呼吸道感染病原體抗體(IgM)九聯(lián)檢檢測及應用

呼吸道感染病原體抗體（IgM）九聯(lián)檢檢測及應用

2021/6/271概述呼吸道病原多通過空氣或唾液飛沫方式傳播，非常容易傳染他人，造成局部流行，甚至可導致爆發(fā)性流行。呼吸道感染病原體抗體IgM九聯(lián)檢的應用有利于盡早快速準確地找到病原體，對疾病的診斷、確定正確治療方案有重大意義。2021/6/272概述呼吸道感染的病原體種類多且臨床癥狀相似難以區(qū)分，因而快速檢測、診斷、明確病原體感染對臨床診治工作有很大的幫助。應用呼吸道聯(lián)合檢測試劑盒可以提供快速診斷，對加強呼吸道疾病病原學診斷和合理使用抗生素可起到很好的指導作用。2021/6/273概述我科在實際檢測和應用中積累了一定的心得和體會：各種病原體感染的臨床意義，抗體檢測的最佳時間，試劑的靈敏度、特異性、精密度，交叉反應和檢測中的技巧等，希望能和廣大同行進行交流和學習。2021/6/274

社區(qū)獲得性肺炎社區(qū)獲得性肺炎（community-acquiredpneumonia,CAP）是指在非醫(yī)院環(huán)境中受感染因子侵襲所發(fā)生的肺部炎癥，以及住院后48小時內或特殊病原菌在潛伏期10天內所患肺炎，又稱院外獲得性肺炎。CAP的發(fā)病率為4.7%-11.6%，其中22%-51%的CAP需住院治療；住院CAP死亡率7%，重癥CAP死亡率29%。2021/6/275社區(qū)獲得性肺炎的分類

（一）細菌性肺炎

1.需氧革蘭染色陽性球菌，如肺炎鏈球菌（即肺炎球菌）、金黃色葡萄球菌、甲型溶血性鏈球菌等。

2．需氧革蘭染色陰性菌，如肺炎克雷白桿菌、流感嗜血桿菌、埃希大腸桿菌、綠膿桿菌、軍團菌等。

3．厭氧桿菌如棒狀桿菌、梭形桿菌等。2021/6/276社區(qū)獲得性肺炎的分類（二）病毒性肺炎如腺病毒、呼吸道合胞病毒、流感病毒、麻疹病毒等。（三）支原體肺炎由肺炎支原體引起。（四）真菌性肺炎如白色念珠菌、曲菌、放線菌等。（五）其他病原體所致肺炎如立克次體（如Q

熱立克次體）、衣原體（如鸚鵡熱衣原體）、弓形體（如鼠弓形體）、原蟲（如卡氐肺孢子蟲）、寄生蟲（如肺包蟲、肺吸蟲、肺血吸蟲）等。2021/6/277嗜肺軍團菌LP是社區(qū)獲得性肺炎的重要致病菌。在歐洲和北美軍團軍肺炎占社區(qū)獲得性肺炎前3，4位，ICU重癥社區(qū)獲得性肺炎的第三位。對人致病的LP有16個血清型，軍團菌肺炎8O%由LP1引起。美國每年新發(fā)軍團菌肺炎病例1萬例，我國各省市均有散發(fā)病例報告。夏秋季為軍團菌肺炎流行高峰季節(jié)，散發(fā)病例全年均有發(fā)生。2021/6/278嗜肺軍團菌人感染軍團菌主要是通過吸入被軍團菌污染的氣溶膠而導致的，氣溶膠是軍團菌傳播、感染的重要載體。目前尚無人—人之間直接接觸傳播軍團菌病的報道。與其他介水傳播疾病不同的是軍團菌沒有糞－口傳播途徑，人們也不會由于飲用了含有軍團菌的水而感染。2021/6/279嗜肺軍團菌

