CNAS-TRL-018-2022 醫(yī)學(xué)實驗室 核酸檢測質(zhì)量和安全指南

發(fā)布日期：2022年03月01日醫(yī)學(xué)實驗室核酸檢測質(zhì)量和安全指南中國合格評定國家認(rèn)可委員會CNAS-TRL-018:2022 2 3 3 3 4 4 4 4 6 8 10 10 10 12 12 12 12 13 13 14 14 15 16 19 20CNAS-TRL-018:2022CNAS-TRL-018:2022醫(yī)學(xué)實驗室核酸檢測質(zhì)量和安全指南ISO/TS20658《醫(yī)學(xué)實驗室-樣CNAS-CL02-A001：2021《CNAS-TRL-018:2022核酸檢測過程分為檢驗前、檢驗中和檢驗后（具檢測過程檢驗前過程檢測項目的申請，知情同意的簽署，樣本的采集、運輸、接收和保存、耗材的驗收等檢驗中過程檢測過程中的核酸提取質(zhì)量控制、核酸擴增、室內(nèi)質(zhì)量控制，室間質(zhì)量評價，檢驗過程的標(biāo)準(zhǔn)操作程序及實驗記錄等檢驗后過程包括報告的解釋及發(fā)放，數(shù)據(jù)的處理及保存，檢驗后樣本和材料的保存、處理及銷毀等4.1.1.1送檢申請、樣本采集、樣本運輸、樣本接收等檢驗前過程應(yīng)符合GB/T4.1.1.3報告的解釋及發(fā)放，數(shù)據(jù)的處理及保存等檢驗后過程應(yīng)符合GB/TCNAS-TRL-018:2022CNAS-TRL-018:2022a）設(shè)專門運維人員，按照設(shè)施設(shè)備的使用說明進行保養(yǎng)與維護，并制定巡a）定量檢測方法：分析性能驗證內(nèi)容至少應(yīng)包括精密度、CNAS-TRL-018:2022b）定性檢測方法：驗證內(nèi)容至少應(yīng)包括測定下限、特異性、準(zhǔn)確度（方法CNAS-TRL-018:2022a）人員選擇。要對選擇人員的背景、健康監(jiān)護、培訓(xùn)和能力等要素進行綜b）人員培訓(xùn)。做好實驗人員的崗前培訓(xùn)、在崗持續(xù)培訓(xùn)以及定期或不定期CNAS-TRL-018:20224.1.4.3操作CNAS-TRL-018:2022a)風(fēng)險材料的存儲，包括菌毒株、檢測的陽性材料、存儲的病死動物尸體1）放置區(qū)域：全自動核酸提取純化設(shè)備應(yīng)放置在核本制備區(qū)，PCR儀等檢測設(shè)備應(yīng)放置于擴增區(qū)等相關(guān)區(qū)域內(nèi)，相互獨立。實驗3）設(shè)備工作條件：環(huán)境溫濕度應(yīng)符合設(shè)備要求；實驗室承重及實驗臺承重a）防污染驗證：推薦進行防污染驗證。可采用棋盤法，即陰性和陽性質(zhì)控c）提取方法學(xué)比對：對于同一檢測項目同時采用不同方法進行核酸提取純CNAS-TRL-018:2022試劑配制、樣本核酸純化、反應(yīng)體系構(gòu)建、PCR擴增、數(shù)據(jù)分析等一系列流程制程序控制各個功能組件的運轉(zhuǎn)、通過網(wǎng)關(guān)收集/分析數(shù)據(jù)并可通過網(wǎng)關(guān)將數(shù)據(jù)CNAS-TRL-018:2022c）處理模塊：樣本純化，包括裂解、清洗、洗脫；PCR反應(yīng)體系構(gòu)建，即e）庫存管理單元：存儲試劑、質(zhì)控品、裂解液、洗脫液、磁珠、洗液等；存儲在生物安全二級或以上級別實驗室使用，并嚴(yán)格