濟(jì)寧感染性腹瀉病例監(jiān)測哨點(diǎn)醫(yī)院區(qū)級及以上

——附件5濟(jì)寧市感染性腹瀉暴發(fā)疫情基本情況調(diào)查表編號姓名性別年齡職業(yè)發(fā)病日期發(fā)病時間首發(fā)癥狀腹瀉次數(shù)（/天）大便形狀嘔吐次數(shù)（/天）腹痛惡心發(fā)熱（最高體溫）其它癥狀是否就診癥狀消失時間是否采集標(biāo)本調(diào)查單位：調(diào)查時間：調(diào)查者簽名：附件6標(biāo)本采集、保存、運(yùn)輸及檢測技術(shù)指南一、標(biāo)本采集（一）病例標(biāo)本的采集采集糞便標(biāo)本，由受過專門培訓(xùn)的人員來施行，并填寫采樣登記表。優(yōu)先采集就診時未使用過抗生素的病例標(biāo)本。注意生物安全防護(hù)，防止污染、傳播和自身感染。標(biāo)本應(yīng)做好相應(yīng)標(biāo)記。采集糞便使用無菌容器。用6支無菌棉拭多點(diǎn)采集糞便標(biāo)本（如有膿血或黏液應(yīng)挑取膿血、黏液部分，液體糞便應(yīng)取絮狀物，使棉拭表面布滿糞便），分別插入1支C-B運(yùn)輸培養(yǎng)基，棉拭子應(yīng)盡量全部插入培養(yǎng)基內(nèi)，以保證彎曲菌所需的微需氧環(huán)境，迅速擰緊管口。另外再分5ml糞便放到無菌糞便采樣杯（盒）（不加任何培養(yǎng)基和試劑），置于-20℃或-20℃以下冷凍保存。（二）水標(biāo)本的采集無菌采集表層水1000mL(水平面下30cm內(nèi))，并應(yīng)注意防止水樣間相互污染。采集表層水體樣品時用提前準(zhǔn)備好的無菌廣口容器，標(biāo)記好。（三）水產(chǎn)品的采集個體較大的動物性水產(chǎn)品以一個個體為單位單獨(dú)取樣；個體較小的魚類、蝦、蟹和貝等，混合采取樣品，每份樣品的最少采樣量為500g，注意盡量體現(xiàn)樣品代表性。樣品采集后放置在一個提前標(biāo)記好的無菌塑料袋中，應(yīng)標(biāo)記清晰，避免不同樣本之間的交叉污染。（四）標(biāo)本的保存和運(yùn)輸用于細(xì)菌檢測的糞便標(biāo)本如不能立即送檢，需保存于4℃冰箱或冷藏包，但不應(yīng)超過12小時。用于病毒檢測的糞便樣本采集后30min內(nèi)放入-20℃冰箱中，保存期內(nèi)避免樣本發(fā)生反復(fù)凍融。所有標(biāo)本置于冷藏包（配備冰排），由專職人員運(yùn)輸至監(jiān)測點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，在動輸過程中需防止容器破碎、灑漏、顛倒，注意生物安全防護(hù)。水標(biāo)本及水產(chǎn)品送檢樣品應(yīng)盡可能保持采集時的溫度，盡快送達(dá)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢驗(yàn)。運(yùn)送過程中應(yīng)避免交叉污染。如果在炎熱夏季，運(yùn)輸溫度應(yīng)在10℃左右（但不得低于7℃），以避免弧菌損傷或死亡。二、細(xì)菌檢測（一）標(biāo)本處理1.