DB21T 1861.4-2010 水產(chǎn)生物種質(zhì)檢驗(yàn)技術(shù)規(guī)程 簡(jiǎn)單重復(fù)序列擴(kuò)增法　_第1頁
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DB21DB21/T1861.4—2010水產(chǎn)生物種質(zhì)檢驗(yàn)技術(shù)規(guī)程簡(jiǎn)單重復(fù)序列擴(kuò)增法Simplesequencerepeatproceduretodetectgermplasmforaquaculturespecies2010-12-31發(fā)布2011-02-01實(shí)施遼寧省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布I1本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了水產(chǎn)生物簡(jiǎn)單重復(fù)序列擴(kuò)增法的術(shù)語定義、原理、試劑、儀器、取樣、DNA提簡(jiǎn)單重復(fù)序列(simplesequenc2平均遺傳雜合度（averageheteroz3鄰近結(jié)合法聚類分析（Neighborjoi析，通過堿基的變化和差異計(jì)算相互之間的進(jìn)微衛(wèi)星側(cè)翼的DNA片段克隆、測(cè)序，然后根據(jù)微衛(wèi)星的側(cè)翼序列設(shè)計(jì)引物將微衛(wèi)星位點(diǎn)擴(kuò)增出來。由5.710×Tris硼酸(10×TBE)電泳緩沖液按附錄A配制5.86上樣緩沖液45.18N,N,N,N—四甲基乙二胺（TEMED）5.25乙二胺四乙酸(EDTA)5空白對(duì)照管；在每個(gè)離心管中加入15μL配制好的毛囊裂解液。毛囊裂解液用1×PCR緩沖液(50取-20℃下凍存的臟器0.2g，置于液氮中研成粉末；加DNA提取液(10mmol/LTris-HCl，pH8.末狀；將研缽放入65℃水浴至樣品粉末剛開始融化，向研缽中加入DNA提取液(10mmol/L吸取1~3μL提取的DNA，用濃度1~2％6260nm波長(zhǎng)下測(cè)定產(chǎn)物（或產(chǎn)物稀釋液）的紫外吸收值，根據(jù)公式(1)PCRBuffer(10)17234），89并用UPGMA做基于Nei’s遺傳距離的樹形圖小心：溴化乙錠是強(qiáng)誘變劑并有中度毒性，使用含有這種染料12將氯仿和異戊醇按24:1體積比N,N-亞甲叉

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