原理是______________________________________________________________________________________。(2)稀釋涂布平板法統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目少,其原因是

。(3)在富含纖維素的環(huán)境中尋找纖維素分解菌的原因是__________________________________________________________________________________________________。必備知識梳理

人為提供有利于目的菌生長的條件(包括營養(yǎng)、溫度和pH等),同時抑制或阻止其他微生物的生長當(dāng)兩個或多個細(xì)胞連在一起時,平板上觀察到的只是一個菌落在富含纖維素的環(huán)境中,纖維素分解菌的含量相對較高,從這種土樣中獲得目的微生物的概率要高于普通環(huán)境(4)欲判斷所配制的選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用,應(yīng)設(shè)計的對照組是

。

必備知識梳理配制牛肉膏蛋白胨的基本培養(yǎng)基【易錯辨析】(1)選擇培養(yǎng)基可以鑒定某種微生物的種類。(

)(2)對細(xì)菌進(jìn)行計數(shù)能采用稀釋涂布平板法,也能用平板劃線法。(

)(3)對微生物進(jìn)行計數(shù)時,用稀釋涂布平板法統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比實際數(shù)量多,而用顯微鏡直接計數(shù)法統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比實際數(shù)量少。(

)×必備知識梳理[解析]選擇培養(yǎng)基可以篩選出目的微生物,但不能鑒定某種微生物的種類。×[解析]平板劃線法不能用來進(jìn)行細(xì)菌的計數(shù)。×[解析]對微生物進(jìn)行計數(shù)時,用稀釋涂布平板法統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比實際數(shù)量少,而用顯微鏡直接計數(shù)法統(tǒng)計的是死菌數(shù)和活菌數(shù)之和,比實際數(shù)量多。(4)篩選能分解尿素的細(xì)菌所利用的培養(yǎng)基中,尿素是唯一的氮源。(

)(5)應(yīng)盡量選菌落數(shù)少的平板來統(tǒng)計,以確保一個菌落來自單個細(xì)菌。(

)×必備知識梳理√[解析]利用平板計數(shù)時,需要選擇菌落數(shù)在30~300的平板進(jìn)行計數(shù)?！窘滩氖斑z】(1)血細(xì)胞計數(shù)板比細(xì)菌計數(shù)板厚,常用于相對較大的酵母菌細(xì)胞、霉菌孢子等的計數(shù)。用細(xì)菌計數(shù)板可對細(xì)菌等較小的細(xì)胞進(jìn)行觀察和計數(shù)。[教材

選擇性必修3P18](2)細(xì)菌適宜在酸堿度接近中性的潮濕土壤中生長,絕大多數(shù)分布在距地表3~8cm的土壤層。[教材

選擇性必修3P19](3)細(xì)菌一般在30~37℃的溫度下培養(yǎng)1~2d。[教材

選擇性必修3P19](4)在標(biāo)記培養(yǎng)皿時應(yīng)該注明組別、培養(yǎng)日期和平板上培養(yǎng)樣品的稀釋度等。[教材

選擇性必修3P19]必備知識梳理1.比較選擇培養(yǎng)基與鑒別培養(yǎng)基重點(diǎn)難點(diǎn)突破項目選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基制備方法培養(yǎng)基中加入某些化學(xué)物質(zhì)培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品原理依據(jù)某些微生物對某些物質(zhì)或環(huán)境條件的嗜好或抗性而設(shè)計產(chǎn)生特定的顏色或其他變化用途從眾多微生物中分離出所需的微生物鑒別不同種類的微生物舉例加入青霉素分離得到酵母菌和霉菌在剛果紅培養(yǎng)基上鑒別纖維素分解菌項目平板劃線法稀釋涂布平板法分離結(jié)果

