DB51-T 2966-2022 瀕危野生植物及其制品物種鑒定規(guī)范

CCSB00DB512022-12-27發(fā)布I 2 2 25.2微觀形態(tài)學(xué)指標(biāo) 2 25.4分子生物學(xué)指標(biāo) 2 2 2 27.2實(shí)驗(yàn)室耗材和試劑 3 3 3 3 3 4 4 4 4 5 5 5 5 5 5 5 5 6 6 6 6 6 6 6 7 7 7 7 7 7 7 7 7 8 8 8 8 8 8 8 8 本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定1瀕危野生植物及其制品物種鑒定規(guī)范GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格GB/T19495.3轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測核酸提取純化GB/T27025檢測和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室能力的通用GB/T27403實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范食品分子生物學(xué)LY/T2501野生動物及其產(chǎn)品的物種SN/T3689植物檢疫性有害生物實(shí)驗(yàn)室生物SN/T4626DNA條形碼物種3.1瀕危野生植物endangeredwi3.2瀕危野生植物制品endangeredwildplant3.33.42委托單位（人）提供的、用作物種鑒定的瀕危野生植物及其3.54縮略語BOLD：生命條形碼數(shù)據(jù)系統(tǒng)(TheBarcodeofLifeDataSystem)NCBI：美國國立生物技術(shù)信息中心(NationalCenterforBiotechnologyInformation)根據(jù)種子、花、等組織的典型或特異性的微觀形態(tài)學(xué)6.3具有物種特異性的微觀結(jié)構(gòu)特征的檢測樣品，采用微觀形態(tài)學(xué)方法進(jìn)行檢驗(yàn)。6.4具有物種特異性生化成分的檢測樣品，可采用生物化學(xué)方法進(jìn)行檢驗(yàn)鑒定。6.6宏觀形態(tài)學(xué)方法中具有物種唯一性的特征指標(biāo)可以單獨(dú)使用，如指標(biāo)特征不具有物種唯一性，則7.1.1實(shí)驗(yàn)室應(yīng)配置與其所應(yīng)用的檢驗(yàn)方法所必需的儀器設(shè)備，且應(yīng)是具有資質(zhì)的實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備廠家37.1.2檢驗(yàn)方法所必需的關(guān)鍵(核心)設(shè)備所產(chǎn)生的數(shù)據(jù)或結(jié)果應(yīng)7.1.4新購置的儀器設(shè)備、或原有儀器設(shè)備維修保養(yǎng)后，在使用前應(yīng)當(dāng)校準(zhǔn)7.2實(shí)驗(yàn)室耗材和試劑7.2.1實(shí)驗(yàn)室應(yīng)配置與其所應(yīng)用的檢驗(yàn)方法所必需的實(shí)驗(yàn)耗材和試劑，且應(yīng)是具有資質(zhì)的廠家生產(chǎn)的7.2.2所有實(shí)驗(yàn)耗材和試劑應(yīng)處于保質(zhì)期7.2.3商品試劑盒應(yīng)標(biāo)明到貨日期和有效期。實(shí)驗(yàn)室自行配制的試劑應(yīng)在容器上標(biāo)明名稱、濃度、配7.2.4每一批次購進(jìn)的耗材和試劑應(yīng)進(jìn)行符合性驗(yàn)證等質(zhì)8.1.2實(shí)驗(yàn)室的各功能分區(qū)應(yīng)布局合理，通風(fēng)良好、光線適度、8.1.3配備生物安全設(shè)施，確保環(huán)8.2實(shí)驗(yàn)室區(qū)域設(shè)置原則宏觀形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)、微觀形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)、生物化學(xué)檢驗(yàn)和分子生微觀形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)室和生物化學(xué)檢驗(yàn)室應(yīng)分別設(shè)檢測樣品貯存室：主要用于初檢室：主要用于案件的登記、檢測樣品的初檢和照相、錄相、固定等。試劑貯存和配制室：主要用于試劑的貯存、配制、消耗品的消毒等。數(shù)據(jù)分析室：主要用于檢驗(yàn)結(jié)果的分析、比對、鑒定報告的形成等。檔案室：主要用于案件資料、實(shí)驗(yàn)操作相關(guān)資料的存檔保存等。