制藥工藝學(xué)資料

1、我國(guó)藥物的三大藥源指的是化學(xué)藥物、生物藥物、中草藥。

2、現(xiàn)代生物藥物已形成四大類型，包括基因工程藥物、基因藥物、天然生物藥物、醫(yī)學(xué)生

物制品。

1、生化活性物質(zhì)濃縮可采用的方法有鹽析濃縮、有機(jī)溶劑沉淀濃縮、用葡聚糖凝膠濃縮、

用聚乙二番透析濃縮、超濾濃縮、真空減壓濃縮與薄膜濃縮。

2、生化活性物質(zhì)常用的干燥方法有減壓干燥、噴霧干燥、冷凍干燥等。

3、冷凍干燥是在低溫、低壓條件下,利用水的處性能而進(jìn)行的一種干燥方法。

4、固定化酶常采用的方法可分為吸附法、包埋法、交聯(lián)法和共價(jià)鍵結(jié)合法四大類。

5、由于目的蛋白質(zhì)和雜蛋白分子量差別較大，擬根據(jù)分子量大小分離純化并獲得目的蛋白

質(zhì)，可采用（C）A、SDS凝膠電泳B、鹽析法C、凝膠過濾D、吸附層析

6、分離純化早期，由于提取液中成分復(fù)雜，目的物濃度稀，因而易采用（A）

A、分離量大分辨率低的方法B、分離量小分辨率低的方法C、分離量小分辨率高的方法

D、各種方法都試驗(yàn)一下，根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果確定

1.固相析出法主要包括鹽析法,有機(jī)溶劑沉淀法,等電點(diǎn)沉淀法,結(jié)晶法及其它多種沉淀方

法等。

2.按照一般的習(xí)慣，析出物為晶體時(shí)稱為結(jié)晶法,析出物為無(wú)定形固體則稱為沉淀法。

3結(jié)晶包括三個(gè)過程：3）形成鮑和溶液;（2）晶核形成;（3）晶體生長(zhǎng)。

4.、晶體的質(zhì)量主要是指晶體的大小、形狀和純度等3個(gè)方面。

1、在一定的pH和溫度下改變離子強(qiáng)度（鹽濃度）進(jìn)行鹽析，稱作（A）

A.KS鹽析法B.6鹽析法C.重復(fù)鹽析法D.分部鹽析法

2、鹽析法與有機(jī)溶劑沉淀法比較，其優(yōu)點(diǎn)是（B）

A.分辨率高B.變性作用小C.雜質(zhì)易除D.沉淀易分離

3、將配基與可溶性的載體偶聯(lián)后形成載體-配基復(fù)合物，該復(fù)合物可選擇性地與蛋白質(zhì)結(jié)合，

在一定條件下沉淀出來(lái)，此方法稱為（A）

A.親和沉淀B聚合物沉淀C.金屬離子沉淀D.鹽析沉淀

4、影響晶體大小的主要因素與下列哪些因素?zé)o關(guān)（D）

A.過飽和度B.溫度C.攪拌速度D.飽和度

1、吸附劑按其化學(xué)結(jié)構(gòu)可分為兩大類：一類是有機(jī)吸附劑，如活性炭、淀粉、

大孔吸附樹脂等；另一類是無(wú)機(jī)吸附劑，如白陶土、氧化鋁、硅膠、硅藻土等。

2、常用的吸附劑有活性炭、硅膠和白陶土等。

3」大孔網(wǎng)狀聚合物吸附劑按骨架的極性強(qiáng)弱，可分為非極性、中等極性、極性和強(qiáng)極性吸

附劑四類。

1、用大網(wǎng)格高聚物吸附劑吸附的弱酸性物質(zhì)，一般用下列哪種溶液洗脫（D）

A.水B.高鹽C.低pHD.高pH

2、''類似物容易吸附類似物”的原則，一般極性吸附劑適宜于從何種溶劑中吸附極性物質(zhì)（B）

A.極性溶劑B.非極性溶劑C.水D.溶劑

3、活性炭在下列哪種溶劑中吸附能力最強(qiáng)？（A）A.水B.甲障C.乙醉D.三氯甲烷

4、關(guān)于大孔樹脂洗脫條件的說法，錯(cuò)誤的是：（A）

A.最常用的是以高級(jí)醉、酮或其水溶液解吸。B.對(duì)弱酸性物質(zhì)可用堿來(lái)解吸。

C.對(duì)弱堿性物質(zhì)可用酸來(lái)解吸。

D.如吸附系在高濃度鹽類溶液中進(jìn)行時(shí)，則常常僅用水洗就能解吸下來(lái)。

1、葡聚糖凝膠的孔徑大小取決于交聯(lián)度，其越小，凝膠孔徑越大；

而瓊脂糖凝膠的孔徑卻依賴于瓊脂糖濃度。

2、瓊脂糖凝膠的一個(gè)特征是分離的分子量范圍非常大，其分離范圍隨著凝膠濃度上升而

下降，顆粒強(qiáng)度隨濃度上升而提高。

1、凝膠層析中，有時(shí)溶質(zhì)的Kd>l,其原因是（B）

A.凝膠排斥B.凝膠吸附C.柱床過長(zhǎng)D.流速過低

2、凝膠層析中，有時(shí)小分子溶質(zhì)的Kd<l,其原因是（A）

A水合作用B.凝膠吸附C.柱床過長(zhǎng)D.流速過低

3、在凝膠層析中樣品各組分最先淋出的是（A）

A.分子量最大的B.體積最大的C.分子量最小的D.體積最小的

4、為了進(jìn)一步檢查凝膠柱的質(zhì)量，通常用一種大分子的有色物質(zhì)溶液過柱，常見的檢查物

質(zhì)為藍(lán)色葡聚糖，下面不屬于它的作用的是（C）

A.觀察柱床有無(wú)溝B.觀察色帶是否平整C.測(cè)量流速D.測(cè)量層析柱的外水體積

1>離子交換劑由載體、功能基團(tuán)和平衡離子組成。平衡離

子帶正電荷為陽(yáng)離子交換樹脂,平衡離子帶負(fù)電荷稱陰離子交換樹脂。

2、寫出下列離子交換劑類型：732強(qiáng)酸001x7樹脂（強(qiáng)酸性苯乙烯系陽(yáng)離子交換樹脂）,

724弱酸101x4樹脂（陽(yáng)離子型）,

717強(qiáng)堿201x7樹脂（強(qiáng)堿性苯乙烯系陰離子交換樹脂）,

CM-C竣甲基纖維素（弱酸性陽(yáng)離子交換纖維素）,

DEAE-C二乙基氨基乙基纖維素（強(qiáng)堿型陰離子交換纖維素）,

PBE94多緩沖交換劑（堿性陰離子交換劑）。

3、色譜聚焦是一種高分辨的新型的蛋白質(zhì)純化技術(shù)。它是根據(jù)蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)，

