動(dòng)物實(shí)驗(yàn)技術(shù)課件

12醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)前言一個(gè)、兩個(gè)中心

主題3一個(gè)中心標(biāo)準(zhǔn)化4標(biāo)準(zhǔn)化動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)化5實(shí)驗(yàn)動(dòng)物動(dòng)物實(shí)驗(yàn)兩個(gè)主題6動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn)化飼養(yǎng)管理（生產(chǎn)）營養(yǎng)基礎(chǔ)疾病預(yù)防根本選種,育種關(guān)鍵質(zhì)量控制遺傳控制微生物,寄生蟲控制環(huán)境控制營養(yǎng)控制7實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)條件8910動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的要求..1、科學(xué)性2、經(jīng)濟(jì)性3、倫理性11科學(xué)性要求

標(biāo)準(zhǔn)化的動(dòng)物

標(biāo)準(zhǔn)化的實(shí)驗(yàn)條件

標(biāo)準(zhǔn)化的操作規(guī)程12經(jīng)濟(jì)性要求

動(dòng)物的選擇實(shí)驗(yàn)方法的選擇13倫理性要求動(dòng)物福利3R原則14

第一講實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備內(nèi)容:1、實(shí)驗(yàn)條件的準(zhǔn)備3、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的準(zhǔn)備15第一節(jié)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)條件的準(zhǔn)備一．

動(dòng)物飼養(yǎng)條件的準(zhǔn)備動(dòng)物實(shí)驗(yàn)過程中，需要一個(gè)觀察動(dòng)物反應(yīng)的飼養(yǎng)場(chǎng)所，既動(dòng)物觀察室。不同等級(jí)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，需要不同環(huán)境條件的動(dòng)物觀察室。

16（一）普通動(dòng)物實(shí)驗(yàn)觀察室環(huán)境設(shè)施條件要求

環(huán)境特點(diǎn):1、開放系統(tǒng)2、環(huán)境和微生物控等級(jí)較低3、不能完全控制傳染因子。17（二）清潔動(dòng)物實(shí)驗(yàn)觀察室環(huán)境設(shè)施條件要求環(huán)境特點(diǎn)：

1、屏障或半屏障系統(tǒng)

2、所有實(shí)驗(yàn)用品經(jīng)滅菌處理

3、實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)出要嚴(yán)格按屏障系統(tǒng)操作規(guī)程操作必需設(shè)備：超凈工作臺(tái)18

(三）SPF級(jí)以上動(dòng)物實(shí)驗(yàn)觀察室環(huán)境設(shè)施條件要求環(huán)境特點(diǎn)：

1、屏障系統(tǒng)或隔離系統(tǒng)。2、所有實(shí)驗(yàn)用品經(jīng)嚴(yán)格滅菌處理。

3、實(shí)驗(yàn)人員要嚴(yán)格按隔離系統(tǒng)操作規(guī)程操作。19清潔級(jí)和SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)飼養(yǎng)設(shè)施1、屏障系統(tǒng)飼養(yǎng)室2、空氣層流架和IVC系統(tǒng)3、有過濾帽的飼養(yǎng)盒20二、實(shí)驗(yàn)場(chǎng)地的準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)操作室細(xì)胞培養(yǎng)室其他特殊觀察室……21三、實(shí)驗(yàn)藥品、試劑的準(zhǔn)備22四、實(shí)驗(yàn)器械的準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)器械準(zhǔn)備得充分、適當(dāng)，有助于實(shí)驗(yàn)的順利完成。不同類型、部位的實(shí)驗(yàn)使用的實(shí)驗(yàn)器械種類、數(shù)量不盡一致。23

（一）實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備根據(jù)實(shí)驗(yàn)的目的、要求、內(nèi)容不同而不同。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)檢查是否準(zhǔn)備就緒。24252627一．

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)理論知識(shí)的準(zhǔn)備（一）了解實(shí)驗(yàn)用動(dòng)物的基礎(chǔ)知識(shí)實(shí)驗(yàn)用動(dòng)物包括實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、家畜家禽及部分野生動(dòng)物。特別是要熟悉動(dòng)物的生物學(xué)特性，解剖生理結(jié)構(gòu)，這對(duì)開展動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究是十分有益的。2829二、實(shí)驗(yàn)技能的準(zhǔn)備全程預(yù)試驗(yàn)：演習(xí)整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程預(yù)試驗(yàn)..30

第三節(jié)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇是醫(yī)學(xué)研究中首要考慮的問題。選擇恰當(dāng)與否關(guān)系到課題的質(zhì)量，經(jīng)費(fèi)開支，研究途徑及方法的簡繁，甚至影響到課題的成敗及研究結(jié)果的正確性。31一．

