SNT 1961.18-2013 出口食品過(guò)敏原成分檢測(cè) 第18部分：實(shí)時(shí)熒光PCR方法檢測(cè)蕎麥成分_第1頁(yè)
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出口食品過(guò)敏原成分檢測(cè)第18部分：實(shí)時(shí)熒光PCR方法檢測(cè)蕎麥成分DetectionofallergencomponentsinI 本部分所規(guī)定方法的最低檢出限(LOD)為0.01%質(zhì)量分?jǐn)?shù))。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB/T27403實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制和探針進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光PCR擴(kuò)增，觀察實(shí)時(shí)熒光PCR的增幅現(xiàn)象，判斷樣品中是否存在過(guò)敏原蕎麥工25試劑和材料表1。序列(5'-3’)目的基因內(nèi)參照5'端引物內(nèi)參照3'端引物內(nèi)參照探針AATTTGCGCGCCTGCTGCCTTCFAM-CCGTTTCTCAGGCTCCCTCTCCGGAA真核生物18SrRNA基因ITS和5.8SrRNA用10%鹽酸調(diào)pH至8.0,121℃,高壓滅菌20min,備用。5.4蛋白酶K:20mg/μL。5.1070%乙醇。6.1實(shí)時(shí)熒光PCR儀。6.4冰箱：2℃~8℃,-20℃。3取適量DNA溶液原液加雙蒸水稀釋一定倍數(shù)后，使用核酸蛋白分析儀或紫外分光光度計(jì)測(cè)c=A?6O×N×50…………(1)7.3實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)7.3.2實(shí)時(shí)熒光PCR反應(yīng)參數(shù)50℃/2min,95℃/10mi4c)如35.0<Ct值<40.0,則重復(fù)一次。如再次擴(kuò)增后Ct值仍為<40.0,則判定被檢樣品陽(yáng)性：如再次擴(kuò)

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