結(jié)合離子交換技術(shù)的大容量色譜，能分離幾百毫克蛋白質(zhì)樣品，洗脫峰被聚焦效應(yīng)濃

縮，分辨率很高，操作簡(jiǎn)單。

4、在采用多緩沖陰離子交換劑作固定相的離子交換聚焦色譜過程中，當(dāng)柱中某位點(diǎn)之pH值

下降到蛋白質(zhì)組分EL值以下時(shí)，它因帶正電荷而下移，如果柱中有兩種蛋白組分，

Dl值較大者會(huì)超過另一組分，移動(dòng)至柱下部DH較高的位點(diǎn)進(jìn)行聚焦?

1、親和層析洗脫方法有非專一性洗脫,特殊洗脫，專一性洗脫。

2、親和力大小除由親和對(duì)本身的解離常數(shù)（親和勢(shì)KL）決定外,還受許多因素的影響，

其中包括微環(huán)境、空間位阻、配基濃度、載體孔徑、結(jié)合位點(diǎn)等。

3、親和層析中常用作分離酶的配基有底物的類似物，抑制劑，輔酶和底物。

4、親和層析中非專一性吸附有離子效應(yīng)、疏水作用、復(fù)合親和力。

5、親和過濾指的是將親和層析和膜過濾結(jié)合運(yùn)用,它包括親和錯(cuò)流過濾

和親和膜分離兩大方法。

1、制備親和柱時(shí)應(yīng)首先選用的配基是（A）A.大分子的B.小分子的C.中等大小的D.不確定

2、親和層析的洗脫過程中，在流動(dòng)相中加入配基的洗脫方法稱作

（C）A.陰性洗脫B.劇烈洗脫C.競(jìng)爭(zhēng)洗脫D.非競(jìng)爭(zhēng)洗脫

3、親和層析的洗脫過程中，在流動(dòng)相中減去配基的洗脫方法稱作（D）

A.陰性洗脫B.劇烈洗脫C.正洗脫D.負(fù)洗脫

1、生物藥物與生物制品的定義

生物藥物：是利用生物體、生物組織、細(xì)胞或其成分，綜合應(yīng)用生物與醫(yī)學(xué)、生物化學(xué)與分

子生物學(xué)、微生物學(xué)與免疫學(xué)、物理化學(xué)與工程學(xué)和藥學(xué)的原理與方法進(jìn)行加工、制造而成

的一大類預(yù)防、診斷、治療和康復(fù)保健的制品。

生物制品：是應(yīng)用普通的或以基因工程、細(xì)胞工程、蛋白質(zhì)工程、發(fā)酵工程等生物技術(shù)獲

得的微生物、細(xì)胞及各種動(dòng)物和人源的組織和液體等生物材料制備的，用于人類疾病預(yù)防、

治療和診斷的藥品。

2.基因工程藥物與基因藥物有什么區(qū)別？

基因工程藥物是應(yīng)用基因工程和蛋白質(zhì)工程技術(shù)制造的重組活性多肽、蛋白質(zhì)及其修飾

物。藥物的化學(xué)成分屬于多肽或蛋白質(zhì)。而基因藥物是以基因物質(zhì)（以基因物質(zhì)（RNA或

DNA及其衍生物）作為治療的物質(zhì)基礎(chǔ)，包括基因治療用的重組目的DNA片段、重組疫

苗、反義藥物和核酶等。藥物的化學(xué)成分為核酸或其衍生物。

3.生物藥物的特性有哪些？

（1）藥理學(xué)特性：①活性強(qiáng)：體內(nèi)存在的天然活性物質(zhì)。②治療針對(duì)性強(qiáng)，基于生理生化

機(jī)制。③毒副作用一般較少，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高。④生理副作用常有發(fā)生可能具免疫原性或產(chǎn)生過

敏反應(yīng)。

（2）理化特性:①生物材料中有效成分濃度低，雜質(zhì)種類多且含量相對(duì)較高②生物活性物質(zhì)組

成結(jié)構(gòu)復(fù)雜、穩(wěn)定性差③生物材料易染菌、腐?、苌锼幬镏苿┑奶厥庖螅壕忈尅⒖蒯?。

4、生物藥物分類及每類藥物的準(zhǔn)確范疇

（1）基因工程藥物：應(yīng)用基因工程和蛋白質(zhì)工程技術(shù)制造的重組活性多肽、蛋白質(zhì)及其修

飾物。

（2）基因藥物：以基因物質(zhì)（RNA或DNA及其衍生物）作為治療的物質(zhì)基礎(chǔ)，包括基因治

療用的重組目的DNA片段、重組疫苗、反義藥物和核酶等

（3）天然生物藥物:①微生物藥物：是一類特異的天然有機(jī)化合物，包括微生物的初級(jí)代謝

產(chǎn)物、次級(jí)代謝產(chǎn)物和微生物結(jié)構(gòu)物質(zhì)，還包括借助微生物轉(zhuǎn)化產(chǎn)生的藥物或中間體。如：

抗生素、酶抑制劑、免疫抑制劑。②生化藥物：指從生物體（動(dòng)物、植物、和微生物）中獲

得的天然存在的生化活性物質(zhì)（或者合成、半合成的天然物質(zhì)類似物），其有效成分和化學(xué)