選擇原則（一）相似性原則

在醫(yī)學(xué)研究中選用那些生物學(xué)特性和解剖生理特點(diǎn)與人類相似的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物更具有實(shí)際意義。321、結(jié)構(gòu)和功能的相似性在可能的情況下，盡量選用那些生物學(xué)特性和解剖生理特點(diǎn)與人類相似的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。一般說來，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物愈高等，進(jìn)化程度愈高，其機(jī)能、代謝、結(jié)構(gòu)愈復(fù)雜，反應(yīng)就愈接近人類。332、年齡狀態(tài)的相似性

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的壽命與人具有很大的差異，但都可以找到與人的生長發(fā)育階段相對(duì)應(yīng)的時(shí)期。343、群體分布的相似性

人類群體屬于自然分布群體類型。在以群體為研究對(duì)象的課題中，要考慮選擇與人類群體基因型及表現(xiàn)型分布類型相似的動(dòng)物。35生態(tài)或健康狀況的相似性在動(dòng)物的遺傳、環(huán)境和營養(yǎng)控制相同的情況下，其微生物控制和健康狀況對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響就非常重要。

一般無菌動(dòng)物是飼養(yǎng)在超常生態(tài)環(huán)境條件的動(dòng)物，用于一些特殊的研究。

SPF動(dòng)物和清潔動(dòng)物是飼養(yǎng)在健康生態(tài)環(huán)境條件下的動(dòng)物，用于多數(shù)科學(xué)研究。

365.疾病特點(diǎn)的相似性實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有許多自發(fā)或誘發(fā)性疾病能局部或全部地反映與人類類似的疾病過程和特點(diǎn)，可用于研究相關(guān)的人類疾病。

37小香豬38（二）特殊性原則

1、動(dòng)物解剖、生理的特殊性

不同種系的動(dòng)物的解剖生理特征既有共性又存在差異，充分利用這些共性和差異，并符合實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊螅潜ＷC實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵。392、對(duì)刺激反應(yīng)的特殊性不同種系的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物對(duì)相同因素的刺激反應(yīng)既有共同性的一面，也存在一些特殊反應(yīng)，同樣的刺激對(duì)一些動(dòng)物敏感，但對(duì)另外一些動(dòng)物可能不敏感。因此在實(shí)驗(yàn)研究中選用那些有特殊反應(yīng)、對(duì)實(shí)驗(yàn)研究敏感的動(dòng)物作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，也是保證實(shí)驗(yàn)成功的重要因素。40（三）標(biāo)準(zhǔn)化原則

標(biāo)準(zhǔn)化原則是指動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中選擇與課題研究的目的、內(nèi)容、水平相匹配的標(biāo)準(zhǔn)化的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。只有選用經(jīng)微生物、寄生蟲學(xué)、遺傳學(xué)、環(huán)境及營養(yǎng)控制的標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，才能排除生物因素、遺傳因素、環(huán)境及營養(yǎng)因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的干擾。41（四）規(guī)格化原則

規(guī)格化原則是指選擇與實(shí)驗(yàn)要求一致的動(dòng)物規(guī)格。動(dòng)物的規(guī)格是指對(duì)動(dòng)物在年齡、體重、性別、生理及健康狀況等量和質(zhì)的規(guī)定。同種動(dòng)物不同的規(guī)格對(duì)外界刺激的反應(yīng)存在差異。421、不同的動(dòng)物年齡，有不同的生物學(xué)特性，對(duì)實(shí)驗(yàn)刺激的反應(yīng)也隨著年齡的不同而有明顯變化。2．

標(biāo)準(zhǔn)化的健康實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的體重與年齡一般呈正相關(guān)，選擇動(dòng)物時(shí)，可按體重選擇。年齡

體重433．

同種動(dòng)物不同性別對(duì)外界刺激的反應(yīng)不一致。因此，一般而言，實(shí)驗(yàn)若對(duì)動(dòng)物性別無特殊要求，則宜選用雌雄各半。以避免由性別差異造成的差異。4

、動(dòng)物不同的生理狀態(tài)，機(jī)體對(duì)某些刺激的反應(yīng)有較大的差異。性別

生理和健康狀況

44（五）

經(jīng)濟(jì)性原則

經(jīng)濟(jì)原則是指在不影響實(shí)驗(yàn)質(zhì)量的前提下，盡量選用容易獲得、價(jià)格便宜和飼養(yǎng)經(jīng)濟(jì)的動(dòng)物。45二．

