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PAGE7-土壤中分解尿素的細(xì)菌的分別與計(jì)數(shù)(建議用時(shí):40分鐘)題組一篩選菌株與選擇培育基1.下列關(guān)于土壤取樣的敘述錯(cuò)誤的是()A.土壤取樣,應(yīng)選取肥沃、潮濕的土壤B.先鏟去表層土3cm左右,再取樣C.取樣用的小鐵鏟和信封在運(yùn)用前不用滅菌D.應(yīng)在火焰旁稱取土壤C[微生物的培育要留意無菌操作,土壤取樣用的小鐵鏟和信封在運(yùn)用前需滅菌,后續(xù)稀釋等操作均需在火焰旁進(jìn)行。]2.用以尿素為唯一氮源加入酚紅指示劑的培育基,培育細(xì)菌后,指示劑將()A.變藍(lán)色 B.變紅色C.變黑色 D.變棕色B[細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解成了氨,會使培育基的堿性增加,pH上升,加入酚紅指示劑將變紅。]3.用來推斷選擇培育基是否起到了選擇作用須要設(shè)置的比照是()A.未接種的選擇培育基B.未接種的牛肉膏蛋白胨(全養(yǎng)分)培育基C.接種了的牛肉膏蛋白胨(全養(yǎng)分)培育基D.接種了的選擇培育基C[將菌液稀釋相同的倍數(shù),在牛肉膏蛋白胨培育基上生長的菌落數(shù)目應(yīng)明顯多于選擇培育基上的數(shù)目,因此可用接種了的牛肉膏蛋白胨培育基作為比照。本試驗(yàn)的變量是培育基種類,其他方面如接種、培育條件等應(yīng)相同。]4.下列屬于菌落特征的是()①菌落的形態(tài)②菌落的大?、劬涞亩嗌佗苈∑鸪潭娶蓊伾抻袩o莢膜A.①②③④ B.①②④⑤C.②③④⑥ D.①②③④⑤⑥B[不同種類的細(xì)菌所形成的菌落大小、形態(tài)、光澤度、顏色、硬度、透亮度等方面具有肯定特征,所以,每種細(xì)菌在肯定條件下所形成的菌落,可以作為鑒定的重要依據(jù)。單個(gè)細(xì)菌用肉眼是看不見的,故細(xì)菌的個(gè)體特征不能作為菌種鑒定的依據(jù)。]5.產(chǎn)生標(biāo)準(zhǔn)形態(tài)菌落的細(xì)菌的最初數(shù)目和培育基分別是()A.一個(gè)細(xì)菌、液體培育基B.很多細(xì)菌、液體培育基C.一個(gè)細(xì)菌、固體培育基D.很多細(xì)菌、固體培育基C[在液體培育基中生活的細(xì)菌,無論是一個(gè)還是很多,肉眼都是看不見的。在固體培育基上的細(xì)菌,當(dāng)數(shù)目較少時(shí)也是看不見的。當(dāng)固體培育基上有很多細(xì)菌并且集中在較小范圍內(nèi)時(shí),肉眼可見。而菌落是一個(gè)細(xì)菌或幾個(gè)細(xì)菌的子細(xì)胞群體,形成于固體培育基上,有肯定的形態(tài)結(jié)構(gòu),所以肉眼可見。同種細(xì)菌形成的菌落,形態(tài)結(jié)構(gòu)是相同的。假如有很多細(xì)菌形成的菌落,就不行能有比較標(biāo)準(zhǔn)的形態(tài),因?yàn)楹芏嗉?xì)菌的話,第一不行能是同一種細(xì)菌,其次不行能在培育基的同一個(gè)點(diǎn)上。]6.下列能選擇出分解尿素的細(xì)菌的培育基是()A.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、尿素、瓊脂、蒸餾水B.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、瓊脂、蒸餾水C.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、尿素、瓊脂、蒸餾水D.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、牛肉膏、蛋白胨、瓊脂、蒸餾水A[在A項(xiàng)的培育基中既有尿素作為唯一氮源,又有其他各種成分,可以選擇出分解尿素的細(xì)菌;而C項(xiàng)中缺少碳源,B項(xiàng)中無尿素作氮源,D項(xiàng)中有牛肉膏可供應(yīng)氮源的成分。]題組二微生物數(shù)量的測定及試驗(yàn)操作7.