2025年上教版選擇性必修3生物上冊(cè)階段測(cè)試試卷

…………○…………內(nèi)…………○…………裝…………○…………內(nèi)…………○…………裝…………○…………訂…………○…………線(xiàn)…………○…………※※請(qǐng)※※不※※要※※在※※裝※※訂※※線(xiàn)※※內(nèi)※※答※※題※※…………○…………外…………○…………裝…………○…………訂…………○…………線(xiàn)…………○…………第=page22頁(yè)，總=sectionpages22頁(yè)第=page11頁(yè)，總=sectionpages11頁(yè)2025年上教版選擇性必修3生物上冊(cè)階段測(cè)試試卷262考試試卷考試范圍：全部知識(shí)點(diǎn)；考試時(shí)間：120分鐘學(xué)校：______姓名：______班級(jí)：______考號(hào)：______總分欄題號(hào)一二三四五六總分得分評(píng)卷人得分一、選擇題(共6題，共12分)1、使用現(xiàn)代生物科技手段達(dá)到所需目的的物質(zhì)或過(guò)程，與生物體內(nèi)有差異的是（）A.植物組織培養(yǎng)過(guò)程中形成的愈傷組織B.PCR技術(shù)擴(kuò)增基因時(shí)使用的DNA聚合酶C.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)細(xì)胞正常分裂的代數(shù)是有限的D.構(gòu)建的基因表達(dá)載體中需要啟動(dòng)子來(lái)驅(qū)動(dòng)轉(zhuǎn)錄2、生物技術(shù)發(fā)展速度很快，已滅絕生物的“復(fù)生”將不再是神話(huà)。如果世界上最后一只野馬剛死亡，下列提供的“復(fù)生”野馬個(gè)體的方法中能夠成功的是（）A.將野馬的體細(xì)胞取出，利用組織培養(yǎng)技術(shù)，經(jīng)脫分化、再分化，培育成新個(gè)體B.將野馬的體細(xì)胞兩兩融合，再經(jīng)組織培養(yǎng)培育成新個(gè)體C.取出野馬的體細(xì)胞核移植到母家馬的去核卵母細(xì)胞中，經(jīng)孕育培養(yǎng)成新個(gè)體D.將野馬基因?qū)爰荫R的受精卵中，培育成新個(gè)體3、下列有關(guān)平板劃線(xiàn)操作的敘述，不正確的是（）A.第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物B.每次劃線(xiàn)前，灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線(xiàn)結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種C.在第二次劃線(xiàn)時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來(lái)源于菌液D.劃線(xiàn)結(jié)束后，灼燒接種環(huán)能及時(shí)殺死接種環(huán)上的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者4、良種試管牛的繁殖過(guò)程是：用激素促進(jìn)甲牛多排卵，然后把卵母細(xì)胞在體外與人工采集的乙牛的精子進(jìn)行受精，在特定培養(yǎng)基上培育成胚胎，再把胚胎送入經(jīng)過(guò)激素處理的丙牛的子宮內(nèi)，孕育成試管牛。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）A.丙牛對(duì)移入的外來(lái)胚胎基本上不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)B.處理甲牛的激素可能是孕激素C.甲牛、乙牛對(duì)試管牛核基因的貢獻(xiàn)相同D.該技術(shù)可應(yīng)用于加速優(yōu)良種畜的繁殖5、下列關(guān)于“DNA粗提取與鑒定實(shí)驗(yàn)”的敘述，正確的是（）A.洗滌劑能瓦解細(xì)胞膜并增加DNA在NaCl溶液中的溶解度B.將DNA絲狀物放入二苯胺試劑中沸水浴后冷卻變藍(lán)C.調(diào)節(jié)NaC1溶液濃度或加入木瓜蛋白酶，都可以去除部分雜質(zhì)D.加入冷卻的酒精后用玻棒快速攪拌濾液會(huì)導(dǎo)致DNA獲得量增多6、玉簾和石蒜為二倍體，將二者的花粉用一定的方法誘導(dǎo)融合后，再通過(guò)植物組織培養(yǎng)可使融合細(xì)胞長(zhǎng)成植株，已知培養(yǎng)過(guò)程中未進(jìn)行融合細(xì)胞的篩選。下列說(shuō)法正確的是（）A.融合細(xì)胞進(jìn)行植物組織培養(yǎng)后形成的植株均不可育B.植物組織培養(yǎng)的脫分化和再分化培養(yǎng)基均要含有碳源C.得到雜種植株過(guò)程中需要用秋水仙素處理萌發(fā)的種子D.所用培養(yǎng)基及花粉粒都要進(jìn)行嚴(yán)格的滅菌處理評(píng)卷人得分二、多選題(共9題，共18分)7、營(yíng)養(yǎng)缺陷性菌株是野生型菌株經(jīng)過(guò)人工誘變或自發(fā)突變失去合成某種成長(zhǎng)因子的能力；只能在補(bǔ)充了相應(yīng)的生長(zhǎng)因子的基本培養(yǎng)基中才能正常生長(zhǎng)的變異菌株。某研究小組對(duì)酵母菌用紫外線(xiàn)照射后將其接種到甲培養(yǎng)皿的培養(yǎng)基上，一段時(shí)間后將甲培養(yǎng)皿的菌落影印接種（不改變菌落位置）到乙；丙兩培養(yǎng)皿的培養(yǎng)基中，進(jìn)一步培養(yǎng)得到如下圖所示結(jié)果。

下列分析正確的是（）A.接種到甲培養(yǎng)皿采用的是稀釋涂布平板法B.甲、丙兩培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基是基本培養(yǎng)基C.甲培養(yǎng)皿中菌落數(shù)有可能比接種的酵母菌數(shù)少D.甲、乙、丙三個(gè)培養(yǎng)皿都可能存在營(yíng)養(yǎng)缺陷型8、在傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)中；果醋的制作往往在果酒制作基礎(chǔ)上進(jìn)行。下圖甲是醋酸發(fā)酵裝置，乙是培養(yǎng)液pH變化曲線(xiàn)圖，下列敘述不正確的是（）

A.發(fā)酵初期不通氣，溶液中沒(méi)有氣泡產(chǎn)生B.中期可以聞到酒香，說(shuō)明進(jìn)行了酒精發(fā)酵C.后期接種醋酸菌，適當(dāng)通氣并保持原有溫度D.圖乙中能正確表示pH變化的曲線(xiàn)是③9、良種試管牛的繁殖過(guò)程是用激素促進(jìn)甲牛多排卵，然后把卵母細(xì)胞在體外與人工采集的乙牛的精子進(jìn)行受精，在特定培養(yǎng)基上培育成胚胎，再把胚胎送入經(jīng)過(guò)激素處理的丙牛的子宮內(nèi)，孕育成試管牛。下列相關(guān)敘述正確的是（）A.“用激素促進(jìn)甲牛多排卵”的激素是孕激素B.產(chǎn)生試管牛的生殖方式屬于有性生殖C.甲牛、乙牛對(duì)試管牛核基因的貢獻(xiàn)相同D.該技術(shù)可應(yīng)用于加速優(yōu)良種畜的繁殖10、下圖是我國(guó)科學(xué)家制備小鼠孤雄單倍體胚胎干細(xì)胞的相關(guān)研究流程；其中Oct4基因在維持胚胎干細(xì)胞全能性和自我更新中發(fā)揮極其重要的作用。下列敘述正確的是（）

A.受精卵發(fā)育過(guò)程中桑椹胚前的細(xì)胞都是全能性細(xì)胞B.推測(cè)Oct4基因的表達(dá)有利于延緩衰老C.過(guò)程③胚胎干細(xì)胞細(xì)胞核大、核仁明顯D.從卵巢中獲取的卵母細(xì)胞可直接用于過(guò)程①11、將蘇云金桿菌的Bt基因?qū)朊藁?xì)胞中，可獲得抗棉鈴蟲(chóng)的轉(zhuǎn)基因棉，其過(guò)程如圖所示(KanR為卡那霉素抗性基因)。下列相關(guān)敘述正確的是（）

