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PAGEPAGE3基因工程的基本操作程序一、選擇題(每小題4分,共20分)1.下列有關PCR技術(shù)的敘述正確的是(B)A.作為模板的DNA序列不能在每一次擴增中重復運用B.作為引物的脫氧核苷酸序列不能在每次擴增中重復運用C.反應須要的DNA聚合酶不能在每次擴增中重復運用D.反應須要的DNA連接酶不能在每次擴增中重復運用解析:PCR中模板DNA序列可反復在每一次循環(huán)中用作模板;反應過程中須要的DNA聚合酶可重復運用;反應不須要DNA連接酶;而每一次循環(huán)用到的引物都會始終成為產(chǎn)物DNA中的一部分序列,在下一個反應循環(huán)中作為模板DNA,所以不行重復作為引物。2.在推斷抗蟲基因是否勝利轉(zhuǎn)入棉花基因組的方法中,不屬于分子檢測的是(A)A.通過視察害蟲吃棉葉是否死亡B.檢測目的基因片段與DNA探針能否形成雜交帶C.檢測目的基因轉(zhuǎn)錄形成的mRNA與DNA探針能否形成雜交帶D.檢測目的基因表達產(chǎn)物蛋白質(zhì)能否與特定抗體形成雜交帶解析:通過視察害蟲吃棉葉是否死亡屬于個體水平的檢測,檢測目的基因表達產(chǎn)物蛋白質(zhì)能否與特定抗體形成雜交帶屬于分子水平檢測。3.科學家通過基因工程的方法,能使大腸桿菌產(chǎn)生人的胰島素。以下敘述錯誤的是(D)A.可用含抗生素的培育基檢測大腸桿菌中是否導入了重組質(zhì)粒B.導入大腸桿菌的目的基因不肯定能勝利表達C.DNA連接酶和限制性內(nèi)切酶都是構(gòu)建重組質(zhì)粒必需的工具酶D.目的基因的檢測與表達過程中沒有發(fā)生堿基互補配對解析:導入大腸桿菌的目的基因不肯定能勝利表達,如,該人胰島素基因是從基因組文庫中獲得的,則會由于含有內(nèi)含子,而無法在大腸桿菌中正常轉(zhuǎn)錄,進而不能勝利表達。目的基因的檢測與表達過程中有堿基互補配對的現(xiàn)象,如利用DNA分子雜交技術(shù)檢測目的基因是否勝利導入時,目的基因和分子探針間雜交的原理就是堿基互補配對原則。4.下列關于基因工程的敘述,錯誤的是(D)A.目的基因和受體細胞均可來自動、植物或微生物B.限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶是兩類常用的工具酶C.人胰島素原基因在大腸桿菌中表達的胰島素原無生物活性D.載體上的抗性基因有利于篩選含重組DNA的細胞和促進目的基因的表達解析:人胰島素原基因中有內(nèi)含子存在,因此在大腸桿菌中表達后無生物活性。載體上的抗性基因有利于篩選含重組DNA的細胞,但由于它和目的基因是相互獨立的,并不能促進目的基因的表達。5.基因工程技術(shù)也稱為DNA重組技術(shù),其實施必需具備的四個必要條件是(C)A.目的基因限制酶載體受體細胞B.重組DNARNA聚合酶限制酶連接酶C.工具酶目的基因載體受體細胞D.模板DNAmRNA質(zhì)粒受體細胞解析:基因工程是把供體生物的基因(目的基因)導入受體(細胞),并使其勝利表達,以使受體獲得新的遺傳特性的過程。因此該過程須要有目的的基因、受體細胞及其工具(工具酶和載體)。二、非選擇題(共30分)6.(14分)1970年,特明和巴爾的摩證明了RNA病毒能依靠RNA合成DNA的過程,并發(fā)覺了催化此過程的酶。下面為形成cDNA的過程和PCR擴增過程示意圖。請依據(jù)圖解回答下列問題。(1)催化①過程的酶是反轉(zhuǎn)錄酶(或逆轉(zhuǎn)錄酶);核酸酶H的作用是分解RNA。(2)③過程也稱為DNA的變性,此過程在溫度高達90~95℃時才能完成,說明DNA分子具有穩(wěn)定性。(3)由圖中信息分析可知,催化②⑤過程的酶都是DNA聚合酶,兩者在作用特性上的區(qū)分是催化⑤過程的酶耐高溫。(4)假如RNA單鏈中有堿基100個,其中A占25%,U占15%,則通過該過程合成的一個雙鏈DNA片段中有胞嘧啶60個。解析:依據(jù)圖示可以看出,該過程是RNA在逆轉(zhuǎn)錄酶的催化作用下形成cDNA(負鏈DNA),構(gòu)成RNA—DNA中間體。中間體中的RNA再經(jīng)過RNA酶H水解,而以剩下的負鏈DNA復制成雙鏈DNA的過程。①過程是由RNA合成DNA的過程,須要逆轉(zhuǎn)錄酶進行催化。②過程是以單鏈DNA復制獲得雙鏈DNA的過程須要DNA聚合酶催化。⑤屬于雙鏈DNA復制的過程,須要DNA聚合酶催化。⑤過程在70~75℃環(huán)境下進行,所須要的酶應當能夠耐高溫。7.(16分)肺細胞中的let—7基因表達減弱,癌基因RAS表達增加,會引發(fā)肺癌。探討人員利用基因工程技術(shù)將let—7基因?qū)敕伟┘毎麑崿F(xiàn)表達,發(fā)覺肺癌細胞的增殖受到抑制。該基因工程技術(shù)基本流程如圖1。圖1請回答:(1)進行過程①時,需用限制性核酸內(nèi)切(或限制)酶切開載體以插入let—7基因。載體應有RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位,以驅(qū)動let—7基因轉(zhuǎn)錄,該部位稱為啟動子。(2)探討發(fā)覺,let—7基因能影響癌基因RAS的表達,其影響機理如圖2。據(jù)圖分析,可從細胞中提取RNA進行分子雜交,以干脆檢測let—7基因是否轉(zhuǎn)錄。肺癌細胞增殖受到抑制,可能是由于細胞中RAS蛋白(RASmRNA/RAS蛋白)含量削減引起的。圖2解析:(1)基因工程中目的基因和載體須要同一種限制性核酸內(nèi)切酶切割產(chǎn)生相同的黏性末端,使目的基因與載體結(jié)合,載體中與RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位是啟動子

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