某同學(xué)對101、102、103倍稀釋液計(jì)數(shù)的平均菌落數(shù)分別是2760、295和16,則菌落總數(shù)為(所用稀釋液體積為0.1mL)()A.2.76×104個(gè)/mLB.2.95×105個(gè)/mLC.4.6×104個(gè)/mLD.3.775×104個(gè)/mLB[為保證結(jié)果精確,一般選擇菌落數(shù)在30~300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù),因此只有295符合要求。其稀度倍數(shù)為102,所用稀釋液體積為0.1mL,代入計(jì)算公式得菌落總數(shù)為2.95×105個(gè)/mL。]8.欲從土壤中分別出能分解尿素的細(xì)菌,下列試驗(yàn)操作不正確的是()A.將土壤用無菌水進(jìn)行一系列的梯度稀釋B.同一濃度的土壤稀釋液應(yīng)至少涂布三個(gè)平板C.可將未接種的培育基在相同條件下培育作為比照D.用加入剛果紅指示劑的培育基可篩選出分解尿素的細(xì)菌D[在以尿素為唯一氮源的培育基中應(yīng)加入酚紅作為指示劑,指示劑變紅說明該菌種能分解尿素。]9.尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)肥料,但若不經(jīng)細(xì)菌的分解,就不能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物種類、數(shù)量繁多,某生物小組試圖探究土壤中微生物對尿素是否有分解作用,設(shè)計(jì)了以下試驗(yàn),并勝利篩選到能高效降解尿素的細(xì)菌(目的菌)。培育基成分如下表所示,試驗(yàn)步驟如下圖所示。請分析回答:KH2PO4Na2HPO4MgSO4·7H2O葡萄糖尿素瓊脂1.4g2.1g0.2g10g1g15g(1)培育基中加入尿素的目的是篩選________,這種培育基屬于________培育基。(2)“目的菌”生長所需的氮源和碳源分別來自培育基中的________和________,試驗(yàn)中須要振蕩培育,目的是_____________。(3)轉(zhuǎn)到固體培育基上時(shí),常采納________法接種,獲得單個(gè)菌落后接著篩選。(4)下列材料或用具中,須要滅菌的是________;須要消毒的是________。(填序號)①培育細(xì)菌用的培育基與培育皿②玻璃棒、試管、錐形瓶和吸管③試驗(yàn)操作者的雙手(5)簡述土壤中可分解尿素細(xì)菌的鑒定方法及原理:__________________________________________________________________________________________________________________________________________________[解析](1)培育基中加入尿素為唯一氮源能夠篩選出能分解尿素的細(xì)菌,此培育基屬于選擇培育基。(2)尿素為“目的菌”供應(yīng)氮源,葡萄糖為“目的菌”供應(yīng)碳源。振蕩培育基可融入氧氣,為培育的目的菌供應(yīng)必需的氧氣。(5)見答案。[答案](1)目的菌選擇(2)尿素葡萄糖為目的菌供應(yīng)氧氣(3)稀釋涂布平板(或平板劃線)(4)①②③(5)在以尿素為唯一氮源的培育基中加入酚紅指示劑;細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解為氨,使培育基的堿性增加,pH增高,使酚紅指示劑變紅10.從自然界微生物中篩選某菌種的一般步驟是:采集菌樣→富集培育→純種分別→性能測定。(1)不同微生物的生存環(huán)境不同,獲得志向微生物的第一步是從合適的環(huán)境采集菌樣,然后再按肯定的方法分別、純化。例如,培育噬鹽菌的菌樣應(yīng)從____________環(huán)境中采集。(2)富集培育指創(chuàng)設(shè)僅適合待分別微生物旺盛生長的特定環(huán)境條件,使其數(shù)量大大增加,從而分別出所需微生物的培育方法。對產(chǎn)耐高溫淀粉酶微生物的富集培育應(yīng)選擇________________的培育基,并在________條件下培育。(3)接種前要對培育基進(jìn)行____________處理。在整個(gè)微生物的分別和培育中,肯定要留意在________條件下進(jìn)行。