A.可使用含卡那霉素的培養(yǎng)基來(lái)篩選含重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌B.過(guò)程①必須用同種限制酶切割含Bt基因的DNA和Ti質(zhì)粒C.過(guò)程③將棉花細(xì)胞與農(nóng)桿菌混合培養(yǎng)能使T-DNA進(jìn)入棉花細(xì)胞D.過(guò)程④和過(guò)程⑤的培養(yǎng)基中添加的激素的濃度不同12、生活中常見(jiàn)的果酒、果醋和泡菜的制作離不開(kāi)傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)。下列相關(guān)敘述正確的是（）A.家庭釀酒、制果醋和酸奶均需要選純種菌進(jìn)行發(fā)酵B.果醋制作的溫度一般控制在30～35℃，果酒發(fā)酵的溫度一般控制在18～25℃C.制作泡菜壇口密封的目的是保證壇內(nèi)乳酸菌發(fā)酵時(shí)所需的無(wú)氧環(huán)境D.果醋制作中期通入氮?dú)?，有利于醋酸菌將乙醇變?yōu)橐胰?，再將乙醛變?yōu)榇姿?3、某女子的線(xiàn)粒體存在遺傳缺陷，研究人員取其卵細(xì)胞的細(xì)胞核，注入捐獻(xiàn)者的去核卵細(xì)胞中，經(jīng)體外培養(yǎng)、體外受精和早期壓胎培養(yǎng)，將早期胚胎移入該女子的子宮內(nèi)并發(fā)育成胎兒，該嬰兒稱(chēng)為“三體嬰兒”。下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是（）A.“三體嬰兒”同時(shí)含有父親、母親及卵細(xì)胞捐獻(xiàn)者的部分基因B.該技術(shù)能避免“三體嬰兒”攜帶父親和母親染色體上的致病基因C.在體外受精前，完成核移植的卵細(xì)胞需處于MⅡ期D.在體外受精前，可根據(jù)該夫妻的意愿選擇X精子或Y精子14、為了獲得抗蚜蟲(chóng)棉花新品種，研究人員將雪花蓮凝集素基因（GNA）和尾穗莧凝集素基因（ACA）與載體（pBI121）結(jié)合，然后導(dǎo)入棉花細(xì)胞（如下圖所示）。下列操作與實(shí)驗(yàn)?zāi)康南喾氖牵ǎ?/p>

A.用限制酶BsaBⅠ和DNA連接酶處理兩種基因可獲得GNA-ACA融合基因B.用KpnⅠ和XhoⅠ兩種酶處理融合基因和載體可保證基因轉(zhuǎn)錄方向正確C.將棉花細(xì)胞接種在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上可篩選出轉(zhuǎn)基因細(xì)胞D.用PCR技術(shù)可檢測(cè)GNA和ACA基因是否導(dǎo)入棉花細(xì)胞中15、農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒上的T-DNA可以轉(zhuǎn)移并隨機(jī)插入到被侵染植物的染色體DNA中。研究者將下圖中被侵染植物的DNA片段連接成環(huán)；并以此環(huán)為模板，利用PCR技術(shù)擴(kuò)增出T-DNA插入位置兩側(cè)的未知序列，以此可確定T-DNA插入的具體位置。下列說(shuō)法正確的是（）

A.進(jìn)行PCR擴(kuò)增的依據(jù)是DNA分子雙鏈復(fù)制的原理B.進(jìn)行PCR擴(kuò)增需要的酶有解旋酶和熱穩(wěn)定DNA聚合酶C.利用圖中的引物②、③組合可擴(kuò)增出兩側(cè)的未知序列D.通過(guò)與受體細(xì)胞的基因組序列比對(duì)，可確定T-DNA的插入位置評(píng)卷人得分三、填空題(共7題，共14分)16、平板劃線(xiàn)法是通過(guò)____________在_______________培養(yǎng)基表面______________的操作，將__________的菌種______________分散到培養(yǎng)基的表面。在數(shù)次劃線(xiàn)后培養(yǎng)，可以分離到由____________繁殖而來(lái)的肉眼可見(jiàn)的_______________，這就是_______________________。稀釋涂布平板法則是將菌液進(jìn)行一系列的______________，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到_____________培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成____________，從而能在培養(yǎng)基表面形成___________________。17、動(dòng)物細(xì)胞融合的意義：克服了______，成為研究_____、_____、腫瘤和生物新品種培育的重要手段。18、基因的“剪刀”是_____，它的化學(xué)本質(zhì)是_____，它只能識(shí)別一種特定的_____，并在_____上切割DNA分子；基因的“針線(xiàn)”是______，它能連接DNA骨架上的_____，DNA的骨架由___________構(gòu)成；基因的運(yùn)載體是將_____送入_____的運(yùn)輸工具。目前常用的運(yùn)載體有_____、________和_____。質(zhì)粒存在于許多_____和______等生物中，是擬核或_____外能夠_____的很小的環(huán)狀_____。19、基因工程操作一般經(jīng)歷如下四個(gè)步驟：_____。20、原核基因采取______獲得，真核基因是______。人工合成目的基因的常用方法有______和______。21、_______mol/L濃度下，DNA溶解度最大。22、蛋白質(zhì)工程在生物制藥上有廣泛的應(yīng)用。如果已經(jīng)確認(rèn)某種新蛋白質(zhì)可能具有特殊的抗癌功能，其氨基酸序列也已經(jīng)確認(rèn)，如何通過(guò)蛋白質(zhì)工程生產(chǎn)這種新藥？如果回答有困難，可以向老師請(qǐng)教或通過(guò)互聯(lián)網(wǎng)查找答案。_____評(píng)卷人得分四、判斷題(共4題，共12分)23、胚胎發(fā)育早期，細(xì)胞的數(shù)量不斷增加，胚胎的總體積也增加。()A.正確B.錯(cuò)誤24、生殖性克隆是指通過(guò)克隆技術(shù)產(chǎn)生獨(dú)立生存的新個(gè)體。（選擇性必修3P106）()A.正確B.錯(cuò)誤25、生殖性克隆和治療性克隆兩者有著本質(zhì)的區(qū)別。()A.正確B.錯(cuò)誤26、中國(guó)政府禁止生殖性克隆，但不反對(duì)治療性克隆。()A.正確B.錯(cuò)誤評(píng)卷人得分五、實(shí)驗(yàn)題(共4題，共40分)27、鼠傷寒沙門(mén)氏菌的野生型菌株（his+）可在基本培養(yǎng)基（含微量組氨酸）上生長(zhǎng)形成菌落，而突變型的組氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株（his-）不能合成組氨酸；無(wú)法在基本培養(yǎng)基上形成菌落。利用his菌株可檢測(cè)環(huán)境或食品中是否存在化學(xué)致癌劑（誘發(fā)his-菌株突變）?；卮鹣铝袉?wèn)題：

(1).基本培養(yǎng)基的成分主要包括_____。制備基本固體培養(yǎng)基的操作：計(jì)算→稱(chēng)量→溶化→滅菌→倒平板。倒平板時(shí)應(yīng)注意：_____。

(2).檢測(cè)是否存在化學(xué)致癌劑時(shí)，用_____法將his-菌株接種于基本培養(yǎng)基上，使其密集均勻分布在平板上，將浸泡過(guò)待測(cè)化合物的濾紙片貼于平板中央。若培養(yǎng)基滅菌合格，則可能影響該檢測(cè)結(jié)果的兩個(gè)重要因素是_____。若圖A為對(duì)照組，B為實(shí)驗(yàn)組，則A組濾紙片的處理方法是_____。經(jīng)正確檢驗(yàn)后，結(jié)果如B所示，則實(shí)驗(yàn)結(jié)果和結(jié)論為_(kāi)____。

(3).使用過(guò)的培養(yǎng)基在丟棄之前應(yīng)做的處理及目的是_____。28、黃曲霉和寄生曲霉是常見(jiàn)的真菌，多見(jiàn)于發(fā)霉的糧食、糧制品及其它霉腐的有機(jī)物上。黃曲霉素是由黃曲霉和寄生曲霉等產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物，具有極強(qiáng)的毒性和致癌性?？蒲腥藛T用黃曲霉素Bl（AFB1）的結(jié)構(gòu)類(lèi)似物——豆香素（C9H6O2）篩選出能高效降解AFB1的菌株；具體過(guò)程如下圖所示，其中序號(hào)代表過(guò)程。