9人員要求及管理法規(guī)，誠實(shí)守信，有良好的職業(yè)道德操守，嚴(yán)格遵守行業(yè)主49.2技術(shù)負(fù)責(zé)人應(yīng)具備博士學(xué)位或中級以上專業(yè)技術(shù)職稱，相關(guān)專業(yè)，五年以上相關(guān)工作經(jīng)驗(yàn)，具備過考核后上崗。9.5必要時，技術(shù)負(fù)責(zé)人和鑒定人按照有關(guān)要求有配合相關(guān)部門履行結(jié)果解釋和出庭義務(wù)。10.1.4檢驗(yàn)鑒定如需對檢測樣品進(jìn)10.2檢驗(yàn)鑒定原則本著由簡單到復(fù)雜、由無損到有損的原則，確定檢驗(yàn)鑒10.3檢驗(yàn)鑒定根據(jù)檢測樣品類別，選擇適當(dāng)?shù)臋z驗(yàn)方法，并確定樣品制備方法。顯微圖片應(yīng)標(biāo)注放大倍數(shù)。嚴(yán)格設(shè)置陽性（巳知的DNA樣品）和陰性（不加DNA5PCR擴(kuò)增產(chǎn)物應(yīng)雙向測序，采用克隆測序時每個PCR產(chǎn)物應(yīng)測定5個以上。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)純化后可直接用于序列測定。PCR產(chǎn)物純化和測序可分包給已獲認(rèn)可的權(quán)威專業(yè)技術(shù)機(jī)構(gòu)來進(jìn)行。將平行樣本分別送檢驗(yàn)鑒定結(jié)束后，除留存?zhèn)浞輼悠芬酝猓Ｓ嘧冑|(zhì)和超過保留時限的檢測樣品應(yīng)及時告知委托單位。攜帶疫病的檢測樣品應(yīng)進(jìn)行無害化10.4結(jié)果分析10.5復(fù)檢對鑒定結(jié)果不明確或其他特殊需要，按有關(guān)程序經(jīng)同意可送相關(guān)權(quán)威機(jī)構(gòu)進(jìn)行復(fù)核鑒定。10.7鑒定質(zhì)量控制確保對鑒定質(zhì)量的有效控制。評審過程和評審發(fā)現(xiàn)的問題應(yīng)形成評審報告，并存檔。10.8鑒定報告起草10.9鑒定報告的審核、簽發(fā)611.2新方法的使用11.3標(biāo)準(zhǔn)方法確認(rèn)11.3.3如實(shí)驗(yàn)室采用的標(biāo)準(zhǔn)方法發(fā)生了11.4非標(biāo)方法確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室在沒有標(biāo)準(zhǔn)方法或現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)方法無法完成鑒定的情況下可考慮采用非標(biāo)方法，但必須經(jīng)過實(shí)驗(yàn)室自行研制的鑒定方法須經(jīng)同行專家組檢驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)記錄，分子生物學(xué)的DNA提取記錄、12.1.4鑒定文件：包括鑒定意見書12.2操作手冊12.3說明書類712.4方法認(rèn)可記錄檢驗(yàn)方法等的認(rèn)可程序、專家會議紀(jì)要、認(rèn)可過程記12.5管理檔案物種檢驗(yàn)鑒定工作流程圖、儀器設(shè)備清單、儲存試劑的清12.7電子化管理12.8保密13.1.2各樣品應(yīng)標(biāo)記清楚，防止各樣品間的13.2檢驗(yàn)人員13.2.3檢驗(yàn)操作中應(yīng)戴一次性手套13.3檢驗(yàn)區(qū)域13.4檢驗(yàn)器材13.5檢驗(yàn)過程8在實(shí)驗(yàn)室的固定位置應(yīng)設(shè)急救箱和緊急噴淋裝置，并有明確標(biāo)識，所有人員應(yīng)掌握使用方法。14.2化學(xué)藥品14.3儀器操作14.3.1儀器操作說明中應(yīng)注明該儀器操作中發(fā)生事故或故障的可能性及原因，并注明預(yù)防和處理的14,4檢驗(yàn)人員14.5樣品處置疫病的傳染、傳播。取樣可按照SN/T3689進(jìn)行植物檢疫性有15.4與技術(shù)先進(jìn)的研究機(jī)構(gòu)和犯罪調(diào)查專家合作開展能力建設(shè)和培訓(xùn)。916.1對參與鑒定過程的鑒定工作人員進(jìn)行培訓(xùn)，以不斷提高鑒定人員的技術(shù)能力。16.3實(shí)驗(yàn)室制定計劃開展實(shí)驗(yàn)室A.1概述對較短的DNA序列來進(jìn)行物種鑒定的一種分子生物學(xué)技術(shù)，是傳統(tǒng)形態(tài)鑒別方法的有效補(bǔ)充。由于不同物種的DNA序列是由腺嘌呤(A)、鳥嘌呤(G)、胞嘧啶(C)、胸腺嘧啶(T)四種堿基以不同順序排成，因此對某一特定DNA片段序列進(jìn)行分析即能夠區(qū)分不同物種。DNA條形碼分子鑒定通常是選用A.2儀器的一般要求動灌膠、自動進(jìn)樣、自動數(shù)據(jù)收集分析等全自動電腦控制的測定DNA片段中堿基順序或大小，以及定量A.3.1檢測樣品處理psbA-trnH序列擴(kuò)增正向引物psbAF：5′-GTTATGCATGAACGTAATGCTC-3′;反向引物trnHR：5′-A.3.3.2反應(yīng)體系A(chǔ).3.3.3擴(kuò)增程序采取1%瓊脂糖，100V，電泳方法檢測PCR產(chǎn)物。