靜脈免疫球蛋白對早產(chǎn)兒臍血T淋巴細胞功能的影響課件

靜脈免疫球蛋白對早產(chǎn)兒臍血T淋巴細胞功能的影響0靜脈免疫球蛋白對早產(chǎn)兒臍血T淋巴細胞功能的影響引言—研究目的靜脈免疫球蛋白(IVIG)被廣泛應用于感染性和免疫相關性疾病的治療。IVIG在新生兒尤其早產(chǎn)兒感染預防與重癥感染治療中療效確切，但其安全性也日益受到關注。近年研究發(fā)現(xiàn)足月新生兒應用大劑量IVIG后，T、B淋巴細胞增殖反應下降。而有關早產(chǎn)兒應用IVIG對其免疫功能影響的研究資料較少。本研究目的：采用體外實驗，選擇不同劑量IVIG作用于早產(chǎn)兒臍血單個核細胞，觀察其對Th細胞和調節(jié)性T細胞功能的影響，從免疫學角度探討IVIG早產(chǎn)兒用藥安全性。1靜脈免疫球蛋白對早產(chǎn)兒臍血T淋巴細胞功能的影響材料與方法—研究對象

選擇2011年6月～2011年12月在青島大學醫(yī)學院附屬醫(yī)院母孕32～34周娩出的早產(chǎn)兒15例為研究對象，出生體重1300g～2450g，平均(1923±349)g。其母親分娩前4周內無明顯感染史，未使用免疫增強或抑制劑等藥物。所有受試的早產(chǎn)兒母親均知情同意。2靜脈免疫球蛋白對早產(chǎn)兒臍血T淋巴細胞功能的影響材料與方法—研究方法標本采集CBMC制備CBMC培養(yǎng)(設置A組、B組、C組）CD4+CD25+Foxp3+Treg細胞IFN-r、IL-4、IL-10、TGF-β13靜脈免疫球蛋白對早產(chǎn)兒臍血T淋巴細胞功能的影響材料與方法—分

組IVIG的濃度選擇

37℃、飽和濕度、5%CO2條件培養(yǎng)72hA組（近生理狀態(tài)組）B組（低劑量組）C組（高劑量組）6mg/ml9mg/ml12mg/ml4靜脈免疫球蛋白對早產(chǎn)兒臍血T淋巴細胞功能的影響材料與方法—統(tǒng)計學處理

采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學處理。實驗數(shù)據(jù)呈正態(tài)分布且方差齊，以

x±s表示。采用單因素方差分析，LSD檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義，P＜0.01為差異有顯著統(tǒng)計學意義。5靜脈免疫球蛋白對早產(chǎn)兒臍血T淋巴細胞功能的影響結果組別例數(shù)IFN-γIL-4A組15175.68±86.8229.04±8.27▲B組15124.51±56.0618.01±5.72C組1532.59±26.82＊14.44±5.18注：＊與B組和A組比較,P<0.01；▲與B組和C組比較，P<0.01表1不同濃度IVIG對早產(chǎn)兒臍血CBMC分泌IFN-γ及IL-4水平的影響1、不同濃度IVIG對早產(chǎn)兒臍血CBMC分泌IFN-γ及IL-4水平的影響6靜脈免疫球蛋白對早產(chǎn)兒臍血T淋巴細胞功能的影響結果組別例數(shù)IFN-γ/IL-4A組155.61±2.38B組158.22±4.21☆

C組152.41±1.72△

表2不同濃度IVIG對CBMC上清液IFN-γ/IL-4比值變化的影響注：△與B組和A組比較，P<0.01；☆與A組比較，P<0.05.2、不同濃度IVIG對CBMC上清液IFN-γ/IL-4比值變化的影響7靜脈免疫球蛋白對早產(chǎn)兒臍血T淋巴細胞功能的影響結果020406080100120140160180200IFN-γIL-4A組B組C組圖1不同濃度IVIG對CBMC分泌細胞因子影響0123456789A組B組C組A組B組C組圖2不同濃度IVIG對CBMC上清液IFN-γ/IL-4比值變化影響8靜脈免疫球蛋白對早產(chǎn)兒臍血T淋巴細胞功能的影響結

果3、IVIG對早產(chǎn)兒CBMC體外培養(yǎng)后CD4+CD25+Foxp3+Treg細胞表達的影響:

實驗顯示：早產(chǎn)兒CBMC在不同濃度IVIG干預下，各組CD4+CD25+Foxp3+Treg細胞的表達率比較均無顯著性差異(P均>0.05)。9靜脈免疫球蛋白對早產(chǎn)兒臍血T淋巴細胞功能的影響結

果4、IVIG對早產(chǎn)兒CBMC體外產(chǎn)生IL-10和TGF-β1水平的影響：

C組CBMC分泌IL-10水平明顯低于B組(P<0.05)，顯著低于A組(P<0.01)；B組CBMC分泌IL-10水平也明顯低于A組(P<0.05)。

C組CBMC分泌TGF-β1水平顯著低于A組(P<0.01)，但與B組比較無顯著性差異(P>0.05)；B組CBMC分泌TGF-β1水平明顯低于A組(P<0.05)。

10靜脈免疫球蛋白對早產(chǎn)兒臍血T淋巴細胞功能的影響圖3

IVIG對早產(chǎn)兒CBMC體外培養(yǎng)后CD4+CD25+Foxp3+Treg

細胞表達的影響結果圖4IVIG對早產(chǎn)兒CBMC體外培養(yǎng)后IL-10和TGF-β1水平影響11靜脈免疫球蛋白對早產(chǎn)兒臍血T淋巴細胞功能的影響討論IVIG除免疫替代外可通過多種機制發(fā)揮免疫調節(jié)作用、用于治療多種免疫相關性疾病