(4)如圖是采納純化微生物培育的兩種接種方法接種后培育的效果圖,請分析接種的詳細(xì)方法。獲得圖A效果的接種方法是_______________________,獲得圖B效果的接種方法是_____________________________________________________。一同學(xué)在純化土壤中的細(xì)菌時(shí),發(fā)覺培育基上的菌落連成一片,最可能的緣由是_____________________________________________________應(yīng)當(dāng)怎樣操作才可避開此種現(xiàn)象?__________________________________。(5)假如探究溫度對纖維素酶活性的影響,自變量是________,應(yīng)當(dāng)保持______________等不變(至少答兩項(xiàng))。[解析](1)篩選菌種應(yīng)從適于目的菌種生長、繁殖的環(huán)境中找尋,故培育噬鹽菌應(yīng)從高鹽環(huán)境中采集。(2)富集培育時(shí)培育基及培育條件應(yīng)能促進(jìn)目的菌的生長、繁殖。(3)微生物的分別及培育中必需保證無菌,包括培育基的滅菌和操作過程的滅菌等。(4)純化培育中接種方法有稀釋涂布平板法和平板劃線法,前一種方法形成的菌落分布較勻稱,后一種方法形成的菌落分布不勻稱,先劃線的部分菌落密集甚至相連,后劃線的部分菌落分布稀疏。(5)探究溫度對酶活性的影響時(shí),溫度為自變量,酶活性為因變量,其他變量如底物和酶的用量、pH、反應(yīng)時(shí)間等均為無關(guān)變量。[答案](1)海灘等高鹽(2)以淀粉為唯一碳源高溫(3)高壓蒸汽滅菌無菌(4)稀釋涂布平板法平板劃線法菌液濃度過高增大稀釋倍數(shù)(或培育過程被雜菌污染嚴(yán)格無菌操作;或用接種環(huán)劃下一區(qū)域前接種環(huán)沒有滅菌每劃一個(gè)新區(qū)域前都要對接種環(huán)進(jìn)行滅菌處理)(緣由與操作要對應(yīng))(5)溫度纖維素的量與濃度、反應(yīng)時(shí)間、pH11.選擇培育基可以從混雜的微生物群體中分別出所需的微生物,通過不含有機(jī)物的培育基、缺氮培育基、含尿素(不含其他氮源)的培育基,可從土壤中分別出的微生物依次是()A.硝化細(xì)菌、放線菌、根瘤菌B.根瘤菌、青霉菌、固氮菌C.異養(yǎng)型細(xì)菌、放線菌、硝化細(xì)菌D.自養(yǎng)型細(xì)菌、固氮菌、分解尿素的細(xì)菌D[選擇培育基是依據(jù)不同微生物的代謝特點(diǎn),通過變更培育基的成分,以達(dá)到選擇某種微生物的目的。不含有機(jī)物的培育基可以選擇自養(yǎng)型微生物,缺少氮元素的培育基可以培育固氮微生物,含尿素(不含其他氮源)的培育基可以選擇能分解尿素的微生物。]12.用稀釋涂布平板法測定同一土壤樣品中的細(xì)菌數(shù),在對應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培育基中,得到以下幾種統(tǒng)計(jì)結(jié)果,正確的是()A.涂布了1個(gè)平板,統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是230B.涂布了2個(gè)平板,統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是215和260,取平均值238C.涂布了3個(gè)平板,統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是21、212和256,取平均值163D.涂布了3個(gè)平板,統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是210、240和250,取平均值233D[在設(shè)計(jì)試驗(yàn)時(shí),肯定要涂布至少3個(gè)平板,作為重復(fù)組,才能增加試驗(yàn)的勸服力與精確性,所以A、B兩項(xiàng)不正確;C項(xiàng)雖涂布了3個(gè)平板,但是,其中1個(gè)平板的計(jì)數(shù)結(jié)果與另兩個(gè)相差太遠(yuǎn),說明在操作過程中可能出現(xiàn)了錯(cuò)誤;因此,不能簡潔地用3個(gè)平板的計(jì)數(shù)值求平均值。]