電泳后，PCR產(chǎn)物應(yīng)在相應(yīng)的DNA條形碼序列長度位切取目的條帶所在位置的在紫外燈下迅速凝膠,采用瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒進(jìn)行純化。使用DNA測序儀對目的條帶進(jìn)行雙向測序,PCR擴(kuò)增引物作為測序引物,測序原理同Sanger測序法。有目的條帶的序列拼接對雙向測序峰圖應(yīng)用有序列拼接功能的專業(yè)軟件進(jìn)行序列拼接,去除引物序列質(zhì)量與方向?yàn)榇_保DNA條形碼序列的可靠性,需去除測序結(jié)果兩端信號弱或重疊峰區(qū)域,序列方將獲得的序列與NCBI及BOLD中DNA條形碼標(biāo)準(zhǔn)小花龍舌蘭(姬亂雪)Agaveparviflora皇后龍舌蘭Agavevictoriae-reginae#4間型酒瓶蘭Nolinainterrata克雷塔羅絲蘭YuccaqueretaroensisGalanthusspp.Sternbergiaspp.德氏漆Operculicaryadecaryi織冠漆Operculicaryahyphaenoides象腿漆Operculicaryapachypus安博棒錘樹Pachypodiumambongense巴氏棒錘樹Pachypodiumbaronii德氏棒錘樹PachypodiumdecaryiHoodiaspp.★蛇根木(印度蘿芙木)Rauvolfiaserpentina★人參Panaxginseng(僅俄羅西洋參Panaxquinquefolius智利南洋杉AraucariaaraucanaBeaucarneaspp.★桃兒七Podophyllumhexandrum哈氏老人須Tillandsiaharrisii卡氏老人須Tillandsiakammii旱生老人須Tillandsiaxerographica巖牡丹屬所有種Ariocarpusspp.星冠Astrophytumasterias花籠Aztekiumritteri精美球Coryphanthawerdermannii林氏鹿角掌Echinocereusferreirianusssp.lindsayorum珠毛柱Echinocereusschmollii小極光球Escobariaminima須彌山Escobariasneedii白斜子Mammillariapectinifera(包括亞種solisioides)圓錐花座球Melocactusconoideus晚刺花座球Melocactusdeinacanthus蒼白花座球Melocactusglaucescens疏刺花座球Melocactuspaucispinus帝冠Obregoniadenegrii金毛翁Pachycereusmilitaris布氏月華玉Pediocactusbradyi銀河玉Pediocactusknowltonii雛鷺球Pediocactusparadinei斑鳩球Pediocactuspeeblesianus天狼Pediocactussileri斧突球?qū)偎蟹NPelecyphoraspp.布氏白虹山Sclerocactusblainei麒麟屬所有種Pereskiaspp.、Pereskiopsisspp.和頂花掌屬所有種Quiabentiaspp.)突氏玄武玉Sclerocactusbrevihamatusssp.tobuschii短刺白虹山Sclerocactusbrevispinus新墨西哥鯱玉Sclerocactuscloverae白瑯玉Sclerocactuserectocentrus蒼白玉Sclerocactusglaucus藤榮球Sclerocactusmariposensis月想曲Sclerocactusmesae-verdae尼氏鯱玉Sclerocactusnyensis月童Sclerocactuspapyracanthus毛刺球Sclerocactuspubispinus塞氏鯱玉Sclerocactussileri猶他球Sclerocactuswetlandicus懷氏虹山Sclerocactuswrightiae鱗莖玉屬所有種Strombocactusspp.姣麗球?qū)偎蟹NTurbinicarpusspp.尤伯球?qū)偎蟹NUebelmanniaspp.多柱樹Caryocarcostaricense云木香Saussureacostus柔毛沙葫蘆Zygosicyospubescens沙葫蘆Zygosicyostripartitus智利肖柏Fitzroyacupressoides姆蘭杰南非柏Widdringtoniawhytei★桫欏屬所有種Cyatheaspp.