（1）為了篩選到AFB1降解菌，可選的采樣地點(diǎn)是_____。

（2）在篩選AFB1降解菌時(shí)，1號(hào)培養(yǎng)基的碳源是_____，過(guò)程③所需要的工具是_____。2號(hào)培養(yǎng)基加入瓊脂的目的是_____。

（3）在此過(guò)程中，鑒定不同菌落降解AFB1能力的方法是_____。

（4）菌體對(duì)有機(jī)物的降解途徑有胞外分泌物降解和菌體吸附降解兩種。對(duì)降解菌的發(fā)酵液進(jìn)行離心，發(fā)現(xiàn)上清液中AFB1的殘留率明顯低于菌懸液的。經(jīng)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)上清液中存在多種蛋白質(zhì)，為驗(yàn)證蛋白質(zhì)K是降解AFB1的有效成分，科研小組設(shè)計(jì)了實(shí)驗(yàn)過(guò)程，如下表。表中①、②、③分別表示_____（用“+”或“-”表示）。如果驗(yàn)證成功，則④與⑤的大小比較關(guān)系是_____。不同處理或測(cè)定試管甲試管乙培養(yǎng)過(guò)降解菌的上清液①②一段時(shí)間后，分別加入含AFB1的培養(yǎng)基蛋白質(zhì)K水解酶+③測(cè)定培養(yǎng)基中AFB1含量④⑤

表中“＋”表示添加，“-”表示不添加，甲乙試管所加物質(zhì)的量均相同。29、《傷寒論》中記載的芍藥甘草湯是由芍藥和甘草兩味藥物制成，具有調(diào)和肝脾，緩急止痛的作用，芍藥和甘草的主要活性成分分別為芍藥苷和甘草酸?？蒲袌F(tuán)隊(duì)通過(guò)制備抗芍藥苷的單克隆抗體，將其純化后結(jié)合在固相載體上，讓芍藥甘草湯流過(guò)，去除湯中芍藥苷，用于探究芍藥苷與芍藥甘草湯對(duì)小鼠鎮(zhèn)痛作用的相關(guān)性?；卮鹣铝袉?wèn)題。

(1)制備單克隆抗體依賴(lài)的生物技術(shù)有______________、_________________等。將芍藥苷與蛋白質(zhì)結(jié)合作為抗原，定期間隔免疫小鼠，取免疫后的小鼠脾臟，剪碎并用_____________酶處理得到小鼠脾臟細(xì)胞。

(2)圖中誘導(dǎo)其與骨髓瘤細(xì)胞融合的試劑X是____________，經(jīng)選擇培養(yǎng)篩選出的細(xì)胞Y具有________________________特點(diǎn)。用多孔培養(yǎng)板培養(yǎng)細(xì)胞Y并收集上清液，利用___________________技術(shù)對(duì)上清液進(jìn)行抗體陽(yáng)性檢測(cè)。

(3)研究人員將生理狀態(tài)相同的小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、造模組進(jìn)行如下處理，造模組前期已完成冰醋酸致痛處理（冰醋酸能引起深部的、大面積且較持久的疼痛刺激，此時(shí)小鼠會(huì)出現(xiàn)扭體反應(yīng)）。請(qǐng)完善實(shí)驗(yàn)方案。。組別前期處理后期處理對(duì)照組腹腔注射生理鹽水I造模組腹腔注射冰醋酸模型組：口服生理鹽水陽(yáng)性藥組：口服芍藥甘草湯陽(yáng)性藥組：口服芍藥甘草湯實(shí)驗(yàn)組：Ⅱ?qū)嶒?yàn)組：Ⅱ

①表中I的處理是_____________、Ⅱ的處理_______________。

②結(jié)果與分析：

若前期處理后，造模組小鼠扭體次數(shù)顯著__________對(duì)照組，表明致痛處理成功。后期處理結(jié)束后測(cè)定各組小鼠扭體次數(shù)，若結(jié)果為_(kāi)_____________________，則表明芍藥苷是芍藥甘草湯中發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用的重要成分之一。30、干燥綜合征（SS）是臨床常見(jiàn)的一種自身免疫??；患者血清中存在多種抗體，其中以SSB抗體特異性最強(qiáng)。下圖表示科研人員利用基因工程技術(shù)獲得SSB蛋白及利用SSB蛋白對(duì)小鼠進(jìn)行免疫的過(guò)程?；卮鹣铝袉?wèn)題：

(1)利用RNA通過(guò)①過(guò)程獲得cDNA需要________酶。已知真核生物mRNA在3'端加有PolyA（多聚腺嘌呤核糖核苷酸）保護(hù)尾部不被降解。為了針對(duì)性獲得cDNA，應(yīng)如何設(shè)計(jì)逆轉(zhuǎn)錄第一步時(shí)的DNA引物______，設(shè)計(jì)引物的目的是______。

(2)為確保與pET41a質(zhì)粒定向連接，對(duì)逆轉(zhuǎn)錄得到的cDNA擴(kuò)增時(shí)，應(yīng)在相應(yīng)引物的_______（填“5'”或“3'”）端加上______酶切位點(diǎn)。

(3)③過(guò)程用重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染大腸桿菌時(shí)，需要用Ca2+處理大腸桿菌，目的是______，然后將處理后的大腸桿菌先接種在添加_______的培養(yǎng)基（A）上培養(yǎng)，待長(zhǎng)出菌落后再利用無(wú)菌膜同位置轉(zhuǎn)移到添加______的培養(yǎng)基（B）上培養(yǎng)，收集_______菌落進(jìn)一步純化后將菌體破碎處理；篩選得到SSB蛋白。

(4)將改造后的大腸桿菌生產(chǎn)的SSB蛋白注入到小鼠體內(nèi)是為了檢測(cè)該蛋白是否具有抗原性，則后續(xù)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容應(yīng)為抽取小鼠血液_______。評(píng)卷人得分六、綜合題(共3題，共18分)31、如圖為A；B不同物種間體細(xì)胞雜交示意圖請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

(1)在用促融劑處理時(shí)，使用的促融劑主要是______。

(2)若只考慮兩兩融合，融合的細(xì)胞中可能包括______種類(lèi)型，若A和B均為二倍體，則雜種植株為_(kāi)_____倍體。

(3)該技術(shù)利用的原理有__________________和__________________。

(4)該技術(shù)的優(yōu)勢(shì)是____________________________________。32、H18雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生的抗人肝癌單克隆抗體（HAb18）對(duì)于人體肝癌的靶向治療具有重要的意義；但H18雜交瘤細(xì)胞在培養(yǎng)過(guò)程中的凋亡現(xiàn)象制約著細(xì)胞的高密度培養(yǎng)以及生產(chǎn)能力的提高。通過(guò)基因工程可改造H18雜交瘤細(xì)胞的抗凋亡能力，相關(guān)研究步驟如下。請(qǐng)回答：

(1)請(qǐng)完善表格中的實(shí)驗(yàn)步驟。實(shí)驗(yàn)步驟具體操作肝癌細(xì)胞的培養(yǎng)將人肝癌細(xì)胞在培養(yǎng)液中培養(yǎng)一段時(shí)間后，用①____酶處理培養(yǎng)液，漂洗后調(diào)整細(xì)胞懸液濃度為1×107個(gè)·mL－1．②____向小鼠體內(nèi)注射肝癌細(xì)胞懸液0.8mL，以后每隔2周免疫1次，共3次，最后一次免疫后3天，取脾臟制成細(xì)胞懸液備用。細(xì)胞融合及篩選將脾臟細(xì)胞懸液和③____細(xì)胞懸液進(jìn)行融合，篩選出H18雜交瘤細(xì)胞。改造H18雜交瘤細(xì)胞利用PCR技術(shù)獲得小鼠的④____基因使用⑤____酶構(gòu)建基因表達(dá)載體，通過(guò)脂質(zhì)體法導(dǎo)入H18雜交瘤細(xì)胞，再篩選出抗凋亡能力明顯提高的H18雜交瘤細(xì)胞。使用⑤____酶構(gòu)建基因表達(dá)載體，通過(guò)脂質(zhì)體法導(dǎo)入H18雜交瘤細(xì)胞，再篩選出抗凋亡能力明顯提高的H18雜交瘤細(xì)胞。