軍團菌病因其無典型臨床特征，很難與其他病原體所致的肺炎相區(qū)別，又因其多系統(tǒng)受累還需與相關疾病鑒別，故臨床診斷比較困難，早期常被誤診，導致病死率較高。因此早期診斷對于疾病的轉歸具有重要的意義。應結合流行病學資料、臨床表現(xiàn)和實驗室檢查結果進行綜合分析。治療建議使用紅霉素治療2021/6/27102021/6/2711肺炎支原體是介于病毒與細菌之間的一種沒有細胞壁的病原體40%的非典型肺炎病例是由肺炎支原體引起的，同時由多達18%的住院病例是兒童。發(fā)病率高發(fā)于5到15周歲之間。肺炎支原體感染最嚴重的結果是導致肺炎。兒童最典型的癥狀是氣管、支氣管炎。建議使用大環(huán)內脂類抗菌藥物治療2021/6/2712肺炎支原體MP肺炎在全球范圍內均有發(fā)生，有年齡分布特征和季節(jié)高峰等。是各年齡段兒童急性呼吸道感染的常見病原，在我國社區(qū)獲得性肺炎（CAP）中占據(jù)重要地位。兒童社區(qū)獲得性肺炎（CAP）中MP病原可占70%，國外有文獻報道為9.6%-66.7%，在我國流行期間占小兒肺炎總數(shù)的20%-30%，另外有報道CAP患兒MP感染陽性率與年齡關系：0~6月1.21%，~1歲5.08%，~3歲14.23%，~5歲18.95%，~10歲28.13%，>10歲30.27%?？傮w以學齡兒童為主，但現(xiàn)在年幼兒發(fā)病率有所增加。MP主要通過呼吸道飛沫傳播。MP感染暴發(fā)流行多見在一個密閉環(huán)境中，如學校、幼托機構、夏令營等，密切接觸是重要因素。而且臨床癥狀不典型，MP感染重癥病人增多，難治性MP肺炎增多。2021/6/2713肺炎支原體潛伏期約為2～3周，一般起病較緩慢，但亦有急性起病者，常以發(fā)熱、熱型不定、熱程1～3周、多為弛張熱及不規(guī)則發(fā)熱，平均4-5d；刺激性咳嗽為突出表現(xiàn)，有的酷似百日咳樣咳嗽，多見干咳，可咳少量黏稠痰，甚至痰中帶血絲。伴喘息。嬰幼兒起病急、病程長，可表現(xiàn)喘憋、呼吸困難；年長兒可伴咽痛、胸悶、胸痛等癥狀，肺部常在整個病程中無任何陽性體征，這是本病的特點之一。少數(shù)病例呼吸音減弱，雙肺可聞及干濕性音，這些表現(xiàn)常在X線改變之后發(fā)現(xiàn).2021/6/2714肺炎支原體小齡兒童（〈5歲〉中肺炎支原體感染經常無癥狀而消失或只導致輕度呼吸道感染。由于感染后沒有足夠的免疫力存在，會出現(xiàn)需要長時間康復期并不斷加重的再感染（多次）。2021/6/2715肺炎支原體支原體肺炎后遺問題是由于疾病的嚴重損害，致使氣道、肺組織的完全修復已不可能而造成的，已逐漸引起人們的重視。后遺問題最嚴重的是出現(xiàn)彌漫性肺間質纖維化、肺功能衰竭。其他后遺問題還有反復呼吸道感染、支氣管哮喘等。2021/6/27162021/6/2717Q熱立克次體Q熱是由Q熱立克次體引起的全身疾病，會造成發(fā)熱、非典型性肺炎、肝炎或心內膜炎。由于從臨床標本中分離病原體困難，其診斷基于血清學方法。常用的檢測方法是補體結合（CF）和IFA。IgM檢測中IFA是特異性最好的。綿羊，牛和少數(shù)的山羊是人類的主要傳染源。感染的污染物的吸入是人類接觸到Q熱立克次體病菌的主要方式。大部分病例發(fā)于春天或是初夏。

