DB51T 1850-2014 豬圓環(huán)病毒病診斷技術(shù)規(guī)范

2014-09-19發(fā)布2014-10-01實(shí)施四川省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布I II1范圍 1 13術(shù)語和定義 1 1 26結(jié)果判定 3本標(biāo)準(zhǔn)附錄A為資料性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由四川省農(nóng)業(yè)廳提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)由四川省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局批準(zhǔn)。本標(biāo)準(zhǔn)由四川省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心負(fù)責(zé)起草。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：陳斌、陳弟詩、李金海、裴超信、邢坤、張毅、潘夢、張睿、韓帥、張代芬、王英。1豬圓環(huán)病毒病診斷技術(shù)規(guī)范本規(guī)范規(guī)定了豬圓環(huán)病毒病的臨床癥狀及病理學(xué)變化、實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)要求。本規(guī)范適用于對豬圓環(huán)病毒病開展監(jiān)測、診斷和流行病學(xué)調(diào)查。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T21674豬圓環(huán)病毒聚合酶鏈反應(yīng)試驗(yàn)方法SN/T2708豬圓環(huán)病毒病檢疫技術(shù)規(guī)范《高致病性動(dòng)物病原微生物菌(毒)種或者樣本運(yùn)輸包裝規(guī)范》(2005農(nóng)業(yè)部公告第503號)《獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室生物安全技術(shù)管理規(guī)范》(2003農(nóng)業(yè)部公告第302號)3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)豬圓環(huán)病毒(Porcinecircovirus,PCV)屬于圓環(huán)病毒科圓環(huán)病毒屬成員，無囊膜，含有共價(jià)閉合的單股環(huán)狀負(fù)鏈DNA,是迄今發(fā)現(xiàn)的一種最小的動(dòng)物病毒。分為對豬無致病性的PCV1型和對豬有致病性的PCV2型。豬圓環(huán)病毒病以圓環(huán)病毒2型為主要病原，主要引起斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(PMWS)和豬皮炎與腎病綜合征(PDNS),以及繁殖障礙、先天性振顫(CT)、豬呼吸道疾病綜合征(PRDC)、增生性壞死性肺炎(PNP)、腸炎等病癥，是引起豬免疫障礙的重要傳染病。4臨床癥狀及病理學(xué)變化4.1臨床癥狀4.1.1斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(PMWS)主要發(fā)生在5周~16周齡的豬，斷奶前生長發(fā)育良好，斷奶后同窩或不同窩仔豬有被毛粗糙，發(fā)育遲緩，進(jìn)行性消瘦；有時(shí)出現(xiàn)呼吸道癥狀，如呼吸困難、咳嗽、喘氣；有時(shí)腹瀉；有時(shí)出現(xiàn)貧血皮膚蒼白或可視黏膜黃疸；有時(shí)出現(xiàn)突然死亡。24.1.2豬皮炎與腎病綜合征(PDNS)多發(fā)生于12周～14周齡架子豬，皮膚初期潮紅出現(xiàn)紅色斑點(diǎn)或丘疹，后發(fā)展為圓形或不規(guī)則隆起，呈紅色、紫紅色，繼而由中心部位變黑并逐漸擴(kuò)展到整個(gè)丘疹形成黑色結(jié)痂。皮膚病主要發(fā)生在背部、臀部和四肢，并可延伸至下腹、腰部和耳部，嚴(yán)重的可覆蓋全身各處。輕者體溫正常，常自行康復(fù)，嚴(yán)重者表現(xiàn)厭食、跛行、發(fā)熱、呼吸困難、結(jié)膜炎，腹瀉，消瘦等癥狀。4.1.3先天性振顫(CT)仔豬出生或幾小時(shí)后出現(xiàn)震顫，共濟(jì)失調(diào)。同一窩仔豬中有個(gè)別發(fā)病，也有全部發(fā)病，但顫抖輕重程度各有差異。躺臥或睡眠時(shí)顫抖較輕或停止，外部刺激如突然聲響或寒冷等能引發(fā)或增強(qiáng)顫抖。4.1.4繁殖障礙妊娠后期流產(chǎn)和死胎；母豬懷孕不同階段出現(xiàn)流產(chǎn)、早產(chǎn)，產(chǎn)出木乃伊胎或弱仔；哺乳母豬在仔豬斷奶后長時(shí)間不發(fā)情，或雖然發(fā)情，卻屢配不孕。4.2病理學(xué)診斷4.2.1斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(PMWS)淺表淋巴結(jié)異常腫脹，特別是腹股溝淺淋巴結(jié)，切面為均勻的白色；肺部有灰褐色炎癥和腫脹，呈彌漫性病變，比重增加，質(zhì)地堅(jiān)硬或似橡皮；肝臟肝變硬、發(fā)暗，或者呈淺黃到橘黃色外觀，萎縮，肝小葉間結(jié)締組織增生；腎臟水腫，蒼白，被膜下有壞死灶；脾臟顯著腫大；胰、小腸和結(jié)腸常有腫大及壞死病變。4.2.2皮炎腎衰綜合癥(PDNS)腎臟腫脹、蒼白及腎皮質(zhì)有大面積出血點(diǎn)或斑塊；全身壞死性脈管炎，壞死性及纖維素性腎小球腎炎；淋巴結(jié)水腫，切面蒼白。4.2.3繁殖障礙胎兒明顯心肌肥大，心肌損傷，表現(xiàn)為大面積纖維組織增生或壞死性心肌炎。5實(shí)驗(yàn)室診斷5.1樣品采集無菌采集病豬的扁桃體、全血2mL-4mL或新鮮病死豬的扁桃體、淋巴結(jié)、脾臟、肺臟等組織樣品，4℃保存，立即送檢。送檢豬全血，分離血清，血清應(yīng)新鮮、透明、不溶血、無污染，密裝于滅菌1.5mL離心管內(nèi)，4℃或-20℃保存待檢。5.2病原學(xué)檢測5.2.1聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測(PCR)對病豬的扁桃體、全血或新鮮病死豬的扁桃體、淋巴結(jié)、脾臟、肺臟等組織樣品進(jìn)行檢測，具體操作方法按GB/T21674相關(guān)規(guī)定執(zhí)行。5.2.2實(shí)時(shí)定量熒光PCR檢測(real-timePCR)3對病豬的扁桃體、全血或新鮮病死豬的扁桃體、淋巴結(jié)、脾臟、肺臟等組織樣品進(jìn)行檢測，具體操作方法按SN/T2708Z中4.4的相關(guān)規(guī)定執(zhí)行。5.3抗體檢測對血清樣品進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測抗體，具體操作方法參見附錄A。6結(jié)果判定6.1疑似病例豬只臨床癥狀符合4.1中前3項(xiàng)任意一項(xiàng)者，病理變化符合4.