毛發(fā)中依托咪酯、依托咪酯酸的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法-編制說明

一、項(xiàng)目來源根據(jù)《廣西標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)關(guān)于下達(dá)2023年第三十五批團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)制修定項(xiàng)目計(jì)劃的通知》（桂標(biāo)協(xié)〔2023〕128號(hào)）文件精神，由廣西壯族自治區(qū)禁毒委員會(huì)辦公室提出，由廣西警察學(xué)院、中國藥科大學(xué)、廣西金桂司法鑒定中心、廣東金域司法鑒定所、南寧市公安局禁毒支隊(duì)毒品檢驗(yàn)技術(shù)鑒定科、梧州市公安局物證鑒定所、賀州市公安局物證鑒定所、廣西公安廳禁毒情報(bào)技術(shù)中心、廣州市公安局禁毒支隊(duì)五大隊(duì)、南寧市公安局物證鑒定所、柳州市公安局物證鑒定所、珀金埃爾默企業(yè)管理（上海）有限公司、未名環(huán)境分子診斷（廣東）有限公司、廣西匡品電子科技有限公司等單位共同起草的團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)《毛發(fā)中依托咪酯、依托咪酯酸的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》（項(xiàng)目編號(hào)：2023-3501）獲批立項(xiàng)。二、項(xiàng)目背景及目的意義2020年6月，習(xí)近平對(duì)禁毒工作作出重要指示強(qiáng)調(diào)，習(xí)近平強(qiáng)調(diào)，當(dāng)前，境內(nèi)和境外毒品問題、傳統(tǒng)和新型毒品危害、網(wǎng)上和網(wǎng)下毒品犯罪相互交織，對(duì)群眾生命安全和身體健康、對(duì)社會(huì)穩(wěn)定帶來嚴(yán)重危害，必須一如既往、堅(jiān)決徹底把禁毒工作深入進(jìn)行下去。各級(jí)黨委和政府要堅(jiān)持以人民為中心的發(fā)展思想，以對(duì)國家、對(duì)民族、對(duì)人民、對(duì)歷史高度負(fù)責(zé)的態(tài)度，堅(jiān)持厲行禁毒方針，打好禁毒人民戰(zhàn)爭，完善毒品治理體系，深化禁毒國際合作，推動(dòng)禁毒工作不斷取得新成效，為維護(hù)社會(huì)和諧穩(wěn)定、保障人民安居樂業(yè)作出新的更大貢獻(xiàn)?！?021年中國毒情形勢(shì)報(bào)告》中指出，濫用品種更加多樣。受毒品供應(yīng)和流通數(shù)量“雙降”影響，國內(nèi)主流毒品價(jià)格居高且普遍摻假，毒品買不到、吸不起、純度低成為普遍現(xiàn)象，部分吸毒人員減量降頻，或?qū)で舐榫幤泛头橇泄芪镔|(zhì)進(jìn)行替代，或交叉濫用非慣用毒品以滿足毒癮。氟胺酮和合成大麻素年內(nèi)列管后，查處濫用人數(shù)呈先升后降態(tài)勢(shì)。部分地區(qū)還發(fā)現(xiàn)吸食含依托咪酯、美托咪酯的“煙粉”和“煙油”、含天然阿片類物質(zhì)的“卡痛葉”等替代物質(zhì)。依托咪酯屬于含麻醉作用的新型神經(jīng)刺激藥物，其危害性不容小覷。依托咪酯之所以成為毒品替代品,是由于其本身的麻醉作用，以及毒品難獲得的現(xiàn)實(shí)情況。而由此事帶來的最大的風(fēng)險(xiǎn)是本身非吸毒人員，在依托咪酯不是毒品的表象下忽視了其中的危害,在自主或被人慫恿的情況下為了貪圖一時(shí)的“上頭”,而去吸食。不法分子將依托咪酯用作毒品替代品進(jìn)行銷售，一些吸毒人員濫用依托咪酯影響社會(huì)秩序和身體健康。一些人濫用毒品替代物質(zhì)后，出現(xiàn)狂躁癥狀甚至誘發(fā)精神障礙或心血管疾病，存在引發(fā)肇事肇禍風(fēng)險(xiǎn)。一些不法分子利用具有鎮(zhèn)靜、催眠、麻醉作用的精神藥品制成“迷奸水”“聽話水”，實(shí)施強(qiáng)奸、猥褻等犯罪活動(dòng)，對(duì)社會(huì)的危害性極大。與傳統(tǒng)的生物檢材如尿液，血液等比較，毛發(fā)有其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。