2021/6/2718Q熱立克次體多在宿主細胞空泡內繁殖不含有與變形桿菌X株起交叉反應的X凝集原對實驗室動物一般不顯急性中毒反應對理化因素抵抗力強。在干燥沙土中4～6℃可存活7～9個月，-56℃能活數(shù)年，加熱60～70℃30～60分鐘才能滅活。2021/6/2719Q熱立克次體感染后潛伏期12-39天，突然發(fā)作，伴發(fā)熱、劇烈頭疼、寒顫、嚴重乏力。Q熱的診斷為臨床和實驗室檢查結合。建議使用氯霉素，四環(huán)素類抗生素治療。2021/6/27202021/6/2721肺炎衣原體衣原體是一類嚴格真核細胞內寄生，具有獨特發(fā)育周期，并能通過細菌濾器的原核細胞型微生物。2021/6/2722肺炎衣原體2021/6/2723肺炎衣原體肺炎衣原體極易造成呼吸系統(tǒng)感染，特別是支氣管炎和肺炎。該種屬在呼吸道感染中常見的是肺炎衣原體和鸚鵡熱衣原體。在老年人中發(fā)病率較高，所引起的肺炎占所有肺炎病例的10%。肺炎衣原體感染后無特異性的臨床表現(xiàn)，其診斷主要依靠實驗室診斷。建議使用紅霉素、四環(huán)素或其他大環(huán)內脂類藥物治療。2021/6/27242021/6/2725腺病毒腺病毒對呼吸道、胃腸道、尿道和膀胱、眼、肝臟等均可感染呼吸道感染的典型癥狀是咳嗽、鼻塞和咽炎，同時伴有發(fā)熱、寒戰(zhàn)、頭痛和肌肉痛等，包括以下4種不同的綜合征。1．急性發(fā)熱性咽喉炎通常為嬰兒和兒童發(fā)病，由C組病毒引起，出現(xiàn)咳嗽，鼻塞、發(fā)熱和咽喉部潰瘍等癥狀，這些表現(xiàn)難以與其他病毒引起的輕型呼吸道感染鑒別。2．咽結膜熱（pharyngoconjunctivalfever）癥狀與急性發(fā)熱性咽喉炎相似，但常同時發(fā)生結膜炎。咽結膜熱有暴發(fā)流行傾向，如游泳池結膜炎，多由B組腺病毒3和7型所致，愈后尚好，一般無后遺癥。2021/6/2726腺病毒3．急性呼吸道疾?。╝cuterespiratorydiseases，ARD）這一綜合征由咽炎、發(fā)熱、咳嗽和全身不適為特點，常在軍隊的新兵中流行，多因突然緊張、勞累、聚集等所致。此感染多由腺病毒4、7型引起，也可見于3型。4、腺病毒肺炎約占兒童期肺炎的10%，多由腺病毒3、7型引起；在青年人腺病毒肺炎的病死率為8%～10%；肺炎也是新兵急性呼吸道疾病的一種嚴重表現(xiàn)。2021/6/2727腺病毒腺病毒是一種重要的呼吸道病原體，可引起低齡兒童的肺炎和細支氣管炎。在集體兒童機構中往往同時發(fā)生腺病毒上呼吸道感染及肺炎。腺病毒肺炎80%發(fā)生于7～24月嬰幼兒。腺病毒肺炎約占病毒性肺炎的20%～30%。

