猴痘病毒核酸檢測(cè)試劑盒（熒光PCR法）（CSZ2300354）

受理號(hào)：CSZ2300354體外診斷試劑產(chǎn)品注冊(cè)技術(shù)審評(píng)報(bào)告產(chǎn)品中文名稱：猴痘病毒核酸檢測(cè)試劑盒（熒光PCR法）產(chǎn)品管理類別：第三類申請(qǐng)人名稱：廣州達(dá)安基因股份有限公司國(guó)家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評(píng)中心目錄基本信息...........................................................................................................3一、申請(qǐng)人名稱...............................................................................................3二、申請(qǐng)人住所...............................................................................................3三、生產(chǎn)地址...................................................................................................3技術(shù)審評(píng)概述...................................................................................................4一、產(chǎn)品概述...................................................................................................4二、臨床前研究概述.......................................................................................6三、臨床評(píng)價(jià)概述.........................................................................................11四、產(chǎn)品受益風(fēng)險(xiǎn)判定.................................................................................13綜合評(píng)價(jià)意見.................................................................................................16基本信息一、申請(qǐng)人名稱廣州達(dá)安基因股份有限公司。二、申請(qǐng)人住所廣州市高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)開發(fā)區(qū)香山路19三、生產(chǎn)地址廣州市高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)開發(fā)區(qū)香山路19產(chǎn)業(yè)開發(fā)區(qū)荔枝山路6號(hào)；廣州市黃埔區(qū)香山路17號(hào)B104號(hào)房。技術(shù)審評(píng)概述一、產(chǎn)品概述（一）產(chǎn)品主要組成成分本試劑盒主要組成成分包括猴痘病毒反應(yīng)液反應(yīng)液B陰性質(zhì)控品、MPXV陽性質(zhì)控品，主要組成成分見表1。表1試劑盒主要組成成分組分名稱規(guī)格數(shù)量主要成分MPXVPCR特異性引物、探針、三羥甲

510μL/管1PCR檢測(cè)試劑反應(yīng)液A基氨基甲烷鹽酸緩沖液（大包裝，24人份MPXVPCR熱啟動(dòng)抗體酶、105μL/管1反應(yīng)液B酶、dNTPsUDG酶MPXVPCR特異性引物、探針、三羥甲

935μL/管1PCR檢測(cè)試劑反應(yīng)液A基氨基甲烷鹽酸緩沖液（大包裝，48人份MPXVPCR熱啟動(dòng)抗體酶、195μL/管1反應(yīng)液B酶、dNTPsUDG酶MPXV陰性MPXV內(nèi)標(biāo)片段（RNase質(zhì)控品450μL/管1質(zhì)控品P）的假病毒

（適用于大包裝，人MPXV目的片段的假病份盒；大包裝，人份/MPXV陽性450μL/管1毒、內(nèi)標(biāo)片段盒）質(zhì)控品（RNaseP）的假病毒備注：不同批號(hào)試劑盒的以上成分不可以互換使用。（二）產(chǎn)品預(yù)期用途本試劑盒用于體外定性檢測(cè)猴痘疑似病例、其他需要進(jìn)行猴痘病毒感染診斷或鑒別診斷者的皮膚病變樣本（皮疹表面和/或滲出物的拭子）、咽拭子樣本中猴痘病毒F3L基因。有關(guān)“疑似病例痘防控技術(shù)指南》等文件執(zhí)行。技術(shù)指南》等文件的相關(guān)要求。指南》等的要求，做好生物安全工作。本試劑盒檢測(cè)結(jié)果僅供臨床參考，不得作為臨床診斷的唯一標(biāo)準(zhǔn)。建議結(jié)合患者臨床表現(xiàn)和其他實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)對(duì)病情進(jìn)行綜合分析。（三）產(chǎn)品包裝規(guī)格大包裝，24人份盒；大包裝，48人份（四）產(chǎn)品檢驗(yàn)原理本試劑盒利用實(shí)時(shí)熒光技術(shù)，以猴痘病毒（）F3L基因編碼區(qū)的高度保守區(qū)為靶區(qū)域，設(shè)計(jì)特異性引物及熒光探針，進(jìn)行擴(kuò)增，用于樣本中猴痘病毒的定性檢P陰性結(jié)果的出現(xiàn)。本試劑盒同時(shí)添加了防污染組分（尿嘧啶糖基化酶，即酶），其作用機(jī)理是選擇性水解斷裂含有dU的雙鏈或者單鏈?zhǔn)A基的鏈，在堿性介質(zhì)以及高溫下會(huì)進(jìn)一步水解斷裂，從而被消除。二、臨床前研究概述（一）主要原材料1.主要原材料的選擇該產(chǎn)品在制備過程中主要原材料包括引物、探針、熱啟動(dòng)抗體酶、酶、酶、（、dCTP、dGTP、dUTP）、內(nèi)標(biāo)片段（RNaseP）的假病毒、目的RNase目的片段的假病毒由申請(qǐng)人自制，其他原材料均為外購方式獲得。申請(qǐng)人選擇有資質(zhì)的供應(yīng)商提供的原料，通過功能性試驗(yàn)，篩選出最佳原材料和供應(yīng)商，制定了各主要原材料質(zhì)量要求并經(jīng)檢驗(yàn)合格。2.企業(yè)參考品和質(zhì)控品設(shè)置情況考品和精密度參考品。參考品組成如下：陽性參考品5份：由5份不同濃度的病毒樣本組成；陰性參考品10叉反應(yīng)病原體樣本組成；檢出限參考品4份：由4份不同濃度的病毒樣本組成，其中包括試劑盒檢出限濃度水平；精密度參考品3份：由高、低濃度水平和陰性樣本組成。本產(chǎn)品設(shè)置了陰性質(zhì)控品為內(nèi)標(biāo)片段（RNaseP）的假病毒；陽性質(zhì)控品為目的片段P程中試劑盒和儀器的質(zhì)量控制。此外，檢測(cè)體系還含有內(nèi)源性內(nèi)標(biāo)檢測(cè)系統(tǒng)，通過檢測(cè)內(nèi)標(biāo)基因用于對(duì)標(biāo)本采集、核酸提取過程及擴(kuò)增過程的監(jiān)控，可減少假陰性結(jié)果的出現(xiàn)。（二）生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系研究申請(qǐng)人通過企業(yè)內(nèi)部試驗(yàn)確定最佳的生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系，包括組裝工序等，同時(shí)對(duì)試劑用量、反應(yīng)條件等進(jìn)行研究，還包括對(duì)樣本用量的研究。（三）分析性能評(píng)估本試劑盒分析性能評(píng)估內(nèi)容主要包括：核酸提取或純化性提交了有效運(yùn)行的質(zhì)量管理體系下生產(chǎn)的六批產(chǎn)品在適用機(jī)型上的性能評(píng)估資料。1.核酸提取或純化性能在核酸提取性能研究中，申請(qǐng)人比較評(píng)估了不同核酸提取試劑和產(chǎn)品配套使用的核酸提取試劑的提取效果，結(jié)果表明配套使用的核酸提取或純化試劑的核酸提取效果滿足本產(chǎn)品使用需求。2.準(zhǔn)確度重復(fù)性參考品和檢出限參考品，結(jié)果表明試劑盒檢測(cè)國(guó)家參考品結(jié)果均符合要求。性參考品、檢出限參考品和精密度參考品，結(jié)果表明試劑盒檢測(cè)企業(yè)參考品結(jié)果均符合要求。3.精密度臨界陽性和陰性樣本進(jìn)行天的檢測(cè)，對(duì)批內(nèi)、批間、日內(nèi)、合率為100%Ct值的變異系數(shù)均不大于5.0%儀器間檢測(cè)結(jié)果均為陰性，陰性符合率為100%。4.檢出限梯度的臨床陽性樣本，將具有95%陽性檢出率的最低濃度水平的檢出限濃度為200copies/mL。5.分析特異性1.0×107copies/mL的31I單純皰疹病毒型、人類皰疹病毒6型、人類皰疹病毒7人類皰疹病毒8型、麻疹病毒、腸道病毒71型、梅毒螺旋體、濃度為100ng/μL的人類基因組）進(jìn)行了研究。研究結(jié)果顯示上述特異性樣本均與試劑盒不產(chǎn)生交叉反應(yīng)。能含有的干擾物質(zhì)進(jìn)行評(píng)價(jià)，包括：外源性干擾物質(zhì)抗病毒藥100μg/mL100μg/mL咽部癥狀的含片、噴劑（桂林西瓜霜噴劑（100μg/mL）、西吡氯銨含片（100μg/mL））；過敏性癥狀緩解藥物（鹽酸組胺（100μg/mL100μg/mL100μg/mL抗生素（左氧氟沙星（100μg/mL）、阿奇霉素（100μg/mL）、100μg/mL藥物（撲熱息痛（100μg/mL）、對(duì)乙酰氨基酚（100μg/mL）、阿司匹林（100μg/mL））；全身性抗菌藥物（妥布霉素（100μg/mL（100μg/mL干擾物質(zhì)粘蛋白（200mg/dL）、白蛋白（2.26mmol/L）和血液（25%干擾。6.包容性（Clade）猴痘病毒臨床樣本以及分支（CladeI）假病毒進(jìn)行了包容性研究；同時(shí)經(jīng)生物信息學(xué)分析數(shù)據(jù)庫中的猴痘序列；結(jié)果顯示均不會(huì)影響本產(chǎn)品的檢測(cè)。（四）陽性判斷值或參考區(qū)間研究曲線法以及百分位數(shù)法對(duì)通道陽性判斷值為Ct值等于40，VIC通道陽性判斷值為Ct值等于36。申請(qǐng)人進(jìn)一步采用臨床樣本進(jìn)行了陽性判斷值驗(yàn)證確認(rèn)。（五）穩(wěn)定性研究申請(qǐng)人對(duì)本試劑盒的穩(wěn)定性研究包括實(shí)時(shí)穩(wěn)定性、使用穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性。-20±5℃溫度條件下，每到一個(gè)時(shí)間節(jié)點(diǎn)取出進(jìn)行外觀、陽性參劑盒在-20±5℃溫度條件下可穩(wěn)定保存12個(gè)月。定性進(jìn)行了研究，結(jié)果顯示產(chǎn)品的性能均滿足產(chǎn)品說明書聲稱的要求。三、臨床評(píng)價(jià)概述申請(qǐng)人在上海市公共衛(wèi)生臨床中心、廣東省疾病預(yù)防控制中心、四川省疾病預(yù)防控制中心和深圳市第三人民醫(yī)院共四家機(jī)構(gòu)完成了臨床試驗(yàn)。臨床試驗(yàn)共分為四部分：第一部分：采用試驗(yàn)用體外診斷試劑與Sanger測(cè)序進(jìn)行比較研究試驗(yàn)，驗(yàn)證本產(chǎn)品的臨床性能。共納入樣本本共包括例皮膚病變樣本和456例咽拭子樣本。試驗(yàn)結(jié)果顯示，申報(bào)產(chǎn)品與對(duì)比試劑對(duì)于臨床樣本檢測(cè)的陽性符合率100.00%（95%CI98.91%100.00%（95%CI：97.94%，99.62%）。針對(duì)皮膚病變樣本，陽性符合率100.00%（95%CI：98.22%，100.00%），陰性符合率99.59%（95%CI：97.71%99.93%100.00%（95%CI：97.23%，100.00%），陰性符合率98.75%（95%CI：96.84%，99.51%）。第二部分：采用試驗(yàn)體外診斷試劑與猴痘病毒培養(yǎng)鑒定進(jìn)70例培養(yǎng)鑒定陽性樣本、100.00%（95%CI94.80%100.00%72.34%95%CI64.44%，79.06%）。第三部分：采用試驗(yàn)用體外診斷試劑與臨床參考標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行例受試者，共包括例皮膚病變樣本和例咽拭子樣本。試驗(yàn)結(jié)果顯97.09%（95%CI：94.37%98.52%100.00%（95%CI98.97%100.00%99.07%（95%CI96.67%99.74%，特異度為（95%CI98.42%100.00%樣本，靈敏度為88.54%（95%CI82.61%92.62%為100.00%95%CI：98.73%，100.00%AGS8830-16和7500兩種機(jī)型進(jìn)行了一致性比對(duì)，共納入例樣本，包括皮膚病變樣本和咽拭100.00%95%CI：98.92%，100.00%），陰性符合率100.00%（95%CI：99.32%，100.00%申報(bào)產(chǎn)品與對(duì)比方法不一致的樣本，均結(jié)合臨床背景信息和其他檢測(cè)結(jié)果等進(jìn)行了綜合分析。綜上所述，申報(bào)產(chǎn)品的臨床試驗(yàn)資料符合技術(shù)審評(píng)要求。四、產(chǎn)品受益風(fēng)險(xiǎn)判定本試劑盒根據(jù)YY/T0316-2016醫(yī)療器械風(fēng)險(xiǎn)管理對(duì)本產(chǎn)品的安全風(fēng)險(xiǎn)分析方式，對(duì)本試劑盒進(jìn)行產(chǎn)品受益風(fēng)險(xiǎn)判定。（一）受益評(píng)估本試劑盒用于體外定性檢測(cè)猴痘疑似病例、其他需要進(jìn)行猴痘病毒感染診斷或鑒別診斷者的皮膚病變樣本（皮疹表面和/或滲出物的拭子）、咽拭子樣本中猴痘病毒F3L基因。本產(chǎn)品用于猴痘病毒感染的輔助診斷，本試劑盒檢測(cè)結(jié)果僅供臨床參考，不得作為臨床診斷的唯一標(biāo)準(zhǔn)。建議結(jié)合患者臨床表現(xiàn)和其他實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)對(duì)病情進(jìn)行綜合分析。（二）風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估則判斷每個(gè)危險(xiǎn)降低的風(fēng)險(xiǎn)、不經(jīng)過風(fēng)險(xiǎn)收益分析既判定為不可接受的風(fēng)險(xiǎn)采取控制措施，并對(duì)具體措施進(jìn)行實(shí)施驗(yàn)證，同時(shí)重新對(duì)采取措施后的風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行估計(jì)，確認(rèn)其風(fēng)險(xiǎn)水平是否可接受。但為保證用械安全，基于對(duì)主要剩余風(fēng)險(xiǎn)的規(guī)避，需要在說明書中提示以下信息：1.預(yù)期用途本試劑盒用于體外定性檢測(cè)猴痘疑似病例、其他需要進(jìn)行猴痘病毒感染診斷或鑒別診斷者的皮膚病變樣本（皮疹表面和/或滲出物的拭子）、咽拭子樣本中猴痘病毒F3L基因。有關(guān)“疑似病例痘防控技術(shù)指南》等文件執(zhí)行。技術(shù)指南》等文件的相關(guān)要求。指南》等的要求，做好生物安全工作。本試劑盒檢測(cè)結(jié)果僅供臨床參考，不得作為臨床診斷的唯一標(biāo)準(zhǔn)。建議結(jié)合患者臨床表現(xiàn)和其他實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)對(duì)病情進(jìn)行綜合分析。2.警示及注意事項(xiàng)產(chǎn)品說明書中介紹了該產(chǎn)品檢驗(yàn)方法的局限性及使用中的注意事項(xiàng)。綜合評(píng)價(jià)意見本申報(bào)項(xiàng)目為境內(nèi)第三類醫(yī)療器械產(chǎn)品注冊(cè)。申請(qǐng)人的注華人民共和國(guó)國(guó)務(wù)院令第號(hào)）、《體外診斷試劑注冊(cè)與備48器械法規(guī)與配套規(guī)章，經(jīng)對(duì)申請(qǐng)人提交的注冊(cè)申報(bào)資料進(jìn)行系平，建議準(zhǔn)予注冊(cè)。2024年8月18日附件：產(chǎn)品說明書猴痘病毒核酸檢測(cè)試劑盒（熒光法）說明書【產(chǎn)品名稱】通用名稱：猴痘病毒核酸檢測(cè)試劑盒（熒光PCR法）【包裝規(guī)格】大包裝，24人份/盒；

大包裝，48人份/盒。【預(yù)期用途】本試劑盒用于體外定性檢測(cè)猴痘疑似病例、其他需要進(jìn)行猴痘病毒感染診斷或鑒別診斷者的皮膚病變樣本（皮疹表面和/或滲出物拭子）、咽拭子樣本中猴痘病毒F3L基因。有關(guān)“疑似病例”等人群的定義參照《猴痘診療指南》及《猴痘防控技術(shù)指南》等文件執(zhí)行。本試劑盒在使用上應(yīng)當(dāng)遵守《猴痘診療指南》及《猴痘防控技術(shù)指南》等文件的相關(guān)要求。開展猴痘病毒核酸檢測(cè)，應(yīng)符合《猴痘病毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)指南》等的要求，做好生物安全工作。本試劑盒檢測(cè)結(jié)果僅供臨床參考，不得作為臨床診斷的唯一標(biāo)準(zhǔn)。建議結(jié)合患者臨床表現(xiàn)和其他實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)對(duì)病情進(jìn)行綜合分析?！緳z驗(yàn)原理】本試劑盒利用實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)，以猴痘病毒（MPXV）基因編碼區(qū)的高度保守區(qū)為靶區(qū)域，設(shè)計(jì)特

PCRDNARNase

P基因）檢測(cè)系統(tǒng)，用于對(duì)標(biāo)本采集、核酸提取過程及PCR擴(kuò)增過程的監(jiān)控，可減少假陰性結(jié)果的出現(xiàn)。本試

DNAUDGdU的雙

鏈或者單鏈DNADNA從而被消除?！局饕M成成分】組分名稱規(guī)格數(shù)量主要成分PCR檢測(cè)試劑（大包裝，24人份/盒）MPXVPCR反應(yīng)液510μL/管1特異性引物、探針、三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖液AMPXVPCR反應(yīng)液B105μL/管1熱啟動(dòng)抗體酶、酶、dNTPs、UDG酶PCR檢測(cè)試劑（大包裝，48人份/盒）MPXVPCR反應(yīng)液935μL/管1特異性引物、探針、三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖液AMPXVPCR反應(yīng)液B195μL/管1熱啟動(dòng)抗體酶、酶、dNTPs、UDG酶質(zhì)控品MPXV陰性質(zhì)控品450μL/管1MPXV內(nèi)標(biāo)片段（RNaseP（適用于大包裝，24人份/盒；大包裝，48人份/盒）MPXV目的片段的假病毒、MPXVRNaseMPXV陽性質(zhì)控品450μL/管1P）的假病毒備注：不同批號(hào)試劑盒的以上成分不可以互換使用。需自備的試劑：核酸提取或純化試劑，使用本公司生產(chǎn)的核酸提取或純化試劑（粵穗械備20170583號(hào)、

粵穗械備20170669號(hào)）或使用QIAGEN公司生產(chǎn)的DNeasyBlood&TissueKit（Cat.No.69504/69506）。

需自備的采樣液：推薦使用以下采樣液：（1）廣州達(dá)安基因股份有限公司的樣本保存液（粵穗械備20200802號(hào)、粵穗械備202012546mL/

管；（2）廣州達(dá)安基因股份有限公司的一次性使用采樣器（粵穗械備20201915號(hào)），3mL/管；（3）力因精

20190075號(hào)3mL/4）

江蘇康健醫(yī)療用品有限公司的一次性使用病毒采樣管（蘇泰械備20180169號(hào)3mL/5）深圳市梓健生

物科技有限公司的一次性使用病毒采樣管（粵深械備201900413mL/6）四川好培養(yǎng)生物工程有限

公司的一次性使用病毒采樣管（川蓉械備20200121號(hào)3mL/7）廣東牧瑪生命科技有限公司的一次性

使用病毒采樣管（粵莞械備202000243mL/8）山東享和醫(yī)療科技有限公司的一次性使用病毒采樣管

（魯菏械備20200227號(hào)3mL/9）江蘇默樂生物科技股份有限公司的一次性使用病毒采樣管（蘇泰械

備20200685號(hào)6mL/10201824002363.5mL/管；（11）賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司的RPMI1640培養(yǎng)基（貨號(hào)：11875093），500mL/瓶；

（12）生理鹽水，即0.9%的氯化鈉水溶液，500mL/瓶。質(zhì)控品說明：MPXV陽性質(zhì)控品為MPXV目的片段的假病毒、MPXVRNasePMPXV

MPXVRNaseP在的傳染物質(zhì)，操作和處理均需符合相關(guān)法規(guī)要求。【儲(chǔ)存條件及有效期】試劑盒保存于12個(gè)月。試劑盒應(yīng)避免反復(fù)凍融，反復(fù)凍融次數(shù)不超過7次。試劑盒生產(chǎn)日期和有效期至見產(chǎn)品標(biāo)簽。【適用儀器】ABI7500、AGS8830-16?！緲颖疽蟆?.適用樣本類型：皮膚病變樣本（皮疹表面和/或滲出物拭子）、咽拭子。2.樣本采集：2.1皮疹表面和/或滲出物拭子采集：采樣時(shí)適當(dāng)用力下壓拭子，在皮損表面來回擦拭至少2-3次，然后以拭子另一面再重復(fù)擦拭2-3次。如果在擦拭過程中痘皰破裂，要確保采集到痘皰液。采樣后將拭子放置于無菌采樣管中（可含病毒采樣液或不含液體），折斷拭子頭，去除拭子尾部，蓋上管蓋，以消毒紙巾擦拭消毒采樣管，以封口膜密封管蓋后將采樣管保存或送檢。2.2咽拭子采集：用拭子在被采集者兩側(cè)扁桃體稍微用力來回擦拭至少3次，然后再在咽后壁上下擦拭至少3次，將拭子頭浸入含病毒保存液的管中或置于不含液體（干拭子）的無菌管中，尾部棄去，旋緊管蓋。3.樣本保存-20±5℃保存期為6-70復(fù)凍融，凍融次數(shù)不可超過7次?！緳z驗(yàn)方法】1.樣本處理和核酸提?。颖咎幚韰^(qū)）使用本公司生產(chǎn)的核酸提取或純化試劑（粵穗械備20170583號(hào)）或使用QIAGEN公司生產(chǎn)的DNeasy

Blood&TissueKit（Cat.No.69504/69506）取200μL樣本進(jìn)行核酸提取，洗脫體積100μL；或使用本公司生產(chǎn)

的核酸提取或純化試劑（粵穗械備20170669號(hào)）取200μL樣本進(jìn)行核酸提取，洗脫體積50μL。

本試劑盒中的MPXV陰性質(zhì)控品、MPXV2.PCR試劑準(zhǔn)備（試劑準(zhǔn)備區(qū)）從試劑盒中取出MPXVPCR反應(yīng)液A、MPXVPCRB，室溫融化后振蕩混勻，瞬時(shí)離心數(shù)秒后使用。取N個(gè)（N＝待測(cè)樣本個(gè)數(shù)+MPXV陰性質(zhì)控品+MPXV陽性質(zhì)控品）PCR反應(yīng)管

MPXV單人份擴(kuò)增體系配制如下表：MPXVPCR反應(yīng)液AMPXVPCR反應(yīng)液B擴(kuò)增體系17μL3μL20μL20μL擴(kuò)增體系分裝到PCR管中。3.加樣（樣本制備區(qū)）往上述對(duì)應(yīng)的PCRMPXVMPXV，