關(guān)鍵操作接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線

①一系列的梯度稀釋

②涂布平板操作接種用具接種環(huán)涂布器2.對比平板劃線法與稀釋涂布平板法重點(diǎn)難點(diǎn)突破項目平板劃線法稀釋涂布平板法菌體獲取在具有顯著的菌落特征的區(qū)域菌落中挑取菌體從適宜的稀釋度的平板上的菌落中挑取菌體優(yōu)點(diǎn)可以觀察菌落特征,對混合菌進(jìn)行分離可以計數(shù),可以觀察菌落特征缺點(diǎn)不能計數(shù)操作較麻煩,平板不干燥效果不好,容易蔓延共同點(diǎn)都要用到固體培養(yǎng)基;都需進(jìn)行無菌操作;都會在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落;都可用于觀察菌落特征重點(diǎn)難點(diǎn)突破重點(diǎn)難點(diǎn)突破3.對比分析微生物兩種計數(shù)方法項目間接計數(shù)法(稀釋涂布平板法)直接計數(shù)法(顯微鏡計數(shù)法)原理當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時,培養(yǎng)基表面生長的一個菌落,來源于樣品稀釋液中的一個活菌,通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù),就能推測出樣品中大約含有多少活菌利用特定細(xì)菌計數(shù)板或血細(xì)胞計數(shù)板,在顯微鏡下計算一定容積的樣品中微生物的數(shù)量重點(diǎn)難點(diǎn)突破項目間接計數(shù)法(稀釋涂布平板法)直接計數(shù)法(顯微鏡計數(shù)法)公式每克樣品中的菌落數(shù)=C/V×M[C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù),V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積(mL),M代表稀釋倍數(shù)]每毫升原液所含細(xì)菌數(shù):每小格內(nèi)平均細(xì)菌數(shù)×400×104×稀釋倍數(shù)缺點(diǎn)當(dāng)兩個或多個菌體連在一起時,平板上觀察到的只是一個菌落不能區(qū)分活菌和死菌結(jié)果比實際值偏小比實際值偏大重點(diǎn)難點(diǎn)突破4.微生物的篩選與鑒別方法(1)微生物的篩選方法單菌落挑取法利用平板劃線法或稀釋涂布平板法接種到固體平板培養(yǎng)基表面,直接根據(jù)微生物菌落的特征利用單菌落挑取的方法獲得目的微生物選擇培養(yǎng)法利用選擇培養(yǎng)基對微生物進(jìn)行選擇培養(yǎng),直接獲得目的微生物鑒定培養(yǎng)法利用鑒別培養(yǎng)基使目的微生物菌落呈現(xiàn)特有的特征,然后篩選目的微生物重點(diǎn)難點(diǎn)突破(2)微生物的鑒別方法菌落特征鑒別法根據(jù)微生物在固體培養(yǎng)基表面形成的菌落的形狀、大小、隆起程度和顏色等特征進(jìn)行鑒別指示劑鑒別法如以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑,培養(yǎng)某種微生物后,培養(yǎng)基變紅說明該種微生物能夠分解尿素染色鑒別法如利用剛果紅染色法,根據(jù)培養(yǎng)基中出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈來鑒別分解纖維素的微生物角度一

考查微生物的選擇培養(yǎng)?

[2021·江蘇泰州中學(xué)月考]幽門螺桿菌(含有脲酶)感染是急慢性胃炎和消化性潰瘍的主要致病因素。在患者體內(nèi)采集樣本并制成菌液后,進(jìn)行分離培養(yǎng)。下列有關(guān)敘述不正確的是(

)A.分離純化幽門螺桿菌時應(yīng)使用以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基B.鑒別幽門螺桿菌時應(yīng)在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑和緩沖物質(zhì)C.可用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基作對照證明選擇培養(yǎng)基的選擇作用D.可采用稀釋涂布平板法對幽門螺桿菌進(jìn)行分離和計數(shù)B命題角度例析[解析]

幽門螺桿菌可以合成脲酶,可以利用尿素,所以分離純化幽門螺桿菌時應(yīng)使用以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基,A正確;由于幽門螺桿菌含有脲酶,脲酶將尿素分解成氨,使培養(yǎng)基堿性增強(qiáng),pH升高,所以可以在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑來判斷尿素是否被分解,但不能加緩沖物質(zhì),B錯誤;為了證明選擇培養(yǎng)基的選擇作用,可用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基作對照,牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基為普通培養(yǎng)基,不具有選擇性,如果牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的菌落數(shù)大于選擇培養(yǎng)基,說明選擇培養(yǎng)基有選擇作用,C正確;稀釋涂布平板法可以用于微生物的分離和計數(shù),因此對幽門螺桿菌進(jìn)行分離和計數(shù)可采用稀釋涂布平板法,D正確。命題角度例析?

