實驗三革蘭氏染色

實驗三革蘭氏染色實驗三細菌的單染色與革蘭氏染色法

微生物染色的基本原理，是借助物理因素和化學因素的作用而進行的。物理因素如細胞及細胞物質對染料的毛細現象、滲透、吸附作用等。化學因素則是根據細胞物質和染料的不同性質而發(fā)生的各種化學反應。酸性物質對于堿性染料較易吸附，且吸附作用穩(wěn)固；同樣，堿性物質對酸性染料較易于吸附。如酸性物質細胞核對于堿性染料就有化學親和力，易于吸附。1微生物染色的基本原理

細菌的等電點較低，pH值大約在2—5之間，故在中性、堿性或弱酸性溶液中，菌體蛋白質電離后帶負電荷；而堿性染料電離時染料離子帶正電。因此，帶陰電的細菌常和帶陽電的堿性染料進行結合。所以，在細菌學上常用堿性染料進行染色。2染色方法

微生物染色方法一般分為單染色法和復染色法兩種。前者用一種染料使微生物染色，但不能鑒別微生物。復染色法是用兩種或兩種以上染料，有協助鑒別微生物的作用，故亦稱鑒別染色法。常用的復染色法有革蘭氏染色法和抗酸性染色法，此外還有鑒別細胞各部分結構的（如芽胞、鞭毛、細胞核等）特殊染色法。

實驗三細菌的革蘭氏染色法一、目的要求1學習掌握革蘭氏染色法。2了解革蘭氏染色法的原理及其在細菌分類鑒定中的重要性。二、基本原理三、器材1菌種大腸桿菌約24h營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物，金黃色葡萄球菌約24h營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物。2溶液和試劑革蘭氏染色液，草酸銨結晶紫染液，盧戈氏碘液，番紅復染液3儀器或用具顯微鏡、酒精燈、載玻片、接種環(huán)、雙層瓶（內裝香柏油和二甲苯）、擦鏡紙、無菌生理鹽水、載玻片夾子、濾紙四、操作步驟1制片涂片：固體培養(yǎng)物，液體培養(yǎng)物。注意事項：載玻片要潔凈無油跡；滴加生理鹽水和取菌不宜過多；涂片均勻，不宜過厚。干燥：室溫自然干燥。固定：涂面朝上，通過火焰2－3次。熱固定溫度不宜過高，以玻片背面不燙手為宜。A.加小滴水

B.涂成薄層

C.固定菌體

革蘭氏染色–

制片2初染滴加結晶紫（以剛好將菌膜覆蓋為宜）,染色1－2min，水洗。3媒染用碘液沖去殘水，并用碘液覆蓋菌膜約1min，水洗。4脫色用濾紙吸去玻片上的殘水，將玻片傾斜，用滴管流加95％的乙醇脫色，直至流出的乙醇無紫色時，立即水洗。脫色時間一般液20－30S。脫色不足與過度都會影響和改變染色的結果。5復染用番紅液復染約2min，水洗。革蘭氏染色–

染色6鏡檢干燥后，用油鏡觀察。藍紫色為G+,紅色為G-。7混合涂片染色將大腸桿菌和金黃色葡萄球菌作混合涂片、染色、鏡檢進行比較。ProceduresofGramStainingGrampositiveorGramnegative?實驗報告1．繪圖說明經革蘭氏染色后大腸肝菌和金黃色葡萄球菌的染色結果。

2．思考題

思考題現有一株未知桿菌，個體明顯大于大腸桿菌，請你鑒定該菌株是