常用試驗(yàn)中動(dòng)物的選擇46

毒理學(xué)研究中的選擇在試驗(yàn)品毒性試驗(yàn)研究中，選擇何種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物取決于該動(dòng)物對(duì)試驗(yàn)品的反應(yīng)，以及試驗(yàn)品在該動(dòng)物體內(nèi)的吸收、分布、代謝和排泄與人類的異同程度。因此，作動(dòng)物實(shí)驗(yàn)時(shí)，選擇動(dòng)物應(yīng)當(dāng)注意以下幾個(gè)方面的問題。471、不同種屬的動(dòng)物對(duì)試驗(yàn)品的毒性反應(yīng)有質(zhì)與量的區(qū)別。同一試驗(yàn)品對(duì)不同種屬動(dòng)物的毒性反應(yīng)是有差異的，甚至有本質(zhì)的不同。因此在毒理研究中，選擇動(dòng)物時(shí)，應(yīng)至少選擇兩種動(dòng)物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)且種屬差異越大越好。一般應(yīng)選擇一種嚙齒類動(dòng)物和一種大動(dòng)物。482、通常情況下，動(dòng)物的進(jìn)化程度愈高，對(duì)試驗(yàn)品毒性反應(yīng)愈敏感。493、在選擇動(dòng)物規(guī)格方面，選擇未成年的動(dòng)物、雌雄各半較為合適（對(duì)年齡有特殊要求的除外）。生長期動(dòng)物對(duì)毒性反應(yīng)比老年動(dòng)物敏感。動(dòng)物的性別不同對(duì)試驗(yàn)品的毒性反應(yīng)存在差異。50二．

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的購入

在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的各項(xiàng)準(zhǔn)備工作中，動(dòng)物的購入是一個(gè)重要的環(huán)節(jié)。在購入動(dòng)物前，應(yīng)確定購入動(dòng)物的種類、品系、規(guī)格、數(shù)量及動(dòng)物微生物控制等級(jí)等。購入動(dòng)物時(shí)應(yīng)注意以下幾個(gè)方面的問題。511、購入或領(lǐng)取動(dòng)物前，應(yīng)檢查各項(xiàng)準(zhǔn)備工作是否就緒，如飼養(yǎng)動(dòng)物的器具、器材是否準(zhǔn)備好，飼養(yǎng)室的衛(wèi)生和消毒情況；此外，還應(yīng)檢查動(dòng)物的籠卡、實(shí)驗(yàn)記錄本、墊料、飼料、秤等實(shí)驗(yàn)必須品是否準(zhǔn)備好。52

2、購入動(dòng)物時(shí)，應(yīng)向供應(yīng)單位及時(shí)索取動(dòng)物的遺傳背景、微生物背景、質(zhì)量合格證、動(dòng)物的年齡、體重等資料。533、購入動(dòng)物時(shí)，無論運(yùn)輸距離的遠(yuǎn)近，都應(yīng)考慮運(yùn)輸環(huán)境的溫度、濕度、飲食以及途中污染和窒息死亡等問題。54555、新購進(jìn)的動(dòng)物不能直接進(jìn)入動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室，應(yīng)將動(dòng)物雌雄分開，并分籠在隔離區(qū)飼養(yǎng)一段時(shí)間，以便動(dòng)物得以恢復(fù)體能并適應(yīng)新的環(huán)境。566、無論購入何種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，都應(yīng)同時(shí)購入相應(yīng)數(shù)量的飼料和墊料。57三、動(dòng)物模型準(zhǔn)備58（一）

概念

人類疾病動(dòng)物模型是指醫(yī)學(xué)研究中建立的具有人類疾病表現(xiàn)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)對(duì)象和相關(guān)材料。

使用動(dòng)物模型是當(dāng)代生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、藥學(xué)研究中一種便于認(rèn)識(shí)客觀事物的實(shí)驗(yàn)方法和手段。通過模型的研究可以有意識(shí)地改變那些在自然條件下不可能或不容易排除的因素，以觀察模型的反應(yīng)。59

（二）使用動(dòng)物模型的意義

1、

避免在人身上進(jìn)行實(shí)驗(yàn)所帶來的

風(fēng)險(xiǎn)。如：外傷、中毒、腫瘤和輻射病等。

602、應(yīng)用動(dòng)物模型可以隨時(shí)復(fù)制的特點(diǎn)，得到平時(shí)臨床上不易見到的疾病。

如：放射病、毒氣中毒、烈性傳染病、戰(zhàn)傷等。613、用動(dòng)物提供的模型可以克服人類某些疾病的潛伏期長，病程長和發(fā)病率低的缺點(diǎn)。