本質(zhì)多數(shù)比較清楚，通常按其化學(xué)本質(zhì)和藥理作用分類命名。

（4）醫(yī)學(xué)生物制品：用微生物（包括細(xì)菌、噬菌體、立克次體、病毒等）、微生物代謝產(chǎn)物、

動(dòng)物毒素、人或動(dòng)物的血液或組織等加工制成的預(yù)防、治療和診斷特定傳染病或其它有關(guān)疾

病的免疫制劑，主要指菌苗、疫苗、毒素、應(yīng)變?cè)c血液制品等。

1、生物活性物質(zhì)的來(lái)源及生物材料選擇的質(zhì)量準(zhǔn)則

來(lái)源：①動(dòng)物臟器：胰臟、腦、胃粘膜、肝臟、脾臟等

②血液、分泌物和其他代謝物：血液、分泌物

③海洋生物：海藻、腔腸動(dòng)物節(jié)肢動(dòng)物等

④植物

⑤微生物：細(xì)菌、放線菌、真菌、酵母

生物原料選擇的質(zhì)量準(zhǔn)則：①有效成分的含量②雜質(zhì)情況③來(lái)源

2、常用的活性物質(zhì)提取的方法有哪些？

①酸、堿、鹽水溶液提取方法②表面活性劑提取方法與反膠束提取方法③有機(jī)溶劑提取

④雙水相萃取法⑤超臨界萃取法

3、鹽溶作用的原理？

在稀鹽溶液中，鹽離子作用于生物大分子表面，增加了表面電荷，使之極性增加，水合作用

增強(qiáng)，促進(jìn)形成穩(wěn)定的雙電層，對(duì)生物大分子起到助溶作用。

4、活性物質(zhì)提取時(shí)的保護(hù)性措施哪些？

活性物質(zhì)的保護(hù)措施:

（1）緩沖鹽系統(tǒng)：防止pH大幅度變化（2）保護(hù)劑：還原劑、酶的底物、金屬鰲合劑

（3）抑制水解酶的作用

■加EDTA除去重金屬抑制酶活性

■選擇熱變性,使蛋白酶變性

■添加酶抑制劑

（4）其它保護(hù)措施（防過冷、過熱、酸、堿、紫外線、攪拌、高頻振蕩等）

5、常用的濃縮方法有哪些？

①鹽析濃縮②有機(jī)溶劑沉淀濃縮③用葡聚糖凝膠（Sephadex）濃縮④用聚乙二醇透析濃縮

⑤超濾濃縮⑥真空減壓濃縮與薄膜濃縮

6.簡(jiǎn)述生物活性物質(zhì)分離純化的主要原理。

生物大分子分離純化的主要原理是：

1）根據(jù)分子形狀和大小不同進(jìn)行分離，如差速離心與超離心、膜分離、凝膠過濾等；

2）根據(jù)分子電離性質(zhì)（帶電性）差異進(jìn)行分離，如離子交換法、電泳法、等電聚焦法：

3）根據(jù)分子極性大小及溶解度不同進(jìn)行分離，如溶劑提取法、鹽析法、等電點(diǎn)沉淀及有機(jī)

溶劑分級(jí)沉淀等；

4）根據(jù)物質(zhì)吸附性質(zhì)的不同進(jìn)行分離，如選擇性吸附與吸附層析等；

5）根據(jù)配體特異性進(jìn)行分離，如親和層析法等。

7.誘變育種的方法。

（1）出發(fā)菌株的選擇①穩(wěn)定性②具備某種優(yōu)良性狀的菌株③對(duì)誘變劑敏感④生理狀態(tài)及生

長(zhǎng)時(shí)間

（2）誘變處理①化學(xué)誘變；②物理誘變;③生物誘變

（3）篩選：①隨機(jī)篩選；②半理性化篩選

8.菌種的保藏方法。

①斜面低溫保存②液體石蠟封藏法③甘油冷凍法④冷凍干燥法⑤液氮保藏法

9.目的基因的獲得的方法。①cDNA文庫(kù)②PCR法（變性，退火，延伸）③化學(xué)合成法

10.酶的固定化方法。

①吸附法：可分為物理吸附法和離子吸附法。離子吸附法常用的載體有陰離子交換劑和陽(yáng)離

子交換劑。

②包埋法：將酶或細(xì)胞定位于凝膠高聚物網(wǎng)絡(luò)中，如卡拉膠，海藻膠，聚丙烯酰胺

③共價(jià)結(jié)合法：酶分子與載體分子，通過化學(xué)偶聯(lián)使酶與載體共價(jià)結(jié)合。

④交聯(lián)法：是使用雙功能或多功能試劑與酶分子之間進(jìn)行分子間的交聯(lián)反應(yīng)的固定化方法。

由于醐蛋白的功能基團(tuán)，如氨基、酚基、疏基和咪哇基等參與交聯(lián)反應(yīng)，因此可能影響酶的

活性中心結(jié)構(gòu)，而使酶活力顯著失活

11.中試放大的方法。①經(jīng)驗(yàn)放大法②相似放大法③數(shù)學(xué)模擬放大法

1、凝聚作用和絮凝作用的原理各是什么？

凝聚作用:指在某些電解質(zhì)作用下,使膠體粒子的擴(kuò)散雙電層的排斥電位降低，破壞了膠體

系統(tǒng)的分散狀態(tài)，而使膠體粒子聚集的過程。

絮凝作用：當(dāng)往膠體懸浮液中加入絮凝劑時(shí),膠?？蓮?qiáng)烈吸附在絮凝劑表面的功能團(tuán)上，而

且一個(gè)高分子聚合物的許多鏈節(jié)分別吸附在不同的顆粒的表面上，形成架橋聯(lián)接，形成粗大

的絮凝團(tuán)沉淀出來(lái)，有助于過濾。

2.常用的細(xì)胞破碎方法有哪些？

1）機(jī)械法：勻漿法、珠磨法、超聲波2）物理法：干燥、凍融、滲透壓沖擊

3）化學(xué)法：化學(xué)試劑處理、制成丙酮粉4）生物法：酶解法、自溶

3、固液分離方法有哪些？

I）過濾：常規(guī)和錯(cuò)流2）離心：過濾式離心和沉降式離心

1.掌握萃取與反萃取，分配系數(shù)與分配比，萃取比和萃取率，分離因素的概念。

（1）萃取：料液與萃取劑接觸后，料液中的溶質(zhì)向萃取劑轉(zhuǎn)移的過程

（2）反萃取：將萃取液與反萃取劑（含無(wú)機(jī)酸或堿的水溶液或水）相接觸，使某種被萃入

有機(jī)相的溶質(zhì)轉(zhuǎn)入水相的過程。

（3）分配定律：一定溫度、一定壓力下，某一溶質(zhì)在互不相溶的兩種溶劑間分配時(shí)，達(dá)到

平衡后；在兩相中的活度之比為一常數(shù)，如果是稀溶液，可以用濃度代替活度，即:

CL萃取相濃度。

a萃余相濃度

K稱為分配系數(shù)。

（4）在萃取過程中，溶質(zhì)在兩相的分子形式常常并不相同，仍然采用類似分配定律的公式

作為基本公式。這時(shí)候溶質(zhì)在萃取相和萃余相中的濃度，以分配比表示。

分配比（D）：兩相中各種化學(xué)形式進(jìn)行分配的溶質(zhì)總濃度的比值

CLCH+CL2+CL3+…+Ckn

D=—=-----------=K表

CRCRI4-CR2+CR3H---FCRn

K表示在特定的平衡條件下，被萃物在兩相中的有效濃度（即分子形式一樣）的比值；

D表示實(shí)際平衡條件下被萃物在兩相中總濃度（即不管分子以什么形式存在）的比值。分配

比隨著萃取條件變化而改變。

（5）萃取因素：也稱萃取比，指被萃取溶質(zhì)進(jìn)入萃取相的總量與該溶質(zhì)在萃余相中總量之

比。通常以E表示。自

卒取相中溶質(zhì)總量M\V\71

E=-------------------------=K表

萃余相中溶質(zhì)總量M2V2

（6）萃取率：一種萃取劑對(duì)某種溶質(zhì)的萃取能力（工業(yè)上用）

_萃取相中溶質(zhì)總量lnn€/

"一原始料液中溶質(zhì)總量X°

=---5-!——xl00%=—^―XI00%

M|匕+〃2匕占+1

（7）分離因素：料液中的溶質(zhì)并非是單一的組分，除了所需產(chǎn)物（A）外，還存在有雜質(zhì)

（B）。分離因素常用p表示，其定義為：在同一萃取體系內(nèi)兩種溶質(zhì)在同樣條件下分配系

數(shù)的比值。值越大（或越?。┓蛛x效果越好，越接近于1,分離效果越差。

_CA\/CB\_KA

CA2/CBZKB

2.萃取的方法有哪些？

萃取按照操作方式分類：（一）單級(jí)萃?。ǘ┒嗉?jí)錯(cuò)流萃?。ㄈ┒嗉?jí)逆流萃取

方法：溶劑萃取、雙水相萃取、反膠團(tuán)萃取、超臨界萃取

3、破乳方法主要有哪些？

1）加表面活性劑：改變界面張力2）離心：促進(jìn)乳狀液滴碰撞聚集

3）電解質(zhì)：中和電荷，鹽析蛋白質(zhì)4）加熱：促液滴布朗運(yùn)動(dòng)增加，降低黏度

5）吸附：介質(zhì)對(duì)油和水的吸附能力差異破乳6）高壓電：破壞雙電層等

7）稀釋：降低乳化劑濃度8）其他：超濾、反應(yīng)萃取、結(jié)合萃取劑和破乳劑的篩選

4.萃取的步驟有哪些？

（1）、混合（2）、液一液兩相分離（3）、離心萃?。?）、溶劑回收

5.雙水相萃取、反膠束萃取、超臨界流體萃取基本原理及各自的優(yōu)點(diǎn)？

(1)雙水相萃取

原理：利用生物物質(zhì)在互不相溶的兩水相間分配系數(shù)的差異進(jìn)行分離的過程。

優(yōu)點(diǎn)：保留產(chǎn)物的活性、可連續(xù)化操作

(2)反膠束萃?。?/p>

原理：表面活性劑溶于非極性溶劑中，并使其濃度超過臨界膠束濃度，便會(huì)在有機(jī)溶劑

內(nèi)形成聚集體，非極性基團(tuán)在外，極性基團(tuán)則排列在內(nèi)，形成一個(gè)極性核，此極性核具有溶

解極性物質(zhì)的能力。當(dāng)含有此種反膠束的有機(jī)溶劑與蛋白質(zhì)的水溶液接觸后，蛋白質(zhì)及其他

親水性物質(zhì)能夠溶于極性核內(nèi)部的水中，由于周圍的水層和極性基團(tuán)的保護(hù)，蛋白質(zhì)不與有

機(jī)溶劑接觸，從而不會(huì)造成失活。

優(yōu)點(diǎn)：具有成本低、溶劑可反復(fù)使用、萃取率和反萃取率都高等。

(3)超臨界流體萃取

原理:利用處于臨界壓力和臨界溫度以上的一些溶劑流體所具有特異增加物質(zhì)溶解能力

來(lái)分離純化的技術(shù)。

當(dāng)氣體物質(zhì)處于其臨界溫度(Tc)和臨界壓力(Pc)以上時(shí)，不會(huì)凝縮為液體，只是密度增

大，具有許多特殊的物理化學(xué)性質(zhì)：

□流體的密度接近于液體的密度，

□粘度接近于氣體；

□在臨界點(diǎn)附近,超臨界流體的溶解度對(duì)溫度和壓力的變化非常敏感：

優(yōu)點(diǎn)：①具有廣泛的適應(yīng)性：②萃取效率高，過程易于調(diào)節(jié)：

③分離工藝流程簡(jiǎn)單：④有些分離過程可在接近室溫下完成

缺點(diǎn)：分離過程必須在高壓下進(jìn)行，設(shè)備及工藝技術(shù)要求高，投資比較大，普及應(yīng)用較為困

難。

6.什么是流體，利用C02作為超臨界萃取的優(yōu)點(diǎn)