(2)向培養(yǎng)肝癌細(xì)胞的培養(yǎng)液中加入____，能為動(dòng)物細(xì)胞生長(zhǎng)增殖和保持動(dòng)物細(xì)胞生物學(xué)性狀提供不可缺少的物質(zhì)，培養(yǎng)液中還需加入一定量抗生素的目的是____，培養(yǎng)時(shí)提供的二氧化碳?xì)怏w的目的是____。

(3)在細(xì)胞融合及篩選步驟中，常用的生物誘導(dǎo)因素是____。在改造H18雜交瘤細(xì)胞時(shí)，通過(guò)脂質(zhì)體法將基因表達(dá)載體導(dǎo)入H18雜交瘤細(xì)胞的原理是利用了____。

(4)與普通抗肝癌的化療藥物相比，用抗人肝癌單克隆抗體（HAb18）與相應(yīng)抗癌藥物結(jié)合制成的“生物導(dǎo)彈”治療肝癌的主要優(yōu)點(diǎn)是能____，減少對(duì)正常細(xì)胞的傷害，減少用藥劑量。也可以使用____標(biāo)記抗人肝癌單克隆抗體（HAb18），顯示肝癌腫瘤的位置，診斷肝癌腫瘤病灶是否轉(zhuǎn)移，以指導(dǎo)手術(shù)范圍。33、經(jīng)過(guò)基因工程改造的；能生產(chǎn)人胰島素的大腸桿菌是一種特殊的“工程菌”。所用運(yùn)載體（普通質(zhì)粒）結(jié)構(gòu)如下圖左；目的基因如下圖右?；卮鹣铝袉?wèn)題：

(1)該過(guò)程中最重要的環(huán)節(jié)是基因表達(dá)載體的構(gòu)建，方法是選用____________（填“X”或“Y”）限制酶同時(shí)處理質(zhì)粒和目的基因，再用____________處理使之成為重組質(zhì)粒。構(gòu)建好的基因表達(dá)載體中含有啟動(dòng)子，啟動(dòng)子是指____________。

(2)將上述重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌時(shí)，應(yīng)選用____________處理大腸桿菌；使其成為感受態(tài)細(xì)胞。

(3)將目的基因?qū)胧荏w菌時(shí)；常出現(xiàn)三種情況：未轉(zhuǎn)化的細(xì)菌；含空載體（普通質(zhì)粒）的細(xì)菌、含重組質(zhì)粒的細(xì)菌。下圖是含人胰島素基因的重組質(zhì)粒的“工程菌”的篩選示意圖。

上圖中的____________（用圖中字母作答）菌落為含有目的基因的“工程菌”。參考答案一、選擇題(共6題，共12分)1、B【分析】【分析】

1；轉(zhuǎn)錄過(guò)程需要啟動(dòng)子來(lái)驅(qū)動(dòng)。

2；PCR技術(shù)的條件：模板DNA、四種脫氧核苷酸、一對(duì)引物、熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶）。

3；正常動(dòng)物細(xì)胞的分裂能力是有限的；傳代次數(shù)也是有限的。

【詳解】

A；植物組織培養(yǎng)過(guò)程中通過(guò)脫分化形成愈傷組織的過(guò)程進(jìn)行有絲分裂；細(xì)胞內(nèi)遺傳物質(zhì)不變，與生物體無(wú)差異，A錯(cuò)誤；

B；PCR技術(shù)擴(kuò)增基因時(shí)使用的DNA聚合酶是熱穩(wěn)定DNA聚合酶；而體內(nèi)DNA復(fù)制所用的酶不能耐高溫，這與題意相符，B正確；

C；動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)細(xì)胞正常分裂的代數(shù)是有限的；體內(nèi)細(xì)胞分裂的代數(shù)也是有限的，與題意不符，C錯(cuò)誤；

D；構(gòu)建的基因表達(dá)載體中需要啟動(dòng)子來(lái)驅(qū)動(dòng)轉(zhuǎn)錄；體內(nèi)轉(zhuǎn)錄過(guò)程也需要啟動(dòng)子來(lái)驅(qū)動(dòng)，與題意不符，D錯(cuò)誤。

故選B。2、C【分析】【分析】

1.動(dòng)物核移植的概念：將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核移入一個(gè)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中；使其重組并發(fā)育成一個(gè)新的胚胎．這個(gè)新的胚胎最終發(fā)育為動(dòng)物個(gè)體。核移植得到的動(dòng)物稱(chēng)克隆動(dòng)物。

2.植物細(xì)胞的全能性可以通過(guò)植物組織培養(yǎng)來(lái)實(shí)現(xiàn)；動(dòng)物細(xì)胞的全能性受到限制，不能用動(dòng)物細(xì)胞復(fù)制動(dòng)物。

【詳解】

A；由于動(dòng)物細(xì)胞的全能性受到限制；目前動(dòng)物的體細(xì)胞還不能直接培養(yǎng)成動(dòng)物個(gè)體，A錯(cuò)誤；

B；由于動(dòng)物細(xì)胞的全能性受到限制；目前動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)還不能產(chǎn)生生物體，B錯(cuò)誤；

C；將野驢的體細(xì)胞核移植到母家馬的去核卵母細(xì)胞中；形成重組細(xì)胞，進(jìn)而經(jīng)過(guò)培養(yǎng)獲得重組胚胎，可以克隆形成野馬，該過(guò)程利用核移植技術(shù)，為體細(xì)胞克隆的例子，C正確；

D；將野馬的基因?qū)爰荫R的受精卵中；屬于基因工程，可培育成新性狀的家馬，不能讓野馬復(fù)生，D錯(cuò)誤。

故選C。

【點(diǎn)睛】3、C【分析】【分析】

平板劃線(xiàn)法是指通過(guò)接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線(xiàn)的操作；將聚集的菌種，逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面，最后得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的菌落。

【詳解】

A；接種前先要用火焰灼燒接種環(huán)；目的是避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物，A正確；

B；每次劃線(xiàn)結(jié)束；灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線(xiàn)結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種，B正確；

C；在第二區(qū)域內(nèi)劃線(xiàn)時(shí)；接種環(huán)上的菌種直接來(lái)源于上一次劃線(xiàn)的末端，C錯(cuò)誤；

D；劃線(xiàn)結(jié)束后；灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線(xiàn)結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者，D正確。

故選C。

【點(diǎn)睛】4、B【分析】【分析】

1；良種試管牛的繁殖過(guò)程：對(duì)供體和受體的選擇和處理（同期發(fā)情處理；超數(shù)排卵處理）、配種或進(jìn)行人工授精、對(duì)胚胎的收集檢查培養(yǎng)或保存、進(jìn)行胚胎移植。

【詳解】

A；受體丙牛對(duì)移入子宮的外來(lái)胚胎基本上不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)；為胚胎在受體內(nèi)的存活提供了可能，A正確；

B；處理供體甲牛的激素可能是促性腺激素；使其超數(shù)排卵，B錯(cuò)誤；

C；母本甲牛提供卵細(xì)胞、父本乙牛提供精子；試管牛細(xì)胞核中基因一半來(lái)源于父方，一半來(lái)源于母方，C正確；

D；體外受精和早期胚胎發(fā)育、胚胎移植等技術(shù)可以縮短繁殖周期；增加一生繁殖的后代數(shù)量，D正確。

故選B。

【點(diǎn)睛】5、C【分析】【分析】

DNA粗提取和鑒定的原理：

1；DNA的溶解性：DNA和蛋白質(zhì)等其他成分在不同濃度NaCl溶液中溶解度不同；DNA不溶于酒精溶液；但細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)溶于酒精；DNA對(duì)酶、高溫和洗滌劑的耐受性。

2；DNA的鑒定：在沸水浴的條件下；DNADNA遇二苯胺會(huì)被染成藍(lán)色。

【詳解】

A；DNA粗提取與鑒定實(shí)驗(yàn)中；洗滌劑能瓦解細(xì)胞膜但對(duì)DNA在NaCl溶液中的溶解度沒(méi)有影響，A錯(cuò)誤；

B；將DNA絲狀物溶解后加入二苯胺試劑；沸水浴后冷卻變藍(lán)，B錯(cuò)誤；

C；DNA在不同濃度的NaCl溶液中的溶解度不同；調(diào)節(jié)NaCl溶液濃度可以除去DNA樣品中的部分雜質(zhì)，加入木瓜蛋白酶也可以除去DNA樣品中的蛋白質(zhì)雜質(zhì)，C正確；

