《儀器分析》課件-2.3.1實(shí)驗(yàn)一

實(shí)驗(yàn)最大吸收波長的確定和測量實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、掌握定量分析的三種方法2、熟練操作紫外分光光度計(jì)3、通過實(shí)驗(yàn)用三種不同方法來計(jì)算實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析方法實(shí)驗(yàn)內(nèi)容實(shí)驗(yàn)?zāi)康男〗Y(jié)1、吸收系數(shù)法2、對(duì)照品法3、標(biāo)準(zhǔn)曲線法E——物質(zhì)在測定波長下的百分吸收系數(shù)，100mL·g-1·cm-1郎伯-比爾定律：A=Kbcc——溶液的濃度K——吸光系數(shù)b——液層厚度紫外分光光度計(jì)的定量分析方法E未知未知樣的濃度與對(duì)照品相差較大實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)內(nèi)容分析方法小結(jié)（一）確定維生素B1的最大吸收波長（二）用吸收系數(shù)法測定維生素B1的含量（三）用對(duì)照品比較法測定維生素B1的含量（四）用標(biāo)準(zhǔn)曲線法測定維生素B1的含量實(shí)驗(yàn)內(nèi)容實(shí)驗(yàn)?zāi)康姆治龇椒▽?shí)驗(yàn)內(nèi)容小結(jié)（一）確定維生素B1的最大吸收波長1、用1cm的石英吸收池，以試劑空白作參比；2、濃度為2.50μg/mL的維生素B1溶液作為測試液，在200～400nm波長范圍內(nèi)每隔20nm測定一次吸光度；3、在峰值附近（10nm范圍）每間隔2nm測量一次;4、波長作為橫坐標(biāo)，吸光度A作為縱坐標(biāo)，繪制吸收曲線，并確定維生素B1的最大吸收波長λmax。實(shí)驗(yàn)?zāi)康姆治龇椒▽?shí)驗(yàn)內(nèi)容小結(jié)Aλ200220240260280300320340360380400ⅩⅩⅩⅩⅩⅩⅩⅩⅩⅩ維生素B1的吸收曲線實(shí)驗(yàn)?zāi)康姆治龇椒▽?shí)驗(yàn)內(nèi)容小結(jié)（二）用吸收系數(shù)法測定維生素B1的含量在最大吸收波長λmax下，用1cm的吸收池，以試劑空白作參比，測定供試品溶液的吸光度，按吸收系數(shù)法測定供試品溶液的含量。E維生素B1=421×100mL·g-1·cm-1實(shí)驗(yàn)?zāi)康姆治龇椒▽?shí)驗(yàn)內(nèi)容小結(jié)項(xiàng)目吸光度A含量/μg/mL供試品-10.1453.44結(jié)果在最大吸收波長λmax下，用1cm的吸收池，以試劑空白作參比，分別測定對(duì)照品（5.00μg/mL）、供試品溶液的吸光度，按對(duì)照品比較法，計(jì)算維生素B1的含量。（三）用對(duì)照品比較法測定維生素B1的含量實(shí)驗(yàn)?zāi)康姆治龇椒▽?shí)驗(yàn)內(nèi)容小結(jié)項(xiàng)目吸光度A含量/μg/mL對(duì)照品0.082/供試品-10.1454.42結(jié)果1、測定標(biāo)準(zhǔn)曲線在最大吸收波長λmax下，用1cm的吸收池，以試劑空白作參比，分別測定標(biāo)準(zhǔn)系列溶液吸光度。2、繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制標(biāo)準(zhǔn)溶液吸收光譜曲線，記錄維生素B1標(biāo)準(zhǔn)系列溶液相應(yīng)的吸光度，并以c為橫坐標(biāo)，吸光度A為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求線性回歸方程。3、測定供試品溶液根據(jù)供試品溶液的吸光度，從線性回歸方程上獲得對(duì)應(yīng)的維生素B1濃度，從而求得供試品中維生素B1的含量。（四）用標(biāo)準(zhǔn)曲線法測定維生素B1的含量。實(shí)驗(yàn)?zāi)康姆治龇椒▽?shí)驗(yàn)內(nèi)容小結(jié)項(xiàng)目0123供試品1濃度c/μg/mL0.002.505.0012.50吸光度0.0000.0820.1470.3250.145含量c/μg/mL/5.26線性回歸方程/相關(guān)系數(shù)y=0.0255x+0.0109R2=0.9953結(jié)果實(shí)驗(yàn)?zāi)康姆治龇椒▽?shí)驗(yàn)內(nèi)容小結(jié)小結(jié)1、供試品可以通過測定得到最大吸收波長，且與濃度無關(guān)；2、不同的情況下可以選用