吳醫(yī)銀翹防疫方對(duì)慢性脂多糖誘導(dǎo)肺損傷小鼠肺黏膜免疫及其相關(guān)因子的影響-國(guó)際中醫(yī)藥研究

【摘要】目的研究吳醫(yī)銀翹防疫方對(duì)脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的慢性肺損傷小鼠肺黏膜免疫及其相關(guān)細(xì)胞II、ACE和ACE2蛋白分布與強(qiáng)度變化。結(jié)果與對(duì)照和充血水腫，以及伴隨大量的炎性浸潤(rùn)情況等，且病理組織學(xué)損傷評(píng)分明顯升高（P＜0.05模型組小鼠），吳醫(yī)銀翹防疫方以劑量依賴(lài)性減輕了肺損傷小鼠肺組織破壞程度（P＜0.05），各劑量組明顯抑制肺損傷小）；【關(guān)鍵詞】吳醫(yī)銀翹防疫方；肺黏膜損傷；呼吸道黏膜免疫；小GSWS2023015）；2024年蘇州市吳門(mén)醫(yī)派驗(yàn)方評(píng)價(jià)與轉(zhuǎn)化重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室項(xiàng)目（編EffectsofWuyiYinqiaoFangyiPrescription1SuzhouHospitalofChineseMedicineAffiliatedtoNanji2SuzhouWumenMedicalSchoolKeyLaboratoryofPrescriptionEvaluationand【Abstract】ObjectiveTostudytheeffectsofWuyiyinqiaoJiangu吳醫(yī)銀翹防疫方對(duì)慢性脂多糖誘導(dǎo)肺損傷小鼠肺黏膜免andrelatedcytokinesinmicewithLPSinducewasestablishedbyrepeatedinfusionofLPS(crudedrug/kg)andhigh(20.0gcrudedrug/kg)dosegroups.Aftersuccessfanesthetizedandkilledafter3weeksafterretissuewereextracted.HEstainingwasusedtoobservethepathologicalchangesoflungtissue.ThelevelsofIL-4,andthedistributionandintensityofAngII,ACEandACE2proteinsinlungmucosaweandimmunohistochemistry,respectively.Resseptumwidening,hyperemiaandedema,andalargenumberofinflammatoryinfiltrateswereobservegroup,andthehistopathologicproteinsinlungmucosaltissuesofmiceinmodelgroupincontrolgroup(P<0.05).ThemeanopticaldistributioninlungmucosaltissueofmiceinmodelgroupwassignificantlyhigherproteinandtheincreasedlevelsofIL-6andIFN-γinlungmucosaltiseachdosegroup(P<0.05).TheelevatedlevelsofIL-4,TGF-βandTNF-αinlthatWuyiyinqiaoJianguoprescriptioninhibitedtheenhancementofAngII,ACEdistributionandtheincreaseofaverageopticaldensityintensityinlungmucosaltissuesofmicewithlunginjuryadose-dependentway.Codosegroups(P<0.05).ConclusionByregulatingtheexpressionofIgAandpIgR,aswellas6,TGF-β,IFN-γandTNF-α,WuyiYinjujianprescriptioncactivityinlungmucosa.Inthisway,thelungmucosalimmunefunctioncanberegulalungmucosalinjuryinducedbyLPS.【Keywords】WuyiYinqiaoFangyipresc呼吸道感染性疾病是威脅人類(lèi)健康的多發(fā)病和常見(jiàn)病。呼吸道黏膜免疫功能是機(jī)體防御外來(lái)有害物質(zhì)如病毒、細(xì)菌等入侵的第一道防線，而肺黏膜免疫機(jī)能是保護(hù)呼吸系統(tǒng)免受病原體、毒素和機(jī)械損傷的侵害最重要的防御屏障。疫苗和抗生素、激素等西藥即時(shí)能夠體現(xiàn)一定的效用，但是長(zhǎng)遠(yuǎn)來(lái)講很難避免病毒變異、耐藥和毒副作用[1]帶來(lái)的“問(wèn) 題”。基于傳統(tǒng)中醫(yī)藥防治呼吸道感染性疾病長(zhǎng)期功能是中醫(yī)理論“正氣”的主要表現(xiàn)和抗感染的主體，而中醫(yī)藥治療眾多感染性疾病的特色和優(yōu)勢(shì)即是維護(hù)機(jī)體之正氣，提高機(jī)體的免疫機(jī)能，主要通過(guò)調(diào)節(jié)黏膜局部紊亂的免疫功能狀態(tài)起到增強(qiáng)整體免疫機(jī)能和修復(fù)能力，對(duì)于抗呼吸道感染性疾病起到積吳醫(yī)銀翹防疫方為蘇州市中醫(yī)醫(yī)院吳門(mén)醫(yī)派專(zhuān)家組充分運(yùn)用吳門(mén)醫(yī)派溫病學(xué)說(shuō)理論和臨證經(jīng)驗(yàn)，基于吳門(mén)醫(yī)派驗(yàn)方和經(jīng)方（銀翹散、玉屏風(fēng)散和藿究已經(jīng)表明吳醫(yī)銀翹防疫方輔助治療病毒性上呼吸其機(jī)制可能主要與調(diào)節(jié)炎癥因子和干預(yù)血管緊張素吳醫(yī)銀翹防疫方對(duì)慢性脂多糖誘導(dǎo)肺損傷小鼠肺黏膜免細(xì)胞外壁中的一種成分，它是誘發(fā)炎癥最主要的病原分子之一，被廣泛應(yīng)用于建立急性和慢性炎癥的白受體（pIgR）蛋白表達(dá)異常降低[8]?；谄诨A(chǔ)和新近研究報(bào)道，本研究筆者進(jìn)一步從改善呼吸道黏膜免疫功能低下的角度，以從鼻腔向呼吸鼠動(dòng)物模型為研究對(duì)象，探究了吳醫(yī)銀翹防疫方對(duì)病的潛在效能而深入闡明黏膜免疫調(diào)節(jié)機(jī)制提供新的思路，以期為吳醫(yī)銀翹防疫方的綜合利用及新的上海一恒科學(xué)儀器有限公司。恒溫烘箱：上海恒一科學(xué)儀器有限公司；電泳儀（miniprote司。成像系統(tǒng)（5200）：Tanon公司。石蠟切片機(jī)（SQ2125）、攤片機(jī)（PPTHK-21B徠克公司。）：鼠飼養(yǎng)和實(shí)驗(yàn)于領(lǐng)致生物科技（昆山）有限公司標(biāo)中中藥飲片由蘇州市中醫(yī)醫(yī)院藥學(xué)部鑒定和提供，并由蘇州市吳門(mén)醫(yī)派驗(yàn)方評(píng)價(jià)與轉(zhuǎn)化重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室根購(gòu)自北京百奧萊博科技有限公司，貨號(hào)：QN0166。（HE）和廣譜二抗：鴻泉生物科技有限公司產(chǎn)品。