潛伏期長的疾?。耗[瘤、慢性氣管炎、動(dòng)脈粥樣硬化、遺傳病等。

發(fā)病率低的疾?。好庖咝?、代謝性、內(nèi)分泌和血液病等。624、

可以嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件，排除各種干擾。

臨床上疾病較復(fù)雜，影響因素多，如：身患多種疾病、病人的年齡、性別、體重、遺傳、生活地區(qū)和規(guī)律，營養(yǎng)狀況等各不相同。動(dòng)物復(fù)制的疾病模型，可以選擇相同品種、品系、性別、年齡、體重，以及相同的質(zhì)量控制和飼養(yǎng)條件等。635、

樣品收集方便。

收集動(dòng)物疾病模型的樣品不受時(shí)間和條件的限制，可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要隨時(shí)采集。64

（三）

動(dòng)物模型的分類1、

按產(chǎn)生的原因分類..（1）誘發(fā)性或?qū)嶒?yàn)性動(dòng)物模型

（ExperimentalAnimalModels）（2）自發(fā)性動(dòng)物模型（SpontaneousAnimalModels）（3）轉(zhuǎn)基因和基因敲除動(dòng)物模型(Transgenicanimal,geneknock-outanimal)65誘發(fā)性或?qū)嶒?yàn)性動(dòng)物模型：

是指實(shí)驗(yàn)者使用物理的、化學(xué)的和生物的致病因素作用于動(dòng)物造成動(dòng)物組織、器官或全身一定的損害，出現(xiàn)某些類似人類疾病時(shí)的功能、代謝障礙或形態(tài)結(jié)構(gòu)方面的病變。物理因素

:化學(xué)因素：生物因素：復(fù)合因素：

多種因素誘導(dǎo).67自發(fā)性動(dòng)物模型：

是指在自然情況下所形成的疾病模型或者經(jīng)有意識(shí)的人工處置發(fā)生的疾病，并能穩(wěn)定遺傳給后代的疾病模型。包括人工培育的突變系和近交系的各種疾病模型。如：無胸腺裸鼠、高血壓大鼠、肥胖癥小鼠等。68

需要指出：1、以上兩種動(dòng)物模型各有其優(yōu)缺點(diǎn)。其優(yōu)缺點(diǎn)只是相對(duì)的。2、很多疾病模型可用不同方式獲得。693、不同方法復(fù)制的動(dòng)物模型在發(fā)病機(jī)理和

疾病內(nèi)在特征方面存在著各自的特點(diǎn)。4、大部分自發(fā)性動(dòng)物模型是通過人為定向培育而成的，與人類自然發(fā)生的疾病在很多方面有差異。70712、

按實(shí)驗(yàn)所用對(duì)象分類..（1）整體動(dòng)物模型（2）

離體器官，組織動(dòng)物模型（3）細(xì)胞株動(dòng)物模型72

（四）

動(dòng)物模型的設(shè)計(jì)原則

1、

相似形

人類疾病動(dòng)物模型應(yīng)盡可能地相似于人類疾病。如：大鼠的自發(fā)性高血壓。

復(fù)制動(dòng)物模型時(shí)，應(yīng)注意動(dòng)物的選擇732、

重復(fù)性

理想的動(dòng)物模型應(yīng)該是可以重復(fù)的。保證動(dòng)物模型具有重復(fù)性的措施..

（1）選用標(biāo)準(zhǔn)化的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物（2）選用標(biāo)準(zhǔn)化的實(shí)驗(yàn)設(shè)施（3）保證復(fù)制因素的一致性743、

可靠性

復(fù)制的動(dòng)物模型應(yīng)可靠地反映人類疾病，疾病的主要癥狀和體征明顯，不能出現(xiàn)與實(shí)驗(yàn)無關(guān)的疾病。

注意動(dòng)物的選擇和動(dòng)物的質(zhì)量754、

適用性和可控性

疾病模型應(yīng)盡量考慮在今后臨床上的應(yīng)用和便于控制其發(fā)展，以利于研究。如：雌激素終止大、小鼠早期妊娠的模型無實(shí)用性。動(dòng)物+制模因子=結(jié)果散發(fā)或死亡無法控制模型的發(fā)展方向和速度，無價(jià)值。