D；加入冷卻的酒精后用玻棒緩慢攪拌濾液可以使成絲狀的DNA聚集在一起；增加提取量，D錯(cuò)誤。

故選C。

【點(diǎn)睛】6、B【分析】【分析】

將二者的花粉用一定的方法誘導(dǎo)融合后；花粉間的融合是隨機(jī)的，僅考慮兩兩融合，可得到三種不同的融合細(xì)胞。

【詳解】

A；培養(yǎng)過(guò)程中未進(jìn)行融合細(xì)胞的篩選；同種植物的花粉融合后經(jīng)組織培養(yǎng)形成的是同源二倍體，是可育的，A錯(cuò)誤；

B；植物組織培養(yǎng)的脫分化和再分化培養(yǎng)基均以蔗糖作為碳源；B正確；

C；雜種細(xì)胞經(jīng)組織培養(yǎng)即可得到雜種植株；C錯(cuò)誤；

D；所用培養(yǎng)基要進(jìn)行嚴(yán)格的滅菌處理；花粉粒經(jīng)消毒即可，D錯(cuò)誤。

故選B。二、多選題(共9題，共18分)7、A:C【分析】【分析】

①平板劃線(xiàn)法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板；接種，劃線(xiàn)，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線(xiàn)的開(kāi)始部分，微生物往往連在一起生長(zhǎng)，隨著線(xiàn)的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落。

②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過(guò)足夠稀釋后；均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后，可形成單菌落。

【詳解】

A；甲培養(yǎng)皿的菌落均勻分布；接種方法應(yīng)為稀釋涂布平板法，A正確；

B；甲、丙培養(yǎng)基菌落數(shù)目多；包括野生型酵母菌菌株和某種營(yíng)養(yǎng)缺陷型酵母菌菌株，乙培養(yǎng)皿菌株是某種營(yíng)養(yǎng)缺陷型酵母菌菌株，乙培養(yǎng)皿的培養(yǎng)基是基本培養(yǎng)基，甲和丙是加入了同種營(yíng)養(yǎng)成分的培養(yǎng)基，B錯(cuò)誤；

C；由于基因突變具有不定向性；接種到甲培養(yǎng)皿的酵母菌可能還有其他營(yíng)養(yǎng)缺陷型，且有些菌落不一定由一個(gè)酵母菌形成，所以，甲培養(yǎng)皿中菌落數(shù)有可能比接種的酵母菌數(shù)少，C正確；

D；乙培養(yǎng)皿的培養(yǎng)基是基本培養(yǎng)基；形成的菌落只可能是野生型菌落，D錯(cuò)誤。

故選AC。8、A:C:D【分析】【分析】

1；參與果酒制作的微生物是酵母菌；其新陳代謝類(lèi)型為異養(yǎng)兼性厭氧型。

果酒制作的原理：

（1）在有氧條件下，反應(yīng)式如下：C6H12O6+6H2O+6O2→6CO2+12H2O；

（2）在無(wú)氧條件下，反應(yīng)式如下：C6H12O6→2CO2+2C2H5OH。

2；參與果醋制作的微生物是醋酸菌；其新陳代謝類(lèi)型是異養(yǎng)需氧型。果醋制作的原理：當(dāng)氧氣、糖源都充足時(shí)，醋酸菌將葡萄汁中的果糖分解成醋酸。當(dāng)缺少糖源時(shí)，醋酸菌將乙醇變?yōu)橐胰賹⒁胰┳優(yōu)榇姿帷?/p>

【詳解】

A；若發(fā)酵初期不通入氣體；由于錐形瓶中含有少量空氣，溶液中酵母菌也可通過(guò)有氧呼吸產(chǎn)生二氧化碳，即使沒(méi)有空氣，酵母菌也能通過(guò)無(wú)氧呼吸產(chǎn)生二氧化碳，因此有氣泡產(chǎn)生，A錯(cuò)誤；

B；中期可以聞到酒香；說(shuō)明有酒精產(chǎn)生，即進(jìn)行了酒精發(fā)酵，B正確；

C；由于醋酸菌是嗜氧菌；也是嗜溫菌，因此后期接種醋酸菌，需通氣并適當(dāng)升高溫度，C錯(cuò)誤；

D；醋酸發(fā)酵過(guò)程中；發(fā)酵液的pH會(huì)進(jìn)一步降低，因此圖乙中能正確表示pH變化的曲線(xiàn)是②，D錯(cuò)誤。

故選ACD。9、B:C:D【分析】【分析】

良種試管牛的繁殖過(guò)程：對(duì)供體和受體的選擇和處理（同期發(fā)情處理；超數(shù)排卵處理）；配種或進(jìn)行人工授精、對(duì)胚胎的收集檢查培養(yǎng)或保存、進(jìn)行胚胎移植。

【詳解】

A；處理供體甲牛的激素可能是促性腺激素；使其超數(shù)排卵，A錯(cuò)誤；

B；產(chǎn)生試管牛的過(guò)程中經(jīng)過(guò)了兩性生殖細(xì)胞的融合過(guò)程；因此試管牛產(chǎn)生的生殖方式屬于有性生殖，B正確；

C；母本甲牛提供卵細(xì)胞、父本乙牛提供精子；試管牛細(xì)胞核中基因一半來(lái)源于父方，一半來(lái)源于母方，C正確；

D；體外受精和早期胚胎發(fā)育、胚胎移植等技術(shù)可以縮短繁殖周期；增加一生繁殖的后代數(shù)量，即該技術(shù)可充分發(fā)揮優(yōu)良雌性個(gè)體的繁殖潛力，D正確。

故選BCD。

【點(diǎn)睛】10、A:B:C【分析】【分析】

分析圖示可知；將卵子去核，然后注入Oct4轉(zhuǎn)基因小鼠的精子，用氧化鍶激活，可使該換核的細(xì)胞形成雄原核，并分裂分化形成單倍體囊，最終形成孤雄單倍體胚胎干細(xì)胞。

【詳解】

A；由于桑椹胚期的細(xì)胞沒(méi)有出現(xiàn)分化；桑椹胚前的細(xì)胞都具有發(fā)育成完整胚胎的潛能，是全能性細(xì)胞，A正確；

B；從題干可知；Oct4基因在維持胚胎干細(xì)胞全能性和自我更新中發(fā)揮極其重要的作用，可推測(cè)Oct4基因的表達(dá)有利于延緩衰老，B正確；

C；過(guò)程③胚胎干細(xì)胞具有胚胎細(xì)胞的特性；體積較小，細(xì)胞核大，核仁明顯，C正確；

D；卵巢中取出來(lái)的是未成熟的卵細(xì)胞；要進(jìn)行培養(yǎng)到減數(shù)第二次分裂的中期才能受精，不能直接用于過(guò)程①，D錯(cuò)誤。

故選ABC。

【點(diǎn)睛】11、A:C:D【分析】【分析】

據(jù)圖分析，過(guò)程①表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建過(guò)程，需用DNA連接酶將目的基因和運(yùn)載體（質(zhì)粒）連接形成重組Ti質(zhì)粒。過(guò)程②表示將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞（農(nóng)桿菌），需要用Ca2+處理；使其成為感受態(tài)細(xì)胞，使其易吸收周?chē)h(huán)境中的DNA分子。農(nóng)桿菌侵染棉花后，將自身的Ti質(zhì)粒上的T-DNA整合到棉花細(xì)胞的DNA上，然后利用棉花細(xì)胞進(jìn)行植物組織培養(yǎng)，獲得抗蟲(chóng)棉。

【詳解】

A、KanR為卡那霉素抗性基因；成功導(dǎo)入質(zhì)粒的農(nóng)桿菌具有卡那霉素抗性而普通農(nóng)桿菌沒(méi)有，因此可使用含卡那霉素的培養(yǎng)基來(lái)篩選含重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌，A正確；

B；為使目的基因DNA片段和質(zhì)粒DNA片段在切口處的黏性末端匹配；需要選擇能切出相同黏性末端的限制酶來(lái)進(jìn)行切割，可以是同種限制酶，也可以是不同限制酶，但是必須要能產(chǎn)生相同黏性末端，B錯(cuò)誤；

