家禽種蛋(胚胎)注射的研究進(jìn)展

家禽種蛋（胚胎）注射技術(shù)的研究進(jìn)展西南大學(xué)榮昌校區(qū)動物科學(xué)系13級動科4班盧燕梅222013602022163摘要：家禽種蛋注射技術(shù)，是指對一定胚齡的家禽胚胎進(jìn)行疫苗接種注射，將一些外源物質(zhì)注射到家禽種蛋中，使雛禽在出殼時至出殼后幾天就具有特異性主動免疫力。這一項技術(shù)因能避免雛禽早期感染特定傳染病，已經(jīng)被越來越多的應(yīng)用到了實際生產(chǎn)中。關(guān)鍵詞：種蛋免疫注射免疫力注射操作家禽種蛋（胚胎）注射免疫與孵化出雛后預(yù)防免疫相比較，其優(yōu)點在于：提早免疫，應(yīng)激反應(yīng)低，注射精確且一致，勞動力成本低，注射用途廣，疫苗污染少等。一．家禽種蛋注射的常規(guī)方法1卵白注射在雞胚10d時，尿囊絨毛膜已將卵白完全覆蓋，找不準(zhǔn)卵白注射位點，故卵白注射一般在2～9d進(jìn)行。且因卵白離胚胎較遠(yuǎn)，不會對胚胎產(chǎn)生太大的應(yīng)激作用，可用于較精確的定量研究，加之操作方便，應(yīng)用比較廣泛。但外源物質(zhì)注射到卵白后，會與卵白內(nèi)的其它營養(yǎng)物質(zhì)混合，可能不會立即被胚胎吸收、利用，因而可能無法立即反映注射液的作用效果，所以一般取樣的時間是在注射后3～7d開始，而且最好盡可能多地在不同發(fā)育時點取樣，或者在某一時段連續(xù)取樣。注射操作時要注意避開血管，針頭插入0.5mm即可，以降低可能造成的損傷和應(yīng)激，注射液體積一般在0.1～1.5mL左右，不宜過高。2卵黃囊內(nèi)注射卵黃是胚胎發(fā)育的重要營養(yǎng)來源，卵黃囊內(nèi)注射的外源物質(zhì)能較好地被胚胎吸收。雞胚發(fā)育到18～21d時，卵黃囊被收入腹腔，因此卵黃囊內(nèi)注射應(yīng)在18d前進(jìn)行。注射液一般配制成體積為1.0mL左右的鹽溶液，注射前溶液要預(yù)熱至孵化溫度，在注射操作上要盡可能地熟練、細(xì)致，降低系統(tǒng)誤差。3羊膜腔注射羊膜腔是離胚胎最近的腔室，注射到羊膜腔的外源物質(zhì)，利用效率高；而且羊膜腔內(nèi)的營養(yǎng)物質(zhì)可提供給整個發(fā)育期的胚胎，沒有注射時間的限制。但羊膜腔處于胚蛋內(nèi)部的中心，注射操作上有一定難度；而且腔內(nèi)液體直接與胚胎相連，注射后對胚胎發(fā)育會產(chǎn)生較大干擾，阻礙了它的應(yīng)用。采用該注射方法時，要先選擇大小、形狀相似的胚蛋，再根據(jù)蛋形指數(shù)、胚蛋結(jié)構(gòu)特點確定注射角度和深度，注射液體積一般不高于1.5mL，注射前溶液要預(yù)熱等。4尿囊注射尿囊注射運用得最早、最成熟，但尿囊內(nèi)營養(yǎng)成分較少，且利用效率有限。故尿囊注射在外源性營養(yǎng)因子、生長因子對胚胎生長發(fā)育的研究中運用較少。雞胚在19d開始肺呼吸，尿囊絨毛膜開始萎縮，因此尿囊注射應(yīng)該在19d前進(jìn)行。尿囊絨毛膜血液循環(huán)可以供給胚胎發(fā)育的部分營養(yǎng)物質(zhì)（如吸收蛋殼中的鈣和磷），但胚胎發(fā)育的主要營養(yǎng)來源是卵黃和卵白，所以，用尿囊接種法培養(yǎng)病毒，在供給病毒繁育所需營養(yǎng)的同時，不會出現(xiàn)因過多消耗胚胎營養(yǎng)，導(dǎo)致胚胎的過早死亡。這樣就可以達(dá)到在一定時間內(nèi)培養(yǎng)病毒的目的。后來的弱毒疫苗的制備、胚胎早期免疫都是根據(jù)此原理進(jìn)行的。5尿囊血管注射一般胚蛋注射，都會力求避開血管，以降低對胚胎的直接應(yīng)激。