13.試驗(yàn)測定鏈霉素對3種細(xì)菌的抗生素效應(yīng),用3種細(xì)菌在事先打算好的瓊脂平板上面3條等長的平行線(3條線均與圖中的鏈霉素帶接觸),將平板置于37℃條件下恒溫培育3天,結(jié)果如圖所示。從試驗(yàn)結(jié)果分析,以下敘述不正確的是()A.鏈霉素能阻擋結(jié)核桿菌的生長B.鏈霉素對結(jié)核桿菌比對霍亂菌更有效C.鏈霉素對結(jié)核桿菌比對傷寒菌更有效D.鏈霉素可以用于治療傷寒病人D[從圖中可以看出,這是含有鏈霉素的選擇培育基,接種的三種細(xì)菌中,霍亂菌和結(jié)核桿菌都可以被殺滅,并且鏈霉素對結(jié)核桿菌殺滅的有效程度大于霍亂菌,而傷寒菌照常生長不受影響,所以選項(xiàng)D錯(cuò)誤。]14.下列利用選擇培育基篩選微生物的方法,不正確的是()A.依據(jù)微生物對碳源需求的差別,運(yùn)用含不同碳源的培育基B.依據(jù)微生物缺乏的特別養(yǎng)分物質(zhì)的種類,在培育基中增減不同的特別養(yǎng)分物質(zhì)C.依據(jù)微生物遺傳組成的差異,在培育基中加入不同比例的核酸D.依據(jù)微生物對抗生素敏感性的差異,在培育基中加入不同的抗生素C[由于不同的微生物對碳源、氮源、無機(jī)鹽、特別養(yǎng)分物質(zhì)的需求不同和對不同抑菌物質(zhì)敏感性不同,因此,可以依據(jù)微生物的生長需求來配制特別的培育基以獲得單一菌種,也可以依據(jù)其對抗生素等抑菌物質(zhì)的敏感性不同,加入不同的抗生素來獲得單一菌種。微生物不能干脆利用加入培育基中的核酸,因此向培育基中加入不同比例的核酸對分別、純化菌種是無用的。]15.在探究培育液中酵母菌種群數(shù)量變更的試驗(yàn)中,需利用計(jì)數(shù)板對微生物細(xì)胞進(jìn)行干脆計(jì)數(shù)。如圖所示,計(jì)數(shù)板是一個(gè)特制的可在顯微鏡下視察的玻片,樣品就滴在計(jì)數(shù)室內(nèi)。計(jì)數(shù)室由25×16=400個(gè)小室組成,容納液體總體積為0.1mm3。某同學(xué)操作時(shí)將1mL酵母菌樣品加99mL無菌水稀釋,用無菌吸管吸取少許使其自行滲入計(jì)數(shù)室,蓋上蓋玻片并用濾紙吸去多余菌液,進(jìn)行視察計(jì)數(shù)。(1)在試驗(yàn)中,某同學(xué)的部分試驗(yàn)操作過程是這樣的:①從靜置試管中吸取酵母菌培育液加入計(jì)數(shù)板進(jìn)行計(jì)數(shù),并記錄數(shù)據(jù);②把酵母菌培育液放置在冰箱中;③第七天再取樣計(jì)數(shù),記錄數(shù)據(jù),統(tǒng)計(jì)分析繪成曲線。請訂正該同學(xué)試驗(yàn)操作中的3處錯(cuò)誤:①_____________________________________________________;②_____________________________________________________;③_____________________________________________________。(2)在試驗(yàn)前應(yīng)當(dāng)對計(jì)數(shù)板、吸管等器具進(jìn)行____________處理。(3)假如一個(gè)小方格內(nèi)酵母菌過多,難以數(shù)清,應(yīng)實(shí)行的措施是________。(4)假如視察到a、b、c、d、e5個(gè)大格共80個(gè)小室內(nèi)共有酵母菌48個(gè),則上述1mL酵母菌樣品中約有酵母菌________個(gè),要獲得較為精確的數(shù)值,削減誤差,你認(rèn)為該怎么做?________________。[解析](1)在從試管中吸取酵母菌培育液之前,應(yīng)將試管輕輕振蕩幾下,目的是使酵母菌在培育液中勻稱分布。酵母菌的培育液應(yīng)置于相宜條件下,并且每隔24小時(shí)就要統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目。(2)
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