印度蘇鐵Cycasbeddomei★金毛狗脊Cibotiumbarometzdeltoidea捕蠅草Dionaeamuscipula安波沃本大戟(安波麒麟)Euphorbiaambovombensis開塞恩坦馬里大戟Euphorbiacapsaintemariensis克氏大戟Euphorbiacremersii(包括型viridifolia和變種rakotozafyi)筒葉大戟(筒葉麒麟)Euphorbiacylindrifolia(包括亞種tuberifera)德氏大戟(皺葉麒麟)Euphorbiadecaryi(包括變種ampanihyensis、robinsonii和spirosticha)費(fèi)氏大戟(潘郎麒麟)Euphorbiafrancoisii莫氏大戟Euphorbiamoratii(包括變種antsingiensis、bemarahensis和multiflora)小序大戟Euphorbiaparvicyathophora扁枝大戟Euphorbiaquartziticola圖拉大戟EuphorbiatulearensisEuphorbiamisera和被列入附錄閣Euphorbiatrigona栽培品種的Euphorbianeriifolia人工培植變異的龜紋箭Euphorbia★蒙古櫟Quercusmongolica(俄羅斯)簇生福桂花Fouquieriafasciculata普氏福桂花Fouquieriapurpusii玉)Fouquieriacolumnaris★買麻藤Gnetummontanum(尼泊楓桃Oreomunneapterocarpa玫瑰安妮樟Anibarosaeodora巴西黑黃檀Dalbergianigra德米古夷蘇木GuibourtiademeuseiGuibourtiapellegriniana特氏古夷蘇木Guibourtiatessmannii巴西蘇木Paubrasiliaechinata大美木豆Pericopsiselata多穗闊變豆Platymisciumparviflorum刺猬紫檀Pterocarpuserinaceus檀香紫檀Pterocarpussantalinus染料紫檀Pterocarpustinctorius南方?jīng)Q明Sennameridionalis微白蘆薈Aloealbida白花蘆薈(雪女王)Aloealbiflora阿氏蘆薈Aloealfredii貝氏蘆薈(斑蛇龍)Aloebakeri美麗蘆薈Aloebellatula喜鈣蘆薈Aloecalcairophila扁蘆薈Aloecompressa(包括變種vars.paucituberculata,rugosquamosa和schistophila)德爾斐蘆薈Aloedelphinensis德氏蘆薈Aloedescoingsii脆蘆薈Aloefragilis十二卷狀蘆薈(琉璃姬孔雀)Aloehaworthioides(包括變種var.aurantiaca)列入附錄的翠葉蘆薈Aloevera，亦即Aloebarbadensis)海倫蘆薈Aloehelenae艷蘆薈Aloelaeta(包括變種var.maniaensis)平列葉蘆薈Aloeparallelifolia小蘆薈Aloeparvula皮氏蘆薈(女王錦)Aloepillansii多葉蘆薈Aloepolyphylla勞氏蘆薈Aloerauhii索贊蘆薈Aloesuzannae變色蘆薈Aloeversicolor沃氏蘆薈Aloevossii★蓋裂木Magnolialiliiferavar.obovata(尼泊格氏猴面包樹Adansoniagrandidieri矮桃花心木Swieteniahumilis#4大葉桃花心木Swieteniamacrophylla#6(新熱帶種群)桃花心木Swieteniamahagoni劈裂洋椿Cedrelafissilis(玻阿根廷洋椿Cedrelaodorata(巴西和玻利維亞、以及卡西豬籠草Nepentheskhasiana拉賈豬籠草NepenthesrajahNepenthesspp.★水曲柳Fraxinusmandshurica(俄羅斯)馬達(dá)加斯加船形蘭Aerangisellisii大花蕾立蘭Cattleyajongheana淺裂蕾立蘭Cattleyalobata血色石斛Dendrobiumcruentum墨西哥兜蘭Mexipediumxerophyticum★兜蘭屬所有種Paphiopedilumspp.鴿蘭Peristeriaelata美洲兜蘭屬所有種Phragmipediumspp.★云南火焰蘭Renantheraimschootiana★肉蓯蓉Cistanchedeserticola擬散尾葵Dypsisdecipiens馬島葵Beccariophoenixmadagascariensis三角檳榔(三角椰)Dypsisdecaryihalleuxii子)Marojejyadarianii繁序雷文葵Ravenealouvelii子)Ravenearivularis林扇葵Satranaladecussilvae長苞椰Voanioalagerardii巨籽棕Lodoiceamaldivica(塞舌爾)尼泊爾綠絨蒿Meconopsisregia(尼泊爾)紫紅葉蒴蓮Adeniafiringalavensis鱷魚蔓Adeniaolaboensis小葉蒴蓮Adeniasubsessilifolia黃花艷桐Uncarinagrandidieri粉花艷桐Uncarinastellulifera危地馬拉冷杉Abiesguatemalensis★紅松Pinuskoraiensis(俄羅彎葉羅漢松Podocarpusparl