沉淀反應（免疫學檢驗課件）

沉淀反應沉淀反應（precipitation)

可溶性抗原與相應抗體發(fā)生特異性結合，在適當條件下而出現的沉淀現象。

前言1.液相內沉淀試驗

環(huán)狀沉淀反應、絮狀沉淀反應、免疫比濁度分析。2.凝膠內沉淀試驗

單向瓊脂擴散試驗、雙向瓊脂擴散試驗。3.凝膠免疫電泳技術

對流電泳技術、免疫電泳技術、火箭電泳技術、免疫固定電泳技術。沉淀反應分類以含鹽緩沖液為反應介質的抗原抗體特異性結合的沉淀試驗。沉淀現象不一環(huán)狀沉淀絮狀沉淀免疫濁度沉淀第一節(jié)液相內沉淀試驗一、環(huán)狀沉淀試驗原理：將抗原溶液疊加在細小玻璃管中抗體溶液上面，因抗血清蛋白濃度高，比重大，在兩液交界的清晰界面上形成白色沉淀環(huán)為陽性反應。技術要點：用毛細滴管吸取抗血清加于沉淀管底部，避免產生氣泡；將抗原溶液沿管壁緩緩加于抗血清液面上，形成清晰的交界面；置沉淀管于室溫下使其反應，1-5分鐘內在兩液交界面間呈乳白色沉淀環(huán)為陽性。30分鐘無沉淀環(huán)出現則為陰性。方法評價：簡便快速，只能定性。二、絮狀沉淀試驗原理：抗原溶液與相應抗體溶液混合，在電解質存在的條件下，抗原與抗體結合出現可見的絮狀沉淀。由此可作為最適比測定的基本方法。技術要點：抗原稀釋法抗體稀釋法方陣滴定法方法評價：簡單、不需特殊設備，敏感度較低，受抗原抗體比例影響非常明顯。常用于滴定抗原抗體反應的最適比例。三、免疫比濁度分析透射免疫比濁法（turbidimetricimmunoassay）散射免疫比濁法（nephelometryimmunoassay）速率散射比濁法終點散射比濁法免疫膠乳比濁法根據抗原抗體在體內快速結合的原理

指可溶性抗原、抗體在含有電解質的凝膠內自由擴散形成濃度梯度，二者在比例合適的位置形成肉眼可見的沉淀線或沉淀環(huán)。根據抗原與抗體反應的方式和特性，可分為單向瓊脂擴散試驗和雙向瓊脂擴散試驗。第二節(jié)凝膠內沉淀試驗

抗體與待測的抗原,在兩者比例合適的部位結合形成沉淀環(huán)。環(huán)的大小與抗原的濃度成正相關。本法穩(wěn)定、簡便、無需儀器設備。重復性和線性均可信，但靈敏度稍差、耗時長、影響因素多。一、單向瓊脂擴散試驗（平板法）單向免疫擴散試驗將抗原抗體分別加在瓊脂糖凝膠不同的對應孔中，兩者在凝膠中自由擴散，在比例合適處形成白色沉淀線。沉淀線的位置、形狀以及對比關系，可進行定性分析，如抗原或抗體的存在與否、相對含量估計、相對分子量分析和性質分析。二、雙向瓊脂擴散試驗（平板法）1.抗原或抗體的定性分析。2.抗原、抗體的相對分子量和相對濃度的估計。

雙向瓊脂擴散試驗應用A：Ag、Ab濃度及分子量近似；B：Ag、Ab濃度近似，分子量Ag＜Ab；C：Ag、Ab濃度近似，分子量Ag＞Ab；D：濃度Ag＞Ab，分子量近似；E：濃度Ag＞Ab，分子量Ag＜Ab；F：濃度Ag＜Ab，分子量Ag＞Ab抗原完全相同抗原完全不同抗原部分相同3.抗原性質的分析4.抗體效價的測定5.抗原或抗體純度的鑒定

本法操作簡單、特異性高、結果可靠、成本低廉，但靈敏度低，耗時長，不能精確定量。電泳分析與沉淀反應的結合產物，即可溶性抗原和抗體在直流電場的作用下，在凝膠內加速定向泳動，彼此相遇而特異性結合，在比例合適處形成可見的沉淀物。該技術提高了沉淀反應的速度和敏感度，廣泛用于臨床實驗診斷和科學研究。第三節(jié)凝膠免疫電泳技術對流免疫電泳01免疫電泳免疫固定電泳火箭免疫電泳030204凝膠免疫電泳技術

無沉淀線出現表明無相應的抗原。沉淀線位于抗原抗體孔中間，說明兩者比例較適合。沉淀線偏向抗原孔一方，表示抗體濃度＞抗原，反之，則是抗體濃度＜抗原濃度。一、對流免疫電泳技術雙向瓊脂擴散與電泳相結合單向免疫擴散和電泳的定量檢測技術。固定抗體不移動，抗原向正極泳動，隨著抗原量減少，基底區(qū)越來越窄，形成的沉淀線逐漸變窄，形成一個如火箭的沉淀峰，峰的高度與抗原量呈正相關?；鸺庖唠娪緢D①②③④為標準抗原；⑤⑥為標本-+二、火箭免疫電泳技術單向瓊脂擴散與電泳相結合三、免疫電泳技術區(qū)帶電泳與雙向瓊脂擴散相結合（如MM患者出現M蛋白）SPGAMκ

λSPGAMκ

λSPGAMκ

λ四、免疫固定電泳技術返回章目錄區(qū)帶電泳與沉淀反應相結合（免疫球蛋白分型、M蛋白鑒定）IgG

κ型血清

IgG

λ型血清

正常血清

小結

沉淀反應是指可溶性抗原與相應抗體在適當條件下發(fā)生特異性結合而出現可見的沉淀現象。1.