2.1LPS誘導(dǎo)的肺損傷模型小鼠模型建立及分40只ICR雌性小鼠，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后隨機(jī)分參考文獻(xiàn)[9]并適當(dāng)改良，采用從鼻腔向呼吸道內(nèi)反），），天和57天分別從鼻腔向小鼠呼吸道內(nèi)滴入生理鹽），術(shù)檢測(cè)目標(biāo)組織中IgA蛋白表達(dá)情況，并采用ELISA法對(duì)應(yīng)檢測(cè)各組肺黏膜組織中IgA相關(guān)細(xì)胞2.3pIgR的蛋白表達(dá)及其相關(guān)細(xì)吳醫(yī)銀翹防疫方對(duì)慢性脂多糖誘導(dǎo)肺損傷小鼠肺黏膜免術(shù)檢測(cè)目標(biāo)組織中pIgR蛋白表達(dá)情況，并采用取各組經(jīng)甲醛固定的肺臟組織和肺黏膜組織，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)程度等）。根據(jù)病理?yè)p傷嚴(yán)重程度進(jìn)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用GraphPadprism軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)-實(shí)驗(yàn)小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)期間，飲食正常、活動(dòng)頻及造模進(jìn)程中，相對(duì)于空白組，其它組實(shí)驗(yàn)小鼠逐扎堆聚集以及呼吸喘促和身體顫抖的現(xiàn)象。經(jīng)過(guò)不組和模型組以生理鹽水灌胃）后，模型組小鼠身體顫抖狀況略有減輕，其他情況均未有改善，吳醫(yī)銀翹防疫方以劑量依賴(lài)性明顯改善了以上的一般情況。主要的表現(xiàn)為呼吸喘促、身體顫抖和精神萎靡狀況有所減輕，但是仍然偶爾有食欲欠佳和扎堆聚集的因子IL-4、IL-6和TGF-β水平均明顯升高（P均<3.3吳醫(yī)銀翹防疫方對(duì)肺黏膜pIgR的蛋白表鼠肺黏膜組織中pIgR蛋白表達(dá)明顯降低且相關(guān)細(xì)以不同劑量吳醫(yī)銀翹防疫方以灌胃干預(yù)肺損傷小鼠3周后，發(fā)現(xiàn)吳醫(yī)銀翹防疫方各劑量組明顯抑制肺3.4吳醫(yī)銀翹防疫方對(duì)對(duì)肺損傷小鼠肺組織病理學(xué)改變以及肺黏膜組織AngII、ACE和ACE2分鼠肺組織結(jié)構(gòu)發(fā)生一定程度的破壞，主要變現(xiàn)為肺泡萎縮、間隔變寬和充血水腫，以及伴隨大量的炎以不同劑量吳醫(yī)銀翹防疫方以灌胃干預(yù)肺損傷輕了肺損傷小鼠肺組織破壞程度。主要體現(xiàn)為肺泡間隔厚度縮小、充血水腫緩解和炎性浸潤(rùn)減少，且吳醫(yī)銀翹防疫方的高劑量能明顯抑制肺損傷小鼠肺以不同劑量吳醫(yī)銀翹防疫方以灌胃干預(yù)肺損傷蛋白染色分布增強(qiáng)及其平均光密度強(qiáng)度升高。與模型組比較，吳醫(yī)銀翹防疫方的中、高劑量能明顯抑吳醫(yī)銀翹防疫方對(duì)慢性脂多糖誘導(dǎo)肺損傷小鼠肺黏膜免注：A為空白組；B為L(zhǎng)PS-肺損傷小鼠模型組；C-E為L(zhǎng)PS-肺損傷小鼠+吳醫(yī)銀翹防疫方低、中、高（5.0g生藥/kg、10.0g生藥/kg、高20.0g生藥/kg）劑量組。與空白組比較，*P<0.05；與LPS-肺損傷小鼠模型組比較，#P＜0.05。以下結(jié)果標(biāo)注均同此。-圖2吳醫(yī)銀翹防疫方對(duì)肺損傷小鼠肺黏膜組織中pIgR蛋白表達(dá)及其相關(guān)細(xì)胞因子I吳醫(yī)銀翹防疫方對(duì)慢性脂多糖誘導(dǎo)肺損傷小鼠肺黏膜免-傳統(tǒng)中醫(yī)將呼吸道感染性疾病歸為“疫病”的討吳門(mén)醫(yī)派在疫病治療方面有豐富的經(jīng)驗(yàn)和許多經(jīng)典著作，吳門(mén)醫(yī)派歷代醫(yī)家結(jié)合流行病學(xué)和發(fā)熱病學(xué)結(jié)了診斷治療體系。