C；棉花細(xì)胞與農(nóng)桿菌混合后；農(nóng)桿菌在侵染棉花細(xì)胞時(shí)，可將自身的Ti質(zhì)粒上的T-DNA整合到棉花細(xì)胞的DNA上，C正確；

D；植物組織培養(yǎng)時(shí)；培養(yǎng)基中生長(zhǎng)素濃度高于細(xì)胞分裂素，可以誘導(dǎo)根的分化；若是細(xì)胞分裂素高于生長(zhǎng)素濃度，則誘導(dǎo)芽的分化，從圖上可知，④過(guò)程分化出芽，⑤過(guò)程分化形成根，繼而形成試管苗，因此④和⑤中的培養(yǎng)基用到的激素的濃度不同，D正確。

故選ACD。12、B:C【分析】【分析】

制作果醋的菌種為原核生物中的醋酸菌。醋酸菌是一種好氧菌。當(dāng)氧氣；糖源都充足時(shí)；醋酸菌將果汁中的糖分分解成醋酸；當(dāng)氧氣充足、糖源缺乏時(shí)，醋酸菌將乙醇變?yōu)橐胰賹⒁胰┳優(yōu)榇姿帷?/p>

【詳解】

A；家庭制作果酒、果醋和酸奶過(guò)程中有多種微生物參與發(fā)酵過(guò)程；因此均不是純種發(fā)酵，A錯(cuò)誤；

B；果醋制作的溫度一般控制在30～35℃；果酒發(fā)酵的溫度一般控制在18～25℃，B正確；

C；泡菜腌制時(shí)需要乳酸菌發(fā)酵；乳酸菌是厭氧細(xì)菌，在無(wú)氧的情況下，將葡萄糖分解成乳酸，因此壇子加水密封的目的是營(yíng)造缺氧環(huán)境，利于乳酸菌發(fā)酵，C正確；

D；當(dāng)氧氣充足、糖源缺乏時(shí)；醋酸菌將乙醇變?yōu)橐胰?，再將乙醛變?yōu)榇姿?，D錯(cuò)誤。

故選BC。

【點(diǎn)睛】

本題考查考生運(yùn)用所學(xué)知識(shí)解決問(wèn)題的能力。13、B:D【分析】【分析】

動(dòng)物細(xì)胞核移植技術(shù)是將動(dòng)物一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核移入去核的卵母細(xì)胞中；使這個(gè)重新組合的細(xì)胞發(fā)育成新胚胎，繼而發(fā)育成動(dòng)物個(gè)體的技術(shù)。原理是動(dòng)物細(xì)胞核具有全能性，克隆動(dòng)物的遺傳物質(zhì)來(lái)自雙親，其核遺傳物質(zhì)來(lái)自供核生物，而細(xì)胞質(zhì)基因來(lái)自提供細(xì)胞質(zhì)的生物。

【詳解】

A；三親嬰兒“的細(xì)胞核基因一半來(lái)自母親；一半來(lái)自父親，線(xiàn)粒體基因來(lái)自于卵母細(xì)胞捐獻(xiàn)者，所以“三親嬰兒”同時(shí)擁有自己父親、母親及卵母細(xì)胞捐獻(xiàn)者的部分基因，A正確；

B；該技術(shù)能避免“三體嬰兒”攜帶母親細(xì)胞質(zhì)中的致病基因；B錯(cuò)誤；

C；若進(jìn)行體外受精；應(yīng)使用培養(yǎng)到MⅡ中期的卵母細(xì)胞，該時(shí)期的細(xì)胞才具備完成受精的能力，C正確；

D；國(guó)家不能篩選胎兒的性別；則不能選擇X精子或Y精子，D錯(cuò)誤。

故選BD。14、A:D【分析】【分析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、花粉管通道法；將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法是Ca2+處理法。（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)：抗原-抗體雜交技術(shù)。個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲(chóng)鑒定；抗病鑒定、活性鑒定等。

【詳解】

A；兩個(gè)基因中都有限制酶BsaBⅠ的一個(gè)識(shí)別位點(diǎn)；用該限制酶切割后再用DNA連接酶可拼接成GNA-ACA融合基因，A正確；

B；GNA-ACA融合基因的兩端有限制酶KpnⅠ和XhoⅠ的切割位點(diǎn)；而質(zhì)粒上也有限制酶KpnⅠ和XhoⅠ的切割位點(diǎn)，但方向不一致，用兩酶切割，正好是反向連接目的基因和運(yùn)載體，B錯(cuò)誤；

C；運(yùn)載體上帶有卡那霉素的抗性基因；沒(méi)有氨芐青霉素的抗性基因，轉(zhuǎn)基因細(xì)胞在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上不能存活，C錯(cuò)誤；

D；用PCR技術(shù)擴(kuò)增GNA和ACA基因后；再通過(guò)分子雜交或電泳的方式，可檢測(cè)是否導(dǎo)入棉花細(xì)胞中，D正確。

故選AD。15、A:D【分析】【分析】

PCR技術(shù)：

1；概念：PCR全稱(chēng)為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)；是一項(xiàng)在生物體外復(fù)制特定DNA的核酸合成技術(shù)。

2；原理：DNA復(fù)制。

3；前提條件：要有一段已知目的基因的核苷酸序以便合成一對(duì)引物。

4；條件：模板DNA、四種脫氧核苷酸、一對(duì)引物、熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶）。

5；過(guò)程：①高溫變性：DNA解旋過(guò)程（PCR擴(kuò)增中雙鏈DNA解開(kāi)不需要解旋酶；高溫條件下氫鍵可自動(dòng)解開(kāi)）；低溫復(fù)性：引物結(jié)合到互補(bǔ)鏈DNA上；③中溫延伸：合成子鏈。

【詳解】

A；PCR擴(kuò)增依據(jù)的是DNA分子雙鏈復(fù)制的原理；A正確；

B；進(jìn)行PCR擴(kuò)增需要熱穩(wěn)定DNA聚合酶（TaqDNA聚合酶）；但不需要解旋酶，B錯(cuò)誤；

C；DNA的兩條鏈反向平行；子鏈從引物的3′端開(kāi)始延伸，則利用圖中的引物①、④組合可擴(kuò)增出兩側(cè)的未知序列，C錯(cuò)誤；

D；通過(guò)與受體細(xì)胞的基因組序列比對(duì)；即可確定T-DNA的插入位置，D正確。

故選AD。

【點(diǎn)睛】三、填空題(共7題，共14分)16、略

【解析】①.接種環(huán)②.瓊脂固體③.連續(xù)劃線(xiàn)④.聚集⑤.逐步稀釋⑥.一個(gè)細(xì)胞⑦.子細(xì)胞群體⑧.菌落⑨.梯度稀釋⑩.瓊脂固體?.單個(gè)細(xì)胞?.單個(gè)的菌落17、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】遠(yuǎn)緣雜交的不親和性細(xì)胞遺傳細(xì)胞免疫、18、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】限制酶蛋白質(zhì)核苷酸序列特定的切點(diǎn)DNA連接酶缺口磷酸-脫氧核糖外源基因受體細(xì)胞質(zhì)粒噬菌體動(dòng)植物病毒細(xì)菌酵母菌細(xì)胞核自主復(fù)制DNA分子19、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】提取目的基因、目的基因與運(yùn)載體結(jié)合、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞、目的基因的檢測(cè)與鑒定。20、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】直接分離人工合成反轉(zhuǎn)錄法化學(xué)合成法21、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】0．1422、略

【分析】【詳解】

蛋白質(zhì)工程的基本途徑：從預(yù)期的蛋白質(zhì)功能出發(fā)，設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，推測(cè)應(yīng)有的氨基酸序列，找到相對(duì)應(yīng)的脫氧核苷酸序列，以下按照基因工程的一般步驟進(jìn)行。該蛋白質(zhì)的氨基酸序列已知，因此通過(guò)蛋白質(zhì)工程，生產(chǎn)該蛋白質(zhì)新藥的基本過(guò)程為：根據(jù)已知的氨基酸序列→找到相對(duì)應(yīng)的脫氧核苷酸序列→合成該蛋白質(zhì)新藥基因→將獲得的目的基因與質(zhì)粒構(gòu)建形成基因表達(dá)載體→將重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體菌→獲得工程菌→生產(chǎn)該蛋白質(zhì)新藥。【解析】根據(jù)已知的氨基酸序列→找到相對(duì)應(yīng)的脫氧核苷酸序列→合成該蛋白質(zhì)新藥基因→將獲得的目的基因與質(zhì)粒構(gòu)建形成基因表達(dá)載體→將重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體菌→獲得工程菌→生產(chǎn)該蛋白質(zhì)新藥四、判斷題(共4題，共12分)23、B【分析】【詳解】