[2021·山東濰坊二模]隨著人民生活水平的提高及餐飲業(yè)的增多,含油廢水是一種量大而面廣的污染源。生物法處理油脂污染物是一種最有效、最安全和最徹底的方法,因此篩選高效降解油脂的微生物菌株用于含油廢水處理是一項非常有意義的工作。下列相關(guān)敘述錯誤的是(

)A.篩選菌株應(yīng)該從含油廢水中取樣接種B.應(yīng)該用油脂作為培養(yǎng)基中唯一碳源來進(jìn)行篩選C.可以采用稀釋涂布平板法來進(jìn)行菌種的接種和篩選D.油脂分解菌通過把油脂污染物分解為甘油和脂肪酸來解除水體污染D命題角度例析[解析]

篩選高效降解油脂的微生物菌株應(yīng)該從含油廢水中取樣接種,A正確;篩選高效降解油脂的微生物菌株應(yīng)配制選擇培養(yǎng)基,用油脂作為培養(yǎng)基中唯一碳源,B正確;可用稀釋涂布平板法進(jìn)行菌種的接種和篩選,C正確;油脂分解菌通過把油脂污染物分解為甘油和脂肪酸,最后降解為二氧化碳和水來消除污染,D錯誤。命題角度例析角度二

考查微生物的數(shù)量測定?

丙草胺(C15H22ClNO2)是一種廣泛應(yīng)用的除草劑,能抑制土壤細(xì)菌、放線菌和真菌的生長。某研究小組從某地土壤中分離獲得能有效降解丙草胺的細(xì)菌菌株,并對其計數(shù)(如圖所示),以期為修復(fù)污染土壤提供微生物資源。下列有關(guān)敘述錯誤的是(

)A.將培養(yǎng)基調(diào)至酸性時,有利于降解菌的生長繁殖B.利用該方法計數(shù)的結(jié)果往往比顯微鏡直接計數(shù)得到的結(jié)果小C.用以丙草胺為唯一氮源的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)可提高降解菌的濃度D.5號試管的結(jié)果表明每克土壤中的菌株數(shù)為1.7×109個A命題角度例析[解析]

培養(yǎng)細(xì)菌時,應(yīng)該將培養(yǎng)基的pH調(diào)至中性或弱堿性,A錯誤;該計數(shù)方法為稀釋涂布平板法,由于當(dāng)兩個或多個細(xì)胞連在一起時,平板上觀察到的只是一個菌落,故計數(shù)結(jié)果比顯微鏡直接計數(shù)法小,B正確;若以丙草胺作為唯一氮源,則只有具有降解丙草胺能力的降解菌能夠存活,故可以提高降解菌的濃度,C正確;根據(jù)5號試管的數(shù)據(jù)可知,每克土壤中菌株數(shù)為(168+175+167)÷3×106×10=1.7×109(個),D正確。命題角度例析?

[2021·湖南雅禮中學(xué)一模]尿素是一種重要的氮肥,但是不能被農(nóng)作物直接吸收,只有被土壤中的細(xì)菌分解成氨后才能被植物利用。某實驗小組要完成課題“從土壤中分離出能分解尿素的細(xì)菌”,回答下列問題:(1)在該實驗中,配制培養(yǎng)基需要以

為唯一氮源。該培養(yǎng)基中

(填“需要”或“不需要”)添加葡萄糖,原因是_________________________________

。若要驗證該培養(yǎng)基具有選擇作用,需要設(shè)置

作為對照,當(dāng)

時,即可說明該培養(yǎng)基具有選擇作用。

尿素命題角度例析需要

尿素分解菌為異養(yǎng)生物,需要葡萄糖為其提供碳源在相同稀釋度下接種等量的相同樣品的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上的菌落數(shù)明顯多于該培養(yǎng)基上的菌落數(shù)[解析]在該實驗中,配制培養(yǎng)基需要以尿素為唯一氮源,該培養(yǎng)基中需要添加葡萄糖為分解尿素的細(xì)菌提供碳源,原因是尿素分解菌為異養(yǎng)微生物,不能利用無機(jī)碳源,只能利用現(xiàn)成的有機(jī)碳源;若要驗證該培養(yǎng)基具有選擇作用,需要設(shè)置基礎(chǔ)培養(yǎng)基作為對照,即設(shè)置接種相同樣品的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基,在相同條件下培養(yǎng),當(dāng)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上的菌落數(shù)明顯多于該培養(yǎng)基上的菌落數(shù)時,即可說明該培養(yǎng)基具有選擇作用。命題角度例析(2)在接種前需要對樣品進(jìn)行稀釋處理,以保證獲得菌落數(shù)在

(填范圍)、適于計數(shù)的平板。測定土壤中細(xì)菌的數(shù)量。一般選用104、105、106倍的稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng),若測定放線菌數(shù)量,則需要采用與此不一樣的稀釋倍數(shù),原因是