在致病機(jī)理上：傳染病并非秋辨白疹子等方法，區(qū)別普通發(fā)熱與疫病，重視預(yù)防肺”，出現(xiàn)癥狀的肯定是呼吸系統(tǒng)。在臨床診治上：吳醫(yī)銀翹防疫方對(duì)慢性脂多糖誘導(dǎo)肺損傷小鼠肺黏膜免吳醫(yī)銀翹防疫方來(lái)源有三：吳門(mén)醫(yī)派溫病第一表、清熱解毒的作用，用于溫病初期邪在肺衛(wèi)之衛(wèi)分證。其可增加流感病毒感染小鼠支氣管肺泡灌洗而達(dá)到提高上呼吸道黏膜免疫功能的作用，方中的黃酮類(lèi)物質(zhì)可以抑制流感病毒唾液酸酶的活性、抑制膜融合的作用，具有很好的抗病毒作用[14]。二是），其可通過(guò)修復(fù)腸道機(jī)械屏障和調(diào)節(jié)腸道免疫屏障來(lái)改善腸道環(huán)境[15]。原此，吳醫(yī)銀翹防疫方主要由金吳門(mén)銀翹防疫方結(jié)合西藥病毒性上呼吸道感染臨床研究表明，在癥狀緩解情況（體溫開(kāi)始降低和翹防疫方參與調(diào)控呼吸道黏膜免疫關(guān)鍵靶點(diǎn)分子包（MPO）等；分子對(duì)接實(shí)驗(yàn)表明，關(guān)鍵靶點(diǎn)與吳門(mén)是人類(lèi)血管緊張素轉(zhuǎn)換酶同源物，是一種鋅金屬蛋是病毒的膜上結(jié)合受體之一，與病毒和宿主細(xì)胞的融合、入侵過(guò)程有關(guān)[16]。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究報(bào)道證實(shí)小小鼠的分化期口腔頰黏膜上皮細(xì)胞中表達(dá)ACE2，基因，部分基因呈現(xiàn)特異性表達(dá)[17]。前期筆者也發(fā)現(xiàn)吳門(mén)銀翹防疫方可以抑制高寒冷致上呼吸道黏膜損傷模型小鼠為研究對(duì)象，從改善肺黏膜免疫功能低下的角度探究吳醫(yī)銀翹防疫方對(duì)呼吸道黏膜中CoV-2Spike-ACE2相互作用的潛在效能而深入闡明黏膜免疫調(diào)節(jié)機(jī)制提供新的思路。結(jié)果表明，吳醫(yī)銀翹防疫方通過(guò)調(diào)控肺組織損傷黏膜免疫屏障低其增強(qiáng)肺黏膜免疫功能發(fā)揮潛在的抗呼吸道感染性[1]李柔,凌飛翔,馬禮兵.疫苗在呼吸道感染性疾病的應(yīng)用及研究現(xiàn)狀[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志,2023,39(0[2]郭媛媛,王飄,李江,等.中藥對(duì)上呼吸道感染的治療作用及機(jī)制研究進(jìn)展[J].中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)刊,2023,25(05):4[3]蔣文杰,陸珍琦,陳江,等.吳門(mén)醫(yī)派疫病證治學(xué)術(shù)思想探析[J].中華中醫(yī)藥雜志,2021,36(08):4[4]袁杰,周運(yùn)海,梁國(guó)強(qiáng).蘇州市吳門(mén)醫(yī)派治療新型冠狀病[5]皋青青,梁國(guó)強(qiáng),黃燕鳳,等.吳門(mén)銀翹方輔助治療病毒性上呼吸道感染的臨床研究[J].家庭藥師,2023,16(2):7-[6]HengXU,FangyuanLI,GuoqiangLIAPharmacology,MolecularDockingandExperimentalExploringMolecularMechanismsofYinqiaoAnti-Epid