765、

易行性和經(jīng)濟(jì)性

復(fù)制動(dòng)物模型應(yīng)盡量做到方法簡單、容易，合乎經(jīng)濟(jì)的原則。77（五

）影響動(dòng)物模型制作的因素78

1、致模因素對(duì)動(dòng)物模型復(fù)制的影響：

致摸因素的劑量及在相關(guān)動(dòng)物上的反應(yīng)影響動(dòng)物模型的復(fù)制。

因此造模時(shí)應(yīng)注意..（1）致模因素的選擇

（2）致模因素的劑量（3）致模因素與模型的相關(guān)信息792、動(dòng)物因素對(duì)動(dòng)物模型復(fù)制的影響

（1）動(dòng)物種類的影響（2）

動(dòng)物品系的影響

（3）

年齡和體重的影響（4）性別因素的影響（5）

生理狀態(tài)和健康因素影響80動(dòng)物種類的影響：

不同種的動(dòng)物存在許多不同的特點(diǎn)，動(dòng)物種類選擇不當(dāng)將影響動(dòng)物模型的復(fù)制。

81動(dòng)物品系的影響：

同種不同品系的動(dòng)物對(duì)致模因素的反應(yīng)不一致。82年齡和體重的影響：動(dòng)物的壽命差異較大，解剖生理特征和反應(yīng)隨年齡而明顯變化，一般幼齡動(dòng)物比成年動(dòng)物敏感，應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求，選擇相應(yīng)年齡的動(dòng)物復(fù)制模型（健康動(dòng)物年齡與體重有相關(guān)性）。83性別因素的影響：

同種、同品系，不同性別的動(dòng)物，對(duì)某些反應(yīng)不一致。84生理狀態(tài)和健康因素影響:

動(dòng)物處在不同的生理狀態(tài)和不同的健康狀況對(duì)致模因素的反應(yīng)差異很大。如：肝功能衰竭動(dòng)物模型，不能選用患嚴(yán)重球蟲病的家兔，因球蟲病影響肝功能。8586（2）晝夜不同的影響實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的體溫、血糖、基礎(chǔ)代謝的、內(nèi)分泌等隨晝夜的不同呈有節(jié)律的變化，在復(fù)制模型時(shí)要注意晝夜不同對(duì)模型的影響。87（3）麻醉深度的影響不同的麻醉藥、劑量對(duì)動(dòng)物麻醉效果有差異，這種差異會(huì)影響模型的復(fù)制。8889（5）實(shí)驗(yàn)給藥的影響給藥途徑、劑量和熟練程度不同會(huì)對(duì)造模產(chǎn)生影響。90（6）對(duì)照組對(duì)造模的影響對(duì)照是檢測(cè)模型是否成功的重要手段。914、環(huán)境、營養(yǎng)因素對(duì)復(fù)制動(dòng)物模型的影響

環(huán)境因素是影響造模及其實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重要因素，居住條件、光照、噪聲、氨濃度、溫度、濕度、氣流速度等任何一項(xiàng)都不容忽視.

營養(yǎng)因素對(duì)復(fù)制動(dòng)物模型，特別是長期實(shí)驗(yàn)，影響顯著，應(yīng)予以重視。造模過程中應(yīng)注意給水量充分和給予符合衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的飲水。92（六）動(dòng)物模型的制作1、制模前的準(zhǔn)備工作。2、制模動(dòng)物的選擇。3、制模材料的選擇。4、制模方法的確定。5、制模環(huán)境的確定。準(zhǔn)備就緒，開始制模。93949596一、小鼠（一）、抓取

用右手拇指和食指的指腹抓住尾部中央提起或用兩手捧起。97（二）、固定1、徒手固定（1）將小鼠提起放在飼養(yǎng)盒蓋子上，輕輕向后拉住。（2）用左手拇指和食指抓住頸、背部中央皮膚。

98（3）翻轉(zhuǎn)抓住頸背部的左手，右手拉住鼠尾再用左手的小指壓住尾根部，使整個(gè)小鼠呈一條直線。992、固定板（器）固定

（1）將小鼠麻醉后，用細(xì)繩捆住小鼠四肢。（2）準(zhǔn)備一個(gè)15-20cm，邊緣釘有5個(gè)釘子的方木板。（3）將四肢用細(xì)繩固定在木版兩側(cè)的釘子上，在上顎切齒處用細(xì)繩固定在木版前方的釘子上。100101二、大鼠和地鼠（一）抓取

1、

周齡較小的大鼠和地鼠，可以像小鼠一樣抓住尾部提起。

1022、周齡較大的大鼠可張開左手虎口，迅速將拇、食指插入大鼠的腋下，虎口向前，其余三指及掌心握住大鼠身體中段，并將其保持仰臥位，然后調(diào)整左手拇指的位置，緊抵在下頜骨上即可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。103注意：

操作者第一次抓取大鼠時(shí)，最好戴防護(hù)手套；不能捉提尾尖，也不能長時(shí)間將大鼠懸在空中。

104（二）固定1、徒手固定：對(duì)體重較小的大鼠可用拇指、食指捏住大鼠耳部及頸部皮膚，余下三指緊捏住背部皮膚，置于掌心，調(diào)整好大鼠在手中的姿勢(shì)即可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。如：灌胃、腹腔注射、肌肉注射、皮下注射等實(shí)驗(yàn)。1052、固定板固定：方法與小鼠固定板固定相同，只是需選擇更大一些的固定板。3、