中和清除致病抗原，特別是超抗原

改變免疫復合物的特性，減少免疫復合物的沉積

免疫封閉巨噬細胞和B淋巴細胞，抑制巨噬細胞的吞噬功能和B淋巴細胞的活化

恢復獨特型-抗獨特型網(wǎng)絡，抑制自身抗體的產(chǎn)生

抑制T淋巴細胞活化，減少各種細胞因子的產(chǎn)生等12靜脈免疫球蛋白對早產(chǎn)兒臍血T淋巴細胞功能的影響新生兒（包括早產(chǎn)兒）Thl/Th2功能狀態(tài)特點

足月兒T淋巴細胞功能呈生理性低下狀態(tài)，且其Th細胞亞群功能發(fā)育不平衡，Th2類細胞功能相對占優(yōu)勢

早產(chǎn)兒IFN-γ、IL-4的水平明顯低于足月兒，以IFN-γ更為突出，即仍然Th2亞群功能相對占優(yōu)勢

13靜脈免疫球蛋白對早產(chǎn)兒臍血T淋巴細胞功能的影響IVIG對新生兒T細胞功能的影響：

體外實驗顯示：IVIG10mg/ml可以明顯抑制PHA-P誘導的足月新生兒CBMC分泌IFN-γ，也可以抑制CBMC中IL-4mRNA的表達；同時抑制PHA誘導的足月新生兒CBMC分泌IL-10與TGF-β1。

IVIG能抑制脂多糖誘導的新生兒單核巨噬細胞的活化，從而抑制其分泌IL-6，而IL-6能促進T細胞的活化及向Thl、Th2分化，間接證明了IVIG對T細胞尤其是Thl、Th2細胞因子的抑制作用14靜脈免疫球蛋白對早產(chǎn)兒臍血T淋巴細胞功能的影響

IVIG對新生兒肺炎似無明顯療效，大劑量使用IVIG可能因其至少短期內具有抑制T、B淋巴細胞功能作用而加重新生兒期暫時免疫缺陷。

對極低出生體重兒過大劑量或短期內反復使用IVIG預防感染無明顯療效，而且可能加重暫時免疫低應答反應，影響細胞免疫的自然發(fā)育過程。15靜脈免疫球蛋白對早產(chǎn)兒臍血T淋巴細胞功能的影響本實驗研究結果：

與近似生理狀態(tài)組比較，低劑量IVIG組CBMC分泌IL-4顯著降低，而IFN-γ變化輕微；較大劑量IVIG組IFN-γ和IL-4的水平皆明顯降低，但以IFN-γ降低更為顯著

結果提示：IVIG可抑制早產(chǎn)兒臍血Thl、Th2細胞功能，并且與其劑量相關。低劑量時主要抑制Th2細胞功能，較大劑量時Th1、Th2細胞均受抑，但以Th1細胞更為顯著16靜脈免疫球蛋白對早產(chǎn)兒臍血T淋巴細胞功能的影響本實驗研究結果顯示：

早產(chǎn)兒CBMC經(jīng)不同劑量IVIG干預后，其CD4+CD25+Foxp3+Treg細胞表達率無顯著差異。

較大劑量IVIG組CBMC分泌IL-10水平明顯低于低劑量組和近生理狀態(tài)組，低劑量組也明顯低于近生理狀態(tài)組；較大和低劑量組CBMC分泌TGF-β1水平均明顯低于近生理狀態(tài)組，但較大劑量組與低劑量組比較無顯著性差異。

結果提示：IVIG對早產(chǎn)兒CBMC中天然Treg細胞的數(shù)量并無影響。但IVIG能抑制早產(chǎn)兒CBMCIL-10和TGF-β1的分泌。IVIG濃度越高，IL-10分泌越少；而TGF-β1當IVIG達到一定濃度后其抑制分泌程度無進一步加重。17靜脈免疫球蛋白對早產(chǎn)兒臍血T淋巴細胞功能的影響正常過敏體質伴炎癥反應過敏體質未伴炎癥反應123TH1/TH17/TH2/Treg細胞18靜脈免疫球蛋白對早產(chǎn)兒臍血T淋巴細胞功能的影響綜合國內外文獻和本研究結果：

早產(chǎn)兒應用較大劑量IVIG對其T細胞功能有明顯影響，可進一步加重Th1/Th2失衡，抑制Treg細胞功能，加重暫時免疫低應答反應，影響細胞免疫的自然發(fā)育過程，可能增加日后變態(tài)反應性疾病的發(fā)生。提示早產(chǎn)兒應用IVIG需選擇適宜劑量。19靜脈免疫球蛋白對早產(chǎn)兒臍血T淋巴細胞功能的影響結論IVIG可抑制早產(chǎn)兒臍血Thl、Th2細胞功能，并且與其劑量相關。低劑量時主要抑制Th2細胞功能，較大劑量時Th1、Th2細胞均受抑，但以Th1細胞更為顯著。IVIG不能直接影響早產(chǎn)兒臍血天然Treg細胞的數(shù)量，但可以通過調節(jié)細胞因子IL-10和TGF-β1的分泌抑制Treg細胞的功能且有劑量依賴效應。20靜脈免疫球蛋白對早產(chǎn)兒臍血T淋巴細胞功能的影響樹突細胞（DC）在機體免疫系統(tǒng)中處于中心地位作為一種專職抗原提呈細胞，DC可經(jīng)其膜表面的Toll樣受體（TLR）等來識別各種微生物的病原相關分子模式（PAMP），通過提呈抗原、表達共刺激分子和分泌