所以，采用血管注射時，溶液理化條件的控制要更加精細(xì)，包括前文提到液體體積、溫度、滲透壓等。同時，注射操作要熟練、謹(jǐn)慎，不可過多的刺破血管。尿囊血管在10～17d較為粗大、清晰，因此注射操作多集中在這段時間。尿囊血管注射后的物質(zhì)胚胎吸收快、利用率高，可以快速的檢測到外源因子對部分敏感指標(biāo)（如能量水平、激素水平等）的變化，從而及時衡量注射因子的作用效果，這是在該位點注射的最大優(yōu)點。該法尤其適合注射多肽類外源物質(zhì)，因注射到血管后被分解、轉(zhuǎn)化的少。有研究者將50μL不同含量水平的抗脂肪細(xì)胞單克隆抗體（Mab）溶液注射到15d的尿囊血管中，發(fā)現(xiàn)0.2mg的Mab注射組的個體在6周齡腹脂重降低了28%，且出殼后體重和生長水平不受影響。該研究為降低家禽腹脂提供了一條新途徑。6氣室注射氣室注射的外源物質(zhì)能通過滲透作用被胚胎吸收利用，3～18d是適宜的注射時間。因為雞胚在19d后尿囊絨毛膜開始萎縮，滲透作用開始減弱。氣室注射可最大限度地降低因注射液體和操作對胚胎產(chǎn)生的應(yīng)激，且操作更為簡單、方便。但是，氣室內(nèi)物質(zhì)的吸收效率較其它注射方式差，吸收利用量不易被衡定，易受環(huán)境條件影響，故只能做出定性的判斷，無法滿足精確、定量的研究需要。二．種蛋注射技術(shù)與傳統(tǒng)免疫的比較對于雞胚而言，有研究認(rèn)為，在雞胚發(fā)育到第18天，其免疫系統(tǒng)已經(jīng)基本建立，能夠?qū)δ承┛乖a(chǎn)生較好的免疫應(yīng)答。家禽胚胎注射技術(shù)的成功周瑤因素有：第一，在雞胚發(fā)育過程中，可以接受注射的最早時間點，注射具有生物活性的疫苗和其他可以注射的物質(zhì)，因此可以在雛雞出殼之前備妥其生長過程中所需要的免疫力。第二，一群體免疫的方式對每一個單一個體做全劑量的注射可以在很快的速度下完成整齊的接種?；谶@兩個原則，此技術(shù)能快速的發(fā)展運用。以下為胚胎注射的優(yōu)點：免疫效果好胚胎免疫可以使雛雞更早的產(chǎn)生自動免疫力，一出殼就具有較強(qiáng)的免疫力。而出殼后接種免疫，雛雞要1至2周才能產(chǎn)生有效的免疫力，仍可受到外源入侵而發(fā)病。胚胎注射，避免了免疫空白帶，可明顯降低雛雞發(fā)病率，提高其存活率。提高工作效率每臺種蛋注射機(jī)每小時可以接種30000個種蛋，比人工接種雛雞提高工效100倍以上，當(dāng)出雛時，雛雞已經(jīng)有接種過疫苗，就可以直接運往飼養(yǎng)場飼養(yǎng)。應(yīng)激反應(yīng)低常家禽免疫接種，不但需要耗費人力和時間，而且對家禽帶來較強(qiáng)的應(yīng)激反應(yīng)，造成生長速度減慢，死淘率增加，飼料報酬低等不良影響，而胚胎注射就可以避免這些損失。免疫精確一致種蛋注射機(jī)可一致性的，精確的，溫和的百分百的接種于種蛋，排出了人工接種的疏漏和接種不完全的困擾，因而可得到更高比例的健康雞，大大的降低了死亡率。注射用途廣胚胎注射，不僅可以用于早期疫苗免疫，還可以用于某些生物活性物質(zhì)與病毒疫苗的聯(lián)合接種，大大的提高了對疾病的免疫能力和抗體效價。三.種蛋注射操作要點1.疫苗的無菌配制對種蛋注射的效果影響非常關(guān)鍵，在配制過程中必須嚴(yán)格以避免被污染的可能。2.種蛋大頭朝上，全部注射過程都要經(jīng)過嚴(yán)密的電腦控制，確保注射迅速準(zhǔn)確，溫和無污染及高效率。小結(jié)：在以往研究中，對家禽種蛋（胚胎）研究的研究方向逐漸趨于四個方向：1，蛋內(nèi)給予疫苗和藥物。2.預(yù)防疾病。3.免疫促進(jìn)。