固定器（盒）固定：方法與小鼠固定器（盒）固定相同，只是固定器較小鼠的大。同樣適用于大鼠尾靜脈注射。

106三、豚鼠（一）抓取

抓取幼齡豚鼠時(shí)，用兩手捧起；成熟豚鼠可以用左手大把抓起。107

注意：

豚鼠性情溫和，一般不傷人，但膽小易驚，易造成自傷。抓取時(shí)，不能太粗野，更不能抓腰腹部，在操作過程中，如果豚鼠掙扎，手不要越握越緊，否則會(huì)造成豚鼠呼吸困難，甚至死亡。108（二）固定1、徒手固定：用左手的食指和中指放在豚鼠頸背部兩側(cè)，拇指和無名指放在肋部，分別用手指挾住左右前肢抓起，然后反轉(zhuǎn)左手，用右手的拇指和無名指挾住右后肢，用中指和無名指挾住左后肢，使鼠體成為一條直線。1092、固定板（器）固定：與大、小鼠，豚鼠固定板固定基本一致。

110四、實(shí)驗(yàn)兔（一）抓取抓住頸背部皮膚及兩耳提起，并用左手托住兔腹部或臀部，使其重量主要落在左手上。

111

注意：

家兔溫順，一般不會(huì)咬人，但腳爪較銳利，要防止被抓傷。另外抓取時(shí)不能只提兔耳或四肢，也不能用單手只抓頸背部皮膚。112（二）固定1、徒手固定：用一只手抓住兔的頸背部皮膚，另一只手抓住兔的兩后肢，固定在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上。113

也可以坐在椅子上用一手抓住兔頸背皮膚和兩耳，大腿挾住兔的后半身，用另一只手抓住兩前肢將兔固定。此固定方法適用于腹腔、肌肉注射，及經(jīng)口給藥。1142、固定盒固定：此固定方法適用于頭、耳部位實(shí)驗(yàn)。115116五、實(shí)驗(yàn)犬（一）抓取

對(duì)未經(jīng)馴服和調(diào)教的外購犬抓取時(shí)，可用特制的長柄鐵鉗夾住犬的頸部，由另一人用布帶或粗繩縛其嘴，并將布帶、繩固定在狗耳后頸部，防止脫落。

注意：

狗性情兇惡、咬人，特別是對(duì)陌生人有攻擊性。對(duì)剛購入的狗要特別小心，避免被其咬傷。在縛嘴時(shí)，動(dòng)作要迅速，捆綁松緊要適中。

117（二）固定實(shí)驗(yàn)臺(tái)固定：用特制的長柄鐵鉗夾住犬的頸部后，麻醉動(dòng)物。將麻醉的犬放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，再用粗棉帶（繩）固定四肢于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上。并將犬舌拉出。此固定方法仰臥位適用于口腔、頸、胸、腹、四肢等部位的實(shí)驗(yàn)，俯臥位適用于腦、背部位的實(shí)驗(yàn)。

118119

不管采用哪種抓取與固定方法，都應(yīng)遵守的基本原則是：1.保證實(shí)驗(yàn)人員的安全。2.防止動(dòng)物意外損傷，禁止采取粗暴的動(dòng)作。因此在抓取與固定動(dòng)物時(shí)，應(yīng)了解動(dòng)物的生活習(xí)性，生理解剖結(jié)構(gòu)，體重、體型，實(shí)驗(yàn)內(nèi)容確定動(dòng)物的抓取與固定方法。120第二節(jié)

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的編號(hào)與標(biāo)記動(dòng)物實(shí)驗(yàn)時(shí)，當(dāng)使用的動(dòng)物數(shù)或?qū)嶒?yàn)分組數(shù)大于1時(shí)，需要對(duì)動(dòng)物個(gè)體間或組間區(qū)別開來，就需進(jìn)行編號(hào)與標(biāo)記。因此編號(hào)與標(biāo)記的目的就是動(dòng)物個(gè)體與組別的識(shí)別。SD大鼠121