發(fā)收集方便而且?guī)缀鯚o侵犯性，容易監(jiān)督防止作假；檢測時(shí)限可長至幾周，幾個(gè)月甚至幾年；毛發(fā)檢材非常穩(wěn)定，易于保存。毛發(fā)中毒(藥)物的分析已廣泛地應(yīng)用于法庭科學(xué)領(lǐng)域，如判別是否長期濫用，區(qū)分制毒者和吸毒者，尋找死亡原因，興奮劑控制等。通過對(duì)毛發(fā)中依托咪酯、依托咪酯酸的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測技術(shù)的創(chuàng)新與提高，能夠彌補(bǔ)依托咪酯、依托咪酯酸檢測的缺陷，提高司法鑒定行業(yè)整體技術(shù)水平。目前，廣西有57家司法鑒定機(jī)構(gòu)，但是因?yàn)闆]有與依托咪酯檢測的相關(guān)國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)、地方標(biāo)準(zhǔn)、團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)，司法鑒定機(jī)構(gòu)沒有開展此項(xiàng)檢驗(yàn)。在刑事案件中，部分公安機(jī)關(guān)檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)使用自制方法檢驗(yàn)體內(nèi)檢材中依托咪酯（沒有通過資質(zhì)認(rèn)定或?qū)嶒?yàn)室認(rèn)可），法院根據(jù)案情采信。司法鑒定機(jī)構(gòu)在民事案件及交通事故案件檢驗(yàn)沒有檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)可使用，無法開展此項(xiàng)工作。由于廣西沒有規(guī)范的依托咪酯、依托咪酯酸檢測方法，更沒有依托咪酯犯罪的判定標(biāo)準(zhǔn)，導(dǎo)致許多違法犯罪分子得以逃脫法律的制裁。所以急需制定出依托咪酯、依托咪酯酸的檢測方法，通過定性分析來準(zhǔn)確判定依托咪酯、依托咪酯酸，從而解決目前廣西依托咪酯、依托咪酯酸檢測無技術(shù)依據(jù)的問題現(xiàn)狀。依托咪酯在廣西、廣東地區(qū)濫用現(xiàn)象比較嚴(yán)重，依托咪酯檢測技術(shù)問題直接影響到執(zhí)法部門辦案，如沒有具體的檢測、判定標(biāo)準(zhǔn)，將無法對(duì)違法犯罪者進(jìn)行具體的處罰。因此，通過制定團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)《毛發(fā)中依托咪酯、依托咪酯酸的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》，以標(biāo)準(zhǔn)為抓手，統(tǒng)一規(guī)范毛發(fā)中依托咪酯、依托咪酯酸的檢測技術(shù)，為相關(guān)行政執(zhí)法部門及司法鑒定機(jī)構(gòu)提供技術(shù)依據(jù)具有重要意義。三、項(xiàng)目編制過程（一）成立標(biāo)準(zhǔn)編制工作組團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)《毛發(fā)中依托咪酯、依托咪酯酸的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》項(xiàng)目任務(wù)下達(dá)后，廣西警察學(xué)院牽頭組織成立了標(biāo)準(zhǔn)編制工作組，制定了標(biāo)準(zhǔn)編寫方案，明確任務(wù)職責(zé)，確定工作技術(shù)路線，開展標(biāo)準(zhǔn)研制工作，具體由廣西警察學(xué)院、中國藥科大學(xué)、廣西金桂司法鑒定中心、廣西公安廳禁毒情報(bào)技術(shù)中心、廣東金域司法鑒定所、廣州市公安局禁毒支隊(duì)五大隊(duì)、南寧市公安局禁毒支隊(duì)毒品檢驗(yàn)技術(shù)鑒定科、南寧市公安局物證鑒定所、柳州市公安局物證鑒定所、珀金埃爾默企業(yè)管理（上海）有限公司、未名環(huán)境分子診斷（廣東）有限公司、廣西匡品電子科技有限公司相關(guān)人員配合。（二）收集整理文獻(xiàn)資料標(biāo)準(zhǔn)編制工作組收集了國內(nèi)有關(guān)依托咪酯、依托咪酯酸的測定的相關(guān)技術(shù)文獻(xiàn)資料。