胚胎發(fā)育早期；細(xì)胞數(shù)量不斷增加，但胚胎總體積不變或略有縮小。

故錯(cuò)誤。24、A【分析】【詳解】

生殖性克隆，即通常所說(shuō)的克隆人，通過(guò)克隆技術(shù)產(chǎn)生獨(dú)立生存的新個(gè)體，即通常所說(shuō)的克隆人，該說(shuō)法正確。25、A【分析】【分析】

生殖性克隆和治療性克隆兩者有著本質(zhì)區(qū)別；最重要的體現(xiàn)在目的不同。

【詳解】

治療性克隆：是指把克隆出來(lái)的組織和器官用于治療疾病，這種用于醫(yī)療目的的使用克隆技術(shù)制造胚胎稱(chēng)為治療性克隆。生殖性克隆：處于生殖的目的使用克隆技術(shù)在實(shí)驗(yàn)室制造人類(lèi)胚胎。治療性克隆和生殖性克隆最重要的差別是目的不同。26、A【分析】【分析】

轉(zhuǎn)基因生物的安全性問(wèn)題：食物安全（滯后效應(yīng)；過(guò)敏源、營(yíng)養(yǎng)成分改變）、生物安全（對(duì)生物多樣性的影響）、環(huán)境安全（對(duì)生態(tài)系統(tǒng)穩(wěn)定性的影響）。治療性克?。褐咐每寺〖夹g(shù)產(chǎn)生特定細(xì)胞和組織（皮膚、神經(jīng)或肌肉等）用于治療性移植。生殖性克?。褐笇⒖寺〖夹g(shù)用于生育目的；即用于產(chǎn)生人類(lèi)個(gè)體。中國(guó)政府：禁止生殖性克隆人，堅(jiān)持四不原則（不贊成、不允許、不支持、不接受任何生殖性克隆人實(shí)驗(yàn)），不反對(duì)治療性克隆人。

【詳解】

據(jù)分析可知；中國(guó)政府禁止生殖性克隆，但不反對(duì)治療性克隆。

故正確。五、實(shí)驗(yàn)題(共4題，共40分)27、略

【分析】【分析】

培養(yǎng)基的制作流程一般為：計(jì)算→稱(chēng)量→溶化（包括瓊脂）→調(diào)節(jié)pH→分裝→滅菌→倒平板→（冷卻后）倒置平板。微生物接種是微生物學(xué)研究中最常用的基本操作；主要用于微生物的分離純化。具體來(lái)說(shuō)，就是在無(wú)菌條件下，用接種環(huán)或接種針等專(zhuān)用工具，從一個(gè)培養(yǎng)皿（上面可能存在各種雜菌落）挑取所需的微生物，轉(zhuǎn)接到另一個(gè)培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)的方法?！拘?wèn)1】

培養(yǎng)基的組成成分包括碳源；氮源、水、無(wú)機(jī)鹽、生長(zhǎng)因子等。倒平板時(shí)；應(yīng)待培養(yǎng)基冷卻到50℃左右倒平板，平板冷凝后要將平板倒置，倒平板過(guò)程中應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行，以防止雜菌污染?！拘?wèn)2】

題干中表明菌體密集均勻分布在平板上；所以是稀釋涂布平板法接種。培養(yǎng)基滅菌合格，影響因素應(yīng)為除培養(yǎng)基滅菌以外可能的影響因素，因此，可能操作過(guò)程中是否無(wú)菌操作，以及使用的濾紙條是否滅菌合格等。A為對(duì)照組，應(yīng)除自變量以外，其他條件都相同，因此，處理方法為浸泡在無(wú)菌水中處理后貼于平板中央；實(shí)驗(yàn)中能觀察到出現(xiàn)野生型菌株菌落，說(shuō)明環(huán)境中存在化學(xué)致癌劑導(dǎo)致突變型菌株突變成野生型菌株?！拘?wèn)3】

使用過(guò)的培養(yǎng)基應(yīng)滅菌后再丟棄；以防止培養(yǎng)基中的有害物質(zhì)污染環(huán)境或感染實(shí)驗(yàn)操作者。

【點(diǎn)睛】

本題考查培養(yǎng)基的成分、制備過(guò)程以及微生物的接種方法等相關(guān)知識(shí)，意在考查考生對(duì)所學(xué)知識(shí)的識(shí)記和理解能力?！窘馕觥俊拘☆}1】①.碳源；氮源、水和無(wú)機(jī)鹽②.待培養(yǎng)基冷卻至50℃左右時(shí)；在酒精燈火焰旁附近倒平板。

【小題2】①.稀釋涂布平板②.濾紙片是否滅菌徹底和待測(cè)化合物是否含有雜菌③.（濾紙片）用無(wú)菌水浸泡④.his-菌株在培養(yǎng)基上突變?yōu)閔is+菌株；說(shuō)明待測(cè)化合物中存在致癌劑（或待測(cè)化合物中存在化學(xué)誘變劑，這些化學(xué)物質(zhì)具有致癌性，敘述合理即可）

【小題3】滅菌，避免對(duì)環(huán)境造成污染28、略

【分析】【分析】

篩選能高效降解AFB1的菌株的一般步驟是：取樣、選擇培養(yǎng)、梯度稀釋、涂布培養(yǎng)和篩選菌株。篩選時(shí)需要使用以香豆素（C9H6O2）為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基。

【詳解】

（1）黃曲霉素Bl（AFB1）一般來(lái)自發(fā)霉的糧食；糧制品及其它霉腐的有機(jī)物上；在霉?fàn)€的食品中富含AFB1，其中可能含有較多的AFB1降解菌，因此為了篩選到AFB1降解菌，可以從霉變的玉米或糧食采樣。

（2）豆香素（C9H6O2）可以為AFB1降解菌提供碳源；所以1號(hào)培養(yǎng)基的碳源是豆香素，篩選微生物的培養(yǎng)基一般是固體培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中需要加入一定量的瓊脂，目的是作為凝固劑，以制備固體培養(yǎng)基。篩選微生物可以采用稀釋涂布平板法，因此過(guò)程③所需要的工具是涂布器（無(wú)菌玻璃刮鏟）。

（3）鑒定不同菌落降解AFB1能力的方法是準(zhǔn)備含有等量黃曲霉素的液體培養(yǎng)基若干瓶；將挑取不同菌落放置在不同的瓶子中，一段時(shí)間后，測(cè)量剩余黃曲霉素的量。通過(guò)比較各瓶中黃曲霉素的剩余量得出結(jié)論。

（4）根據(jù)題意試管甲；乙分別作為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組；自變量是有無(wú)蛋白質(zhì)K，可以通過(guò)在兩試管中加入或不加蛋白質(zhì)K水解酶來(lái)控制自變量，故③表示不添加（－）。兩組實(shí)驗(yàn)的無(wú)關(guān)變量要一致，①、②都表示添加（+）培養(yǎng)過(guò)降解菌的上清液（含有降解菌的分泌物）。由于試管甲中蛋白質(zhì)K被加入的蛋白質(zhì)K水解酶分解，因此試管甲對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)基中AFB1不能被降解，含量高，而試管乙中培養(yǎng)基中AFB1被蛋白質(zhì)K降解，含量低，即④大于⑤。

【點(diǎn)睛】

本題主要考查微生物的培養(yǎng)和應(yīng)用，解題關(guān)鍵是掌握微生物的培養(yǎng)、篩選、分離的方法，能夠根據(jù)題目提供的信息回答問(wèn)題?！窘馕觥棵棺兊挠衩谆蚣Z食豆香素涂布器（無(wú)菌玻璃刮鏟）形成固體培養(yǎng)基，形成菌落準(zhǔn)備含有等量黃曲霉素的液體培養(yǎng)基若干瓶，將挑取不同菌落放置在不同的瓶子中，一段時(shí)間后，測(cè)量剩余黃曲霉素的量++-④大于⑤29、略

【分析】【分析】

1；單克隆抗體：由單個(gè)B淋巴細(xì)胞進(jìn)行無(wú)性繁殖形成的細(xì)胞系所產(chǎn)生出的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體。具有特異性強(qiáng)、靈敏度高；并可能大量制備的特點(diǎn)。

2；單克隆抗體的制備過(guò)程：首先用特定抗原注射小鼠體內(nèi)；使其發(fā)生免疫，小鼠體內(nèi)產(chǎn)生具有免疫能力的B淋巴細(xì)胞，利用動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)將B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合，單克隆抗體制備過(guò)程中的兩次篩選：第一次篩選：利用特定選擇培養(yǎng)基篩選，獲得雜交瘤細(xì)胞，即AB型細(xì)胞(A為B淋巴細(xì)胞，B為骨髓瘤細(xì)胞)，不需要A、B、AA、BB型細(xì)胞。第二次篩選：利用多孔板法和抗原抗體雜交法篩選，獲得產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞。

【詳解】

（1）單克隆抗體制備的基本步驟：對(duì)小鼠進(jìn)行免疫→提取B淋巴細(xì)胞→將B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合→通過(guò)篩選；克隆化培養(yǎng)和擴(kuò)大化培養(yǎng)→最終注入小鼠體內(nèi)→從腹腔腹水中提取單克隆抗體；此過(guò)程依賴(lài)的生物技術(shù)有動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和動(dòng)物細(xì)胞融合等。剪碎后的組織用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理，使其分散成單個(gè)細(xì)胞。

（2）誘導(dǎo)B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合的試劑是聚乙二醇（PEG）；因此試劑X是聚乙二醇（PEG）。用特定的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，只有雜交瘤細(xì)胞才能成活，因此經(jīng)選擇培養(yǎng)篩選出的細(xì)胞Y具有既能迅速大量增殖，又能產(chǎn)生抗體的特點(diǎn)。上清液中含有雜交瘤細(xì)胞，由于雜交瘤細(xì)胞能分泌抗體，故利用抗原-抗體雜交技術(shù)對(duì)上清液進(jìn)行抗體陽(yáng)性檢測(cè)，以便篩選出能產(chǎn)生專(zhuān)一抗體的雜交瘤細(xì)胞，選擇陽(yáng)性孔中的細(xì)胞（即能產(chǎn)生芍藥苷抗體的細(xì)胞）繼續(xù)植入小鼠腹腔內(nèi)進(jìn)行體內(nèi)培養(yǎng)，從小鼠腹水中可提取到抗芍藥苷的單克隆抗體，也可以將陽(yáng)性孔中的細(xì)胞在體外進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)。

（3）①正常對(duì)照組：前期處理為腹腔注射生理鹽水(空白對(duì)照)；后期處理為a腹腔注射生理鹽水(空白對(duì)照)；造模組：模型組為口服生理鹽水(產(chǎn)生模型小鼠)，陽(yáng)性藥組為口服芍藥甘草湯(藥物具有顯著的鎮(zhèn)痛作用)，實(shí)驗(yàn)組為c口服去除芍藥苷的芍藥甘草湯(檢驗(yàn)去除芍藥苷的芍藥甘草湯是否具有鎮(zhèn)痛作用)。

②因?yàn)樵炷＝M注射了冰醋酸，結(jié)合題意可知，冰醋酸能引起小鼠的扭體反應(yīng)，因此前期處理后，造模組小鼠扭體次數(shù)顯著高于正常對(duì)照組，表明致痛處理成功。如果芍藥苷是芍藥甘草湯中發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用的重要成分之一，則陽(yáng)性藥組小鼠的扭體次數(shù)最低，實(shí)驗(yàn)組小鼠雖然口服的是去除了芍藥苷的芍藥甘草湯，但芍藥甘草湯中除了芍藥苷還有其他成分能夠起到鎮(zhèn)痛作用，則實(shí)驗(yàn)組小鼠扭體次數(shù)低于模型組，因此若結(jié)果為實(shí)驗(yàn)組小鼠扭體次數(shù)高于陽(yáng)性藥組低于模型組，則表明芍藥苷是芍藥甘草湯中發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用的重要成分之一。【解析】(1)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞融合胰蛋白（膠原蛋白）

(2)聚乙二醇（PEG）既能大量增殖，又能產(chǎn)生抗體抗原—抗體雜交

(3)腹腔注射生理鹽水口服去除芍藥苷的芍藥甘草湯高于實(shí)驗(yàn)組小鼠扭體次數(shù)高于陽(yáng)性藥組低于模型組30、略

【分析】【分析】

1；基因工程的四個(gè)步驟：目的基因的篩選與獲取、基因表達(dá)載體的構(gòu)建、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞、目的基因的檢測(cè)與鑒定。

2、在基因工程操作中，常用原核生物作為受體細(xì)胞，其中以大腸桿菌應(yīng)用最為廣泛。研究人員一般先用Ca2＋處理大腸桿菌細(xì)胞；使細(xì)胞處于一種能吸收周?chē)h(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)，然后再將重組的基因表達(dá)載體導(dǎo)入其中。

【詳解】

（1）利用RNA通過(guò)①過(guò)程（逆轉(zhuǎn)錄）獲得cDNA需要逆轉(zhuǎn)錄酶；已知真核生物基因的mRNA在3'端加有PolyA（多聚腺嘌呤核糖核苷酸）保護(hù)尾部不被降解。逆轉(zhuǎn)錄第一步以mRMA為模板合成DNA單鏈；新鏈與模板鏈反向平行，由于新鏈只能由5'端向3'端延伸，所以逆轉(zhuǎn)錄第一步的引物應(yīng)與mRNA尾部的PolyA（多聚腺嘌呤核糖核苷酸）互補(bǔ)配對(duì)，即用多聚胸腺嘧啶脫氧核苷酸序列為引物；設(shè)計(jì)引物的目的是使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開(kāi)始連接脫氧核苷酸。

（2）對(duì)逆轉(zhuǎn)錄得到的cDNA擴(kuò)增時(shí)；引物的5'端結(jié)合母鏈的3'端之后DNA聚合酶開(kāi)始擴(kuò)增DNA。為確保其與pET41a質(zhì)粒定向連接，應(yīng)使用不同種的限制酶切割質(zhì)粒和目的基因，由圖可知，使用EcoRI酶會(huì)破環(huán)SSB基因，故應(yīng)在相應(yīng)引物的5'端加上BamHI和XhoⅠ酶切位點(diǎn)。

（3）由題圖分析可知：質(zhì)粒上存在卡那霉素和氯霉素抗性基因，由于XhoⅠ酶破壞了氯霉素抗性基因，所以成功組裝的重組質(zhì)粒不能在添加了氯霉素的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，③過(guò)程用重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染大腸桿菌時(shí)，需要用Ca2+處理大腸桿菌；目的是使大腸桿菌成為易于吸收外源DNA的狀態(tài)，然后分別將處理后的大腸桿菌先接種在添加卡那霉素的培養(yǎng)基（A）上培養(yǎng)，待長(zhǎng)出菌落后再利用無(wú)菌膜同位置轉(zhuǎn)移到添加氯霉素的培養(yǎng)基（B）上培養(yǎng)，收集能在含卡那霉素的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)而不能在含氯霉素培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落進(jìn)一步純化后將菌體破碎處理，經(jīng)篩選即可得到SSB蛋白。

（4）將改造后的大腸桿菌生產(chǎn)的SSB蛋白注入到小鼠體內(nèi)是為了檢測(cè)該蛋白是否具有抗原性，如果該蛋白有抗原性，會(huì)引起機(jī)體的免疫反應(yīng)，產(chǎn)生相應(yīng)抗體。則后續(xù)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容應(yīng)為抽取小鼠血液提取其中的抗體，利用抗原—抗體雜交的方法檢測(cè)其是否含有抗SSB的抗體?！窘馕觥?1)逆轉(zhuǎn)錄用多聚胸腺嘧啶脫氧核苷酸序列為引物

使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開(kāi)始連接脫氧核苷酸

(2)5’BamHⅠ和XhoI

(3)使大腸桿菌成為易于吸收外源DNA的狀態(tài)卡那霉素氯霉素能在含卡那霉素的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)而不能在含氯霉素培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的。

(4)提取其中的抗體，利用抗原—抗體雜交的方法檢測(cè)其是否含有抗S