標(biāo)記的方法很多，良好的標(biāo)記方法應(yīng)滿足：號(hào)碼清楚、持久、簡便易認(rèn)和適用，不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，對(duì)動(dòng)物的刺激小，標(biāo)記物對(duì)動(dòng)物無毒性。編號(hào)方法無定法，原則是使實(shí)驗(yàn)者能夠識(shí)別動(dòng)物個(gè)體和組別?，F(xiàn)介紹幾種常用的標(biāo)記和編號(hào)方法。122染色法（一）染色法：是用化學(xué)試劑在動(dòng)物身體明顯部位如被毛、四肢等處進(jìn)行涂染，以涂染的部位或顏色來區(qū)別不同個(gè)體、組別，是動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中最常用、最容易掌握的方法。123家兔針刺法（二）針刺法：用人工針刺的方法，在動(dòng)物無體毛或明顯部位，如耳、面鼻和四肢部位，拔去被毛，人工針刺號(hào)碼，刺后涂以酒精黑墨即可。此方法適用于兔及大、中型動(dòng)物。124（三）打耳孔法：用動(dòng)物編號(hào)的耳孔機(jī)直接在動(dòng)物耳朵上打孔或打成缺口編號(hào)，也可用剪刀將耳緣成缺口，根據(jù)孔或缺口的位置、數(shù)量來標(biāo)記動(dòng)物個(gè)體的方法。常用于實(shí)驗(yàn)豬的標(biāo)記。125（四）標(biāo)簽號(hào)牌法：用塑料、金屬或木等材料制成號(hào)牌固定在動(dòng)物身體某一部位或飼養(yǎng)圈、籠上，以標(biāo)識(shí)動(dòng)物個(gè)體、組別的方法。如耳標(biāo)簽、戴項(xiàng)圈、戴腳圈等。常用于大動(dòng)物的標(biāo)記。126第三節(jié)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的給藥途徑與方法實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的給藥方法主要有：注射法和胃腸給藥法兩種，此外還有用于皮膚的涂布給藥法和用于呼吸道的吸入給藥法。

裸鼠127一.注射分為：

皮內(nèi)注射、皮下注射、肌肉注射、腹腔注射、靜脈注射、腦膜下注射、腦內(nèi)注射、胸腔內(nèi)注射、腰椎內(nèi)注射、關(guān)節(jié)腔注射和心內(nèi)注射。

在實(shí)驗(yàn)過程中，應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、?dòng)物種類、藥物類型選擇給藥途徑和方法，若是臨床前藥物的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，給藥方法應(yīng)與人的給藥途徑一致。128129130131二.胃腸給藥法分為：

自動(dòng)口服給藥灌胃給藥直腸給藥。132

表常用動(dòng)物一次灌胃能耐受的最大容積*動(dòng)物種類體重（g）最大容積小鼠>301.025-300.820-240.5大鼠>3008.0250-3006.0100-1993.0豚鼠>3006.0家兔>35002002500-35001502000-2400100貓>3000100-1502500-300050-80犬10,000-15,000200-500133134第四節(jié)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血液和尿液的采集一．

動(dòng)物血液的采集方法實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血液的采集方法有很多。（一）按采血部位不同可分為：眼部采血、耳部采血、心臟采血、大血管采血及尾部采血等。

小香豬135（二）按采血使用的手段不同可分為：鼠尾刺血、剪尾采血、眼眶靜脈叢采血、心臟采血、斷頭采血、頸靜（動(dòng)）脈采血、腹主動(dòng)（靜）脈采血、耳緣剪口采血、耳靜脈采血、后肢外側(cè)小隱靜脈、前肢內(nèi)側(cè)皮下頭靜脈采血、翼下采血等。采血時(shí)，應(yīng)根據(jù)動(dòng)物的種類，檢驗(yàn)項(xiàng)目、方法及需采血量確定采血的部位和方法。136137138139140表常用動(dòng)物的最大安全采血量動(dòng)物種類最大安全采血量（ml）最小致死采血量（ml）小鼠0.10.3

大鼠12

豚鼠510

家兔1040

狗50300

猴1560141

二、

尿液采集（一）、

代謝籠采集代謝籠的特點(diǎn)是能將動(dòng)物排泄的大小便分開，達(dá)到采集尿液的目的。此法常用于大鼠、小鼠、豚鼠、兔等中小型動(dòng)物的尿液采集。（二）、導(dǎo)尿法采集在動(dòng)物的尿道或輸尿管內(nèi)插一根塑料導(dǎo)管采集尿液。此法適用于兔、犬、貓等。142第五節(jié)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的麻醉方法

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的麻醉就是用物理或化學(xué)的方法，使動(dòng)物全身或局部暫時(shí)痛覺消失或遲鈍，以利于實(shí)驗(yàn)操作。比格犬143（一）全身麻醉：指麻醉藥通過呼吸道吸入，靜脈、肌肉或腹腔注射，使動(dòng)物產(chǎn)生短時(shí)間的意識(shí)喪失，痛覺消失，肌肉松弛和反射抑制等中樞神經(jīng)系統(tǒng)抑制現(xiàn)象。分為吸入麻醉和注射麻醉。1．吸入麻醉指揮發(fā)性麻醉劑經(jīng)動(dòng)物呼吸道吸入體內(nèi)從而產(chǎn)生麻醉效果的方法。常見的吸入麻醉劑有乙醚。一．麻醉類型及方法實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的麻醉分為全身麻醉和局部麻醉兩種類型。144（1）步驟與方法：