主要有：SF/T0065-2020毛發(fā)中二甲基色胺等16種色胺類新精神活性物質(zhì)及其代謝物的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢驗(yàn)方法SF/T0093-2021血液中卡西酮等37種卡西酮類新精神活性物質(zhì)及其代謝物的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢驗(yàn)方法SF/T0094-2021毛發(fā)中5F-MDMB-PICA等7種合成大麻素類新精神活性物質(zhì)的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢驗(yàn)方法SF/ZJD0107019-2018法醫(yī)毒物有機(jī)質(zhì)譜定性分析通則SF/ZJD0107025-2018毛發(fā)中15種毒品及代謝物的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢驗(yàn)方法SF/T0063-2020法醫(yī)毒物分析方法驗(yàn)證通則（三）研討確定標(biāo)準(zhǔn)主體內(nèi)容標(biāo)準(zhǔn)編制工作組在對(duì)收集的資料進(jìn)行整理研究之后，標(biāo)準(zhǔn)編制工作組召開了標(biāo)準(zhǔn)編制會(huì)議，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)的整體框架結(jié)構(gòu)進(jìn)行了研究，并對(duì)標(biāo)準(zhǔn)的關(guān)鍵性內(nèi)容進(jìn)行了初步探討。經(jīng)過研究，標(biāo)準(zhǔn)的主體內(nèi)容確定為毛發(fā)中依托咪酯、依托咪酯酸的測定的原理、試劑和材料、儀器設(shè)備、操作方法、分析結(jié)果評(píng)價(jià)。（四）調(diào)研及形成草案、征求意見稿2023年7月，在前期工作的基礎(chǔ)之上，通過理清邏輯脈絡(luò)，整合已有的參考資料中有關(guān)依托咪酯、依托咪酯酸測定的要求，并結(jié)合依托咪酯、依托咪酯酸測定實(shí)際要求的基礎(chǔ)上，按照簡化、統(tǒng)一等原則編制完成團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)《毛發(fā)中依托咪酯、依托咪酯酸的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》（草案）。2023年8月，標(biāo)準(zhǔn)編制工作組對(duì)前期的研究和數(shù)據(jù)進(jìn)了整理并結(jié)合前期技術(shù)咨詢會(huì)、征求意見會(huì)的內(nèi)容針對(duì)依托咪酯、依托咪酯酸的測定進(jìn)行多次討論、研究，最終形成團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)《毛發(fā)中依托咪酯、依托咪酯酸的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》（征求意見稿）和編制說明。四、標(biāo)準(zhǔn)制定原則（一）實(shí)用性原則本文件是在充分收集相關(guān)資料和文獻(xiàn)，分析依托咪酯、依托咪酯酸的測定當(dāng)前現(xiàn)狀，調(diào)研依托咪酯、依托咪酯酸的分析方法情況，在現(xiàn)有國家、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)相關(guān)毒物測定方法要求的基礎(chǔ)上，結(jié)合多年經(jīng)驗(yàn)而總結(jié)起草的。符合當(dāng)前使用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定依托咪酯、依托咪酯酸的方向與需求，有利于行業(yè)的長遠(yuǎn)發(fā)展，具有較強(qiáng)的實(shí)用性和可操作性。（二）協(xié)調(diào)性原則本文件編寫過程中注意了與依托咪酯、依托咪酯酸的測定相關(guān)法律法規(guī)的協(xié)調(diào)問題，在內(nèi)容上與現(xiàn)行法律法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)協(xié)調(diào)一致。