建議抗病毒藥物治療并注意繼發(fā)細菌感染的防治。

2021/6/27282021/6/2729呼吸道合胞病毒呼吸道合胞病毒是導致嬰幼兒下呼吸道感染的重要原因，大約有65%的1歲兒童感染了呼吸道合胞病毒，幾乎所有兒童在2歲時至少感染過1次，呼吸道合胞病毒感染引發(fā)的支氣管炎的住院兒童可增加其以后發(fā)生反復喘息和哮喘的風險，而且，感染后機體獲得的免疫反應維持時間不長，仍可再次感染。2021/6/2730呼吸道合胞病毒呼吸道合胞病毒是一種RNA病毒，屬于副粘液病毒。感染后臨床癥狀不典型。建議抗病毒治療，重癥病人可以使用三氮唑核苷做霧化治療。2021/6/27312021/6/2732流感病毒該病毒呈季節(jié)性周期性流行爆發(fā)（12月-4月）甲型流感的流行每年都會發(fā)生。乙型流感的流行只在每3-6年爆發(fā)一次，感染人數(shù)超過總人口的25%。流感病毒降低了人體抵御呼吸道感染的能力，因此流感經常會造成繼發(fā)性感染。建議使用干擾素、金剛烷胺、奧司他韋等藥物進行治療。2021/6/27332021/6/27342021/6/2735副流感病毒副流感病毒1、2和3型在2-4歲兒童中能引起喉氣管支氣管炎（哮吼）。血清3型是引起1歲以下兒童肺炎的重要病原體，且具有流行性；血清1型和血清2型常與哮吼有關。建議使用病毒唑、雙黃蓮抗病毒治療。2021/6/27362021/6/2737診斷總則對于肺炎的診斷，血清學檢測是所有實驗室診斷的一部分，其他診斷還包括培養(yǎng)和抗原或核酸檢測。每種方法都是對其它診斷方法的一種證實和有效的確認。像肺炎這樣難以診斷的臨床病例，應該使用不同的診斷方法同時檢測，以獲得最佳的診斷結果，各種方法之間是一種互補的關系。2021/6/2738檢測原理2021/6/2739載玻片2021/6/2740檢測注意事項1.試劑復溫2.血清IGG吸附3.加樣4.溫育5.熒光二抗6.封片2021/6/2741檢測注意事項檢測結果出現(xiàn)假陰現(xiàn)象：（1）檢查陰陽性對照實驗結果，以確認試劑盒是否在有效期；（2）檢查實驗記錄，是否嚴格按照操作規(guī)程，是否漏加、錯加酶結合物或樣本；（3）是否洗滌時正對孔沖洗、水流過猛，使固相化的復合體被沖洗掉；（4）加樣量、反應時間、溫度不夠；（5）沒有及時觀察結果或判斷有誤。

2021/6/2742檢測注意事項檢測結果出現(xiàn)假陽性現(xiàn)象：（1）加樣時操作不規(guī)范造成加樣污染；（2）洗滌時發(fā)生交叉污染或洗滌不徹底；

（3）檢查實驗記錄，是否嚴格按照操作規(guī)程，是否忘記加IgG吸附劑；

（4）判斷有誤；

（5）試劑盒過期2021/6/2743抗原抗體檢測IgMIgG2021/6/2744病原體潛伏期IgM抗體產生時間病原體潛伏期IgM產生時間Igm存在時間嗜肺軍團菌2-10天1周左右3-6個月肺炎支原體14-21天1周左右3-6個月Q熱立克次體12-19天2周左右3-4個月肺炎衣原體30天左右2-3周2-6個月腺病毒2-14天1周左右2-3個月呼吸道合胞3-7天1周左右2-3個月流感病毒1-7天1周左右2-3個月副流感2-7天1周左右2-3個月2021/6/2745試劑性能指標靈敏度和特異性：驗證方法：方法學對比；靈敏度：檢測感染樣本的陽性率

DS(%)=(TP/TP+FN)x100；特異性：檢測未感染樣本的陰性率

ED(%)=(TN/TN+FP)x100；2021/6/2746對比試劑及樣本數(shù)量病原體方法廠家腺病毒ELISAVirotech立克次體IFABiomerieux衣原體IFAFOCUS甲型流感病毒ELISAVirotech乙型流感病毒