執(zhí)行實b）試劑、耗材管理：必須按照廠家要求進行試劑、耗材的存儲和有效期的5基于高通量測序的核酸檢測程序5.1工作流程高通量測序核酸檢測流程如下：樣本接收核酸提取樣本前處理測序結(jié)果解讀報告發(fā)放圖1高通量測序核酸檢測流程圖其中檢驗前、檢驗中、檢驗后過程要求應(yīng)符合GB/T22576.1中5.4～5.9要求，高通量測序的核酸檢測工作流程中還需注意以下幾點：a)文庫構(gòu)建：提取后的核酸經(jīng)過片段化、反轉(zhuǎn)錄(如適用)、末端修復(fù)、5'端磷酸化、加接頭和標(biāo)簽序列、擴增等步驟，構(gòu)建可用于測序的DNA片段，在b)文庫定量和混合：使用文庫濃度檢測設(shè)備，對所得文庫進行DNA濃度c)信息分析：使用既定的信息分析流程及相關(guān)數(shù)據(jù)庫，對測序數(shù)據(jù)進行處d)結(jié)果解讀(如適用):實驗室根據(jù)不同的檢測項目使用特定的數(shù)據(jù)庫，對e)報告發(fā)放：由具備相關(guān)專業(yè)技術(shù)職稱的授權(quán)人員對報告內(nèi)容進行核對和簽發(fā)，并以約定的形式發(fā)送給送檢客戶或受檢者，如適用，應(yīng)提供遺傳咨詢或報CNAS-TRL-018:20223）核酸濃度檢測設(shè)備如電泳儀、熒光定量儀、微量分光光度計和熒4）文庫定量和混合：文庫濃度檢測設(shè)備通常有生物分析儀、qPCR儀、熒b）高通量測序?qū)嶒炇抑饕陌踩O(shè)備包括生物安全柜、樣本滅活設(shè)備、壓CNAS-TRL-018:20221）高通量測序?qū)嶒炇腋鲄^(qū)空調(diào)相互獨立，不可連通3）測序儀芯片或載片倉內(nèi)的激光器產(chǎn)生的激光存在潛在人體危害，儀器運4）測序儀產(chǎn)生的廢液使用廢液桶收集，廢液中的化學(xué)成分對眼睛、皮膚和5）測序區(qū)和服務(wù)器機房使用的消防滅火系統(tǒng)，應(yīng)避免水、泡沫、CNAS-TRL-018:2022b）樣本采集、運輸、接收與保存要求CNAS-TRL-018:2022高通量測序核酸檢測項目可通過加入與文庫基質(zhì)相同或相似的質(zhì)控樣品評CNAS-CL02-A001:2021《醫(yī)學(xué)實驗室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則的應(yīng)用要求CNAS-TRL-018:2022實驗室應(yīng)建立高通量測序數(shù)據(jù)保存類型和保存期限相關(guān)要求，一般保存FASTQ文件、BAM文件和VCF文件，并保留雙備份。數(shù)據(jù)保存應(yīng)符合CNAS-CL02-A001:2021《醫(yī)學(xué)實驗室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則的應(yīng)用要求》4.13記附錄A(資料性附錄)實驗室功能區(qū)核酸檢測采樣方案A.1采樣方法內(nèi)畫交叉線(如圖A.1),盡量讓植絨拭子每個面都接觸到采樣目標(biāo)，一個采樣圖A.1采樣區(qū)域內(nèi)交叉線采樣法A.2采樣區(qū)域及編號根據(jù)不同采樣區(qū)域和采樣點及要求進行采樣，每個采樣點單獨一個植絨拭子，按照表A.1中要求放置到含有采樣液的采樣管中并標(biāo)注采樣編號，如采樣編號為管1中應(yīng)放置的是把手、傳遞窗、臺面單獨采樣的3個植絨拭子。CNAS-TRL-018: