原核表達(dá)PEDV經(jīng)典株和流行株S基因N端片段的抗原性比較及單克隆抗體制備的任務(wù)書

原核表達(dá)PEDV經(jīng)典株和流行株S基因N端片段的抗原性比較及單克隆抗體制備的任務(wù)書任務(wù)書任務(wù)名稱：原核表達(dá)PEDV經(jīng)典株和流行株S基因N端片段的抗原性比較及單克隆抗體制備任務(wù)目的：1.比較PEDV經(jīng)典株和流行株S基因N端片段的抗原性差異，為進(jìn)一步研究提供基礎(chǔ)。2.制備針對PEDV經(jīng)典株和流行株S基因N端片段的單克隆抗體，為研究PEDV的檢測方法、診斷技術(shù)及疫苗研發(fā)提供技術(shù)支持。3.提高實(shí)驗(yàn)人員的技術(shù)水平，加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室的研究能力。研究內(nèi)容：1.基于S基因序列的比對，設(shè)計(jì)PEDV經(jīng)典株和流行株S基因N端片段的引物，使用PCR擴(kuò)增并克隆到原核表達(dá)載體中。2.對原核表達(dá)的PEDV經(jīng)典株和流行株S基因N端片段進(jìn)行純化及驗(yàn)證，包括SDS電泳、Westernblot及ELISA等方法。3.選取合適的小鼠作為免疫動物，免疫原核表達(dá)的PEDV經(jīng)典株和流行株S基因N端片段，制備多克隆抗體。4.使用細(xì)胞融合技術(shù)，制備PEDV經(jīng)典株和流行株S基因N端片段的單克隆抗體。5.對制備的多克隆抗體及單克隆抗體進(jìn)行特異性和敏感性的檢測，評估其在PEDV檢測中的應(yīng)用價值。6.最后，撰寫實(shí)驗(yàn)報告并總結(jié)研究成果。參考文獻(xiàn)：1.萬芬.豬進(jìn)口性腹瀉病毒S蛋白N端片段的原核表達(dá)和免疫抗原性研究[D].沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué),2014.2.Zhang,Q.etal.EvaluationoftransmissiblegastroenteritisvirusMillerstrainMproteinasadiagnostictoolusingamonoclonalantibody-basedindirectELISAandimmunochromatographicstrips.Journalofvirologicalmethods,2014,205:43-50.3.Kim,YK.etal.Protectiveimmuneresponsesofasinglemabrecognizingepizootichemorrhagicdiseasevirusglycoproteininmiceandwhite-taileddeer.Researchinveterinaryscience,2014,96(1):91-97.預(yù)期成果：1.成功克隆PEDV經(jīng)典株和流行株S基因N端片段，并進(jìn)行純化及鑒定。2.成功制備出對PEDV經(jīng)典株和流行株S基因N端片段的多克隆抗體和單克隆抗體。3.多克隆抗體和單克隆抗體特異性和敏感性良好，可應(yīng)用于PEDV的檢測及疫苗研發(fā)。4.通過本研究，提高實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)水平和研究能力，為進(jìn)一步研究提供基礎(chǔ)。時間安排：1.設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案：2天。2.克隆S基因N端片段及其表達(dá)：7天。3.抗原純化及鑒定：2天。4.動物免疫及制備多克隆抗體：60天。5.單克隆抗體制備：30天。6.對多克隆抗體和單克隆抗體進(jìn)行鑒定：10天。7.撰寫實(shí)驗(yàn)報告：5天。費(fèi)用預(yù)算：1.實(shí)驗(yàn)材料費(fèi)：20000