蓋緊管蓋。瞬時(shí)離心15秒后轉(zhuǎn)移至擴(kuò)增檢測(cè)區(qū)。4.PCR擴(kuò)增（擴(kuò)增檢測(cè)區(qū)）4.1將反應(yīng)管放入儀器樣品槽內(nèi)。4.2ABI7500儀器設(shè)置4.2.1Reporter1Quencher1NONE2VICQuencher2：NONE；PassiveReference：NONE。4.2.2打開instrument窗口，設(shè)置循環(huán)條件如下：StageReps（℃）RunningDataCollection115000：02：219500：05：3459500：00：6000：00：√設(shè)置完成后，保存文件，運(yùn)行程序。4.3AGS8830-16儀器設(shè)置4.3.1打開AGS8830-16儀器。4.3.2點(diǎn)擊自定義，設(shè)置程序。4.3.3程序參數(shù)：在程序參數(shù)頁面。擴(kuò)增參數(shù)如下：程序段循環(huán)數(shù)目標(biāo)溫度（℃）恒溫時(shí)間讀取熒光115000：02：219500：05：3459500：00：6000：00：√4.3.4染料參數(shù)：點(diǎn)擊染料參數(shù)頁面，在選擇當(dāng)前程序染料設(shè)置（通道1，通道2VIC），然后選定樣品孔，并在樣本類型部分選擇：陰性質(zhì)控品、陽性質(zhì)控品、未知樣品等。4.3.5啟動(dòng)擴(kuò)增：確認(rèn)PCR反應(yīng)管在主機(jī)內(nèi)放置妥當(dāng)后，點(diǎn)擊開始按鈕開始PCR循環(huán)。4.3.6監(jiān)控進(jìn)程：切換程序運(yùn)行頁面，可以實(shí)時(shí)顯示PCR曲線隨著循環(huán)增加而逐步增長(zhǎng)的實(shí)際情況。如果標(biāo)記物

選、VIC，只顯示對(duì)應(yīng)探針的變化情況。4.3.7保存結(jié)果：程序結(jié)束后，自動(dòng)保存到文件路徑。5.結(jié)果分析（請(qǐng)參照各儀器使用說明書進(jìn)行設(shè)置，以7500儀器為例）

Baseline的StartEnd值以及ThresholdStart3～15End值可設(shè)在520Log圖譜窗口設(shè)置Threshold的閾值線位于擴(kuò)增曲線指數(shù)期），點(diǎn)擊Analysis自動(dòng)獲得分析結(jié)果，在“Report”窗口讀取檢測(cè)結(jié)果。6.質(zhì)量控制MPXV陰性質(zhì)控品：檢測(cè)通道無擴(kuò)增曲線或Ct值＞40VIC檢測(cè)通道有擴(kuò)增曲線，且Ct值≤35；

MPXV陽性質(zhì)控品：檢測(cè)通道有擴(kuò)增曲線，且Ct值≤32，VIC檢測(cè)通道有擴(kuò)增曲線，且Ct值≤35；

以上要求需在同一次實(shí)驗(yàn)中同時(shí)滿足，否則，本次實(shí)驗(yàn)無效，需重新進(jìn)行?！娟栃耘袛嘀怠扛鶕?jù)臨床樣本檢測(cè)結(jié)果，最終確定本試劑盒的目標(biāo)基因陽性判斷值為Ct值=40；內(nèi)標(biāo)陽性判斷值為Ct值=

36。【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】1.每次實(shí)驗(yàn)均需檢測(cè)MPXVMPXV陽性質(zhì)控品，質(zhì)控品結(jié)果滿足質(zhì)量控制要求時(shí)方可進(jìn)行檢測(cè)結(jié)果的判定。2.在質(zhì)控品正常的情況下，結(jié)果判讀如下：陰性結(jié)果判定：若檢測(cè)樣品的檢測(cè)通道無擴(kuò)增曲線，且VIC通道有擴(kuò)增曲線，≤36,可判樣品為

MPXV陰性；通道VIC通道結(jié)果判定陰性結(jié)果判定Ct值＞40Ct值Ct值≤36值陰性陽性結(jié)果判定：若檢測(cè)樣品的檢測(cè)通道有擴(kuò)增曲線且Ct值≤40VIC檢測(cè)通道有或無擴(kuò)增曲線，可判樣品為MPXV陽性。通道VIC通道結(jié)果判定陽性結(jié)果判定Ct值≤40有或無擴(kuò)增曲線陽性3.檢測(cè)通道為陽性時(shí)，由于體系的競(jìng)爭(zhēng)關(guān)系，VIC通道（內(nèi)標(biāo)通道）結(jié)果可能為陰性；4.內(nèi)標(biāo)結(jié)果為陰性時(shí)，若該檢測(cè)管的檢測(cè)通道也為陰性，可能是因?yàn)轶w系受抑制或操作失誤，試驗(yàn)無效，