。

命題角度例析30~300土壤中各類微生物的數(shù)量是不同的[解析]在接種前需要對樣品進(jìn)行稀釋處理,以保證獲得菌落數(shù)在30~300、適于計數(shù)的平板;測定土壤中細(xì)菌的數(shù)量,一般選用104、105、106倍的稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng),若測定放線菌數(shù)量,則需要采用與此不一樣的稀釋倍數(shù),原因是土壤中各類微生物的數(shù)量是不同的,所以分離不同的微生物時需要采用不同的稀釋倍數(shù)。(3)在進(jìn)行實驗時,甲同學(xué)從對應(yīng)106倍稀釋的培養(yǎng)基中篩選出大約200個菌落,但是其他同學(xué)在同樣稀釋度下只篩選出大約90個菌落,若甲同學(xué)的結(jié)果有問題,則可能的原因是

。培養(yǎng)基被雜菌污染或培養(yǎng)基中混入了其他含氮物質(zhì)或土壤樣品不同命題角度例析[解析]在進(jìn)行實驗時,甲同學(xué)從對應(yīng)106倍稀釋的培養(yǎng)基中篩選出大約200個菌落,但是其他同學(xué)在同樣稀釋度下只篩選出大約90個菌落,若甲同學(xué)的結(jié)果有問題,則可能的原因是培養(yǎng)基被雜菌污染或培養(yǎng)基中混入了其他含氮物質(zhì),使得培養(yǎng)基上不止尿素分解菌這一種微生物。經(jīng)典真題·明考向?[2021·北京卷]人體皮膚表面存在著多種微生物,某同學(xué)擬從中分離出葡萄球菌。下述操作不正確的是(

)A.對配制的培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌B.使用無菌棉拭子從皮膚表面取樣C.用取樣后的棉拭子在固體培養(yǎng)基上涂布D.觀察菌落的形態(tài)和顏色等進(jìn)行初步判斷C經(jīng)典真題·明考向[解析]

為避免雜菌污染干擾,需對配制的培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌,A正確;葡萄球菌需從人體皮膚的微生物中分離,為避免雜菌污染,故需要使用無菌棉拭子從皮膚表面取樣,B正確;?[2021·北京卷]人體皮膚表面存在著多種微生物,某同學(xué)擬從中分離出葡萄球菌。下述操作不正確的是(

)A.對配制的培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌B.使用無菌棉拭子從皮膚表面取樣C.用取樣后的棉拭子在固體培養(yǎng)基上涂布D.觀察菌落的形態(tài)和顏色等進(jìn)行初步判斷C經(jīng)典真題·明考向棉拭子上的微生物需要用平板劃線法在培養(yǎng)基上進(jìn)行接種,C錯誤;根據(jù)微生物在固體平板培養(yǎng)基表面形成的菌落的形狀、大小、隆起程度和顏色等特征進(jìn)行鑒別,D正確。?[2021·山東卷]解脂菌能利用分泌的脂肪酶將脂肪分解成甘油和脂肪酸并吸收利用。脂肪酸會使醇溶青瓊脂平板變?yōu)樯钏{(lán)色。將不能直接吸收脂肪的甲、乙兩種菌分別等量接種在醇溶青瓊脂平板上培養(yǎng)。甲菌菌落周圍呈現(xiàn)深藍(lán)色,乙菌菌落周圍不變色,下列說法錯誤的是(

)A.甲菌屬于解脂菌B.實驗中所用培養(yǎng)基以脂肪為唯一碳源C.可將兩種菌分別接種在同一平板的不同區(qū)域進(jìn)行對比D.該平板可用來比較解脂菌分泌脂肪酶的能力B經(jīng)典真題·明考向經(jīng)典真題·明考向[解析]

根據(jù)題干信息“甲菌菌落周圍呈現(xiàn)深藍(lán)色”,說明甲可以分泌脂肪酶將脂肪分解成甘油和脂肪酸,脂肪酸會使醇溶青瓊脂平板變?yōu)樯钏{(lán)色,因此甲菌屬于解脂菌,A正確;乙菌落周圍沒有出現(xiàn)深藍(lán)色,說明乙菌落不能產(chǎn)生脂肪酶,不能利用脂肪為其供能,但乙菌落也可以在培養(yǎng)基上生存,說明該培養(yǎng)基不是以脂肪為唯一碳源,B錯誤;可將兩種菌分別接種在同一平板的不同區(qū)域進(jìn)行對比,更加直觀,C正確;可以利用該平板比較解脂菌分泌脂肪酶的能力,觀察指標(biāo)可以是菌落周圍深藍(lán)色圈的大小,D正確。?