流體是液體和氣體的總稱。流體是由大量的、不斷地作熱運(yùn)動(dòng)而且無(wú)固定平衡位置的

分子構(gòu)成的，它的基本特征是沒有一定的形狀和具有流動(dòng)性。

利用C02作為萃取劑主要有以下優(yōu)點(diǎn)：

(1)二氧化碳超臨界溫度(7b=31.06°C)是所有溶劑中最接近室溫的，可以在35?40℃的條

件下進(jìn)行提取,防止熱敏性物質(zhì)的變質(zhì)和揮發(fā)性物質(zhì)的逸散。

(2)在C02氣體籠罩下進(jìn)行萃取,萃取過程中不發(fā)生化學(xué)反應(yīng);又由于完全隔絕了空氣中的氧,

因此，萃取物不會(huì)因氧化或化學(xué)變化而變質(zhì)。

(3)由于C02無(wú)味、無(wú)臭、無(wú)毒、不可燃、價(jià)格便宜、純度高、容易獲得，使用相對(duì)安全。

(4)C02是較容易提純與分離的氣體,因此萃取物幾乎無(wú)溶劑殘留,也避免了溶劑對(duì)人體的毒

害和對(duì)環(huán)境的污染。

(5)C02擴(kuò)散系數(shù)大而粘度小,大大節(jié)省了萃取時(shí)間，萃取效率高。

7.影響溶劑萃取的因素？

(1)、乳化和破乳化(2)、pH的影響(3)、溫度和萃取時(shí)間的影響

(4)、鹽析作用的影響(5)、溶劑種類、用量及萃取方式的選擇

1.沉淀與結(jié)晶有何不同？常用的沉淀方法包括哪些？

結(jié)晶是指溶質(zhì)自動(dòng)從過飽和溶液中析出，形成新相的過程。

沉淀是溶液中難溶解的固體物質(zhì)從溶液中析出的過程。

■結(jié)晶法：析出物為晶體。

■沉淀法：析出物為無(wú)定形固體。

沉淀方法：(1)有機(jī)溶劑沉淀法(2)等電點(diǎn)沉淀(3)成鹽沉淀法

(4)親和沉淀(5)高分子聚合物沉淀法(6)表面活性劑沉淀法

2.何謂鹽析？其原理是什么？常用的鹽析方法有哪些？影響鹽析的主要因素有哪些？鹽析

操作時(shí)常用的鹽是什么？

(1)鹽析法是利用各種生物分子在濃鹽溶液中溶解度的差異，通過向溶液中引入一定數(shù)量

的中性鹽，使目的物或雜蛋白以沉淀析出，達(dá)到純化目的的方法。

(2)原理：鹽溶現(xiàn)象和鹽析作用

鹽析作用的原理是：

破壞雙電層:在高鹽溶液中，帶大量電荷的鹽離子能中和蛋白質(zhì)表面的電荷，使蛋白質(zhì)分子

之間電排斥作用相互減弱而能相互聚集起來(lái)。

破坯水化層:中性鹽的親水性比蛋白質(zhì)大，鹽離子在水中發(fā)生水化而使蛋白質(zhì)脫去了水化膜，

暴露出疏水區(qū)域，由于疏水區(qū)域的相互作用，使其沉淀。

(3)常用的鹽析方法有鹽析和KS鹽析

(4)影響鹽析的因素

①無(wú)機(jī)鹽的種類

鹽析用鹽的選擇：鹽析作用要強(qiáng)、鹽析用鹽需有較大的溶解度、鹽析用鹽必須是惰性的、來(lái)

源豐富、經(jīng)濟(jì)

②溶質(zhì)(蛋白質(zhì)等)種類：Ks、S③溶質(zhì)(蛋白質(zhì)等)濃度：2~3%④溫度⑤pH

(5)鹽析中常用的鹽：硫酸鏤、硫酸鈉、磷酸鉀、磷酸鈉。

硫酸錢是最常用的蛋白質(zhì)鹽析沉淀劑

3.有機(jī)溶劑沉淀法的主要原理是什么？影響有機(jī)溶劑沉析的主要因素有哪些？

(1)主要原理：

①親水性有機(jī)溶劑加入溶液后降低了介質(zhì)的介電常數(shù)，使溶質(zhì)分子之間的靜電引力增加，聚

集形成沉淀。

②水溶性有機(jī)溶劑本身的水合作用降低了自由水的濃度，壓縮了親水溶質(zhì)分子表面原有水化

層的厚度，降低了它的親水性，導(dǎo)致脫水凝集。

以上兩種因素相比較，脫水作用比靜電作用強(qiáng)。

(2)影響沉淀效果的因素

①有機(jī)溶劑種類②PH的影響③溫度④無(wú)機(jī)鹽含量⑤某些金屬離子的助沉淀作用⑥樣品濃度

4.什么是結(jié)晶？結(jié)晶過程包括哪些？在何種條件下，溶液中才有晶體析出？

(1)溶液中的溶質(zhì)在一定條件下因分子有規(guī)則的排列而結(jié)合成晶體。結(jié)晶是指溶質(zhì)自動(dòng)從

過飽和溶液中析出，形成新相的過程。

(2)過程：①形成過飽和溶液；②晶核形成；③晶體生長(zhǎng)

(3)溶質(zhì)只有在過飽和溶液中才能析出

條件：

推動(dòng)力：形成新相(固體)需要一定的表面自由能。因此，溶液濃度達(dá)到飽和溶解度時(shí)，

晶體尚不能析出，只有當(dāng)溶質(zhì)濃度超過飽和溶解度后，才可能有晶體析出。

晶核：最先析出的微小顆粒是以后晶體的中心，稱為晶核。

首先形成晶核，由Kelvin公式，微小的晶核具有較大的溶解度。實(shí)質(zhì)上，在飽和

溶液中，晶核是處于一種形成一溶解一再形成的動(dòng)態(tài)平衡之中，只有達(dá)到一定的

過飽和度以后，晶核才能夠穩(wěn)定存在。

5.提高晶體質(zhì)量的途徑

晶體質(zhì)量包括三個(gè)方面的內(nèi)容：晶體大小、形狀和純度

（1）晶體大小

1）過飽和度:過飽和度值應(yīng)大至使結(jié)晶操作控制在亞穩(wěn)區(qū)內(nèi)，又保持較高的晶體生長(zhǎng)速率,

使結(jié)晶高產(chǎn)而優(yōu)質(zhì)。

2）溫度（緩慢冷卻）

快速冷卻整發(fā)一大量細(xì)晶體

緩慢冷卻染發(fā)一大而均勻的晶體

3）攪拌速度：適當(dāng)，不宜太快

4）晶種：誘導(dǎo)結(jié)晶，控制晶體形狀大小均勻度

（2）晶體形狀

■控制晶體生長(zhǎng)速度和結(jié)晶溫度

■控制過飽和度

■選擇不同的溶劑

■調(diào)節(jié)溶液的pH

■有目的地加入某種能改變晶形的雜質(zhì)

（3）晶體純度:雜質(zhì)對(duì)晶體的成長(zhǎng)速率的影響較為復(fù)雜，有的雜質(zhì)能抑制晶體的成長(zhǎng)，有的

能促進(jìn)成長(zhǎng)，有的能改變晶型。

■過濾分離母液中的雜質(zhì)

■晶體越細(xì)小，雜質(zhì)越多

■洗滌有利提高純度

■結(jié)晶速度過快，易產(chǎn)生“晶族”，包含雜質(zhì)

（4）晶體結(jié)塊

原因：粒度不齊、空氣濕度高、溫度高、受壓、貯存時(shí)間增長(zhǎng)

