細(xì)胞狀態(tài)檢測專題原理科普

關(guān)鍵詞：細(xì)胞狀態(tài)，細(xì)胞凋亡，細(xì)胞壞死，凋亡檢測指標(biāo)細(xì)胞狀態(tài)檢測專題|原理科普一、細(xì)胞不同的狀態(tài)細(xì)胞死亡是生命現(xiàn)象不可逆停止及生命的結(jié)束，正常的組織中經(jīng)常發(fā)生細(xì)胞死亡，是維持組織機(jī)能和形態(tài)所必須的，包括細(xì)胞主動(dòng)死亡-程序性死亡即細(xì)胞凋亡和細(xì)胞被動(dòng)死亡即細(xì)胞壞死。主要的細(xì)胞狀態(tài)：活細(xì)胞：保持膜完整性；衰老細(xì)胞：保持周期停滯；細(xì)胞毒性：對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生殺傷；凋亡細(xì)胞：基本生物學(xué)現(xiàn)象，程序性死亡；壞死細(xì)胞：喪失膜完整性并釋放內(nèi)容物。細(xì)胞狀態(tài)檢測指標(biāo)：早期凋亡檢測指標(biāo)：AnnexinV、JC-1中期凋亡檢測指標(biāo)：Caspase晚期凋亡檢測指標(biāo)：TUNEL二、不同細(xì)胞狀態(tài)檢測原理細(xì)胞凋亡（apoptosis）是一種基本生物學(xué)現(xiàn)象，指為維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，由基因控制的細(xì)胞自主的有序的死亡，在多細(xì)胞生物去除不需要的或異常的細(xì)胞中起著必要的作用。早期凋亡在正常活細(xì)胞中，磷脂酰絲氨酸（PS）位于細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)，而在細(xì)胞凋亡的早期，PS可從細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜的表面，暴露在細(xì)胞外環(huán)境中。膜聯(lián)蛋白V(AnnexinV)是一種分子量為35~36KDa的鈣離子依賴型磷脂結(jié)合蛋白，能與PS高親和力特異性結(jié)合。通過熒光素或者生物素標(biāo)記AnnexinV即可簡單快速地直接檢測出細(xì)胞早期凋亡情況。線粒體是真核細(xì)胞產(chǎn)生能量的場所，具有雙層膜結(jié)構(gòu)，包括線粒體外膜以及折疊的內(nèi)膜。在完整線粒體內(nèi)膜上有一個(gè)電壓梯度（膜電位=△Ψm），外正內(nèi)負(fù)。線粒體跨膜電位破壞是細(xì)胞凋亡發(fā)生后最早發(fā)生的細(xì)胞內(nèi)變化之一。JC-1是一種碳青胺染料，在線粒體膜電位較高時(shí)，JC-1聚集在線粒體的基質(zhì)(matrix)中，形成聚合物(J-aggregates)，可以產(chǎn)生紅色熒光（Ex/Em=585/590）；在線粒體膜電位較低時(shí)，JC-1不能聚集在線粒體的基質(zhì)中，此時(shí)JC-1為單體(monomer)，可以產(chǎn)生綠色熒光（Ex/Em=510/527nm）。這樣就可以非常方便地通過熒光顏色的轉(zhuǎn)變來檢測線粒體膜電位的變化，為鑒別正常細(xì)胞和凋亡細(xì)胞提供了一種簡便的方法。中期凋亡Caspase-1（ICE，白介素-1β-轉(zhuǎn)換酶）是哺乳動(dòng)物的caspase，負(fù)責(zé)將兩種炎性細(xì)胞因子白介素1β和IL-18的蛋白水解成活性細(xì)胞因子，從而引發(fā)促炎反應(yīng)。它還將加德敏D裂解為活性形式，從而導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。Caspase-1活性分析試劑盒（比色法）基于Caspase1水解肽底物Ac-YVAD-pNA（乙?；?Tyr-Val-Ala-Asp對(duì)硝基苯胺），產(chǎn)生黃色的對(duì)硝基苯胺（pNA），pNA在405nm附近有強(qiáng)吸收，從而可以通過測定吸光度來檢測Caspase1的活性。晚期凋亡細(xì)胞凋亡中，染色體DNA雙鏈斷裂或單鏈斷裂而產(chǎn)生大量的粘性3'-OH末端，可在脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶（TdT）的作用下，將脫氧尿苷三磷酸核苷酸（dUTP）和熒光素形成的衍生物標(biāo)記到DNA的3'-末端，從而可進(jìn)行凋亡細(xì)胞的檢測，這類方法稱為脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法（terminal-deoxynucleotidyltransferasemediatednickendlabeling,TUNEL）。