需對(duì)該樣品進(jìn)行復(fù)檢；5.報(bào)告建議采用以下格式：陰性結(jié)果報(bào)告格式為：樣本未檢測(cè)到猴痘病毒，或樣本濃度低于本試劑盒的靈敏度；

陽性結(jié)果報(bào)告格式為：樣本檢測(cè)到猴痘病毒。【檢測(cè)方法的局限性】1.樣本檢測(cè)結(jié)果與樣本收集、處理、運(yùn)送及保存質(zhì)量有關(guān)，不合理的樣本采集、轉(zhuǎn)運(yùn)、儲(chǔ)存及處理以及不當(dāng)?shù)膶?shí)驗(yàn)操作和實(shí)驗(yàn)環(huán)境均有可能導(dǎo)致錯(cuò)誤的檢測(cè)結(jié)果。2.如果樣本在運(yùn)輸、處理過程中發(fā)生交叉污染，則可能導(dǎo)致假陽性結(jié)果。3.實(shí)驗(yàn)室環(huán)境有PCR產(chǎn)品等氣溶膠污染，則可能導(dǎo)致假陽性結(jié)果。4.實(shí)驗(yàn)過程中使用耗材、設(shè)備等受污染，則可能導(dǎo)致假陽性結(jié)果。5.不合理的樣本采集、轉(zhuǎn)運(yùn)、儲(chǔ)存及處理、樣本中病原體含量過低均有可能導(dǎo)致假陰性結(jié)果。6.該病原體待測(cè)靶序列的變異或其他原因?qū)е碌男蛄懈淖兛赡軙?huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果。7.未經(jīng)驗(yàn)證的其他干擾或PCR抑制因子等可能會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果。8.本試劑盒的檢測(cè)結(jié)果僅供臨床參考，對(duì)患者的臨床診治應(yīng)結(jié)合其癥狀/體征、病史、其它實(shí)驗(yàn)室檢查及治療反應(yīng)等情況綜合考慮。【產(chǎn)品性能指標(biāo)】1.本試劑盒的最低檢出限為200copies/mL，檢測(cè)試劑盒靶區(qū)范圍內(nèi)的國(guó)家檢出限參考品，濃度不低于聲稱檢出限水平的稀釋度檢測(cè)結(jié)果為陽性。2.100P1~P3P1檢測(cè)結(jié)果為陽性，

P2P3檢測(cè)結(jié)果為陰性；企業(yè)陰性參考品符合率為100％；檢測(cè)國(guó)家陰性參考品（N1~N10），N1~N10結(jié)果均

為陰性。3.企業(yè)精密度參考品通道Ct值的變異系數(shù)均不高于R3檢測(cè)結(jié)果為

陰性；檢測(cè)試劑盒靶區(qū)范圍內(nèi)的國(guó)家重復(fù)性參考品，10次檢測(cè)結(jié)果均為陽性，且通道Ct值的變異系數(shù)

（CV，）不高于5.0%。4.1.0×107-帶

I67皰疹病毒8型、麻疹病毒、腸道病毒71型、梅毒螺旋體、登革病毒、金黃色葡萄球菌、化膿性鏈球菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌、丙酸桿菌、類白喉?xiàng)U菌、人乳頭瘤病毒、糞腸球菌、棒狀桿菌、大腸桿菌、生殖支原體、沙眼衣原體以及高濃度人類基因組（100ng/μL）無交叉反應(yīng)。5.100μg/mL100μg/mL緩解咽部癥狀的含片、噴劑（桂林西瓜霜噴劑（100μg/mL）、西吡氯銨含片（100μg/mL））、過敏性癥狀緩解

100μg/mL100μg/mL100μg/mL100μg/mL100μg/mL100μg/mL100μg/mL對(duì)乙酰氨基酚（100μg/mL100μg））、全身性抗菌藥物（妥布霉素（100μg/mL（100μg/mL）對(duì)試劑盒的檢測(cè)結(jié)果無干擾。6.200mg/dL蛋2.26mmol/L2