措施：控制粒度分布、良好外形、干燥密閉容器貯存

（5）重結(jié)晶：晶體用合適溶劑溶解后再次結(jié)晶，提高純度

1、吸附原理

吸附作用：界面上的分子同時(shí)受到不相等的兩相分子的作用力,界面分子的力場(chǎng)不飽和，即

存在一種固體的表面力，能從外界吸附分子、原子或離子，并在吸附劑表面附近形成多分子

層或單分子層。

2、大網(wǎng)格吸附劑及其吸附的特點(diǎn)

大孔網(wǎng)狀吸附劑（大網(wǎng)格吸附劑）：在樹脂聚合時(shí)加入惰性的致孔劑，待網(wǎng)格骨架固化和鏈

結(jié)構(gòu)單元形成后，用溶劑萃取或蒸儲(chǔ)水洗將致孔劑去掉,形成不受外界環(huán)境條件影響的孔隙,

其孔徑遠(yuǎn)大于2?4nm,可達(dá)lOOnm,故稱“大孔”。

特點(diǎn)：

①選擇性好、解吸容易、理化性質(zhì)穩(wěn)定、機(jī)械強(qiáng)度好、可反復(fù)使用等優(yōu)點(diǎn).

②其孔隙大小、骨架結(jié)構(gòu)和極性，可按照需要，根據(jù)不同的原料和合成條件而改變，因此可

適用于吸附各種有機(jī)化合物。

③適合弱電解質(zhì)及非離子型化合物分離。

3、大網(wǎng)格吸附劑吸附的操作過程

⑴樹脂選擇⑵吸附條件選擇⑶洗脫條件選擇

預(yù)處理、上樣、吸附、洗雜、洗脫、再生

1.凝膠層析的原理及特點(diǎn)。

凝膠層析原理：是將樣品混合物通過一定孔徑的凝膠固定相，由于各組分流經(jīng)體積的差異，

使不同分子量的組分得以分離的層析方法。

特點(diǎn)：（1）凝膠層析操作簡(jiǎn)便、設(shè)備簡(jiǎn)單（僅需一根層析柱）。

（2）分離效果較好，重復(fù)性高，樣品回收率高，接近100%。

（3）分離條件緩和。（4）應(yīng)用廣泛。（5）分辨率不高，分離操作較慢。

2.柱床體積、內(nèi)水體積、外水體積、基質(zhì)體積、洗脫體積、分配系數(shù)、全滲入、全排阻

⑴柱體積（VA）：柱體積是指凝膠裝柱后，從柱的底板到凝膠沉積表面的體積，又稱“床”

體積（VA）。

⑵外水體積（Vo）：色譜柱內(nèi)凝膠顆粒間隙，這部分體積稱外水體積，亦稱間隙體積，常用

V0表示。

⑶內(nèi)水體積（Vi）：因凝膠為三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，顆粒內(nèi)部仍有空間，液體可進(jìn)入顆粒內(nèi)部，水

的總和為內(nèi)水體積，又稱定相體積，常用表示。不包括基質(zhì)的體積（Vg）?

VA=V0+Vi+Vg

V柱內(nèi)空間=丫。+丫］

ooo

<§>?oo

O?OQOO

外水體積（V。）內(nèi)水體積（Vi）基質(zhì)體積(Vg)柱床體積（Vt）

圖A6凝膠層析柱各種體積示意圖《陰影部分）

柱床體積VA可以通過加入一定量的水至層析柱預(yù)定標(biāo)記處，然后測(cè)量水的體積來(lái)測(cè)定。

VA=1/4兀D2h計(jì)算

外水體積Vo可以通過測(cè)定完全排阻的大分子物質(zhì)的洗脫體積來(lái)測(cè)定，一般常用藍(lán)色葡聚糖

-2000作為測(cè)定外水體積的物質(zhì)。因?yàn)樗姆肿恿看螅?00萬(wàn)），在各種型號(hào)的凝膠中都

被排阻，并且它呈藍(lán)色，易于觀察和檢測(cè)。

⑷峰洗脫體積（淋出體積Ve）：是指被分離物質(zhì)通過凝膠柱所需洗脫液的體積，常用Ve表

示。洛=4+%,aceVi,ace是后的一部分，它與匕之比成為Kd（分配系數(shù)）

Ve=K）+HKd

（5）（排阻系數(shù)）分配系數(shù)用%

■當(dāng)用=1時(shí)，洗脫體積隹=陽(yáng)+匕，為全滲入。

■當(dāng)然=0時(shí)，洗脫體積隹=⑷，為全排阻。

■0＜用＜1時(shí)，洗脫體積監(jiān)=%+用內(nèi)，為部分滲入。

因此分子的正常Kd值0、1之間,這種由小到大的Kd值順序決定了物質(zhì)流出的順序。

3.了解葡聚糖凝膠、生物凝膠、瓊脂糖凝膠的結(jié)構(gòu)及特點(diǎn)

⑴葡聚糖凝膠（Sephadex）

①結(jié)構(gòu)

商品名為SephadexG類。交聯(lián)葡聚糖的基本骨架是葡聚糖。再經(jīng)3-氯-1,2-環(huán)氧丙烷

為交聯(lián)劑，形成三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的高分子化合物。其交聯(lián)度是通過交聯(lián)劑的加量及反應(yīng)條件來(lái)