直接分離培養(yǎng)：采集的標(biāo)本直接劃線接種選擇性平板進(jìn)行培養(yǎng)，包括麥康凱平板、XLD平板、STEC平板、科瑪嘉沙門菌顯色平板、科瑪嘉弧菌顯色平板、TCBS平板，放置37℃培養(yǎng)；接種mCCD平板，放置42℃微需氧環(huán)境下培養(yǎng)。2.增菌培養(yǎng)：將標(biāo)本同時接種于堿性蛋白胨水，于37℃培養(yǎng)6小時后，接種科瑪嘉弧菌顯色平板或TCBS平板；接種SGB增菌37℃培養(yǎng)18小時后，接種科瑪嘉沙門菌顯色平板；接種3%氯化鈉蛋白胨水增菌液，37℃培養(yǎng)12～16小時后，接種于科瑪嘉弧菌顯色平板或TCBS平板；接種Preston肉湯增菌42℃微需氧培養(yǎng)24～48小時，接種改良CCD平板，42℃微需氧培養(yǎng)1天～5天。3.水體樣品：無菌操作取450mL，加入10倍濃縮培養(yǎng)液50mL，混勻。4.水產(chǎn)品魚類樣品：應(yīng)先用自來水簡單沖洗并甩干表面水分，以無菌操作先開魚背，取可食用部分25g（表皮組織和肉）作為1份樣品。剪碎，無菌操作稱取25g，加入3%氯化鈉堿性蛋白胨水225mL，用旋轉(zhuǎn)刀片式均質(zhì)器以8000r/min均質(zhì)1min，或拍擊式均質(zhì)器拍擊2min，制備成1:10的樣品勻液。甲殼類樣品：參照魚類樣品操作。蝦類的取樣部位應(yīng)包括蝦殼、肉、頭胸節(jié)內(nèi)的內(nèi)臟和腹節(jié)外延處的腸管。蟹類的取樣部位應(yīng)包括肉、胃和鰓條等。軟體動物樣品：參照魚類樣品操作。取樣部位為內(nèi)容物（應(yīng)包括腸、消化腺）。（二）菌株分離和鑒定1.菌落形態(tài)鑒定：在STEC顯色平板上挑取5個形態(tài)特征典型的可疑產(chǎn)毒性大腸桿菌菌落分別保存在半固體培養(yǎng)基中送省CDC進(jìn)行后續(xù)檢測；在其它各種選擇性培養(yǎng)基上分別挑取5個形態(tài)特征典型的可疑菌落(參考附錄5相關(guān)內(nèi)容：病原體在不同選擇性培養(yǎng)基上的菌落特征)進(jìn)行純化或血清凝集試驗(yàn)，同時進(jìn)行革蘭染色。2.生化鑒定：初步生化鑒定包括氧化酶試驗(yàn)、動力、雙糖等。對經(jīng)初步生化鑒定結(jié)果符合的菌株用API生化鑒定條或全自動生化鑒定儀進(jìn)行系統(tǒng)生化鑒定。如使用VITEK2鑒定者，要求將每株疑似菌株鑒定報告附于菌株送檢單后面。3.血清學(xué)鑒定：使用病原菌特異血清進(jìn)行玻片凝集，初步血清鑒定后再進(jìn)行血清分型。（三）疑似菌株的保存和運(yùn)送除志賀菌、空腸彎曲菌和副溶血性弧菌不上送外，其它菌株分別接種半固體瓊脂，37℃過夜，在室溫下保存送檢，不要冷藏。病毒核酸檢測陽性的糞便標(biāo)本冷藏送省CDC。糞便樣本的保存、運(yùn)送和檢測培養(yǎng)條件項(xiàng)目培養(yǎng)基目標(biāo)病原體溫度細(xì)菌標(biāo)本保存和運(yùn)送1.Cary-Blair氏運(yùn)送培養(yǎng)基所有感染性腹瀉綜合監(jiān)測致病菌4℃增菌液1.3%氯化鈉堿性蛋白胨水副溶血性弧菌37℃2.堿性蛋白胨水霍亂弧菌37℃3.Preston肉湯彎曲菌微需氧42℃4.SBG增菌液沙門菌37℃選擇性分離平板1.Mac平板EPEC、STEC、ETEC、37℃EIEC、EAEC、志賀菌2.XLD平板志賀菌37℃3.mCCD平板彎曲菌微需氧42℃