（三）規(guī)范性原則本文件嚴(yán)格參照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的要求和規(guī)定編寫本標(biāo)準(zhǔn)的內(nèi)容，保證標(biāo)準(zhǔn)的編寫質(zhì)量。（四）前瞻性原則本文件在兼顧當(dāng)前區(qū)內(nèi)采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定依托咪酯、依托咪酯酸現(xiàn)實(shí)檢驗(yàn)情況的同時(shí)，還考慮到了依托咪酯、依托咪酯酸的測定方法快速發(fā)展的趨勢(shì)和需要，在標(biāo)準(zhǔn)中體現(xiàn)了個(gè)別特色性、前瞻性和先進(jìn)性條款，作為對(duì)依托咪酯、依托咪酯酸的測定的指導(dǎo)。五、標(biāo)準(zhǔn)主要章節(jié)內(nèi)容及確定依據(jù)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)《毛發(fā)中依托咪酯、依托咪酯酸的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》主要內(nèi)容包括原理、試劑和材料、儀器設(shè)備、操作方法、分析結(jié)果評(píng)價(jià)。廣西警察學(xué)院師資隊(duì)伍結(jié)構(gòu)完整，具備扎實(shí)的理論基礎(chǔ)及豐富的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，專業(yè)技術(shù)能力強(qiáng)。南寧市公安局禁毒支隊(duì)毒品檢驗(yàn)技術(shù)鑒定科、南寧市公安局物證鑒定所、柳州市公安局物證鑒定所等單位長期開展刑事化驗(yàn)工作，在毒物、毒品檢驗(yàn)領(lǐng)域有經(jīng)驗(yàn)豐富的專家、配套的檢驗(yàn)設(shè)備進(jìn)行多方面的檢驗(yàn)驗(yàn)證，是廣西區(qū)內(nèi)公安機(jī)關(guān)理化檢驗(yàn)的權(quán)威機(jī)構(gòu)。廣西金桂司法鑒定中心、廣東金域司法鑒定所有基礎(chǔ)技術(shù)設(shè)備，制訂標(biāo)準(zhǔn)的裝備齊全；技術(shù)人員眾多，有較多的實(shí)踐案例。經(jīng)過起草單位的前期合作，探索制定出采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定毛發(fā)中依托咪酯、依托咪酯酸，該方法靈敏度高，重現(xiàn)性好；操作便捷，便于實(shí)際檢驗(yàn)。南寧市公安局禁毒支隊(duì)毒品檢驗(yàn)技術(shù)鑒定科、廣西金桂司法鑒定中心、廣東金域司法鑒定所使用該方法在多起案件中檢出依托咪酯。原理主要依據(jù)司法部行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)SF/ZJD0107025-2018《毛發(fā)中15種毒品及其代謝物的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢驗(yàn)方法》。毛發(fā)樣品經(jīng)清洗和冷凍研磨后，以甲醇超聲法提取，采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法進(jìn)行檢測，經(jīng)與平行操作的空白樣品和添加樣品作對(duì)照，以保留時(shí)間、質(zhì)譜特征離子對(duì)和離子對(duì)豐度比進(jìn)行定性分析。依托咪酯、依托咪酯酸基本信息見下表1。表1依托咪酯、依托咪酯酸基本信息表化合物化學(xué)式結(jié)構(gòu)式CAS編號(hào)依托咪酯(Etomidate)C14H16N2O233125-97-2依托咪酯酸(Etomidateacid)C12H12N2O256649-48-0試劑和材料除另有說明外，所用試劑均為分析純，實(shí)驗(yàn)用水應(yīng)符合GB/T6682中一級(jí)水的要求。用到的試劑有：甲醇：HPLC級(jí)；50%甲酸溶液；HPLC級(jí)；乙酸銨：HPLC級(jí)；丙酮；甲氧那明（內(nèi)標(biāo)物）。