控制的。

②性質(zhì)：穩(wěn)定性。存在非特異性吸附

⑵聚丙烯酰胺凝膠（生物凝膠）

①結(jié)構(gòu)：商品名為生物凝膠-P（Bio-GelP）?該凝膠由丙烯酰胺組成；以亞甲基雙丙烯酰胺

為交聯(lián)劑，聚合而成。

②聚丙烯酰胺凝膠的性質(zhì)：

1）孔徑大?。赏ㄟ^交聯(lián)度調(diào)整）；2）穩(wěn)定性、強(qiáng)度；

3）無(wú)非特異吸附，保存方便；4）生物凝膠的編號(hào)反映出它的分離界限。如Bio-GelP-100,

⑶瓊脂糖凝膠

①結(jié)構(gòu)：是由S-D-半乳糖與3,6-脫水-L-半乳糖以a-1,3-和B-1,4-糖首鍵相間連接而

成的鏈狀分子。

②特點(diǎn)A、沒有共價(jià)鍵的交聯(lián)。B、孔徑瓊脂糖的濃度。

C、瓊脂糖凝膠的化學(xué)穩(wěn)定性較差。D、顆粒強(qiáng)度差。

E、非特異性吸附力低。F、分離范圍大。

4.什么是“類分離”和“分級(jí)分離”？

（1）將分子量極為懸殊的兩類物質(zhì)分開，如蛋白質(zhì)與鹽類，稱作類分離。

（2）將分子量相差不大的大分子物質(zhì)加以分離如分離血清球蛋白與白蛋白，這叫做分級(jí)分離。

5.在實(shí)驗(yàn)中應(yīng)如何選擇凝膠與預(yù)處理？

（1）凝膠的選擇：

一方面要考慮凝膠的性質(zhì)，包括凝膠的分離分子量范圍（滲入限和排阻限），理化穩(wěn)定性，

強(qiáng)度、非特異性吸附性質(zhì)等；另一方面還要注意到分離目的和樣品的性質(zhì)。

①選擇作類分離的凝膠是，應(yīng)使樣品中大分子的分配系數(shù)用=0,小分子的

②選擇作分級(jí)分離的凝膠型號(hào)時(shí)必須使各種物質(zhì)的Kd值盡可能相差大。要使組分的分子量

盡可能分布在凝膠分離范圍的兩側(cè)，或接近兩側(cè)的位置。如果樣品中含有3個(gè)組分，最好一

個(gè)接近全排阻，另一個(gè)接近全滲入，第三個(gè)為部分滲入，且分子量大于滲入限的3倍，并小

于排阻限的1/3。

（2）凝膠粒度的選擇：

■細(xì)粒凝膠柱流速低，洗脫峰窄，分辨率高，用于精制分離或分析。

■粗粒凝膠柱流速高，洗脫峰平坦，分辨率低，用于粗制分離，脫鹽。

此外，凝膠顆粒必須均勻，顆粒越小更好。

（3）預(yù)處理：

■凝膠在使用前須溶漲，使干膠顆粒充分吸收溶劑，并達(dá)到平衡。

■干膠以10倍以上吸液量的溶劑浸泡。

■熱法溶漲（水浴）。

6.凝膠用過后，有那幾種保存方法？

葡聚糖凝膠有3種,干法、濕法和半縮法

1）濕法：加入一定量的防腐劑置于冰箱中作短期保存。

2）干法：用濃度逐漸升高的乙醵分步處理洗凈的凝膠，脫水收縮，抽濾，用60~80℃吹干。

3）半縮法：60-70%乙醇使凝膠部分脫水收縮，封口，4℃保存。

瓊脂糖凝膠做成珠狀后不再脫水干燥,否則不能再溶脹恢復(fù)原有形狀，因此商品在都以含水

狀態(tài)供應(yīng)，并應(yīng)在濕態(tài)保存。一般懸浮在103mol/LEDTA和0.02%疊氮化鈉溶液中。避免硼

酸緩沖液

7.凝膠層析的操作步驟？

（1）樣品和加樣

蛋白質(zhì)類樣品濃度:不大于4%。樣品粘度小于0.OlPas；樣品渾濁應(yīng)先過濾除顆粒后上柱

（2）洗脫與收集

1）.洗脫劑：常采用緩沖鹽溶液進(jìn)行洗脫；洗脫液的成分也不應(yīng)改變，以防凝膠漲縮引起柱

床體積變化或流速改變。

2）流速（操作壓、型號(hào)、粒度）。整個(gè)洗脫過程中始終保持一定的操作壓；編號(hào)小，顆粒

粗一-流速大；與操作壓成正比，柱長(zhǎng)成反比。

3）部分收集器。

（3）凝膠柱的再生:板結(jié)、不溶物污染、嚴(yán)重吸附；反沖。重新裝柱。

8.細(xì)粒凝膠柱流速慢，洗脫峰越窄，分辨率高，適用于什么產(chǎn)品的分離或分析？粗粒凝膠

柱流速高，但洗脫峰平坦，分辨率低，適用于產(chǎn)品制備那個(gè)階段的分離？

（1）用于精制分離或分析（2）用于粗制分離，脫鹽

9.凝膠層析的應(yīng)用范圍有哪幾方面？

⑴脫鹽和濃縮⑵分子量測(cè)定⑶凝膠在生化制藥中的應(yīng)用包括：去熱原和分離純化

10.在凝膠層析中要想得到好的層析結(jié)果應(yīng)注意那些問題和采取那些措施？

答：注意有沒有色譜峰變寬。措施：減少峰寬效應(yīng)，選擇合適溶劑，填料均勻，填料粒度

一致，降低流速，適當(dāng)增加柱長(zhǎng)，增加分辨率里兩個(gè)峰的峰間距離。

凝膠過濾層析經(jīng)常遇見的問題

1.流速慢

（1）有氣泡、出水管阻塞（2）沒打開夾子（3）柱壓太緊（操作壓過大、長(zhǎng)期使用）

2.柱內(nèi)產(chǎn)生氣泡

（1）上水口不流或皮管破裂，洗脫液外流（2）接口漏氣，如上水口螺絲擰的不緊

3.條帶扭曲

（1）膠面不平（2）樣品或洗脫液中有顆⑶粒裝柱不均勻

4.分辯率不高

（1）裝拄不均勻（2）樣品量過大（3）流速太快（4）柱不垂直或柱不合適

（5）長(zhǎng)菌（6）柱下口軟管太長(zhǎng)（7）膠不適當(dāng)