由于正常的或正在增殖的細(xì)胞幾乎沒有DNA的斷裂，因而沒有3'-OH形成，很少能夠被染色。由此，TUNEL成為了檢測DNA片段化（細(xì)胞凋亡）的最常用方法。TUNEL法細(xì)胞凋亡檢測試劑盒（橙色熒光）提供實(shí)驗(yàn)所需的全套試劑組分以及優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)方案，適用于熒光酶標(biāo)儀、熒光顯微鏡、流式細(xì)胞儀。適用于如下樣品類型：貼壁細(xì)胞，懸浮細(xì)胞，石蠟包埋組織切片，冰凍切片。熒光信號(hào)檢測通道為紅色通道（Ex/Em=555nm/565nm）。碘化丙啶（propidineiodide，PI）是一種核酸染料，它不能透過完整的細(xì)胞膜，而早期凋亡細(xì)胞的細(xì)胞膜是完好的，對(duì)PI有拒染性。但在凋亡中晚期的細(xì)胞和死細(xì)胞，PI能透過細(xì)胞膜而使細(xì)胞核染上。因此將AnnexinV與PI匹配使用，即可區(qū)分凋亡早、晚期細(xì)胞以及死細(xì)胞。PI在488nm，532nm或546nm激發(fā)光激發(fā)下，可發(fā)出紅色熒光。Abbkine根據(jù)細(xì)胞狀態(tài)檢測指標(biāo)提供相關(guān)檢測試劑盒，助力您的科學(xué)研究！早期凋亡檢測指標(biāo)：AnnexinV-AbFluor?細(xì)胞凋亡檢測試劑盒（藍(lán)色/綠色/橙色/紅色）線粒體膜電位分析試劑盒（JC-1法）中期凋亡檢測指標(biāo)：Caspase系列活性分析試劑盒(比色法)晚期凋亡檢測指標(biāo)：TUNEL法細(xì)胞凋亡檢測試劑盒(綠色/紅色熒光)蛋白質(zhì)水平的AnnexinV系列細(xì)胞早期凋亡試劑盒，檢測磷脂酰絲氨酸（PS）的外翻。具有更強(qiáng)的熒光強(qiáng)度和光穩(wěn)定性?？赏ㄟ^流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡對(duì)凋亡細(xì)胞進(jìn)行鑒定和定量。線粒體膜電位分析試劑盒(JC-1法)可用于檢測多種細(xì)胞的線粒體膜電位變化，包括肌細(xì)胞和神經(jīng)元，以及完整的組織或分離的線粒體。試劑盒包含CCCP，它能使質(zhì)子梯度解偶聯(lián)，可作為誘導(dǎo)線粒體膜電位下降的陽性對(duì)照。Abbkine細(xì)胞狀態(tài)系列產(chǎn)品讓您的細(xì)胞狀態(tài)檢測實(shí)驗(yàn)更加便捷省心，免除您的后顧之憂！產(chǎn)品推薦：貨號(hào)名稱規(guī)格價(jià)格KTD102-CN細(xì)胞凋亡檢測雞尾酒套裝1Kit￥998KTA4001線粒體膜電位分析試劑盒（JC-1法）20T/100T/500T￥416/1216/3616KTA2011TUNEL法細(xì)胞凋亡檢測試劑盒（橙色熒光）50T/100T￥2526/4016KTA0010AnnexinV-AbFluor?488/PI雙染細(xì)胞凋亡檢測試劑盒20T/50T/100T￥269/498/569KTA0001AnnexinV-AbFluor?405細(xì)胞凋亡檢測試劑盒（藍(lán)色熒光）50T/100T￥1269/2116KTA0002AnnexinV-AbFluor?488細(xì)胞凋亡檢測試劑盒（綠色熒光）50T/100T￥698/1298KTA0003AnnexinV-AbFluor?555細(xì)胞凋亡檢測試劑盒（橙色熒光）50T/100T￥1269/2116KTA0004AnnexinV-AbFluor?647細(xì)胞凋亡檢測試劑盒（紅色熒光）50T/100T￥1269/2116KTA3020Caspase-1活性分析試劑盒（比色法）20T/50T/100T￥739/1269/2316KTA3021Caspase-2活性分析試劑盒（比色法）20T/50T/100T￥739/1269/2316我們將持續(xù)更新更多技術(shù)前沿資訊，敬請(qǐng)期待！Abbkine的技術(shù)專家為了給廣大讀者提供學(xué)習(xí)生物知識(shí)的平臺(tái)，經(jīng)過不懈努力，將多種高端生物實(shí)驗(yàn)的干貨整理出來，后期陸續(xù)在微信公眾號(hào)中刊登，請(qǐng)廣大熱愛科學(xué)的讀者持續(xù)關(guān)注Abbkine公眾號(hào)。Abbkine專注于蛋白學(xué)和細(xì)胞學(xué)領(lǐng)域，致力于創(chuàng)新和研發(fā)各類抗體、蛋白質(zhì)、分析試劑與試劑盒，以期成為生命科學(xué)研究發(fā)展、藥物研發(fā)等領(lǐng)域的關(guān)鍵推