向日葵總DNA快速提取及檢測技術(shù)規(guī)程編制說明

向日葵總DNA快速提取及檢測技術(shù)規(guī)程編制說明近10余年來，隨著分子生物學(xué)的飛速發(fā)展，DNA高通量測序技術(shù)的完善，品的DNA。在一些分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中，DNA提取的產(chǎn)量、質(zhì)量和提取如CTAB法、SDS法、Chelex-100法等，但是，CTAB、SDS方法，在D過程中，仍需用多種試劑，有些試劑試對人體有害的有機(jī)試劑，而且耗時(shí)較長，系-向日葵種質(zhì)資源評價(jià)項(xiàng)目，十二五期間開展了向日葵總DNA快速提取及檢測根據(jù)國家特色油料產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系-向日葵種質(zhì)資源評價(jià)與創(chuàng)新崗項(xiàng)目以及科技廳、財(cái)政廳項(xiàng)目任務(wù)要求和《自治區(qū)市場監(jiān)管局關(guān)于征集2021年內(nèi)蒙古自治及其用量、震蕩時(shí)間、抽提次數(shù)等參數(shù)和條件，以PCR檢測來判斷這些因素對基因組DNA提取的影響，確定了最佳的提取條件，建立了一種向日葵樣本用量小、經(jīng)濟(jì)、快速、便捷的基因組DNA提取方法，為大量開展向日葵分子生物學(xué)關(guān)鍵。CTAB法、SDS法、Chelex-貓糞便樣品采集及DNA提取技術(shù)規(guī)程》、《親子鑒定DNA提取標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)牧業(yè)科學(xué)院承擔(dān)國家特色油料產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系-向日葵種質(zhì)資根據(jù)《自治區(qū)市場監(jiān)管局關(guān)于征集2021年內(nèi)蒙古自治區(qū)地方標(biāo)準(zhǔn)制修訂項(xiàng)蒙古地方標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目建議書和2021年第一批內(nèi)蒙古自治區(qū)地方標(biāo)準(zhǔn)修訂項(xiàng)目計(jì)劃外的50份食用向日葵種質(zhì)資源進(jìn)行基礎(chǔ)類群劃分，對100條引物采集、保存、預(yù)處理等過程設(shè)計(jì)試驗(yàn)，并對現(xiàn)有CTAB法改進(jìn)，以獲得高質(zhì)量的及質(zhì)量目標(biāo)、材料藥品準(zhǔn)備、DNA提取中的樣品研磨、DNA抽提、離心沉淀、風(fēng)內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)牧業(yè)科學(xué)院承擔(dān)國家特色油料產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系向日葵種子資入到預(yù)先加好700μl無水乙醇的1.5ml離心管中，輕輕的上），），（2）PCR擴(kuò)增程序（RAPD），95℃預(yù)變性4min；94℃變性40s；38℃退（該基礎(chǔ)溫度隨品種不同而不同，一般在54℃~60℃)），RAPD反應(yīng)體系以參考文獻(xiàn)的反應(yīng)體系（20μl）:模板DNA100ng，理和5個(gè)引物濃度處理進(jìn)行正交試驗(yàn)，電泳檢測表明，當(dāng)20μl體系模板濃度為40ng，引物濃度為1.60umol/L時(shí)擴(kuò)增出的條帶清晰、穩(wěn)定，易于統(tǒng)計(jì)分析PCR擴(kuò)增程序以參考文獻(xiàn)提供的反映程序：94℃4min,94℃40s,38℃1.5溫度處理進(jìn)行PCR擴(kuò)增后，電泳結(jié)果表明，因而確立最700bp500700bp500bp400bp300bp200bp700bp500bp400bp300bp200bpp200bpp:引物序列序列C-06GAACGGACTCN-03GGTACTCCCCC-07GTCCCGACGAN-07CAGCCCAGAGC-09CTCACCGTCCN-15CAGCGACTGTC-14TGCGTGCTTGN-17CATTGGGGAGC-16CACACTCCAGN-19GTCCGTACTGF-11TTGGTACCCCO-04AAGTCCGCTCF-18TTCCCGGGTTO-06CCACGGGAAGG-12CAGCTCACGAO-07CAGCACTGACN-02ACCAGGGGCAO-13GTCAGAGTCC0-18CTCGGAGTGC利用篩選出的19條引物分別對50份食用向日葵基因組DNA進(jìn)行PCR增,19條引物共擴(kuò)增出141條DNA1200bp700bp500bp300bp200bp100bp1200bp800bp200bp500bp200bp800bp200bp圖2：引物F-18對50份食用向日葵種8786C-14TGCGTGCTTG88676N-0264N-0776N-0376N-1576N-1775N-19756597878698以實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)為基礎(chǔ)，Quantityone軟降統(tǒng)計(jì)RAPD擴(kuò)增條帶，采用D和EXCEl表格進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。本標(biāo)準(zhǔn)是起草單位在多年開展相關(guān)研究實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上總結(jié)形成的《向日葵總1范哪些研究工作或者技術(shù)的實(shí)施等而進(jìn)行的標(biāo)準(zhǔn)2CTAB法相比做了哪些優(yōu)化；該標(biāo)準(zhǔn)中使用的CTAB法與其他DNA提取方法的優(yōu)點(diǎn)，以及不同3試劑的