11.根據(jù)凝膠層析分離大分子物質(zhì)的原理，分子質(zhì)量為2萬(wàn)，6萬(wàn)和10萬(wàn)的蛋白質(zhì)可選擇哪

種規(guī)格型號(hào)的SephadexG凝膠將三者分開？洗脫后順序如何？為什么？

答：選擇：SephadexG-75

洗脫順序是10萬(wàn)、6萬(wàn)、2萬(wàn)。

因?yàn)榉肿恿枯^小的分子可以占據(jù)較多的孔體積，而大分子占有的孔體積較小，小分子在

柱中停留時(shí)間比大分子長(zhǎng)，于是樣品各組分按分子大小順序而分開，最先洗脫出來(lái)的是大分

子。

1.離子交換層析的原理利用溶液中帶電粒子與離子交換劑之間結(jié)合力的差異進(jìn)行物質(zhì)分離。

2.離子交換劑有哪三部分組成？

3.離子交換劑由惰性的不溶性載體、功能基團(tuán)和平衡離子組成。

3.離子交換樹脂的分類

分類：平衡離子帶正電荷：陽(yáng)離子交換樹脂

平衡離子帶負(fù)電荷：陰離子交換樹脂

具體分為：陽(yáng)離子交換樹脂分類：強(qiáng)酸型樹脂、中酸性樹脂、弱酸性樹脂

陰離子交換樹脂分類：強(qiáng)堿型陰離子交換樹脂、弱堿型陰離子交換樹脂、

中強(qiáng)堿性陰離子交換樹脂

4、離子交換樹脂的預(yù)處理和再生辦法

樹脂的預(yù)處理

■(1)物理處理：去雜，過篩。

■(2)化學(xué)處理：用8?10倍的lmol/L鹽酸或氫氧化鈉溶液交替浸泡。

■(3)最后以去離子水或緩沖夜平衡

再生過程：

■(1)去雜，大量水沖洗，除去物理吸附的雜質(zhì)。

■(2)用酸、堿處理除去與功能基團(tuán)結(jié)合的雜質(zhì)。

■(3)轉(zhuǎn)型：按要求的人為的賦予平衡離子的過程

5、多糖基離子交換劑主要分為哪兩類1.離子交換纖維素2.葡聚糖凝膠離子交換劑

6、CM-sephadexC-25(竣甲基纖維素);C—陽(yáng)離子

功能基團(tuán)是：陵甲基；載體是：葡聚糖凝膠；型號(hào)是：G-25；類型：弱酸型陽(yáng)離子交換劑

7、DEAE-sephadexA-25(二乙胺基乙基纖維素)；A—陰禽子

功能基團(tuán)是：二乙基氨基乙基纖維素；載體是：葡聚糖凝膠；型號(hào)：G-25；

類型：強(qiáng)堿型陰離子交換劑

8、離子交換法有哪些方面的應(yīng)用

■分離純化——氨基酸制備

■無(wú)鹽水制備

9、色譜聚焦的原理

■自動(dòng)形成pH梯度。

■蛋白質(zhì)的色譜行為

■聚焦效應(yīng)

10、K值為離子交換常數(shù)，K>1說明樹脂對(duì)交換離子吸引力較大

11、由下圖，利用給出的兩種離子交換劑(ELE2)分離3種蛋白質(zhì)(Pl、P2、P3),用

箭頭流程圖表示(并指出ELE2的類型)。

E1弱酸型陽(yáng)離子交換劑E2為強(qiáng)堿陰離子交換劑

1、親和層析：利用生物大分子物質(zhì)具有與某些相應(yīng)的分子專一性可逆結(jié)合的特性而建立的

層析技術(shù)。

2、親和過濾：將親和層析和膜過濾技術(shù)結(jié)合運(yùn)用，包括親和錯(cuò)流過濾和親和膜分離。

3、親和萃取：利用偶聯(lián)親和配基的PEG為成相聚合物進(jìn)行的雙水相萃取，在親和配基的親

和結(jié)合作用下促進(jìn)目標(biāo)產(chǎn)物在PEG相（上相）的分配，提高目標(biāo)產(chǎn)物的分配系數(shù)和選擇性。

4、親和膜：親和膜利用親和配基修飾的微濾膜為親和吸附介質(zhì)親和純化目標(biāo)蛋白質(zhì)，是固

定床親和層析的變型。

5、親和反膠團(tuán)萃取：指在反膠團(tuán)相中除通常的表面活性劑以外，添加另一種親水頭部為親

和配基的助表面活性劑。

6、親和電泳：是將親和層析與電泳技術(shù)結(jié)合起來(lái)，將親和層析的吸附劑包埋到瓊脂凝膠板

上制成親和電泳（AEP）載體，電泳時(shí)，對(duì)配基具有親和作用的化合物遷移下降或包留在原

點(diǎn)。

7、親和沉淀：是生物親和相互作用與沉淀分離相結(jié)合的生物大分子的分離純化技術(shù)。

8、二次作用親和沉淀：利用在物理場(chǎng)改變時(shí)溶解度下降、發(fā)生可逆性沉淀的水溶性聚合物

為載體固定親和配基。親和介質(zhì)結(jié)合目標(biāo)分子后，通過改變物理場(chǎng)使介質(zhì)與目標(biāo)分子共同沉

淀的方法稱為二次作用親和沉淀。

9、金屬離子親和層析：利用金屬離子的絡(luò)合或形成螯合物的能力吸附蛋白質(zhì)的分離系統(tǒng)。

1.親和層析中在載體和配基間插入一個(gè)“手臂”的原因是什么？

增加與載體相連配基的活動(dòng)度，減輕載體的立體障礙。

2.親和層析中常用的洗脫方法有哪些？

洗脫方法主要有三種：

非專一性洗脫:改變Ph;改變離子強(qiáng)度;對(duì)疏水作用結(jié)合的可降低緩沖溶液極性

特殊洗脫:特殊方法裂解配基與載體的連接

專一性洗脫:S（固定化配基），E（酶），I（游離配基）

競(jìng)爭(zhēng)效應(yīng)：ESI<EI穩(wěn)定性，I,E洗脫出來(lái)

非競(jìng)爭(zhēng)效應(yīng)：ESI-EI,不能洗脫

反競(jìng)爭(zhēng)性效應(yīng)：ESI>EI穩(wěn)定性，I使ES結(jié)合緊，I,E洗脫出來(lái)

3、常用載體纖維素、瓊脂糖凝膠、葡聚糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠

4、親和配基

配基的選擇配基的濃度配基偶聯(lián)的位置配基分子的大小配基的類型

5、糖類載體活化與偶聯(lián)

澳化鼠活化法高碘酸氧化法環(huán)氧化法甲苯磺酰氯法雙功能試劑法

6、聚丙烯酰胺凝膠活化與偶聯(lián)

疊氮化法重氮化法（含氨基載體）碳二亞胺縮合法（含痰基載體）

7、影響吸附親和力的幾個(gè)因素

配基濃度對(duì)親和力的影響空間障礙的影響配基與載體的結(jié)合位點(diǎn)的影響

載體孔徑的影響微環(huán)境的影響

比較吸附層析、凝膠層析、離子交;所層析、親和層析匹種層析技術(shù)并填寫下表。

吸附分離法凝膠層析離子交換法親和層析

原理吸附力分子量大小（Ve）靜電結(jié)合力特異性作用

構(gòu)成吸附劑凝膠載體一活性基團(tuán)一親和吸附介質(zhì)

平衡離子（載體一配基）

選擇性類似物洗脫類似物交聯(lián)度（孔徑）離子水合半徑KL（配基濃度、

離子價(jià)與離子濃度配給大小、結(jié)合

交換環(huán)境位置、載