[2021·河北卷節(jié)選]葡萄酒生產(chǎn)過程中會產(chǎn)生大量的釀酒殘渣(皮渣)。目前這些皮渣主要用作飼料或肥料,同時研究者也采取多種措施拓展其利用價值?；卮鹣铝袉栴}:(1)為了解皮渣中微生物的數(shù)量,取10g皮渣加入90mL無菌水,混勻、靜置后取上清液,用稀釋涂布平板法將0.1mL稀釋液接種于培養(yǎng)基上。104倍稀釋對應(yīng)的三個平板中菌落數(shù)量分別為78、91和95,則每克皮渣中微生物數(shù)量為

個。

經(jīng)典真題·明考向8.8×106[解析]每克皮渣中微生物的數(shù)量為(78+91+95)÷3÷0.1×104=8.8×106(個)。(2)皮渣堆積會積累醋酸菌,可從中篩選優(yōu)良菌株。制備醋酸菌初篩平板時,需要將培養(yǎng)基的pH調(diào)至

性,滅菌后需在未凝固的培養(yǎng)基中加入無菌碳酸鈣粉末、充分混勻后倒平板,加入碳酸鈣的目的是_____________________________________________________________________________。

培養(yǎng)篩選得到的醋酸菌時,在缺少糖源的液體培養(yǎng)基中可加入乙醇作為

。酸經(jīng)典真題·明考向

醋酸菌分泌的醋酸可以使碳酸鈣分解,從而產(chǎn)生透明圈,依據(jù)透明圈確定醋酸菌的存在碳源[解析]制備醋酸菌初篩平板時,需要將培養(yǎng)基的pH調(diào)至酸性,滅菌后需在未凝固的培養(yǎng)基中加入無菌碳酸鈣粉末、充分混勻后倒平板,由于醋酸菌分泌的醋酸可以使碳酸鈣分解,從而產(chǎn)生透明圈,依據(jù)透明圈確定醋酸菌的存在。培養(yǎng)篩選得到的醋酸菌時,在缺少糖源的液體培養(yǎng)基中加入乙醇作為碳源。(3)皮渣堆積過程中也會積累某些兼性厭氧型乳酸菌。初篩醋酸菌時,乳酸菌有可能混入其中,且兩者菌落形態(tài)相似。請設(shè)計一個簡單實驗,區(qū)分篩選平板上的醋酸菌和乳酸菌。(簡要寫出實驗步驟和預(yù)期結(jié)果)經(jīng)典真題·明考向[答案]實驗步驟:將初篩得到的生長良好的菌落放在其他條件適宜但無氧氣的環(huán)境下繼續(xù)培養(yǎng)一段時間,觀察菌落的形態(tài)。實驗結(jié)果:平板上長勢依然良好的菌落是乳酸菌,菌落逐漸變小,菌落上的微生物死亡的是醋酸菌。[解析]區(qū)分篩選平板上的醋酸菌和乳酸菌,可以將初篩得到的生長良好的菌落放在其他條件適宜但無氧氣的環(huán)境下繼續(xù)培養(yǎng)一段時間,觀察菌落的形態(tài)。結(jié)果,平板上長勢依然良好的菌落是乳酸菌,菌落逐漸變小,菌落上的微生物死亡的是醋酸菌。建網(wǎng)知聯(lián)?[2020·江蘇卷]產(chǎn)脂肪酶酵母可用于含油廢水處理。為篩選產(chǎn)脂肪酶酵母菌株,科研人員開展了相關(guān)研究。請回答下列問題:(1)常規(guī)微生物實驗中,下列物品及其滅菌方法錯誤的是

(填編號)。

④備用習(xí)題編號①②③④物品培養(yǎng)基接種環(huán)培養(yǎng)皿涂布器滅菌方法高壓蒸汽火焰灼燒干熱臭氧[解析]培養(yǎng)基一般進(jìn)行高壓蒸汽滅菌;接種環(huán)可用火焰灼燒滅菌;培養(yǎng)皿可以通過干熱滅菌;涂布器不用時放在酒精溶液中,涂布之前應(yīng)該用酒精引燃滅菌,④錯誤。(2)稱取1.0g某土壤樣品,轉(zhuǎn)入99mL無菌水中,制備成菌懸液,經(jīng)

后,獲得細(xì)胞密度不同的菌懸液。分別取0.1mL菌懸液涂布在固體培養(yǎng)基上,其中10倍稀釋的菌懸液培養(yǎng)后平均長出了46個酵母菌落,則該樣本中每克土壤約含酵母菌

個。

梯度稀釋備用習(xí)題4.6×105