1）

準(zhǔn)備容器:小型實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:5000ml標(biāo)本瓶1個(gè),10ml試管或離心

管1個(gè).如鼠類中型實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:適當(dāng)大小的玻璃箱1個(gè),試管或離心管1個(gè)如貓、兔大體形動(dòng)物:麻醉口罩.如犬

145

2）操作步驟:

放入揮發(fā)性麻醉劑----放入動(dòng)物---密閉4-6分鐘---麻醉---實(shí)驗(yàn)---小容器追加麻醉.

146(2)吸入麻醉的注意事項(xiàng)：A、容器密封性。B、防止麻醉窒息和過量。C、適時(shí)追加麻醉。1472.注射麻醉：通過注射的方法，將麻醉劑注入動(dòng)物的體內(nèi)，使動(dòng)物進(jìn)入麻醉狀態(tài)的方法。常用的注射方法有靜脈注射、肌肉注射和腹腔注射等。1481）準(zhǔn)備器械:注射器（1）步驟與方法：1492).注射麻醉方法：腹腔注射：固定動(dòng)物---頭下位---腹部后1/3

處靠外側(cè)。靜脈注射：固定動(dòng)物---血管---注射

肌肉注射：固定動(dòng)物---肌肉發(fā)達(dá)---注射150(2).注射麻醉的注意事項(xiàng)：

A、腹腔注射時(shí)使動(dòng)物的頭處于低位，使內(nèi)臟向上腹移動(dòng)，可避免注射時(shí)傷及內(nèi)臟。

B、靜脈注射必須緩慢，過快會(huì)引起麻醉意外。

C、肌肉注射應(yīng)在肌肉較發(fā)達(dá)的部位注射，有利于麻醉劑的吸收。腹腔注射、肌肉注射和靜脈注射麻醉動(dòng)物各有優(yōu)缺點(diǎn)，應(yīng)根據(jù)麻醉劑的特性，動(dòng)物解剖特點(diǎn)選擇方法簡單，麻醉效果好的注射方法。151常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物全身麻醉藥及用法和劑量藥物適用動(dòng)物給藥途徑給藥劑量（mg/kg）給藥體積（ml/kg）配制濃度（%）麻醉維持時(shí)間

戊巴比妥鈉大、小鼠腹腔453.8-7.51.2-0.62-4h，中途加1/5量，可延長麻醉時(shí)間1h以上。靜脈30

1.2-0.6豚鼠腹腔40-502.0-2.52靜脈30

犬、貓、兔腹腔40-501.4-1.73靜脈301.03綿羊靜脈30

3山羊靜脈30

3豬靜脈15

3猴靜脈35

3

152速眠新ml/kg大、小鼠肌肉

0.3-0.8

1h-2h兔肌肉

0.2-0.3

雜種犬肌肉

0.1-0.15

純種犬肌肉

0.04-0.08

豬肌肉

0.1-0.15

羊肌肉

0.1-0.15

硫噴妥鈉小鼠腹腔50

115-30min靜脈25

1大鼠、地鼠腹腔405-101靜脈205-101豚鼠腹腔55

靜脈20

犬靜脈20-251.3-2.52貓靜脈281.3-2.52兔靜脈201.3-2.52豬〈45kg靜脈9-10

2豬〉45kg靜脈5

2猴靜脈25

腹腔60

153鹽酸氯胺酮大、小鼠肌肉、腹腔22-44

10-20min貓、犬、猴肌肉10-40

豬肌肉10-15

氨基甲酸乙脂（烏拉坦大、小鼠肌肉、腹腔13507．020-252-4h兔、貓、犬靜脈750-10003-425直腸15006．025乙醚各種動(dòng)物吸入

154兔155156157

常用的脫毛劑配方：⑴配方1：硫化鈉8g溶于100ml水中。⑵配方2：硫化鈉∶肥皂粉∶淀粉的比例為

3∶1∶7，加水調(diào)成糊狀。⑶配方3：硫化鈉10g加生石灰15g溶于100ml

水中。⑷配方4：硫化鈉8g、淀粉7g、糖4g、甘油

5g、硼紗1g、水75g，共100g，調(diào)成糊狀。158159160161162163164165第七節(jié)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的處死方法C57小鼠166處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物應(yīng)遵循動(dòng)物安樂死的基本原則。

安樂死是從人道主義和動(dòng)物保護(hù)角度，在不影響實(shí)