含0.1％甲酸的5mmol/L乙酸銨水溶液（以配制500mL為例）：稱取0.1925g乙酸銨（5.3），加水溶解后，再加入0.5mL甲酸（5.2），用水稀釋至500mL，混勻。100μg/mL依托咪酯、依托咪酯酸標(biāo)準(zhǔn)液：市售依托咪酯、依托咪酯酸標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液。密封，置于冰箱中冷凍保存，保存時(shí)間12個(gè)月。100ng/mL依托咪酯、依托咪酯酸混合標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)工作溶液：移取100μg/mL依托咪酯、依托咪酯酸標(biāo)準(zhǔn)液（5.7）各10μL置于10mL容量瓶中，加入適量甲醇溶解并定容至刻度，配制成100ng/mL依托咪酯、依托咪酯酸混合標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)工作溶液。密封，置于冰箱中冷藏保存，保存時(shí)間3個(gè)月。1.0mg/mL甲氧那明標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：稱取甲氧那明（5.5）10mg于10mL容量瓶中，加入適量甲醇溶解并定容至刻度，配制成1.0mg/mL甲氧那明標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。密封，置于冰箱中冷凍保存，保存時(shí)間12個(gè)月。1.0μg/mL甲氧那明標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：移取1.0mg/mL甲氧那明標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（5.9）10μL置于10mL容量瓶中，加入適量甲醇溶解并定容至刻度，配制成1.0μg/mL甲氧那明標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。密封，置于冰箱中冷藏保存，保存時(shí)間3個(gè)月。2.0ng/mL甲氧那明標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：移取1.0μg/mL甲氧那明標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（5.10）100μL置于50mL容量瓶中，加入甲醇定容至刻度，配制成2.0ng/mL甲氧那明標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。密封，置于冰箱中冷藏保存，保存時(shí)間3個(gè)月。材料有具蓋離心管、具蓋研磨管。儀器設(shè)備液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀(LC-MS/MS)：配有電噴霧離子源(ESI)、電子天平（感量0.1mg）、離心機(jī)、超聲波清洗儀、冷凍研磨儀、恒溫水浴鍋、微量移液器：200μL、移液管或移液器：1.0mL。操作方法樣品前處理毛發(fā)清洗。毛發(fā)樣品依次用適量（以泡過樣品為宜）的水和丙酮（5.4）各振蕩洗滌兩次，晾干后剪成約1mm段，置于冷凍研磨儀中粉碎4min，呈粉末狀。案件樣品。稱取毛發(fā)粉末20mg，加入1.0mL內(nèi)標(biāo)甲氧那明標(biāo)準(zhǔn)工作液（5.11），超聲30min，10000r/min下離心5min，移取上清液供儀器分析。若樣品未檢出，可移取上清液于60℃水浴空氣流下吹干后，殘留物用200μL甲醇復(fù)溶，供儀器分析。空白樣品?？瞻酌l(fā)樣品按7.1.1的要求處理后，取20mg按7.1.2的要求與案件樣品平行提取操作。添加樣品?？瞻酌l(fā)樣品按7.1.1的要求處理后，取20mg加入10μL依托咪酯、依托咪酯酸混合標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)工作溶液（5.8），按7.1.2的要求，與案件樣品平行提取操作。儀器檢測包括儀器條件、進(jìn)樣、記錄、定性判斷依據(jù)。儀器條件：液相色譜條件，以下為參考條件，可根據(jù)不同儀器實(shí)際進(jìn)行調(diào)整：色譜柱：ZORBAXEclipsePlusC18(2.1cm×50mm，1.8μm),或其他等效柱；流動(dòng)相：A為5mmol/L乙酸銨和0.1％甲酸緩沖液，B為甲醇，流動(dòng)相洗脫梯度見表2；色譜柱的選擇：1.