4.提高生產(chǎn)性能。各個研究方向目前研究還不夠深入，全面性也不夠高。種蛋注射才發(fā)展起來，在實際生產(chǎn)應(yīng)用中效果好，但是同時投資成本也較高，。在未來畜牧業(yè)發(fā)展過程中，還具有教的的發(fā)展空間和發(fā)展價值。參考文獻(xiàn)：[1].孫研研，鄭江霞，徐桂云，等，外源基因?qū)腚u胚的兩種顯微注射方法的比較[J].農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報，2010,18（5）：938-943[2].樂牧，種蛋內(nèi)注射技術(shù)的前景［J］青海畜牧獸醫(yī)雜志，1991（2）：28[3].IPEKA,SAHANU.YILMAZB,etal.theeffectofinovoascorbicacidandglucoseinjectioninbroilerbrecdereggsonhatehabilityandchickweight［J］.ArchivFurGeflugelkunde,2004,68(3):132-135[4]劉梅英，陳偉，彭鵬，等.胚蛋注射在家禽營養(yǎng)中的研究進(jìn)展［J］.中國家禽，2007，29（21）：40-42.[5].師昆景，吳靈英，譚榮炳.胚胎注射L-精氨酸和L-鳥氨酸對肉仔雞早期生長、免疫器官及血漿激素T3、T4的影響［J］.中國家禽，2008，30（17）：25-28.[6]黃小春，吳靈芝，雞胚給養(yǎng)氨基酸對肉仔雞孵化率和胚胎生長的影響［J］.中國飼料.2005,23:19-20[7]王延新.種蛋免疫注射的研究進(jìn)展[J]養(yǎng)禽與禽病防治2003（3）,14-15[8]HYLDINGSMOSTRUPOVEJLSTEDMCTAL.changesofDNAmethyfationlevelandspatialarrgementofprimordialgermcellsinembryonicday[J]plosbiology,2010,8(11);e1000506[9]趙冬梅，金帆，黃荷鳳，表遺傳修飾與配子形成和胚胎早期發(fā)育[J]國外醫(yī)學(xué)：遺傳學(xué)分冊，2004,27（3）；159-162.[10][1]OhtaY,TsushimaN,KoideK.Effectofaminoacidinjectioninbroilerbreedereggsonembryonicgrowthandhatchabilityofchicks[J].Poultryscicence,1999，78:1493-1498.[11]丁慶峰，杜曉惠.家禽胚蛋注射技術(shù)的應(yīng)用[J].中國家禽，2010，32（16）：48-49.[12]KocamisH,YeniYN,Kirkpatrick-KellerDC.1999.PostnanalgrowthofbroilersinresponsetoinovoadministrationofchickengrowthHormone[J].PoultryScience,78:1219~1226.[13]宋潤山，THAXTONJ．實用蛋內(nèi)注射技術(shù)問世［J］．國外畜牧學(xué):豬與禽，1990(1):34－35．[14]UniZ,FerketPR.MethodforearlynutritionandtheirPotential[J].World'sPoultrySci,2004，60:101-111.[15]HOSSAINS，BARRETOS，BERTECHINIA，etal．InfluenceofdietaryvitaminEleveloneggproductionofbroilerbreeders，andon