苜蓿鐮刀菌根腐病抗性鑒定技術規(guī)程

1苜蓿鐮刀菌根腐病抗性鑒定技術規(guī)程本文件規(guī)定了苜?？圭牭毒〉蔫b定方法、調查及抗病性評價標準。本文件適用于評價不同苜蓿品種室內對鐮刀菌根腐病的抗性水平。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB6141豆科主要栽培牧草種子質量等級DB15/T1776馬鈴薯枯萎病抗性鑒定技術規(guī)程3術語和定義下列術語和定義適用于本文件。3.1苜蓿鐮刀菌根腐病AlfalfaFusariumRootRot苜蓿種植區(qū)普遍發(fā)生的由鐮刀菌（Fusariumspp.）引起的土傳性真菌病害，主要為害苜蓿根部，造成根部腐爛，導致根系吸收水分和養(yǎng)分的功能逐漸減弱直至植株死亡。3.2抗性評價Resistanceevaluation根據采用的技術標準判別植物對特定病害反應程度和抵抗水平的描述。3.3病情級別Diseaselevel人為定量植物個體或群體發(fā)病程度的數值化描述。3.4病情指數Diseaseindex（DI）通過對植物個體發(fā)病程度（病情級別）數值的計算獲得的群體發(fā)病程度的數值化描述形式。3.5接種體Inoculum用于人工接種以引起病害發(fā)生的病原物的子實體結構。3.6優(yōu)勢菌株DominantPathogen對植物具有高感染力和生存能力，一定環(huán)境中占據主導地位并引起植物病害。4接種體制備4.1供試菌種2選取內蒙古苜蓿種植區(qū)發(fā)病株上分離獲得的根腐病優(yōu)勢菌株—銳頂鐮刀菌（Fusariumacuminatum）。4.2培養(yǎng)基馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA培養(yǎng)基）：馬鈴薯200g，洗凈去皮切碎，加水煮沸20min，紗布過濾，加入葡萄糖20g和瓊脂15g，用水定容至1000mL，攪拌均勻，高壓滅菌（121℃,20min）。麥麩培養(yǎng)基：將60g麥麩加入40mL蒸餾水，裝入罐頭瓶中，高壓滅菌（121℃,30min）。4.3接種體繁殖參照DB15/T1776，將接種菌株轉接于PDA平板培養(yǎng)基上，置于恒溫培養(yǎng)箱25℃培養(yǎng)7d，自菌落邊緣切取菌餅，接種于麥麩培養(yǎng)基上，置于恒溫培養(yǎng)箱25℃培養(yǎng)7d。4.4接種懸浮液制備收集培養(yǎng)物用四層紗布過濾菌絲獲得孢子懸浮母液，血球計數板配置接鏡檢配至所需接種濃度。5室內抗病性鑒定5.1鑒定室人工接種鑒定室具備人工調節(jié)溫度、濕度及光照的條件，使人工接種后具備良好的發(fā)病環(huán)境。5.2鑒定設計鑒定材料順序排列，重復3次，每一處理6缽（5株/缽）。5.3鑒定對照材料設高抗苜蓿品種為抗病對照材料，高感苜蓿品種為感病對照材料。5.4鑒定材料育苗5.4.1種子質量鑒定種子質量應符合GB6141，苜蓿一級種標準，不應帶檢疫性病蟲。5.4.2種子消毒鑒定種子在3%NaClO表面消毒2min，75%乙醇溶液表面消毒30s，無菌水沖洗5遍，播種于育苗穴盤中。5.4.3育苗基質育苗基質為：170℃高溫滅菌菜田土+營養(yǎng)基質=1:15.4.4育苗在人工氣候培養(yǎng)箱育苗，溫度設置為24℃~26℃,空氣相對濕度30%～40%，苜蓿幼苗出土后，每3d澆無菌水一次。5.5接種35.5.1接種時期苜蓿幼苗3～4片復葉期接種。5.5.2接種體濃度5×106個/mL5.5.3接種方法采用蘸根接種法，將幼苗根系完全浸泡于孢子懸浮液中，30min后將幼苗重新移植于營養(yǎng)缽（高10cm，直徑10cm）中。5.5.4接種后管理將植株置于24℃~26℃的鑒定室內，保持空氣相對濕度30%～40%，每日光照10h～12h，2d澆水一次。6病情調查6.1調查時間苜蓿幼苗接種35d調查病情，按照鐮刀菌根腐病病情分級標準進行調查。6.2病情級別劃分病情級別劃分見表1（引自蔡文涌等，2020）。表1苜蓿鐮刀菌根腐病抗性室內鑒定病情級別的劃分0123456.3調查方法按幼苗病情級別劃分調查接種株發(fā)病情況，記載單株病情級別，計算病情指數（DI）。病情指數按公式（1）計算：DI=×100…………………（1）式中：DI—病情指數S—各病情級別代表數值4n—各病情級別病株數N—調查總株數S—最高病情級別代表值注：計算結果精確到小數點后兩位。7抗病性評價7.1抗病性評價標準依據鑒定材料3次重復病情指數（DI）的平均值確定其抗性水平，劃分標準見表2（引自潘龍其等，2016）。表2苜蓿鐮刀菌根腐病抗性評定標準7.2鑒定有效性判別感病對照材料達到其相應感病程度（DI＞50），該批次根腐病抗性鑒定視為有