根據(jù)SF/ZJD0107025-2018《毛發(fā)中15種毒品及代謝物的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢驗(yàn)方法》中6.2.1.1液相色譜條件中色譜柱的選擇：RestekAllurePFPPropyl液相色譜柱（或其它等效柱），實(shí)驗(yàn)室采用了等效柱ZORBAXEclipsePlusC18(2.1*50mm，1.8-Micron)，用依托咪酯、依托咪酯酸及內(nèi)標(biāo)甲氧那明的混合標(biāo)準(zhǔn)品重復(fù)測試后，各組分色譜峰完全分開，保留時(shí)間短，各個(gè)組分的保留時(shí)間經(jīng)多次測定誤差非常小。說明柱子穩(wěn)定好，滿足依托咪酯、依托咪酯酸的測定要求。2.流動(dòng)相的選擇表2SF/ZJD0107025-2018中流動(dòng)相梯度洗脫程序流動(dòng)相：A為乙腈，B為20mmol/L乙酸銨和0.1%甲酸緩沖液。時(shí)間（min）流速(mL/min)流動(dòng)相A%流動(dòng)相B%0.000.3580201.000.3580204.000.359558.000.359558.100.35802014.000.358020表3實(shí)驗(yàn)室的流動(dòng)相梯度洗脫程序流動(dòng)相：A為5mmol/L乙酸銨和0.1％甲酸緩沖液，B為甲醇時(shí)間(min)流速(mL/min)流動(dòng)相A(％)流動(dòng)相B(％)0.000.39550.500.370303.500.370305.000.330706.000.330706.500.35958.000.35958.100.395510.000.3955經(jīng)依托咪酯、依托咪酯酸及內(nèi)標(biāo)甲氧那明的混合標(biāo)準(zhǔn)品反復(fù)測試后，用本實(shí)驗(yàn)室的流動(dòng)相能很好地得到分離結(jié)果，色譜峰形狀好，基線不漂移。質(zhì)譜條件。根據(jù)SF/ZJD0107025-2018中6.2.1.2中的質(zhì)譜條件，根據(jù)實(shí)際情況，對(duì)實(shí)驗(yàn)室的儀器進(jìn)行了調(diào)整，實(shí)驗(yàn)室的儀器：QSightLX50UHPLC液相色譜儀；通過實(shí)驗(yàn)找到最佳的質(zhì)譜條件。以下條件作為參考，可根據(jù)不同儀器實(shí)際情況進(jìn)行調(diào)整：離子源：電噴霧電離-正離子模式(ESI+)；檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)；離子源電壓(IS)：4800V；碰撞氣(CAD)、氣簾氣(CUR)、霧化氣(GS1)、輔助氣(GS2)均為高純氮?dú)猓褂们罢{(diào)節(jié)各氣流流量以使質(zhì)譜靈敏度達(dá)到檢測要求；噴霧電壓(IS)、去簇電壓(DP)、碰撞能量(CE)等電壓值應(yīng)優(yōu)化至最佳靈敏度。稱取空白粉末毛發(fā)20mg6份，分別添加10ng、4ng、2ng、1ng、0.4ng、和0.2ng的依托咪酯、依托咪酯酸混合標(biāo)準(zhǔn)溶液到20mg的空白毛發(fā)中，用含內(nèi)標(biāo)甲氧那明的甲醇（2ng/mL）進(jìn)行提取后進(jìn)行儀器分析。通過標(biāo)準(zhǔn)曲線法[根據(jù)儀器自動(dòng)計(jì)算選定色譜峰的信噪比（S/N），以S/N≥3時(shí)且符合定性要求的添加樣品最低濃度]為檢出限。通過分析，得出空白毛發(fā)樣品添加1ng依托咪酯、依托咪酯酸符合作為檢出限的相關(guān)要求。在以上色譜、質(zhì)譜條件下，依托咪酯、依托咪酯酸和內(nèi)標(biāo)物的定性離子對(duì)和保留時(shí)間見表3。依托咪酯、依托咪酯酸、內(nèi)標(biāo)物的MRM色譜圖見圖1、圖2、圖3。表4依托咪酯、依托咪酯酸和內(nèi)標(biāo)物的定性離子對(duì)和保留時(shí)間化合物母離子(m/z)子離子(m/z)去簇電壓(V)碰撞能量(eV)保留時(shí)間(min)依托咪酯(Etomidate)244.9141.105155.7095.00634依托咪酯酸(Etomidateacid)217.1113.205141.5795.00539甲氧那明(Orthoxine)180.2121.0810241.95148.801016圖1依托咪酯的MRM色譜圖圖2依托咪酯酸的MRM色譜圖圖3甲氧那明的MRM色譜圖進(jìn)樣。分別吸取案件樣品、空白樣品和添加樣品提取液，按7.2.1的條件進(jìn)樣分析。記錄。記錄案件樣品、空白樣品和添加樣品中依托咪酯和依托咪酯酸可疑色譜峰的保留時(shí)間、特征離子和離子對(duì)豐度比。定性判斷依據(jù)。以保留時(shí)間作為參考，以質(zhì)譜特征碎片離子峰和離子對(duì)相對(duì)豐度比作為定性判斷依據(jù)。如果案件樣品中出現(xiàn)依托咪酯和依托咪酯酸的兩對(duì)定性離子對(duì)的特征色譜峰，保留時(shí)間與添加樣品中相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的色譜峰保留時(shí)間一致（相對(duì)誤差在±2.5％內(nèi)），且定性離子對(duì)豐度比與濃度相近添加樣品的離子對(duì)豐度比之相對(duì)誤差不超過表3規(guī)定的范圍，則可判斷案件樣品中存在該種目標(biāo)物。表5相對(duì)離子對(duì)豐度比的最大允許誤差范圍相對(duì)離子對(duì)豐度比/（％）5020＜X≤5010＜X≤2010最大允許的相對(duì)誤差/（％）20253050（五）分析結(jié)果評(píng)價(jià)。陰性結(jié)果評(píng)價(jià)：如果案件樣品中僅檢出內(nèi)標(biāo)甲氧那明，未檢出依托咪酯和依托咪酯酸，則陰性結(jié)果可靠。如果案件樣品中未檢出內(nèi)標(biāo)甲氧那明，則陰性結(jié)果不可靠。陽性結(jié)果評(píng)價(jià)：如果案件樣品中檢出依托咪酯或依托咪酯酸并檢出內(nèi)標(biāo)甲氧那明，且空白樣品無干擾，則陽性結(jié)果可靠。如果案件樣品中檢出依托咪酯或依托咪酯酸但未檢出內(nèi)標(biāo)甲氧那明，則陽性結(jié)果不可靠。如果空白樣品中檢出依托咪酯或依托咪酯酸，則陽性結(jié)果不可靠。檢出限檢出限按司法部行標(biāo)《SF/T0063-2020法醫(yī)毒物分析方法驗(yàn)證通則》的規(guī)定進(jìn)行驗(yàn)證，稱取空白粉末毛發(fā)20mg6份，分別添加10ng、4ng、2ng、1ng、0.4ng、和0.2ng的依托咪酯、依托咪酯酸混合標(biāo)準(zhǔn)溶液到20mg的空白毛發(fā)中，用含內(nèi)標(biāo)甲氧那明的甲醇（2ng/mL）進(jìn)行提取后進(jìn)行儀器分析。通過標(biāo)準(zhǔn)曲線法[根據(jù)儀器自動(dòng)計(jì)算選定色譜峰的信噪比（S/N），以S/N≥3時(shí)且符合定性要求的添加樣品最低濃度]為檢出限。通過分析，得出空白毛發(fā)樣品添加1ng依托咪酯、依托咪酯酸符合作為檢出限的相關(guān)要求。依托咪酯的方法檢出限為0.05ng/mg，依托咪酯酸的方法檢出限為0.05ng/mg。如下表所示：化合物名稱定性離子對(duì)(m/z)和CE（eV）保留時(shí)間（min）檢出限（ng/mg）依托咪酯(Etomidate)244.9/141.0(15)5.700.05244.9/95.0(34)依托咪酯酸(Etomidateacid)217.1/113.2（14）1.570.05217.1/95.0（39）甲氧那明(Orthoxine)180.2/121.08（24）1.95—180.2/148.8（16）1.95—（七）精密度定性分析的精密度通常表現(xiàn)為假陽性或假陰性。依據(jù)液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法進(jìn)行測定，判斷案件樣品的測定結(jié)果為陰性或陽性。樣品甲氧那明（是否檢出）依托咪酯（是否檢出）依托咪酯酸（是否檢出）結(jié)果判定1-1（空白樣品）是否否依托咪酯、依托咪酯酸均為陰性1-2（案件樣品）是否否1-3（加標(biāo)樣品）是是是2-1（空白樣品）是否否依托咪酯、依托咪酯酸均為陽性2-2（案件樣品）是是是2-3（加標(biāo)樣品）是是是3-1（空白樣品）是否否依托咪酯、依托咪酯酸均為陰性3-2（案件樣品）是否否3-3（加標(biāo)樣品）是是是4-1（空白樣品）是否否依托咪酯為陽性、依托咪酯酸為陰性4-2（案件樣品）是是否4-3（加標(biāo)樣品）是是是5-1（空白樣品）是否否依托咪酯